Name: an in vitro dissolution determination of multi-index components in tibetan medicine rhodiola granules
Uploaded: 2022-11-04T15:00:00
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이 작업은 중국의 국가 핵심 연구 개발 프로그램 (2017YFC1703904), 대학 (Chengdu University of TCM)-기업 (Tibet Rhodiola Pharmaceutical Holding Co. LTD) 협력 프로젝트 (1052022040101)의 지원을 받았습니다. 쓰촨성 과학기술부 지역혁신협력사업(2020YFQ0032); 칭하이성 과학기술부의 핵심 R&D 및 변혁 프로그램(2020-SF-C33).

1. 용액 준비
<ol><li>표준물질 원액 준비: 전자 분석 저울에서 살리드로사이드 10.6mg, 갈산(gallicacid) 5.24mg, 에틸갈산(ethyl gallicacid) 5.21mg을 따로 칭량하여 5mL 용량 플라스크에 개별적으로 넣습니다. 그런 다음 HPLC 등급 메탄올을 첨가하여 용해시키고 5mL로 희석합니다. 마지막으로 잘 흔들어 질량 농도가 각각 2.120mg/mL, 1.048mg/mL, 1.042mg/mL인 표준물질 원액을 얻습니다. 참고: 표준 물질 원액...

<ol>
	<li>Smith, S. C., Zheng, Z. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impending+cardiovascular+pandemic+in+China.">The impending cardiovascular pandemic in China.</a> Circulation Cardiovascular Quality and Outcomes. 3 (3), 226-227 (2010).</li><li>Wang, D., Wang, P., Zhang, R., Xi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+and+safety+of+Xuefu+Zhuyu+decoction+combined+with+Western+medicine+for+angina+pectoris+in+coronary+heart+disease:+A+protocol+for+systematic+review+and+meta-analysis.">Efficacy and safety of Xuefu Zhuyu decoction combined with Western medicine for angina pectoris in coronary heart disease: A protocol for systematic review and meta-analysis.</a> Medicine. 99 (50), 23195 (2020).</li><li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+traditional+Chinese+medicine+in+the+regulation+of+stress+in+treating+coronary+heart+disease.">The role of traditional Chinese medicine in the regulation of stress in treating coronary heart disease.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2019, 3231424 (2019).</li><li>Yang, J., Tian, S., Zhao, J., Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+mechanism+of+TCM+formulae+in+the+treatment+of+different+types+of+coronary+heart+disease+by+network+pharmacology+and+machining+learning.">Exploring the mechanism of TCM formulae in the treatment of different types of coronary heart disease by network pharmacology and machining learning.</a> Pharmacological Research. 159, 105034 (2020).</li><li>Pu, W. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analytical+strategies+for+the+discovery+and+validation+of+quality-markers+of+traditional+Chinese+medicine.">Analytical strategies for the discovery and validation of quality-markers of traditional Chinese medicine.</a> Phytomedicine. 67, 153165 (2020).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+modified+biopharmaceutics+classification+system+absorption+model+for+oral+Traditional+Chinese+Medicine+(Sanye+Tablet).">Establishment of modified biopharmaceutics classification system absorption model for oral Traditional Chinese Medicine (Sanye Tablet).</a> Journal of Ethnopharmacology. 244, 112148 (2019).</li><li>Song, X. Y., Li, Y. D., Shi, Y. 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N., Wang, X., Su, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+of+dissolution+test+methodologies.">Progress of dissolution test methodologies.</a> Chinese Journal of New Drugs. 22 (10), 1119-1124 (2013).</li><li>Chi, Z., Azhar, I., Khan, H., Yang, L., Feng, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automatic+dissolution+testing+with+high-temporal+resolution+for+both+immediate-release+and+fixed-combination+drug+tablets.">Automatic dissolution testing with high-temporal resolution for both immediate-release and fixed-combination drug tablets.</a> Scientific Reports. 9 (1), 17114 (2019).</li><li>Haidar, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioequivalence+approaches+for+highly+variable+drugs+and+drug+products.">Bioequivalence approaches for highly variable drugs and drug products.</a> Pharmaceutical Research. 25 (1), 237-241 (2008).</li></ol>

용출시험은 위장관에서 고체 경구 제제의 붕해 및 용해를 모사하기 위한 이상적인 시험관 내 방법이다15. 고체 경구 제제의 품질을 평가하고 관리하는 데 중요한 지표입니다. 따라서, 용출시험은 경구용 고형 의약품16의 개발에 필수적인 역할을 한다. 특히, 중국 전통 의학 (TCM) 품질 관리 기술의 발달과 함께, 용해의 결정은 중국 및 민족 의학 화합물 제제...

중국에서는 심혈관 질환의 유병률이 계속 증가하고 있으며, 심혈관 질환의 이환율과 사망률은 중국인 중 1위입니다1. 관상동맥 심장질환의 협심증은 관상동맥경화증에 의한 내강 협착증에 의해 발생하며, 이는 상대적으로 관상동맥 혈액 공급이 부족하고 심근 허혈 및 저산소증을 유발한다2. 최근 몇 년 동안 관상 동맥 심장 질환 치료에 대한 중국 전통 의학의 치료 효과가 많은 의사들에 의해 인정되고 있다3.
중국 전통 의학은 임상 증상을 완화하고 환자의 삶의 질을 향상시키는 데 중요한 역할을 합니다4. 홍경천(RG)은 티베트 고원의 약용 식물인 Rhodiola rosea L.에서 추출 및 정제됩니다. RG의 주성분은 살리드로사이드, 로디오신 및 플라보노이드 5,6입니다. RG는 Qi7을 보충하고 혈액 순환을 활성화 및 촉진하여 통증을 완화시키는 효과가 있습니다. 임상적으로 Qi 결핍 및 혈액 정체, 관상 동맥 심장 질환, 협심증으로 인한 흉부 폐쇄를 치료하는 데 사용됩니다8. 시험관 내 분해 및 용해가 약물의 생체 이용률 및 효능에 영향을 미칠 수 있기 때문에 함량 측정만으로는 약물의 고유 품질을 완전히 반영하지 못합니다 9,10. 한약의 용해 검사 방법에는 회전 바구니 방법, 패들 방법 및 작은 컵 방법이 있습니다. 회전 바스켓 방법의 단점은 회전 바스켓의 바깥 부분만 회전 중에 용해 매체와 접촉하여 실제 용해 거동을 반영하지 않는다는 것입니다. 패들 방법은 위의 단점을 극복할 수 있어 일부 고체 한약 제제11에 바스켓 방법보다 더 적합하다. 현재 RG의 시험관 내 용출 분석에 대한 보고는 없습니다. RG의 품질을 보다 포괄적으로 제어하기 위해 RG의 세 가지 지표 성분(갈산, 살리드로시드 및 에틸 갈레이트)의 용해 거동을 조사했습니다. 이 연구는 RG의 품질 관리를 위한 데이터와 다른 민족 화합물 제제의 품질 평가를 위한 방법론적 참조를 제공합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chromatographic column</td>
			<td>ZORBAX Eclipse&#160;&#160;</td>
			<td>XDB-C18</td>
			<td>4.6 mm x 250 mm, 5 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drug dissolution tester</td>
			<td>Shanghai Huanghai Pharmaceutical Inspection Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>RCZ-6B3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic analytical balance</td>
			<td>Shanghai Liangping Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>FA1004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl gallate (HPLC, &#8805;98%)</td>
			<td>Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>DSTDM006301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Function drawing software</td>
			<td>OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA</td>
			<td>2022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gallic acid (HPLC, &#8805;98%)</td>
			<td>Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>DSTDM000802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High performance liquid chromatography</td>
			<td>Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd.</td>
			<td>Agilent 1260 Infinity <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/64670/64670eq01.jpg" style="margin: auto;" /></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC grade methanol</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific (China) Co., Ltd.</td>
			<td>216565</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injector</td>
			<td>Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus &#38; Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>0.7 (22 G)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millipore filter</td>
			<td>Tianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd</td>
			<td>&#966;13 0.22 Nylon66</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhodiola granules</td>
			<td>Tibet Nodikang Pharmaceutical Co., Ltd.</td>
			<td>210501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salidroside (HPLC, &#8805;98%)</td>
			<td>Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>DST200425-037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra pure water systemic</td>
			<td>Merck Millipore Ltd.</td>
			<td>Milli-Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleansing machine</td>
			<td>Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd</td>
			<td>SB-8200 DTS</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vitro dissolution determination of multi-index components in tibetan medicine rhodiola granules

티베트 의약품 Rhodiola granules (RG)의 조성은 복잡하며 RG의 전반적인 품질을 결정하기가 어렵습니다. 따라서 RG의 다성분 시험관 내 용출을 결정하는 방법을 확립하는 것은 품질 관리에 매우 중요합니다. 이 연구는 미국 약전(USP)의 장치 0931을 준수하는 중국 약전(2020년판)의 네 번째 일반 규칙 2의 두 번째 패들 방법을 사용합니다. 용해 장치는 초순수를 용해 매질로 하여 회전 속도를 100 rpm으로 하였다. 각 시점에서 1mL의 샘플 부피를 수집했습니다. 또한, 서로 다른 시점에서 RG에 갈산, 살리드로시드 및 에틸 갈산의 누적 용해는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 측정되었습니다. 마지막으로 용해 곡선을 그리고 곡선을 GompertzMod, Gompertz, Logistics 및 Weibull 방정식에 맞췄습니다. 그 결과 RG에서 갈산의 누적 용출은 1분에 80% 이상, 살리드로사이드와 에틸 갈산의 누적 용출은 5분에 65% 이상, 30분 후에는 각 지표 성분의 누적 용출이 감소하는 것으로 나타났다. 곡선 피팅은 GompertzMod 방정식이 RG의 각 지수 성분에 가장 적합한 모델임을 보여주었습니다. 결론적으로, 이 프로토콜에 기술된 용해 시험 방법은 간단하고 정확하며 신뢰할 수 있습니다. 시험관 내에서 RG에서 지수 성분의 용해 거동을 특성화할 수 있으며, 이는 RG의 품질 관리 및 다른 민족 화합물의 품질 평가를 위한 방법론적 참조를 제공합니다.

이 연구에서 RG의 정밀도, 안정성, 반복성 및 샘플 회수율은 모두 중국 약전(Volume 4, 2020)12에 명시된 방법론적 범위 내에 있었으며, 이는 이 방법이 실현 가능함을 나타냅니다. 반복적인 디버깅 후, 이 연구에 사용된 용리 그래디언트가 RG의 세 가지 인덱스 성분에 대해 양호한 분해능을 갖는 것으로 확인되었습니다(그림 1). RG의 3가지 지표 성분은 특정 농도 ?...

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An In Vitro Dissolution Determination of Multi-Index Components in Tibetan Medicine Rhodiola Granules

여기에서는 시험관 내에서 홍경천 과립(RG)의 용해를 테스트하고, 초순수에서 살리드로사이드, 갈산 및 에틸 갈레이트의 용해 곡선을 그리고 곡선을 다양한 수학적 모델에 맞춥니다. 이 프로토콜은 RG의 생체 내 생물학적 동등성 및 생체 내 시험관 내 상 관 연구에 대한 정보와 지침을 제공합니다.

Tibetan Medicine Rhodiola Granules의 Multi-Index 성분에 대한 시험관 내 용해 측정

The composition of the Tibetan medicine Rhodiola granules (RG) is complex, and the overall quality of RG is difficult to determine. Therefore, ...

시험관 내 측정은 약물 붕해의 영향, 용해 거동 및 활성 성분의 함량을 고려한 고체 한약 제제 용액의 용해를 검사하는 데 적합한 측정입니다. 다중 인덱스 구성 요소의 감지는 중립적 영향과 다른 구성 요소의 용해 차이를 더 잘 반영할 수 있습니다. 절차를 시연하는 것은 내 실험실의 특별한 학생 인 Quinyun Du가 될 것입니다.먼저 전자 분석 저울에서 살리드로제 10.6mg, 갈산 5.24mg, 에틸 갈산 5.21mg을 별도로 칭량하여 표준 물질 원액을 준비합니다. 그런 다음 5 밀리리터 부피 플라스크에 개별적으로 첨가하십시오. 그런 다음 HPLC 등급 메탄올을 첨가하여 용해시키고 5 밀리리터로 희석합니다.그리고 마지막으로 잘 흔들어 질량 농도가 각각 밀리리터당 2.120, 1.048 및 1.042mg인 표준물질 원액을 얻습니다. 시험 샘플 용액을 준비하기 위해, 30 분 동안 초음파 세척 기계를 사용하여 10 밀리리터의 HPLC 등급 메탄올로 2.8 그램의 홍경천 과립을 추출한다. 그런 다음 시스템 적응성 테스트를 위해 0.22마이크로미터 필터로 필터링합니다.그런 다음 밀리리터 살리드로시드 0.590 밀리그램, 밀리리터 갈산 2.030 밀리그램 및 밀리리터 에틸 갈 레이트 당 1.930 밀리그램을 포함하는 혼합 기준 용액을 준비합니다. 홍경천 과립의 각 특성 성분의 이론적 함량을 얻으려면 500밀리리터 원추형 플라스크에 2.8g의 홍경천 과립을 넣습니다. 초순수 200 밀리리터를 넣고 60 분 동안 초음파 추출합니다.그런 다음 0.22 마이크로 미터 필터로 필터링하십시오. 시험 용액의 함량을 결정한 후, 원고에 설명 된대로 고성능 액체 크로마토 그래피를위한 크로마토 그래피 조건을 설정하십시오. 선형 관계를 조사하기 위해 갈산과 에틸 갈레이트의 기준 원액과 살리드로시드의 기준 원액을 희석하여 표준 곡선을 그리기 위한 구배 농도 용액을 얻습니다.그런 다음 10마이크로리터의 혼합 기준 용액을 매일 6회 HPLC 시스템에 주입하고 동일한 HPLC 조건으로 샘플을 실행하면서 각 기능 구성 요소의 피크 면적을 기록합니다. 다음으로, 제조된 시료용액 10 마이크로리터를 주입하고, 크로마토그래피 조건에 따라 HPLC의 피크 면적을 서로 다른 시간 간격으로 결정한다. 이전에 시연된 대로 동일한 배치의 홍경천 과립 샘플 6개를 채취하여 테스트 샘플 용액을 준비하고 각 샘플 10마이크로리터를 HPLC 시스템에 주입합니다.재현성을 결정하기 위해 이전에 설명한 대로 샘플을 실행합니다. 테스트 용액에 대해 동일한 배치의 홍경천 과립 6인분을 준비한 후 각 인덱스 성분의 기준 기질의 약 50%를 추가합니다. 앞서 설명한 대로 HPLC 시스템에서 이러한 샘플을 실행하여 원고에 설명된 대로 회수율을 계산합니다.용출시험을 실시하기 위해, 약물 용출 장치의 용출 컵에 초순수 100밀리리터를 넣고, 회전 속도 100rpm으로 온도를 섭씨 37도로 유지한다. 다음으로 홍경천 과립 2.8g을 용해 컵에 넣고 즉시 용해 시간을 기록하기 시작합니다. 서로 다른 시간 간격으로 주입기로 총 1밀리리터의 샘플을 수집하고 즉시 동일한 온도에서 용해 매체로 용해 컵의 부피를 구성합니다.수집된 샘플을 즉시 0.22마이크로미터 미세다공막을 통해 채우고 후속 여과액을 취합니다. 각 성분의 함량을 결정한 후, HPLC에 의해 각 시점에서 각 시점의 용해 및 원고에 기재된 누적 용해를 계산한다. 시료의 크로마토그램 및 기준 용액을 수득하였다.갈산, 살리드로시드 및 에틸 갈레이트에 해당하는 3개의 상이한 피크는 용출 구배가 홍경천 과립의 3가지 지표 성분에 대해 양호한 분해능을 가졌음을 보여준다. 각 성분의 용출 곡선은 갈산의 누적 용출이 1 분 후에 80 % 이상임을 보여줍니다. 살리드로시드와 에틸 갈산의 경우 5 분 후에 65 % 이상이었습니다.그러나, 각 지수 성분의 누적 용해는 30분 후에 감소하였다. 표준 곡선의 희석 문제를 조정하여 샘플 처리의 예비 실험에 따라 샘플을 신속하게 수집하여 특수 수집 시점을 놓치지 않도록 해야 합니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

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이식 품질 평가를 위해 화학 생검 사용

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated ...

On-Site Sampling and Extraction of Brain Tumors for Metabolomics and Lipidomics Analysis

메타볼로믹스 및 리피도믹스 분석을 위한 뇌종양의 현장 샘플링 및 추출

Despite the variety of tools available for cancer diagnosis and classification, methods that enable fast and simple characterization of tumors are still ...