Name: modeling oral-esophageal squamous cell carcinoma in 3d organoids
Uploaded: 2022-12-23T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Oral-Esophageal Squamous Cell Carcinoma in 3D Organoids at JoVE.com

نشكر الموارد المشتركة (قياس التدفق الخلوي ، وعلم الأمراض الجزيئي ، والفحص المجهري البؤري والمتخصص) في مركز هربرت إيرفينغ الشامل للسرطان في جامعة كولومبيا على الدعم الفني. نشكر الدكاترة آلان ديهل وآدم جيه باس وكوك كين وونغ (آليات NCI P01 لسرطان المريء) وأعضاء مختبرات روستي وناكاجاوا على المناقشات المفيدة. تم دعم هذه الدراسة من خلال منح المعاهد الوطنية للصحة التالية: P01CA098101 (H.N. و A.K.R.) ، R01DK114436 (H.N.) ، R01AA026297 (H.N.) ، L30CA264714 (SF) ، DE031112-01 (F.M.H.) ، KL2TR001874 (F.M.H.) ، 3R01CA255298-01S1 (JG) ، 2L30DK126621-02
(ج.ج.) R01CA266978 (C.L.) و R01DK132251 (C.L.) و R01DE031873 (C.L.) و P30DK132710 (CM و H.N.) و P30CA013696 (A.K.R.). حصل H.N. و C.L. على جائزة مركز هربرت إيرفينغ الشامل للسرطان Multi-PI Pilot من جامعة كولومبيا. حصل H.N. على جائزة صندوق فانكوني لأبحاث فقر الدم. حصل F.M.H. على جائزة مؤسسة مارك لأبحاث السرطان (20-60-51-MOME) وجائزة الجمعية الأمريكية لأبحاث السرطان. حصل JG على جائزة الجمعية الأمريكية لأمراض الجهاز الهضمي (AGA).

تم تخطيط تجارب الفئران وتنفيذها وفقا للوائح وبموجب البروتوكول الحيواني #AABB1502 ، وتمت مراجعتها والموافقة عليها من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية بجامعة كولومبيا. تم إيواء الفئران في مرفق مناسب لرعاية الحيوانات يضمن المعاملة الإنسانية للفئران ويوفر الرعاية البيطرية المناسبة ?...

<ol>
	<li>Rustgi, A. K., El-Serag, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Esophageal+carcinoma.">Esophageal carcinoma.</a> The New England Journal of Medicine. 371 (26), 2499-2509 (2014).</li><li>Dotto, G. P., Rustgi, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Squamous+cell+cancers:+A+unified+perspective+on+biology+and+genetics.">Squamous cell cancers: A unified perspective on biology and genetics.</a> Cancer Cell. 29 (5), 622-637 (2016).</li><li>Giroux, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-lived+keratin+15++esophageal+progenitor+cells+contribute+to+homeostasis+and+regeneration.">Long-lived keratin 15+ esophageal progenitor cells contribute to homeostasis and regeneration.</a> The Journal of Clinical Investigation. 127 (6), 2378-2391 (2017).</li><li>DeWard, A. D., Cramer, J., Lagasse, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+heterogeneity+in+the+mouse+esophagus+implicates+the+presence+of+a+nonquiescent+epithelial+stem+cell+population.">Cellular heterogeneity in the mouse esophagus implicates the presence of a nonquiescent epithelial stem cell population.</a> Cell Reports. 9 (2), 701-711 (2014).</li><li>Kinugasa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+SOD2+regulates+epithelial-mesenchymal+transition+and+cell+populations+defined+by+differential+CD44+expression.">Mitochondrial SOD2 regulates epithelial-mesenchymal transition and cell populations defined by differential CD44 expression.</a> Oncogene. 34 (41), 5229-5239 (2015).</li><li>Whelan, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+supports+generation+of+cells+with+high+CD44+expression+via+modulation+of+oxidative+stress+and+Parkin-mediated+mitochondrial+clearance.">Autophagy supports generation of cells with high CD44 expression via modulation of oxidative stress and Parkin-mediated mitochondrial clearance.</a> Oncogene. 36 (34), 4843-4858 (2017).</li><li>Natsuizaka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interplay+between+Notch1+and+Notch3+promotes+EMT+and+tumor+initiation+in+squamous+cell+carcinoma.">Interplay between Notch1 and Notch3 promotes EMT and tumor initiation in squamous cell carcinoma.</a> Nature Communications. 8 (1), 1758 (2017).</li><li>Whelan, K. A., Muir, A. B., Nakagawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Esophageal+3D+culture+systems+as+modeling+tools+in+esophageal+epithelial+pathobiology+and+personalized+medicine.">Esophageal 3D culture systems as modeling tools in esophageal epithelial pathobiology and personalized medicine.</a> Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 5 (4), 461-478 (2018).</li><li>Sachdeva, U. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+cellular+origin+and+progression+of+esophageal+cancer+using+esophageal+organoids.">Understanding the cellular origin and progression of esophageal cancer using esophageal organoids.</a> Cancer Letters. 509, 39-52 (2021).</li><li>Nakagawa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+targeting+of+the+cyclin+D1+oncogene+by+an+Epstein-Barr+virus+promoter+in+transgenic+mice+causes+dysplasia+in+the+tongue,+esophagus+and+forestomach.">The targeting of the cyclin D1 oncogene by an Epstein-Barr virus promoter in transgenic mice causes dysplasia in the tongue, esophagus and forestomach.</a> Oncogene. 14 (10), 1185-1190 (1997).</li><li>Andl, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+mediates+increased+cell+proliferation,+migration,+and+aggregation+in+esophageal+keratinocytes+in+vitro+and+in+vivo.">Epidermal growth factor receptor mediates increased cell proliferation, migration, and aggregation in esophageal keratinocytes in vitro and in vivo.</a> The Journal of Biological Chemistry. 278 (3), 1824-1830 (2003).</li><li>Opitz, O. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+human+oral-esophageal+cancer.">A mouse model of human oral-esophageal cancer.</a> The Journal of Clinical Investigation. 110 (6), 761-769 (2002).</li><li>Stairs, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+p120-catenin+results+in+a+tumor+microenvironment+with+inflammation+and+cancer+that+establishes+it+as+a+tumor+suppressor+gene.">Deletion of p120-catenin results in a tumor microenvironment with inflammation and cancer that establishes it as a tumor suppressor gene.</a> Cancer Cell. 19 (4), 470-483 (2011).</li><li>Tang, X. -. H., Knudsen, B., Bemis, D., Tickoo, S., Gudas, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+cavity+and+esophageal+carcinogenesis+modeled+in+carcinogen-treated+mice.">Oral cavity and esophageal carcinogenesis modeled in carcinogen-treated mice.</a> Clinical Cancer Research. 10, 301-313 (2004).</li><li>Fong, L. Y. Y., Mancini, R., Nakagawa, H., Rustgi, A. K., Huebner, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+cyclin+D1+overexpression+and+zinc+deficiency+disrupts+cell+cycle+and+accelerates+mouse+forestomach+carcinogenesis.">Combined cyclin D1 overexpression and zinc deficiency disrupts cell cycle and accelerates mouse forestomach carcinogenesis.</a> Cancer Research. 63 (14), 4244-4252 (2003).</li><li>Zheng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+murine+esophageal+organoid+culture+method+and+organoid-based+model+of+esophageal+squamous+cell+neoplasia.">A new murine esophageal organoid culture method and organoid-based model of esophageal squamous cell neoplasia.</a> iScience. 24 (12), 103440 (2021).</li><li>Hisha, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+novel+lingual+organoid+culture+system:+generation+of+organoids+having+mature+keratinized+epithelium+from+adult+epithelial+stem+cells.">Establishment of a novel lingual organoid culture system: generation of organoids having mature keratinized epithelium from adult epithelial stem cells.</a> Scientific Reports. 3, 3224 (2013).</li><li>Kalabis, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+mouse+and+human+esophageal+epithelial+cells+in+3D+organotypic+culture.">Isolation and characterization of mouse and human esophageal epithelial cells in 3D organotypic culture.</a> Nature Protocols. 7 (2), 235-246 (2012).</li><li>Nguyen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-&#946;1+alters+esophageal+epithelial+barrier+function+by+attenuation+of+claudin-7+in+eosinophilic+esophagitis.">TGF-&#946;1 alters esophageal epithelial barrier function by attenuation of claudin-7 in eosinophilic esophagitis.</a> Mucosal Immunology. 11 (2), 415-426 (2018).</li><li>Sherrill, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+and+expansion+of+the+eosinophilic+esophagitis+transcriptome+by+RNA+sequencing.">Analysis and expansion of the eosinophilic esophagitis transcriptome by RNA sequencing.</a> Genes and Immunity. 15 (6), 361-369 (2014).</li><li>Ruffner, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+2+stimulation+augments+esophageal+barrier+integrity.">Toll-like receptor 2 stimulation augments esophageal barrier integrity.</a> Allergy. 74 (12), 2449-2460 (2019).</li><li>Kabir, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+transcriptomic+analysis+reveals+cellular+diversity+of+murine+esophageal+epithelium.">Single cell transcriptomic analysis reveals cellular diversity of murine esophageal epithelium.</a> Nature Communications. 13 (1), 1-15 (2022).</li><li>Shimonosono, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alcohol+metabolism+enriches+squamous+cell+carcinoma+cancer+stem+cells+that+survive+oxidative+stress+via+autophagy.">Alcohol metabolism enriches squamous cell carcinoma cancer stem cells that survive oxidative stress via autophagy.</a> Biomolecules. 11 (10), 1479 (2021).</li><li>Flashner, S., Yan, K. S., Nakagawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+organoids:+An+untapped+platform+for+studying+host-microbiome+interactions+in+esophageal+cancers.">3D organoids: An untapped platform for studying host-microbiome interactions in esophageal cancers.</a> Microorganisms. 9 (11), 2182 (2021).</li><li>Liu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox2+cooperates+with+inflammation-mediated+stat3+activation+in+the+malignant+transformation+of+foregut+basal+progenitor+cells.">Sox2 cooperates with inflammation-mediated stat3 activation in the malignant transformation of foregut basal progenitor cells.</a> Cell Stem Cell. 12 (3), 304-315 (2013).</li></ol>

هناك العديد من الخطوات والاعتبارات الحاسمة لتوليد وتحليل MEOs في البروتوكولات الموضحة هنا. لضمان قابلية التكرار والدقة في تجارب MEO ، تعد النسخ المتماثلة البيولوجية والتقنية مهمة. بالنسبة للتكرارات البيولوجية ، فإن اثنين إلى ثلاثة فئران مستقلة تحمل ESCC كافية بشكل عام لكل حالة تجريبية. ومع ذل...

سرطان الخلايا الحرشفية المريئي (ESCC) هو أكثر سرطانات الخلايا الحرشفية البشرية فتكا ، بسبب التشخيص المتأخر ومقاومة العلاج وورم خبيث 1,2. ينشأ ESCC من الظهارة الحرشفية الطبقية ، التي تبطن السطح اللمعي للمريء. تتكون الظهارة الحرشفية من خلايا قاعدية تكاثرية وخلايا متمايزة داخل طبقة الخلايا فوق القاعدية. في ظل الظروف الفسيولوجية ، تعبر الخلايا القاعدية عن علامات مثل p63 و Sox2 و cytokeratin K5 و K14 ، بينما تعبر الخلايا المتمايزة عن K4 و K13 و IVL. الخلايا القاعدية نفسها غير متجانسة وتشمل الخلايا الجذعية المفترضة المحددة بعلامات مثل K153 و CD734. في الاتزان الداخلي، تخضع الخلايا القاعدية للتمايز الطرفي بعد الانقسام داخل طبقة الخلايا فوق القاعدية، في حين تهاجر الخلايا المتمايزة وتتقشر في التجويف لإكمال التجديد الطلائي. يذكرنا ESCC بخلاياهم الأصلية ، ويعرض تمايز الخلايا الحرشفية بدرجات متفاوتة. غالبا ما يصاحب ESCC آفات سلائف نسيجية متعددة البؤر ، تعرف باسم الأورام داخل الظهارة (IEN) أو خلل التنسج ، والتي تضم خلايا قاعدية غير نمطية. بالإضافة إلى التغيرات الظهارية ، يعرض ESCC إعادة تشكيل الأنسجة داخل المقصورة تحت الظهارية ، حيث يتم تنشيط الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان (CAFs) وتجنيد الخلايا المناعية / الالتهابية لتعزيز البيئة المكروية المعززة للورم.
ينطوي التسبب في ESCC على التغيرات الجينية والتعرض لعوامل الخطر البيئية. تشمل الآفات الجينية الرئيسية تعطيل الجينات المثبطة للورم TP53 و CDKN2A (p16INK4A) وتنشيط الجينات المسرطنة CCND1 (cyclin D1) و EGFR ، والتي تبلغ ذروتها في ضعف وظيفة نقطة تفتيش دورة الخلية ، والانتشار الشاذ ، والبقاء على قيد الحياة تحت الإجهاد السمي الجيني المرتبط بالتعرض للمواد المسرطنة البيئية. في الواقع ، تتفاعل التغيرات الجينية بشكل وثيق مع عوامل الخطر السلوكية والبيئية ، وأكثرها شيوعا تعاطي التبغ والكحول. يحتوي دخان التبغ على مواد مسرطنة بشرية مثل الأسيتالديهيد ، وهو أيضا المستقلب الرئيسي للكحول. يحفز الأسيتالديهيد تقريب الحمض النووي والروابط المتقاطعة للحمض النووي ، مما يؤدي إلى تلف الحمض النووي وتراكم طفرات الحمض النووي وعدم استقرار الكروموسومات. بالنظر إلى المحفزات الانقسامية المفرطة والانتشار الشاذ من تنشيط الجينات المسرطنة ، يتم تسهيل التحول الخبيث للخلايا الظهارية المريئية من خلال آليات للتعامل مع الإجهاد السمي الجيني ، بما في ذلك تنشيط مضادات الأكسدة ، والالتهام الذاتي ، والانتقال الظهاري الوسيطة (EMT). ومن المثير للاهتمام ، أن وظائف الحماية الخلوية هذه غالبا ما يتم تنشيطها في الخلايا الجذعية السرطانية ESCC (CSCs) التي تتميز بتعبير CD44 (CD44H) العالي ولديها قدرات بدء الورم ، والغزو ، ورم خبيث ، ومقاومة العلاج5،6،7.
تم تصميم ESCC في زراعة الخلايا وفي نماذجالقوارض 8,9. في العقود الثلاثة الماضية ، تم تطوير نماذج فئران قوية معدلة وراثيا من ESCC. وتشمل هذه الفئران المعدلة وراثيا CCND1 و EGFR 10،11 و p53 و p120Ctn بالضربة القاضية12,13. ومع ذلك ، فإن التغيرات الجينية الفردية لا تؤدي عادة إلى ظهور ESCC سريع. تم التغلب على هذا التحدي باستخدام المواد المسرطنة المريئية التي تلخص بشكل جيد الآفات الوراثية البشرية في ESCC14. على سبيل المثال ، يسرع 4-nitroquinoline-1-oxide (4NQO) تطوير ESCC في الفئران المعدلة وراثيا CCND1 15. في السنوات الأخيرة ، تم التحقيق في الخلايا الجذعية الظهارية المريئية المفترضة ، والخلايا السلفية ، ومصائر كل منها في نماذج الفئران التي يمكن تتبعها من سلالة الخلايا 3,4. علاوة على ذلك ، تم استخدام هذه الفئران التي يمكن تتبعها لاستكشاف خلايا منشأ ESCC وكيف تؤدي هذه الخلايا إلى ظهور CSCs CD44H عبر علم الأنسجة التقليدي والتوصيف الجزيئي القائم على omics7.
أحد المجالات الناشئة المتعلقة بنماذج الفئران هذه هو التطبيق الجديد لتقنيات زراعة الخلايا لتحليل ESCC الحية والخلايا السليفة في نظام عضوي ثلاثي الأبعاد (3D) يتم فيه تلخيص بنية الأنسجة الأصلية خارج الجسم الحي7،8،9. ونمت هذه المواد العضوية 3D بسرعة من تعليق خلية واحدة معزولة من أنسجة الفئران ، بما في ذلك الأورام الأولية والنقيلي (على سبيل المثال ، العقدة الليمفاوية والرئة وآفات الكبد). يتم تضمين الخلايا في مستخلص الغشاء القاعدي (BME) وتغذيتها بوسط زراعة خلايا خال من المصل محدد جيدا. تنمو الكائنات العضوية ثلاثية الأبعاد في غضون 7-10 أيام ، وتكون الهياكل الكروية الناتجة قابلة للزراعة الفرعية ، والحفظ بالتبريد ، والمقايسات لتحليل مجموعة متنوعة من الخصائص والوظائف الخلوية ، بما في ذلك علامات CSC ، EMT ، الالتهام الذاتي ، الانتشار ، التمايز ، وموت الخلايا المبرمج.
يمكن تطبيق هذه الطرق على نطاق واسع على الثقافات العضوية 3D التي أنشئت من أي الأنسجة الظهارية الحرشفية الطبقية ، مثل الغشاء المخاطي للرأس والرقبة (تجويف الفم واللسان والبلعوم والحنجرة) وحتى المعدة الأمامية. الغشاء المخاطي للرأس والرقبة متجاوران مع المريء ، ويشترك النسيجان في تنظيم الأنسجة ووظيفتها وقابليتها للإصابة بالأمراض. يشترك كل من سرطان الخلايا الحرشفية في الرأس والرقبة (HNSCC) و ESCC في الآفات الوراثية وعوامل الخطر البيئية المرتبطة بنمط الحياة مثل التعرض للتبغ والكحول. وتأكيدا على هذا التشابه ، فإن الفئران المعالجة بمحاكاة دخان التبغ 4NQO تطور بسهولة كلا من HNSCC و ESCC. نظرا للسهولة التي يمكن بها تطبيق البروتوكولات الموضحة أدناه على نمذجة HNSCC ، فإننا ندرج تعليمات محددة لإنشاء ثقافات عضوية 3D من هذه الآفات.
هنا ، نقدم بروتوكولات مفصلة لتوليد عضويات 3D مريئية للفئران (MEOs) تمثل الآفات الطبيعية والأورام و ESCC التي تتطور في الفئران المعالجة ب 4NQO. يمكن استخدام سلالات الفئران المختلفة ، بما في ذلك السلالات المختبرية الشائعة مثل C57BL / 6 ومشتقات سلالة الخلايا التي يمكن تتبعها وغيرها من المشتقات المعدلة وراثيا. نؤكد على الخطوات الرئيسية ، بما في ذلك عزل ظهارة المريء الفئرانية الطبيعية أو المريضة ، وإعداد معلقات أحادية الخلية ، وزراعة ومراقبة المواد العضوية 3D المتنامية ، والثقافة الفرعية ، والحفظ بالتبريد ، ومعالجة التحليلات اللاحقة ، بما في ذلك التشكل والتطبيقات الأخرى.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.05% trypsin-EDTA</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>25-300-120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% trypsin-EDTA</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>25-200-114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.4% Trypan Blue</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>T10282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL tuberculin syringe without needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tube</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m cell strainer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>22363549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical tubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-53A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L wide bore micropipette tips</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>212361A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>21 G needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well plate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12-556-006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-Nitroquinoline-1-oxide (4NQO)</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry</td>
			<td>NO250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12-565-270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well plate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12556004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 &#181;m cell strainer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>22363548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>99.9% ethylene propylene glycol</td>
			<td>SK picglobal</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM/F12</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12634028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B</td>
			<td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15290018</td>
			<td>Stock concentration 250 &#181;g/mL, final concentration 0.5 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15240062</td>
			<td>Stock concentration 100x, final concentration 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 supplement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17504044</td>
			<td>Stock concentration 50x, final concentration 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto agar</td>
			<td>BD</td>
			<td>214010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 incubator, e.g.Heracell 150i</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>51026406</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess II FL Automated Cell Counter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AMQAX1000</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryovials</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>03-337-7D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DietGel 76A</td>
			<td>Clear H2O</td>
			<td>72-07-5022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>D4540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354235</td>
			<td>Stock concentration 50 U/mL, final concentration 2.5&#8211;5 U/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25870-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline (PBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14190250</td>
			<td>Stock concentration 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30071.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-386</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezing container</td>
			<td>Corning</td>
			<td>432002</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>G7-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>35050061</td>
			<td>Stock concentration 100x, final concentration 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15630080</td>
			<td>Stock concentration 1 M, final concentration 10 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate/stirrer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>PC-420D</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Armor bead bath (or water bath)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89409-222</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laboratory balance</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>71142841</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel basement membrane extract (BME)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge Minispin</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22620100</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube rack</td>
			<td>Southern Labware</td>
			<td>0061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 supplement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17502048</td>
			<td>Stock concentration 100x, final concentration 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-acetylcysteine (NAC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9165</td>
			<td>Stock concentration 0.5 M, final concentration 1 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M wrap</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>S37440</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>158127-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pathology cassette</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>22-272416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phase-contrast microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant mouse epidermal growth factor (mEGF)</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>315-09-1mg</td>
			<td>Stock concentration 500 ng/&#181;L, final concentration 100 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RN cell-conditioned medium expressing R-Spondin1 and Noggin (RN CM)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Available through the Organoid and Cell Culture Core upon request, final concentration 2%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorval ST 16R centrifuge</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>75004380</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soybean trypsin inhibitor (STI)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>T9128</td>
			<td>Stock concentration 250 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThermoMixer C</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14-285-562 PM</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>Selleck Chemicals</td>
			<td>S1049</td>
			<td>Stock concentration 10 mM, final concentration 10 &#181;M</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling oral-esophageal squamous cell carcinoma in 3d organoids

ينتشر سرطان الخلايا الحرشفية المريئي (ESCC) في جميع أنحاء العالم ، حيث يمثل 90٪ من جميع حالات سرطان المريء كل عام ، وهو الأكثر فتكا من بين جميع سرطانات الخلايا الحرشفية البشرية. على الرغم من التقدم الأخير في تحديد التغيرات الجزيئية المصاحبة لبدء ESCC وتطوره ، لا يزال تشخيص المريض ضعيفا. إن التعليق التوضيحي الوظيفي لهذه التغييرات الجزيئية هو الخطوة التالية الضرورية ويتطلب نماذج تلتقط السمات الجزيئية ل ESCC ويمكن معالجتها بسهولة وبتكلفة زهيدة للتعليق التوضيحي الوظيفي. الفئران المعالجة بمحاكاة دخان التبغ 4-نيتروكينولين 1-أكسيد (4NQO) تشكل بشكل متوقع ESCC والأورام المريئية. وتجدر الإشارة إلى أن آفات 4NQO تنشأ أيضا في تجويف الفم ، والأكثر شيوعا في اللسان ، وكذلك المعدة الأمامية ، والتي تشترك جميعها في ظهارة الحرشفية الطبقية. ومع ذلك ، لا يمكن التلاعب بهذه الفئران ببساطة لاختبار الفرضيات الوظيفية ، حيث أن توليد نماذج الفئران متساوية المنشأ يتطلب وقتا طويلا وموارد. هنا ، نتغلب على هذا القيد عن طريق توليد عضويات ثلاثية الأبعاد (3D) مشتقة من خلية واحدة من الفئران المعالجة ب 4NQO لتوصيف الفئران ESCC أو الخلايا قبل الورمية خارج الجسم الحي. تلتقط هذه الكائنات العضوية السمات البارزة ل ESCC وأورام المريء ، ويمكن الاستفادة منها بثمن بخس وبسرعة لتشكيل نماذج متساوية المنشأ ، ويمكن استخدامها في تجارب زرع الجينات المتزامنة. نوضح كيفية توليد عضويات 3D من أنسجة المريء العادية ، preneoplastic ، و SCC الفئران والحفاظ على هذه المواد العضوية وحفظها بالتبريد. تطبيقات هذه الكائنات العضوية متعددة الاستخدامات واسعة وتشمل استخدام الفئران المعدلة وراثيا والمزيد من التوصيف عن طريق قياس التدفق الخلوي أو الكيمياء الهيستولوجية المناعية ، وتوليد خطوط عضوية متساوية الجينات باستخدام تقنيات كريسبر ، وفحص الأدوية أو زرع الجينات. نعتقد أن الاعتماد الواسع النطاق للتقنيات الموضحة في هذا البروتوكول سيسرع التقدم في هذا المجال لمكافحة العبء الشديد ل ESCC.

يصف هذا البروتوكول عملية توليد عضويات المريء الفأر (MEOs) من أنسجة المريء الطبيعية أو أنسجة ورم ESCC من الفئران المعالجة ب 4NQO وفقا لنظام علاج محدد يتكون من 16 أسبوعا من 4NQO تدار في مياه الشرب ، تليها فترة مراقبة من 10 أسابيع إلى 12 أسبوعا (الشكل 1). ثم يتم القتل الرحيم للفئران لتشريح ا...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Oral-Esophageal Squamous Cell Carcinoma in 3D Organoids at JoVE.com

Modeling Oral-Esophageal Squamous Cell Carcinoma in 3D Organoids

يصف هذا البروتوكول الخطوات الرئيسية لتوليد وتوصيف عضويات 3D عن طريق الفم والمريء التي تمثل آفات سرطان الخلايا الطبيعية والأورام والحرشفية الناجمة عن التسرطن الكيميائي.

نمذجة سرطان الخلايا الحرشفية الفموية المريئية في عضويات 3D

Esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) is prevalent worldwide, accounting for 90% of all esophageal cancer cases each year, and is the deadliest of all ...

سرطان الخلايا الحرشفية المريئي ، ESCC ، مميت ومنتشر في جميع أنحاء العالم. يمكن استخدام المواد العضوية ثلاثية الأبعاد لتسريع التقدم في هذا المجال لمكافحة العبء الشديد ل ESCC. يمكن التلاعب بعضويات 3D المشتقة من خلية واحدة من الفئران المعالجة ب 4NQO بسهولة وبتكلفة زهيدة للتعليق الوظيفي للتغيرات الجزيئية المصاحبة لبدء ESCC وتطويره.يلتقط هذا النموذج عدم التجانس الجيني للأورام التي يسببها الطفرات. لذلك ، توفر هذه الكائنات العضوية منصة ذات صلة من الناحية الفسيولوجية لاختبار استراتيجيات علاجية جديدة أو تحديد التغيرات الجينية البارزة التي تقود تكوين الأورام. سيساعد في إظهار تشريح الحيوانات وجمع الأعضاء ياسوتو توميتا ، وهو موظف مشارك ، وسيظهر نوريهيرو ماتسورا ، زميل أبحاث ما بعد الدكتوراه من مختبري ، إعداد العضو العضوي لإجراء تضمين البارافين.للبدء ، افتح جلد الفئران الرحيمة عن طريق الضغط على الفراء في منتصف البطن واستخدام المقص الجراحي ، قم بعمل شق خط الوسط القحفي الذيلي البطني من أسفل البطن إلى الذقن. بدءا من شق خط الوسط ، قم بعمل جروح شعاعية تمتد إلى الأطراف على جانبي الماوس ، وتضخيم اللوحات الجلدية مفتوحة. لفضح القصبة الهوائية العنقية ، باستخدام مقص تشريح ، قسم الغدد اللعابية عند خط الوسط.لفضح القصبة الهوائية الصدرية ، قم بإزالة القص. قرصة بلطف ورفع الصفاق بالملقط واستخدام مقص لتقسيم الصفاق القحفي الذلي. وبشكل جانبي على طول القفص الصدري.اسحب الكبد برفق من السطح الذيلي للحجاب الحاجز واستخدم المقص لعمل شق صغير في الحجاب الحاجز عند الشق القصي ، وتحديدا على السطح الظهري لعملية الخنجري. بمجرد فصل القفص الصدري عن محتويات الصدر ، أدخل مقصا في شق الحجاب الحاجز وقم بتشريح الجمجمة إلى حزام عنق الرحم الملتصق بشكل وثيق بالسطح الظهري للقص لتجنب تلف الأعضاء أدناه. قطع الأضلاع على جانبي القص باستخدام مقص وإزالة القص.لكشف المريء البطني ، ارفع المعدة برفق من الأمام عن طريق إمساك الغار بالملقط. باستخدام المقص ، تشريح الطحال والبنكرياس والمساريق من المعدة والمريء. لكشف المريء الصدري ، ارفع القصبة الهوائية برفق على الفور إلى غضروف الغدة الدرقية ، وقم بتشريح المريء في الجانب الظهري من القصبة الهوائية باستخدام مقص القزحية.قسم القصبة الهوائية في غضروف الغدة الدرقية بمقص القزحية. قشر القصبة الهوائية من بقية المريء عن طريق تشريحها بعناية في الاتجاه الذيلي. قم بإزالة الرئة والقلب والغدة الصعترية تماما مع القصبة الهوائية.قسم المعدة عند البواب بالمقص. افصل المريء عن الفقرة عن طريق إمساك الغار بالملقط وتشريح الجمجمة. تقسيم المريء على مستوى غضروف الغدة الدرقية وحصاد المريء والمعدة تماما.افصل المعدة والمريء عن طريق تقسيم المريء عند القلب وتشريح أي لفافة على السطح الخارجي للمريء. لحجز عينة للأنسجة ، قم بتقسيمها طوليا بالمقص. ضع المريء السليم المتبقي و PBS البارد على الجليد.افتح المعدة على طول الانحناء الأكبر واغسلها باستخدام برنامج تلفزيوني بما فيه الكفاية. افصل المعدة الأمامية واغسلها باستخدام برنامج تلفزيوني بارد. لحصاد اللسان ، قم بإزالة الإبرة المثبتة من الأنف واسحب اللسان بالملاقط.قطع اللسان لأطول فترة ممكنة ووضعه في برنامج تلفزيوني بارد على الجليد. بعد نقل الأنسجة المنفصلة إلى طبق الثقافة ، قم بإزالة طبقة العضلات بعناية من الظهارة باستخدام الملقط. انقل الظهارة إلى أنبوب طرد مركزي دقيق يحتوي على 500 ميكرولتر من 0.25٪ تربسين واحتضانه في خلاط حراري لمدة 10 دقائق عند 37 درجة مئوية و 800 دورة في الدقيقة.بعد الطرد المركزي لفترة وجيزة ، انقل تعليق الخلية من خلال مصفاة خلية 100 ميكرومتر محفوظة على أنبوب مخروطي سعة 50 ملليلتر مع طرف عريض التجويف باستخدام حركات دائرية ، ثم أضف 3 ملليلتر من مثبطات التربسين فول الصويا ، أو الأمراض المنقولة جنسيا ، من خلال المصفاة باستخدام حركات دائرية للغسيل ، ثم افرك المصفاة بقاعدة مكبس حقنة السل سعة 1 ملليلتر لدفع الخلايا من خلالها. اغسل المصفاة ب 3 ملليلتر من PBS من 3 إلى 5 مرات ، مع تنظيف المصفاة بقاعدة المحقنة بين الغسلات. بعد تكوير الخلايا عن طريق الطرد المركزي ، قم بإزالة المادة الطافية مع ترك 1 ملليلتر من المحلول في الأنبوب لإعادة التعليق.بمجرد إعادة الحبيبات ، انقل تعليق الخلية من خلال مصفاة خلية 70 ميكرومتر إلى أنبوب مخروطي جديد سعة 50 ملليلتر. بعد الطرد المركزي للأنبوب مرة أخرى ، أعد تعليق الحبيبات في 100 ميكرولتر من الوسط العضوي للفأر ، أو MOM ، وقم بإجراء تعداد آلي للخلايا. لوحة 5 ، 000 خلية قابلة للحياة في 75 ٪ استخراج الغشاء القاعدي ، أو BME ، و MOM مع حجم إجمالي 50 ميكرولتر لكل بئر.باستخدام طرف عريض التجويف سعة 200 ميكرولتر ، أضف ببطء قطرة 50 ميكرولتر إلى وسط كل بئر لتجنب التلامس بين الطرف وأسفل أو جوانب البئر. اسمح ل BME بالتصلب لمدة 30 دقيقة في حاضنة عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون و 95٪ رطوبة نسبية. بعد الحضانة ، أضف بعناية 500 ميكرولتر من MOM لكل بئر.قم بتغيير MOM في اليوم 3 أو 4 ، ثم كل 2 إلى 3 أيام بعد ذلك حتى تصبح جاهزة للمرور. احتفظ ب BME المذاب على الثلج ، وقم بتسخين MOM مسبقا ، و 0.05٪ من التربسين ، والأمراض المنقولة جنسيا إلى 37 درجة مئوية قبل الاستخدام. باستخدام طرف ماصة صغيرة عريض التجويف ، اجمع المواد العضوية في قبة BME جنبا إلى جنب مع المادة الطافية وقم بتعطيل BME عن طريق السحب لأعلى ولأسفل.بعد الحصول على الحبيبات العضوية عن طريق الطرد المركزي لفترة وجيزة ، بمجرد إزاحتها ، أعد تعليقها في 500 ميكرولتر من 0.05٪ تربسين. احتضان الأنبوب في خلاط حراري عند 37 درجة مئوية و 800 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق. تعطيل التربسين مع 600 ميكرولتر من الأمراض المنقولة جنسيا.بعد الطرد المركزي والتخلص من المادة الطافية ، أعد تعليق حبيبات الخلية في 100 ميكرولتر من MOM. قم بإجراء عدد تلقائي للخلايا عن طريق استبعاد trypan blue. لإصلاح المواد العضوية ، قم بإزاحة الحبيبات برفق وإعادة تعليقها في 300 ميكرولتر من 4٪ بارافورمالدهيد طوال الليل عند 4 درجات مئوية.بعد ذلك ، قم بإعداد سطح التضمين عن طريق قلب رف أنبوب الطرد المركزي الدقيق وتغطية السطح بورقة من فيلم السقف ، ثم قم بتسمية المعرف العضوي المقابل. تراكب بعناية paraformaldehyde إزالتها في بيليه عضوي مغسول ب PBS عن طريق إضافة 50 ميكرولتر من أجار أسفل جانب الأنبوب. كرر هذه الخطوة.دون إزعاج الحبيبات ، انقل الحبيبات الموجودة في قطرة هلام أجار إلى فيلم السقف على سطح التضمين للتصلب عند 4 درجات مئوية لمدة 45 دقيقة. باستخدام ملقط ، انقل بعناية القطرة التي تحتوي على الحبيبات العضوية الصلبة إلى شريط علم الأمراض المسمى. تم تحليل لسان المريء الطبيعي للفأر وعضويات المعدة الأمامية شكليا عن طريق التصوير الساطع والتلوين النسيجي.أظهر سرطان الخلايا الحرشفية المريئي من فأر معالج ب 4NQO عدم نمطية نووية وتقرن مفاجئ. أظهرت قدرة التجديد الذاتي للعضويات التي تم تقييمها من خلال تحديد معدل تكوين الأعضاء على الثقافة الفرعية أن معدل التكوين يتناقص كدالة للوقت مما يعكس انخفاض الخلايا القاعدية التكاثرية في الكائنات العضوية الناضجة. يتم الكشف عن حركية نمو المواد العضوية من خلال مورفولوجيتها في نقاط زمنية مختلفة.يصبح التقرن في النواة الداخلية للعضويات بارزا بحلول اليوم 10. تبقى الخلايا القاعدية التكاثرية في طبقة الخلايا الخارجية ، حتى في اليوم 14 واليوم 21 نقطة زمنية. يوضح منحنى مضاعفة عدد السكان من عضويات لسان الفأر الطبيعية الناتجة عن الفئران غير المعالجة 4NQO نموها المطرد عبر ممرات متعددة وثقافة طويلة الأجل.المواد العضوية هي منصات للفحص عالي الإنتاجية لتحديد أهداف علاجية جديدة ، والتحرير القائم على كريسبر لاستجواب وظيفة جينية معينة أو ثقافة مشتركة لتحديد التفاعلات في البيئة المكروية للورم التي تؤثر على التحول. وقد مكنتنا هذه التقنية من التحقيق في ظواهر مثل العدوى الجزئية EMT و HPV ، إلى جانب تفاعلها مع الجهاز المناعي في بيولوجيا سرطانات الخلايا الحرشفية في الجهاز الهضمي.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

نموذج للمحيط بالعصب الغزو في الرأس والرقبة قشري سرطان الخلايا

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, ...

Four-color Fluorescence Immunohistochemistry of T-cell Subpopulations in Archival Formalin-fixed, Paraffin-embedded Human Oropharyngeal Squamous Cell Carcinoma Samples

أربعة ألوان مضان المناعية من الخلايا السكانية الفرعية T- خلية في الأرشيفية الفورمالين ثابتة، جزءا لا يتجزأ من البارافين الإنسان البلعوم الخلايا الحرشفية سرطان الخلايا العينات

The four-color fluorescence immunohistochemistry (IHC) technique is a method to quantify cell populations of interest while taking into account their ...

Therapy Testing in a Spheroid-based 3D Cell Culture Model for Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

اختبار في نموذج ثقافة خلية 3D على أساس كروي للرأس والرقبة الحرشفية خلية العلاج

Current treatment options for advanced and recurrent head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) enclose radiation and chemo-radiation approaches with ...

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

تصنيع المصفوفة خارج الخلية اللسان وإعادة تشكيل للسان الخلايا الحرشفية في المختبر

In order to construct an effective and realistic model for tongue squamous cell carcinoma (TSCC) in vitro, the methods were created to produce ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

إينتراموكوسال تلقيح خلايا الخلايا الحرشفية في الفئران للورم التنميط المناعي وتقييم استجابة العلاج

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

Assessing Cell Viability and Death in 3D Spheroid Cultures of Cancer Cells

تقييم صلاحية الخلية والموت في الثقافات الكروية ثلاثية الأبعاد للخلايا السرطانية

Three-dimensional spheroids of cancer cells are important tools for both cancer drug screens and for gaining mechanistic insight into cancer cell biology. ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

مقارنة النقيلي واضحة خلية الخلايا الكلوية نموذج سرطان الخلايا المنشأة في الكلى الماوس وعلى غشاء Chorioallantoic الدجاج

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Multidimensional Coculture System to Model Lung Squamous Carcinoma Progression

نظام ثقافة الرئة المتعددة الأبعاد لنموذج سرطان الرئة الحرشفية

Tumor-stroma interactions play a critical role in the development of lung squamous carcinoma (LUSC). However, understanding how these dynamic interactions ...

Monitoring Cancer Cell Invasion and T-Cell Cytotoxicity in 3D Culture

رصد غزو الخلايا السرطانية والسمية الخلوية للخلايا T-Cell في الثقافة ثلاثية الأبعاد

Significant progress has been made in treating cancer with immunotherapy, although a large number of cancers remain resistant to treatment. A limited ...

Generation and Culturing of High-Grade Serous Ovarian Cancer Patient-Derived Organoids

توليد وزراعة المواد العضوية عالية الجودة المشتقة من سرطان المبيض المصلي

Organoids are 3D dynamic tumor models that can be grown successfully from patient-derived ovarian tumor tissue, ascites, or pleural fluid and aid in the ...