Name: modeling oral-esophageal squamous cell carcinoma in 3d organoids
Uploaded: 2022-12-23T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Oral-Esophageal Squamous Cell Carcinoma in 3D Organoids at JoVE.com

אנו מודים למשאבים המשותפים (ציטומטריית זרימה, פתולוגיה מולקולרית ומיקרוסקופיה קונפוקלית ומיוחדת) במרכז הסרטן המקיף ע"ש הרברט אירווינג באוניברסיטת קולומביה על התמיכה הטכנית. אנו מודים לד"ר אלן דיהל, אדם ג'יי בס וד"ר קווק-קין וונג (NCI P01 Mechanisms of Esophageal Carcinogenesis) ולחברי מעבדות Rustgi ו-Nakagawa על דיונים מועילים. מחקר זה נתמך על ידי מענקי NIH הבאים: P01CA098101 (H.N. ו- A.K.R.), R01DK114436 (H.N.), R01AA026297 (H.N.), L30CA264714 (S.F.), DE031112-01 (F.M.H.), KL2TR001874 (F.M.H.),3R01CA255298-01S1 (J.G.), 2L30DK126621-02
(י.ג.) R01CA266978 (C.L.), R01DK132251 (C.L.), R01DE031873 (C.L.), P30DK132710 (C.M. ו-H.N.) ו-P30CA013696 (A.K.R). H.N. ו- C.L. זכו בפרס הפיילוט Multi-PI של מרכז הסרטן המקיף ע"ש הרברט אירווינג באוניברסיטת קולומביה. H.N. הוא חתן פרס קרן המחקר פאנקוני אנמיה. פ.מ.ה. זכה בפרס קרן מארק לחקר הסרטן (20-60-51-MOME) ובפרס האגודה האמריקאית לחקר הסרטן. J.G. הוא חתן פרס האגודה הגסטרואנטרולוגית האמריקאית (AGA).

ניסויי המורין תוכננו ובוצעו בהתאם לתקנות ותחת פרוטוקול בעלי חיים #AABB1502, נבדקו ואושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת קולומביה. העכברים שוכנו במתקן ראוי לטיפול בבעלי חיים המבטיח טיפול הומני בעכברים ומספק טיפול וטרינרי הולם לעכברים והדרכות בטיחות מעבדה לאנשי המ...

<ol>
	<li>Rustgi, A. K., El-Serag, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Esophageal+carcinoma.">Esophageal carcinoma.</a> The New England Journal of Medicine. 371 (26), 2499-2509 (2014).</li><li>Dotto, G. P., Rustgi, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Squamous+cell+cancers:+A+unified+perspective+on+biology+and+genetics.">Squamous cell cancers: A unified perspective on biology and genetics.</a> Cancer Cell. 29 (5), 622-637 (2016).</li><li>Giroux, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-lived+keratin+15++esophageal+progenitor+cells+contribute+to+homeostasis+and+regeneration.">Long-lived keratin 15+ esophageal progenitor cells contribute to homeostasis and regeneration.</a> The Journal of Clinical Investigation. 127 (6), 2378-2391 (2017).</li><li>DeWard, A. D., Cramer, J., Lagasse, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+heterogeneity+in+the+mouse+esophagus+implicates+the+presence+of+a+nonquiescent+epithelial+stem+cell+population.">Cellular heterogeneity in the mouse esophagus implicates the presence of a nonquiescent epithelial stem cell population.</a> Cell Reports. 9 (2), 701-711 (2014).</li><li>Kinugasa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+SOD2+regulates+epithelial-mesenchymal+transition+and+cell+populations+defined+by+differential+CD44+expression.">Mitochondrial SOD2 regulates epithelial-mesenchymal transition and cell populations defined by differential CD44 expression.</a> Oncogene. 34 (41), 5229-5239 (2015).</li><li>Whelan, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+supports+generation+of+cells+with+high+CD44+expression+via+modulation+of+oxidative+stress+and+Parkin-mediated+mitochondrial+clearance.">Autophagy supports generation of cells with high CD44 expression via modulation of oxidative stress and Parkin-mediated mitochondrial clearance.</a> Oncogene. 36 (34), 4843-4858 (2017).</li><li>Natsuizaka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interplay+between+Notch1+and+Notch3+promotes+EMT+and+tumor+initiation+in+squamous+cell+carcinoma.">Interplay between Notch1 and Notch3 promotes EMT and tumor initiation in squamous cell carcinoma.</a> Nature Communications. 8 (1), 1758 (2017).</li><li>Whelan, K. A., Muir, A. B., Nakagawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Esophageal+3D+culture+systems+as+modeling+tools+in+esophageal+epithelial+pathobiology+and+personalized+medicine.">Esophageal 3D culture systems as modeling tools in esophageal epithelial pathobiology and personalized medicine.</a> Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 5 (4), 461-478 (2018).</li><li>Sachdeva, U. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+cellular+origin+and+progression+of+esophageal+cancer+using+esophageal+organoids.">Understanding the cellular origin and progression of esophageal cancer using esophageal organoids.</a> Cancer Letters. 509, 39-52 (2021).</li><li>Nakagawa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+targeting+of+the+cyclin+D1+oncogene+by+an+Epstein-Barr+virus+promoter+in+transgenic+mice+causes+dysplasia+in+the+tongue,+esophagus+and+forestomach.">The targeting of the cyclin D1 oncogene by an Epstein-Barr virus promoter in transgenic mice causes dysplasia in the tongue, esophagus and forestomach.</a> Oncogene. 14 (10), 1185-1190 (1997).</li><li>Andl, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+mediates+increased+cell+proliferation,+migration,+and+aggregation+in+esophageal+keratinocytes+in+vitro+and+in+vivo.">Epidermal growth factor receptor mediates increased cell proliferation, migration, and aggregation in esophageal keratinocytes in vitro and in vivo.</a> The Journal of Biological Chemistry. 278 (3), 1824-1830 (2003).</li><li>Opitz, O. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+human+oral-esophageal+cancer.">A mouse model of human oral-esophageal cancer.</a> The Journal of Clinical Investigation. 110 (6), 761-769 (2002).</li><li>Stairs, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+p120-catenin+results+in+a+tumor+microenvironment+with+inflammation+and+cancer+that+establishes+it+as+a+tumor+suppressor+gene.">Deletion of p120-catenin results in a tumor microenvironment with inflammation and cancer that establishes it as a tumor suppressor gene.</a> Cancer Cell. 19 (4), 470-483 (2011).</li><li>Tang, X. -. H., Knudsen, B., Bemis, D., Tickoo, S., Gudas, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+cavity+and+esophageal+carcinogenesis+modeled+in+carcinogen-treated+mice.">Oral cavity and esophageal carcinogenesis modeled in carcinogen-treated mice.</a> Clinical Cancer Research. 10, 301-313 (2004).</li><li>Fong, L. Y. Y., Mancini, R., Nakagawa, H., Rustgi, A. K., Huebner, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+cyclin+D1+overexpression+and+zinc+deficiency+disrupts+cell+cycle+and+accelerates+mouse+forestomach+carcinogenesis.">Combined cyclin D1 overexpression and zinc deficiency disrupts cell cycle and accelerates mouse forestomach carcinogenesis.</a> Cancer Research. 63 (14), 4244-4252 (2003).</li><li>Zheng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+murine+esophageal+organoid+culture+method+and+organoid-based+model+of+esophageal+squamous+cell+neoplasia.">A new murine esophageal organoid culture method and organoid-based model of esophageal squamous cell neoplasia.</a> iScience. 24 (12), 103440 (2021).</li><li>Hisha, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+novel+lingual+organoid+culture+system:+generation+of+organoids+having+mature+keratinized+epithelium+from+adult+epithelial+stem+cells.">Establishment of a novel lingual organoid culture system: generation of organoids having mature keratinized epithelium from adult epithelial stem cells.</a> Scientific Reports. 3, 3224 (2013).</li><li>Kalabis, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+mouse+and+human+esophageal+epithelial+cells+in+3D+organotypic+culture.">Isolation and characterization of mouse and human esophageal epithelial cells in 3D organotypic culture.</a> Nature Protocols. 7 (2), 235-246 (2012).</li><li>Nguyen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-&#946;1+alters+esophageal+epithelial+barrier+function+by+attenuation+of+claudin-7+in+eosinophilic+esophagitis.">TGF-&#946;1 alters esophageal epithelial barrier function by attenuation of claudin-7 in eosinophilic esophagitis.</a> Mucosal Immunology. 11 (2), 415-426 (2018).</li><li>Sherrill, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+and+expansion+of+the+eosinophilic+esophagitis+transcriptome+by+RNA+sequencing.">Analysis and expansion of the eosinophilic esophagitis transcriptome by RNA sequencing.</a> Genes and Immunity. 15 (6), 361-369 (2014).</li><li>Ruffner, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+2+stimulation+augments+esophageal+barrier+integrity.">Toll-like receptor 2 stimulation augments esophageal barrier integrity.</a> Allergy. 74 (12), 2449-2460 (2019).</li><li>Kabir, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+transcriptomic+analysis+reveals+cellular+diversity+of+murine+esophageal+epithelium.">Single cell transcriptomic analysis reveals cellular diversity of murine esophageal epithelium.</a> Nature Communications. 13 (1), 1-15 (2022).</li><li>Shimonosono, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alcohol+metabolism+enriches+squamous+cell+carcinoma+cancer+stem+cells+that+survive+oxidative+stress+via+autophagy.">Alcohol metabolism enriches squamous cell carcinoma cancer stem cells that survive oxidative stress via autophagy.</a> Biomolecules. 11 (10), 1479 (2021).</li><li>Flashner, S., Yan, K. S., Nakagawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+organoids:+An+untapped+platform+for+studying+host-microbiome+interactions+in+esophageal+cancers.">3D organoids: An untapped platform for studying host-microbiome interactions in esophageal cancers.</a> Microorganisms. 9 (11), 2182 (2021).</li><li>Liu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox2+cooperates+with+inflammation-mediated+stat3+activation+in+the+malignant+transformation+of+foregut+basal+progenitor+cells.">Sox2 cooperates with inflammation-mediated stat3 activation in the malignant transformation of foregut basal progenitor cells.</a> Cell Stem Cell. 12 (3), 304-315 (2013).</li></ol>

ישנם מספר שלבים ושיקולים קריטיים ליצירה וניתוח של MEOs בפרוטוקולים המתוארים כאן. כדי להבטיח יכולת שחזור וקפדנות בניסויי MEO, שכפולים ביולוגיים וטכניים חשובים שניהם. עבור שכפולים ביולוגיים, שניים עד שלושה עכברים עצמאיים הנושאים ESCC מספיקים בדרך כלל לכל תנאי ניסוי. עם זאת, המספר המתאים של שכפול...

קרצינומה של תאי קשקש בוושט (ESCC) היא הקטלנית ביותר מבין קרצינומות תאי הקשקש האנושיים, בשל האבחנה המאוחרת שלה, עמידות לטיפול וגרורות 1,2. ESCC נובע מאפיתל קשקשי מרובד, אשר מצפה את פני השטח הלומינליים של הוושט. אפיתל הקשקש מורכב מתאי בסיס מתרבים ותאים ממוינים בתוך שכבת התא העל-בסיסי. בתנאים פיזיולוגיים, תאי בסיס מבטאים סמנים כגון p63, Sox2 וציטוקרטין K5 ו-K14, בעוד שתאים ממוינים מבטאים K4, K13 ו-IVL. תאי הבסיס עצמם הם הטרוגניים וכוללים תאי גזע משוערים המוגדרים על ידי סמנים כגון K153 ו- CD734. בהומאוסטזיס, תאי הבסיס עוברים התמיינות טרמינלית פוסט-מיטוטית בתוך שכבת התא העל-בסיסית, בעוד שתאים ממוינים נודדים ומתפרקים לתוך הלומן כדי להשלים את חידוש האפיתל. ESCC, המזכיר את תאי המוצא שלהם, מציג התמיינות תאי קשקש בדרגות שונות. ESCC מלווה לעתים קרובות בנגעים מקדימים היסטולוגיים מולטיפוקליים, המכונים ניאופלזיה תוך-אפיתליאלית (IEN) או דיספלזיה, הכוללים תאים בזלואידים לא טיפוסיים. בנוסף לשינויים באפיתל, ESCC מציג עיצוב מחדש של רקמות בתוך התא התת-אפיתליאלי, שם ההפעלה של פיברובלסטים הקשורים לסרטן (CAFs) וגיוס תאים חיסוניים/דלקתיים מתרחשים כדי לטפח את המיקרו-סביבה המקדמת גידולים.
הפתוגנזה של ESCC כרוכה בשינויים גנטיים וחשיפה לגורמי סיכון סביבתיים. נגעים גנטיים עיקריים כוללים את השבתת הגנים מדכאי הגידול TP53 ו- CDKN2A (p16INK4A) והפעלת האונקוגנים CCND1 (ציקלין D1) ו- EGFR, אשר מגיעים לשיאם בתפקוד לקוי של מחסום מחזור התא, התפשטות חריגה והישרדות תחת לחץ גנוטוקסי הקשור לחשיפה לחומרים מסרטנים סביבתיים. ואכן, שינויים גנטיים מקיימים אינטראקציה הדוקה עם גורמי סיכון התנהגותיים וסביבתיים, לרוב שימוש בטבק ובאלכוהול. עשן טבק מכיל חומרים מסרטנים בבני אדם כגון אצטאלדהיד, שהוא גם המטבוליט העיקרי של אלכוהול. אצטאלדהיד גורם לצינורות DNA ולהצלבות DNA בין-גדיליות, מה שמוביל לנזק לדנ"א ולהצטברות מוטציות DNA וחוסר יציבות כרומוזומלית. בהינתן גירויים מיטוגניים מוגזמים והתפשטות חריגה מהפעלת אונקוגנים, הטרנספורמציה הממאירה של תאי אפיתל הוושט מתאפשרת על ידי מנגנונים להתמודדות עם לחץ גנוטוקסי, כולל הפעלת נוגדי חמצון, אוטופגיה ומעבר אפיתל-מזנכימלי (EMT). באופן מעניין, פונקציות ציטוטופרוטקטיביות אלה מופעלות לעתים קרובות בתאי גזע סרטניים ESCC (CSC) המאופיינים בביטוי CD44 גבוה (CD44H) ויש להם את היכולות של ייזום גידול, פלישה, גרורות ועמידות לטיפול 5,6,7.
ESCC עוצב בתרבית תאים ובמודלים של מכרסמים 8,9. בשלושת העשורים האחרונים פותחו מודלים חזקים של עכברים מהונדסים גנטית של ESCC. אלה כוללים עכברים טרנסגניים CCND1 ו-EGFR 10,11 ועכברי נוקאאוט p53 ו-p120Ctn 12,13. עם זאת, שינויים גנטיים בודדים אינם גורמים בדרך כלל להתפרצות מהירה של ESCC. אתגר זה כבר להתגבר על ידי השימוש של מסרטנים הוושט כי לשחזר היטב את הנגעים הגנטיים האנושיים ESCC14. לדוגמה, 4-nitroquinoline-1-oxide (4NQO) מאיץ את התפתחות ESCC בעכברים טרנסגניים CCND1 15. בשנים האחרונות, תאי גזע אפיתליאליים משוערים של הוושט, תאי אב, וגורלם בהתאמה נחקרו במודלים עכבריים 3,4 הניתנים למעקב אחר שושלת תאים. יתר על כן, עכברים אלה שניתן לעקוב אחר שושלת תאים אלה שימשו לחקר תאי המקור של ESCC וכיצד תאים כאלה יוצרים CSCs CD44H באמצעות היסטולוגיה קונבנציונלית ואפיון מולקולרי מבוסס אומיקס7.
תחום מתפתח אחד הקשור למודלים עכבריים אלה הוא היישום החדש של טכניקות תרבית תאים לניתוח תאי ESCC חיים ותאים מקדימים במערכת אורגנואידים תלת-ממדית (3D) שבה הארכיטקטורה של הרקמות המקוריות משוחזרת ex vivo 7,8,9. אורגנואידים תלת-ממדיים אלה גדלים במהירות מתרחיף חד-תאי המבודד מרקמות מורין, כולל גידולים ראשוניים וגרורתיים (למשל, בלוטות לימפה, ריאות ונגעים בכבד). התאים מוטמעים בתמצית קרום מרתף (BME) ומוזנים בתווך תרבית תאים מוגדר היטב ללא סרום. האורגנואידים התלת-ממדיים גדלים תוך 7-10 ימים, והמבנים הכדוריים המתקבלים מתאימים לתת-תרבית, שימור בהקפאה ובדיקות לניתוח מגוון תכונות ותפקודים תאיים, כולל סמני CSC, EMT, אוטופגיה, התפשטות, התמיינות ומוות תאים אפופטוטיים.
שיטות אלה יכולות להיות מיושמות באופן נרחב על תרביות אורגנואידים תלת-ממדיות שנוצרו מכל רקמת אפיתל קשקשית מרובדת, כגון רירית הראש והצוואר (חלל הפה, הלשון, הלוע והגרון) ואפילו הקיבה הקדמית. רירית הראש והצוואר רציפה עם הוושט, ושתי הרקמות חולקות ארגון רקמות, תפקוד ורגישות דומים למחלות. הן קרצינומה של תאי קשקש בראש ובצוואר (HNSCC) והן ESCC חולקים נגעים גנטיים וגורמי סיכון סביבתיים הקשורים לאורח חיים, כגון חשיפה לטבק ולאלכוהול. כדי להדגיש את הדמיון הזה, עכברים שטופלו בעשן טבק מחקה 4NQO מפתחים בקלות גם HNSCC וגם ESCC. בהתחשב בקלות שבה ניתן ליישם את הפרוטוקולים המתוארים להלן על מידול HNSCC, אנו כוללים הוראות ספציפיות להקמת תרביות אורגנואידים תלת ממדיות מנגעים אלה.
כאן, אנו מספקים פרוטוקולים מפורטים ליצירת אורגנואידים תלת-ממדיים של הוושט (MEOs) המייצגים נגעים נורמליים, פרנאופלסטיים ו-ESCC המתפתחים בעכברים שטופלו ב-4NQO. ניתן להשתמש בזני עכברים שונים, כולל זני מעבדה נפוצים כגון C57BL/6 ומעקב אחר שושלת תאים ונגזרות מהונדסות-גנטית אחרות. אנו מדגישים את שלבי המפתח, כולל בידוד של אפיתל ושט מורין רגיל או חולה, הכנת תרחיפים חד-תאיים, טיפוח וניטור של אורגנואידים תלת-ממדיים גדלים, תת-תרבית, שימור קריוגני ועיבוד לניתוחים הבאים, כולל מורפולוגיה ויישומים אחרים.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.05% trypsin-EDTA</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>25-300-120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% trypsin-EDTA</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>25-200-114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.4% Trypan Blue</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>T10282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL tuberculin syringe without needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tube</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m cell strainer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>22363549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical tubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-53A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L wide bore micropipette tips</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>212361A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>21 G needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well plate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12-556-006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-Nitroquinoline-1-oxide (4NQO)</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry</td>
			<td>NO250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12-565-270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well plate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12556004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 &#181;m cell strainer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>22363548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>99.9% ethylene propylene glycol</td>
			<td>SK picglobal</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM/F12</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12634028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B</td>
			<td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15290018</td>
			<td>Stock concentration 250 &#181;g/mL, final concentration 0.5 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15240062</td>
			<td>Stock concentration 100x, final concentration 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 supplement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17504044</td>
			<td>Stock concentration 50x, final concentration 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto agar</td>
			<td>BD</td>
			<td>214010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 incubator, e.g.Heracell 150i</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>51026406</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess II FL Automated Cell Counter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AMQAX1000</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryovials</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>03-337-7D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DietGel 76A</td>
			<td>Clear H2O</td>
			<td>72-07-5022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>D4540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354235</td>
			<td>Stock concentration 50 U/mL, final concentration 2.5&#8211;5 U/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25870-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline (PBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14190250</td>
			<td>Stock concentration 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30071.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-386</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezing container</td>
			<td>Corning</td>
			<td>432002</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>G7-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>35050061</td>
			<td>Stock concentration 100x, final concentration 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15630080</td>
			<td>Stock concentration 1 M, final concentration 10 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate/stirrer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>PC-420D</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Armor bead bath (or water bath)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89409-222</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laboratory balance</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>71142841</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel basement membrane extract (BME)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge Minispin</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22620100</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube rack</td>
			<td>Southern Labware</td>
			<td>0061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 supplement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17502048</td>
			<td>Stock concentration 100x, final concentration 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-acetylcysteine (NAC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9165</td>
			<td>Stock concentration 0.5 M, final concentration 1 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M wrap</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>S37440</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>158127-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pathology cassette</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>22-272416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phase-contrast microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant mouse epidermal growth factor (mEGF)</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>315-09-1mg</td>
			<td>Stock concentration 500 ng/&#181;L, final concentration 100 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RN cell-conditioned medium expressing R-Spondin1 and Noggin (RN CM)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Available through the Organoid and Cell Culture Core upon request, final concentration 2%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorval ST 16R centrifuge</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>75004380</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soybean trypsin inhibitor (STI)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>T9128</td>
			<td>Stock concentration 250 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThermoMixer C</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14-285-562 PM</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>Selleck Chemicals</td>
			<td>S1049</td>
			<td>Stock concentration 10 mM, final concentration 10 &#181;M</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling oral-esophageal squamous cell carcinoma in 3d organoids

קרצינומה של תאי קשקש בוושט (ESCC) נפוצה ברחבי העולם, ומהווה 90% מכלל מקרי סרטן הוושט מדי שנה, והיא הקטלנית ביותר מבין כל קרצינומות תאי הקשקש האנושיים. למרות ההתקדמות האחרונה בהגדרת השינויים המולקולריים המלווים את ההתחלה וההתפתחות של ESCC, הפרוגנוזה של המטופלים נותרה גרועה. הביאור הפונקציונלי של שינויים מולקולריים אלה הוא השלב הבא ההכרחי ודורש מודלים שגם לוכדים את התכונות המולקולריות של ESCC וגם ניתנים למניפולציה בקלות ובזול לביאור פונקציונלי. עכברים שטופלו בעשן טבק מחקה תחמוצת 4-nitroquinoline 1-oxide (4NQO) באופן צפוי יוצרים ESCC ופרנאופלזיה של הוושט. יש לציין כי נגעים 4NQO מתעוררים גם בחלל הפה, לרוב בלשון, כמו גם בקדמת הבטן, אשר כולם חולקים את אפיתל הקשקש המרובד. עם זאת, לא ניתן פשוט לתמרן עכברים אלה לבדיקת השערות פונקציונליות, מכיוון שיצירת מודלים של עכברים איזוגניים דורשת זמן ומשאבים. כאן, אנו מתגברים על מגבלה זו על ידי יצירת אורגנואידים תלת-ממדיים (תלת-ממדיים) שמקורם בתא יחיד מעכברים שטופלו ב-4NQO כדי לאפיין תאי ESCC (ESCC) או תאים פרה-נאופלסטיים ex vivo. אורגנואידים אלה לוכדים את התכונות הבולטות של ESCC ופרנאופלזיה של הוושט, ניתן למנף אותם בזול ובמהירות ליצירת מודלים איזוגניים, וניתן להשתמש בהם לניסויי השתלה סינגניים. אנו מדגימים כיצד ליצור אורגנואידים תלת-ממדיים מרקמת ושט רגילה, פרנאופלסטית ו-SCC מורין ולתחזק ולשמר בהקפאה אורגנואידים אלה. היישומים של אורגנואידים מגוונים אלה הם רחבים וכוללים שימוש בעכברים מהונדסים גנטית ואפיון נוסף על ידי ציטומטריית זרימה או אימונוהיסטוכימיה, יצירת קווי אורגנואידים איזוגניים באמצעות טכנולוגיות CRISPR, וסינון תרופות או השתלות סינגניות. אנו מאמינים כי האימוץ הנרחב של הטכניקות המוצגות בפרוטוקול זה יאיץ את ההתקדמות בתחום זה כדי להילחם בנטל החמור של ESCC.

פרוטוקול זה מתאר את התהליך של יצירת אורגנואידים של הוושט (MEOs) מרקמת ושט רגילה או מרקמת גידול ESCC מעכברים שטופלו ב-4NQO בהתאם למשטר טיפול ספציפי המורכב מ-16 שבועות של 4NQO הניתנים במי שתייה, ולאחר מכן תקופת תצפית של 10 שבועות עד 12 שבועות (איור 1). לאחר מכן מרדימים את העכברים לצורך נתיח...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Oral-Esophageal Squamous Cell Carcinoma in 3D Organoids at JoVE.com

Modeling Oral-Esophageal Squamous Cell Carcinoma in 3D Organoids

פרוטוקול זה מתאר את השלבים העיקריים ליצירה ולאפיון אורגנואידים תלת-ממדיים אוראליים-ושטיים המייצגים נגעים נורמליים, פרה-נאופלסטיים ונגעי קרצינומה של תאי קשקש הנגרמים באמצעות קרצינוגנזה כימית.

מידול קרצינומה של תאי קשקש אוראליים-ושטיים באורגנואידים תלת-ממדיים

Esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) is prevalent worldwide, accounting for 90% of all esophageal cancer cases each year, and is the deadliest of all ...

קרצינומה של תאי קשקש בוושט, ESCC, היא קטלנית ונפוצה ברחבי העולם. ניתן להשתמש באורגנואידים תלת מימדיים כדי להאיץ את ההתקדמות בתחום כדי להילחם בנטל החמור של ESCC. אורגנואידים תלת-ממדיים שמקורם בתא בודד מעכברים שטופלו ב-4NQO ניתנים למניפולציה קלה וזולה לצורך ביאור פונקציונלי של השינויים המולקולריים הנלווים לאתחול והתפתחות של ESCC.מודל זה לוכד את ההטרוגניות הגנטית של גידולים הנגרמים על ידי מוטגן. לכן, אורגנואידים אלה מספקים פלטפורמה רלוונטית מבחינה פיזיולוגית לבחון אסטרטגיות טיפוליות חדשניות או לזהות את השינויים הגנטיים הבולטים המניעים גידולים. מי שיעזור להדגים את נתיחת בעלי החיים ואיסוף האיברים יהיה יאסוטו טומיטה, עמית צוות, ומי שידגים את הכנת האורגנואיד להליך שיבוץ פרפין יהיה נוריהירו מאטסורה, עמית מחקר פוסט-דוקטורט מהמעבדה שלי.כדי להתחיל, לפתוח את העור של עכברים מורדמים על ידי צביטת הפרווה באמצע הבטן באמצעות מספריים כירורגיים, לבצע חתך craniocaudal, קו האמצע הגחוני מן הבטן התחתונה אל הסנטר. החל מהחתך בקו האמצע, לבצע חתכים רדיאליים המשתרעים על הגפיים משני צידי העכבר, לנפח את דשי העור פתוח. כדי לחשוף את קנה הנשימה הצווארי, באמצעות מספריים ניתוח, לחלק את בלוטות הרוק בקו האמצע.כדי לחשוף את קנה הנשימה החזי, להסיר את עצם החזה. צובטים בעדינות ומרימים את הצפק במלקחיים ומשתמשים במספריים כדי לחלק את הצפק באופן קרניוקולי. ולרוחב לאורך כלוב הצלעות.משכו בעדינות את הכבד מהמשטח הקאודלי של הסרעפת והשתמשו במספריים כדי לבצע חתך קטן בסרעפת בחריץ עצם החזה, במיוחד במשטח הגבי של תהליך הקסיפואיד. לאחר הפרדת כלוב הצלעות מתכולת בית החזה, הכניסו מספריים לחתך בסרעפת ונתחו גולגולתית לחגורת צוואר הרחם הנצמדת היטב למשטח הגבי של עצם החזה כדי למנוע נזק לאיברים שמתחת. חותכים את הצלעות משני צדי עצם החזה באמצעות מספריים ומסירים את עצם החזה.כדי לחשוף את הוושט הבטן, להרים בעדינות את הבטן הקדמית על ידי החזקת האנטרום עם מלקחיים. בעזרת מספריים מנתחים את הטחול, הלבלב והמזנטריה מהקיבה והוושט. כדי לחשוף את הוושט החזי, להרים בעדינות את קנה הנשימה מיד caudal לסחוס בלוטת התריס, ולנתח את הוושט של הצד הגבי של קנה הנשימה באמצעות מספריים הקשתית.מחלקים את קנה הנשימה בסחוס בלוטת התריס בעזרת מספריים של הקשתית. מקלפים את קנה הנשימה משארית הוושט על ידי ניתוחו בזהירות בכיוון הקאודלי. הוציאו את הריאה, הלב ובלוטת התימוס לחלוטין מקנה הנשימה.מחלקים את הבטן בפילורוס עם מספריים. להפריד את הוושט מן החוליה על ידי החזקת האנטרום עם מלקחיים לנתח גולגולת. מחלקים את הוושט לרמה של סחוס בלוטת התריס וקוצרו את הוושט והקיבה לגמרי.הפרידו את הקיבה והוושט על ידי חלוקת הוושט בקרדיה ונתחו כל פאשיה על פני השטח החיצוניים של הוושט. כדי להזמין מדגם עבור היסטולוגיה, לפצל אורך עם מספריים. מניחים את שארית הוושט וה-PBS הקר על קרח.פתח את הבטן לאורך העקמומיות הגדולה יותר ושטוף עם PBS מספיק. יש להפריד את הבטן הקדמית ולשטוף עם PBS קר. כדי לקצור את הלשון, להסיר את המחט נעוצה מן האף ולשלוף את הלשון עם פינצטה.חותכים את הלשון זמן רב ככל האפשר ומניחים אותה PBS קר על קרח. לאחר העברת הרקמה המנותקת לצלחת תרבית, להסיר בזהירות את שכבת השריר מן האפיתל באמצעות מלקחיים. מעבירים את האפיתל לצינור מיקרוצנטריפוגה המכיל 500 מיקרוליטר של 0.25% טריפסין ודגרים בתרמומיקסר למשך 10 דקות ב-37 מעלות צלזיוס ו-800 סל"ד.לאחר צנטריפוגה קצרה, העבירו את תרחיף התא דרך מסננת תאים של 100 מיקרומטר המוחזקת על צינור חרוטי של 50 מיליליטר עם קצה רחב באמצעות תנועות מעגליות, לאחר מכן הוסיפו 3 מיליליטר של מעכב טריפסין סויה, או STI, דרך המסננת באמצעות תנועות מעגליות כדי לשטוף, ואז לקרצף את המסננת עם בסיס של מזרק שחפת 1 מיליליטר כדי לדחוף את התאים דרך. לשטוף את המסננת עם 3 מיליליטר של PBS 3 עד 5 פעמים, קרצוף המסננת עם הבסיס של מזרק בין שטיפות. לאחר הורדת התאים על ידי צנטריפוגה, הסר את הסופרנאטנט והשאיר 1 מיליליטר של תמיסה בצינור להשעיה מחדש.לאחר השעיית הגלולה מחדש, העבירו את תרחיף התא דרך מסננת תאים של 70 מיקרומטר לתוך צינור חרוטי חדש של 50 מיליליטר. לאחר צנטריפוגה של הצינור שוב, השהה מחדש את הגלולה ב -100 מיקרוליטר של מדיום אורגנואיד עכבר, או MOM, ובצע ספירת תאים אוטומטית. צלחת 5, 000 תאים קיימא ב 75% תמצית קרום מרתף, או BME, ו MOM עם נפח כולל 50 מיקרוליטר לכל באר.בעזרת קצה רחב של 200 מיקרוליטר, מוסיפים לאט טיפת 50 מיקרוליטר למרכז כל באר תוך הימנעות ממגע בין הקצה לתחתית או לצדדים של הבאר. לאפשר BME להתמצק במשך 30 דקות באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני ו 95% לחות יחסית. לאחר הדגירה, בזהירות להוסיף 500 מיקרוליטר של MOM לכל באר.שנה את MOM ביום 3 או 4, ולאחר מכן כל 2 עד 3 ימים לאחר מכן עד מוכן למעבר. יש לשמור את ה-BME המופשר על קרח, לחמם מראש את MOM, 0.05% טריפסין ו-STI לטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס לפני השימוש. בעזרת קצה מיקרופיפטה רחב משעמם, אספו את האורגנואידים בכיפת ה-BME יחד עם הסופרנאטנט ושבשו את ה-BME על ידי פיפטינג למעלה ולמטה.לאחר קבלת גלולת האורגנואיד על ידי צנטריפוגה קצרה, ברגע שהוא נעקר, להשעות אותו מחדש ב 500 מיקרוליטר של 0.05% טריפסין. דוגרים על הצינור בתרמיקסר בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-800 סל"ד למשך 10 דקות. להשבית את טריפסין עם 600 מיקרוליטר של STI.לאחר צנטריפוגה והשלכת supernatant, להשעות מחדש את גלולת התא ב 100 מיקרוליטר של MOM. בצע ספירת תאים אוטומטית על-ידי אי-הכללה של כחול טריפאן. כדי לתקן את האורגנואידים, עקרו בעדינות את הגלולה והשהו מחדש ב-300 מיקרוליטר של 4% פרפורמלדהיד למשך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס.לאחר מכן, הכינו משטח הטבעה על ידי היפוך מתלה צינור מיקרוצנטריפוגה וכיסוי המשטח בסדין של סרט תקרה, ולאחר מכן תוויתו עם מזהה האורגנואיד המתאים. כיסו בזהירות את הפרפורמלדהיד שהוסר בגלולת אורגנואיד שטופה PBS על ידי הוספת 50 מיקרוליטר אגר בצד הצינור. חזור על שלב זה.מבלי להפריע לכדור, מעבירים את הגלולה בטיפת אגר ג'ל לסרט התקרה על משטח ההטבעה למיצוק ב 4 מעלות צלזיוס למשך 45 דקות. בעזרת מלקחיים, מעבירים בזהירות את הטיפה המכילה את גלולת האורגנואיד המוצקה לקלטת פתולוגיה מסומנת. האורגנואידים הרגילים של לשון הוושט והקיבה הקדמית נותחו מורפולוגית על ידי הדמיית שדה בהיר וצביעה היסטולוגית.קרצינומה של תאי קשקש בוושט מעכבר שטופל ב-4NQO הציגה אטיפיה גרעינית וקרטיניזציה פתאומית. יכולת ההתחדשות העצמית של אורגנואידים שהוערכה על ידי קביעת קצב היווצרות האורגנואידים על תת-תרבית הראתה כי קצב ההיווצרות יורד כפונקציה של זמן המשקפת ירידה בתאי בזלואידים מתרבים באורגנואידים שהתבגרו. קינטיקה הגדילה של האורגנואידים מתגלה על ידי המורפולוגיה שלהם בנקודות זמן שונות.קרטיניזציה של הליבה הפנימית של אורגנואידים הופכת בולטת ביום ה-10. תאי הבזלואיד המתרבים נשארים בשכבת התא החיצונית ביותר, אפילו ביום ה-14 וביום ה-21 בנקודות הזמן. עקומת הכפלת אוכלוסייה של אורגנואידים נורמליים של לשון עכבר שנוצרו מעכברים לא מטופלים ב-4NQO מדגימה את גדילתם היציבה על פני מעברים מרובים ותרבית ארוכת טווח.אורגנואידים הם פלטפורמות לסינון בתפוקה גבוהה לזיהוי מטרות טיפוליות חדשות, עריכה מבוססת קריספר לחקירת תפקוד גנים ספציפי או תרבית משותפת כדי להגדיר אילו אינטראקציות במיקרו-סביבה של הגידול משפיעות על טרנספורמציה. טכניקה זו אפשרה לנו לחקור תופעות כגון EMT חלקי וזיהום HPV, יחד עם האינטראקציה שלהם עם המערכת החיסונית בביולוגיה של סרטן תאי קשקש במערכת העיכול.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

מודל הפלישה Perineural ב קרצינומה תא ראש וצוואר קשקש

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, ...

Four-color Fluorescence Immunohistochemistry of T-cell Subpopulations in Archival Formalin-fixed, Paraffin-embedded Human Oropharyngeal Squamous Cell Carcinoma Samples

ארבע צבע הקרינה אימונוהיסטוכימיה של T- תאים subpopulations ב פורמולה קבוע פורמאלית, פרפין, מוטבע האדם דגימות שלפוחית ​​השתן דגימות קרצינומה של תאי קשקש

The four-color fluorescence immunohistochemistry (IHC) technique is a method to quantify cell populations of interest while taking into account their ...

Therapy Testing in a Spheroid-based 3D Cell Culture Model for Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

טיפול בדיקות במודל תרבות המבוסס ספרואיד Cell תלת-ממד עבור קרצינומה של תאים קשקשיים בצוואר ואחראי

Current treatment options for advanced and recurrent head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) enclose radiation and chemo-radiation approaches with ...

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

ייצור של הלשון מטריצה חוץ-תאית, שיחזור של הלשון קרצינומה של תאים קשקשיים במבחנה

In order to construct an effective and realistic model for tongue squamous cell carcinoma (TSCC) in vitro, the methods were created to produce ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

חיסון intramucosal של תאי קרצינומה של תאים קשקשיים עכברים עבור פרופיל החיסונית הגידול והערכת התגובה לטיפול

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

Assessing Cell Viability and Death in 3D Spheroid Cultures of Cancer Cells

הערכת הכדאיות תא ומוות ב 3D בתרבויות ספרואיד של תאים סרטניים

Three-dimensional spheroids of cancer cells are important tools for both cancer drug screens and for gaining mechanistic insight into cancer cell biology. ...

Comparing Metastatic Clear Cell Renal Cell Carcinoma Model Established in Mouse Kidney and on Chicken Chorioallantoic Membrane

השוואת הכליה גרורות תא כליות קרצינומה של תא מודל הוקמה בתוך כליה העכבר על עוף כוראולאלי ממברנה

Metastatic clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of kidney cancer. Localized ccRCC has a favorable surgical outcome. However, ...

Multidimensional Coculture System to Model Lung Squamous Carcinoma Progression

מערכת מרב התרבות Coculture מודל ריאות קשקש התקדמות קרצינומה

Tumor-stroma interactions play a critical role in the development of lung squamous carcinoma (LUSC). However, understanding how these dynamic interactions ...

Monitoring Cancer Cell Invasion and T-Cell Cytotoxicity in 3D Culture

ניטור פלישת תאים סרטניים וcytotoxicity T-Cell בתרבות 3D

Significant progress has been made in treating cancer with immunotherapy, although a large number of cancers remain resistant to treatment. A limited ...

Generation and Culturing of High-Grade Serous Ovarian Cancer Patient-Derived Organoids

יצירה וטיפוח של אורגנואידים שמקורם בסרטן השחלות הסרוסי ברמה גבוהה

Organoids are 3D dynamic tumor models that can be grown successfully from patient-derived ovarian tumor tissue, ascites, or pleural fluid and aid in the ...