Name: maintenance of a lateral fluid percussion injury device
Uploaded: 2023-04-21T14:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Maintenance of a Lateral Fluid Percussion Injury Device at JoVE.com

המחברים רוצים להודות ל-Custom Design &; Fabrication Inc. על הסיוע הטכני והתמיכה שלהם. עבודה זו מומנה על ידי מענקי המכונים הלאומיים לבריאות R01NS120099-01A1 ו- R37HD059288-19.

1. ניקוי גליל LFPI
<ol><li>נתק בזהירות את המזרקים המחוברים לבית המתמר וליציאת המילוי, כמו גם את הכבל המחובר למתמר הלחץ (ראה איור 1 לתרשים של רכיבי התקן פציעה).</li>
	<li>תוך זהירות שלא להפיל את הצילינדר, פתח את ידיות היד בחלק האחורי של המכשיר מהדקי הצילינדר כדי לשחרר את הצילינ...

<ol>
	<li>Centers for Disease Control and Prevention. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surveillance+Report+of+Traumatic+Brain+Injury-related+Emergency+Department+Visits,+Hospitalizations,+and+Deaths.">Surveillance Report of Traumatic Brain Injury-related Emergency Department Visits, Hospitalizations, and Deaths.</a> Centers for Disease Control and Prevention, U.S. Department of Health and Human Services. , (2014).</li><li>Dewan, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimating+the+global+incidence+of+traumatic+brain+injury.">Estimating the global incidence of traumatic brain injury.</a> Journal of Neurosurgery. 130 (4), 1080-1097 (2018).</li><li>National Center for Injury Prevention and Control; Division of Unintentional Injury Prevention. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Traumatic Brain Injury in the United States: Epidemiology and Rehabilitation. , (2015).</li><li>Holm, L., Cassidy, J. D., Carroll, L. J., Borg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Summary+of+the+WHO+Collaborating+Centre+for+neurotrauma+task+force+on+mild+traumatic+brain+injury.">Summary of the WHO Collaborating Centre for neurotrauma task force on mild traumatic brain injury.</a> Journal of Rehabilitation Medicine. 37 (3), 137-141 (2005).</li><li>Pavlovic, D., Pekic, S., Stojanovic, M., Popovic, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traumatic+brain+injury:+neuropathological,+neurocognitive+and+neurobehavioral+sequelae.">Traumatic brain injury: neuropathological, neurocognitive and neurobehavioral sequelae.</a> Pituitary. 22 (3), 270-282 (2019).</li><li>Dixon, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fluid+percussion+model+of+experimental+brain+injury+in+the+rat.">A fluid percussion model of experimental brain injury in the rat.</a> Journal of Neurosurgery. 67 (1), 110-119 (1987).</li><li>McIntosh, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traumatic+brain+injury+in+the+rat:+characterization+of+a+lateral+fluid-percussion+model.">Traumatic brain injury in the rat: characterization of a lateral fluid-percussion model.</a> Neuroscience. 28 (1), 233-244 (1989).</li><li>Ma, X., Aravind, A., Pfister, B. J., Chandra, N., Haorah, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+traumatic+brain+injury+and+assessment+of+injury+severity.">Animal models of traumatic brain injury and assessment of injury severity.</a> Molecular Neurobiology. 56 (8), 5332-5345 (2019).</li><li>Nwafor, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pediatric+traumatic+brain+injury:+an+update+on+preclinical+models,+clinical+biomarkers,+and+the+implications+of+cerebrovascular+dysfunction.">Pediatric traumatic brain injury: an update on preclinical models, clinical biomarkers, and the implications of cerebrovascular dysfunction.</a> Journal of Central Nervous System Disease. 14, (2022).</li><li>Turner, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+chronic+traumatic+encephalopathy:+the+way+forward+for+future+discovery.">Modeling chronic traumatic encephalopathy: the way forward for future discovery.</a> Frontiers in Neurology. 6, 223 (2015).</li><li>Petersen, A., Soderstrom, M., Saha, B., Sharma, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+traumatic+brain+injury:+a+review+of+pathophysiology+to+biomarkers+and+treatments.">Animal models of traumatic brain injury: a review of pathophysiology to biomarkers and treatments.</a> Experimental Brain Research. 239 (10), 2939-2950 (2021).</li><li>Sullivan, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid-percussion+model+of+mechanical+brain+injury+in+the+cat.">Fluid-percussion model of mechanical brain injury in the cat.</a> Journal of Neurosurgery. 45 (5), 521-534 (1976).</li><li>Pernici, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+optical+imaging+technique+to+visualize+progressive+axonal+damage+after+brain+injury+in+mice+reveals+responses+to+different+minocycline+treatments.">Longitudinal optical imaging technique to visualize progressive axonal damage after brain injury in mice reveals responses to different minocycline treatments.</a> Scientific Reports. 10, 7815-78 (2020).</li></ol>

הטכניקות המתוארות לעיל מדגימות כיצד לתחזק כראוי מכשיר LFPI. ניקוי וניטור שגרתיים נחוצים כדי לשמור על תפקוד תקין ואמין של מכשיר LFPI. בנוסף, בשל אופיו הפולשני של הליך LFPI, חובה לנקות את המכשיר ביסודיות כדי למנוע זיהום של חיות מעבדה. 
הימנעות מהיווצרות בועות אוויר במכשיר חיונית להש...

פגיעה מוחית טראומטית (TBI) נגרמת על-ידי כוח פתאומי המופעל על הראש. בעקבות פציעות ראשוניות הנובעות מהפגיעה הפיזית, ניצולי פגיעה מוחית טראומטית חווים בדרך כלל פגיעות משניות, כולל ליקויים קוגניטיביים וליקויים נוירולוגיים הקשורים לתגובות פיזיולוגיות לפגיעה הראשונית1. מעריכים שכ-69 מיליון אנשים ברחבי העולם סובלים מפגיעה מוחית טראומטית מדי שנה2. בארצות הברית לבדה, כ-2.5 מיליון ביקורים ואשפוזים בחדרי מיון הקשורים לפגיעה מוחית טראומטית מתרחשים מדי שנה, מה שהופך את TBI לאחד הגורמים המובילים לנכות ומוות בקרב ילדים ומבוגרים צעירים3. TBI יכולה להיות מסווגת כקלה, בינונית או חמורה, כאשר TBI קלה (mTBI) מהווה כ-70%-90% ממקרי TBI4. פתולוגיה היסטולוגית וקוגניטיבית של TBI יכולה להתרחש בתוך דקות עד שעות מרגע הפציעה, וההשפעות של TBI יכולות להימשך חודשים עד שנים לאחר הנזק הראשוני5.
הפיתוח של מודלים ניסיוניים סייע בהבנת ההשפעות והמנגנונים הבסיסיים של פגיעה מוחית טראומטית. מודל אחד כזה, פגיעה בכלי הקשה של נוזל רוחבי (LFPI), משמש בדרך כלל להערכת TBI in vivo. LFPI משחזר באופן הדוק פתולוגיות הקשורות לפגיעה מוחית טראומטית אנושית, כולל הפרעות בכלי הדם, דימומים, אובדן עצבי, דלקת, גליוזה והפרעות מולקולריות 6,7,8. טכניקת LFPI משמשת למגוון רחב של יישומים ניסיוניים, כולל מידול TBI בילדים, כמו גם מצבים נוירודגנרטיביים כרוניים, כגון אנצפלופתיה טראומטית כרונית 9,10. LFPI היא שיטה מוגדרת היטב וניתנת לשחזור של TBI ניסיוני המאפשר להתאים את חומרת הפציעה11. למכשיר ה-LFPI יש כמה מרכיבים חשובים, ביניהם: מטוטלת עם פטיש משוקלל, בוכנה, גליל מלא נוזל, מתמר לחץ, אוסצילוסקופ דיגיטלי, וצינור קטן בקצה הגליל עם מנעול Luer שמתחבר לרכזת על גולגולת החיה (איור 1). LFPI פועל על ידי הנעת המטוטלת לתוך הבוכנה, יצירת גל של לחץ דרך הנוזל (מים degassed deionized או מלוחים) לתוך המוח של החיה המחוברת; זה מגביר את הלחץ התוך גולגולתי, ובכך משכפל את התכונות המכניות והשינויים הביולוגיים של TBI12. בנוסף, בעלי חיים המשמשים בניסויי LFPI עוברים כריתת גולגולת על מנת לחשוף את המוח להשפעת לחץ הנוזלים של המכשיר.
תחזוקה וניטור שגרתיים נחוצים כדי להבטיח שמכשיר ה- LFPI פועל במדויק. השיטות הבאות חיוניות למניעת החדרת בועות אוויר מזהמות למכשיר. כאן, אנו מדגימים שיטות לניקוי, מילוי והרכבה כראוי של מכשיר LFPI. נדון גם ביציאות אוסצילוסקופ ובזמני תיקון עכבר כדרכים לאשר את הכדאיות של ה- LFPI.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2 - 10 mL syringes with Luer lock capability</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Ensures that needle is secure and reduces possible leaks of fluid&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Degassed fluid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Helps to reduce air bubble formation during injury procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluid Percussion Injury (FPI) device (Model 01-B)</td>
			<td>Custom Designs &#38; Fabrications Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Injury device used to model TBI in rodents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mild detergent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Allows to thoroughly clean the LFPI cylinder&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petroleum Jelly</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used as a water-repellent and protects LFPI device form rust</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teflon tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Helps with tight seal of pipe joints on the LFPI device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>*Materials other than the LFPI device can be purchased from any reliable company.</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

maintenance of a lateral fluid percussion injury device

פגיעה מוחית טראומטית (TBI) אחראית לכ-2.5 מיליון ביקורים ואשפוזים בחדרי מיון מדי שנה, והיא גורם מוביל למוות ונכות בקרב ילדים ומבוגרים צעירים. פגיעה מוחית טראומטית נגרמת על-ידי כוח פתאומי המופעל על הראש, וכדי להבין טוב יותר TBI אנושי ואת המנגנונים העומדים בבסיסו, יש צורך במודלים ניסיוניים של פגיעה. פגיעה בכלי הקשה בנוזל הצידי (באנגלית: Lateral fluid percussion injury או בקיצור LFPI) היא מודל פציעות נפוץ בשל דמיון בשינויים הפתולוגיים שנמצאו בפגיעה מוחית טראומטית אנושית בהשוואה ל-LFPI, כולל דימומים, הפרעה בכלי הדם, ליקויים נוירולוגיים ואובדן נוירונים. LFPI משתמשת במטוטלת וצילינדר מלא נוזל, כאשר האחרון בעל בוכנה ניתנת להזזה בקצה אחד, וחיבור נעילת Luer לצינורות נוקשים ומלאי נוזל בקצה השני. הכנת החיה כרוכה בביצוע כריתת גולגולת והצמדת רכזת Luer מעל האתר. למחרת, הצינור ממכשיר הפציעה מחובר לרכזת Luer על גולגולת החיה והמטוטלת מורמת לגובה מוגדר ומשוחררת. השפעת המטוטלת עם הבוכנה יוצרת פולס לחץ אשר מועבר לדורה מאטר השלם של החיה דרך הצינור ומייצר את TBI הניסיוני. טיפול ותחזוקה נאותים חיוניים כדי שמכשיר ה- LFPI יתפקד בצורה אמינה, מכיוון שאופי וחומרת הפציעה יכולים להשתנות במידה רבה בהתאם למצב המכשיר. כאן, אנו מדגימים כיצד לנקות, למלא ולהרכיב כראוי את מכשיר ה- LFPI, ולהבטיח שהוא מתוחזק כראוי לקבלת תוצאות מיטביות.

בדקנו את ההשפעות של זיהום בועות אוויר במכשיר LFPI על היווצרות צורת גל. הזרקנו בועות אוויר למכשיר והשווינו את יציאות האוסילוסקופ עם נתוני אוסצילוסקופ שנאספו ממכשיר LFPI לא מזוהם. התנאים היו כדלקמן: לא מזוהם, הזרקה של 5 מ"ל אוויר, הזרקה של 10 מ"ל אוויר, והזרקה של 15 מ"ל אוויר. שמרנו על המטוטלת בגובה עק...

Watch this Scientific Journal Video about Maintenance of a Lateral Fluid Percussion Injury Device at JoVE.com

Maintenance of a Lateral Fluid Percussion Injury Device

טיפול ותחזוקה נאותים חיוניים לתפקוד אמין של מכשיר לפציעת כלי הקשה בנוזל רוחבי (LFPI). כאן, אנו מדגימים כיצד לנקות, למלא ולהרכיב כראוי מכשיר LFPI, ולהבטיח שהוא מתוחזק כראוי לקבלת תוצאות אופטימליות.

תחזוקת מכשיר לפגיעת נוזל לרוחב

Traumatic brain injury (TBI) accounts for roughly 2.5 million emergency room visits and hospitalizations annually and is a leading cause of death and ...

הפרוטוקול שלנו מדגים כיצד לתחזק את מכשיר ה- LFPI כראוי. הוא מדגיש את החשיבות של ניקוי וניטור שגרתיים כדי למנוע תקלה במכשיר בפציעות לא עקביות. אז LFPI הוא מודל פציעה המשמש להערכת TBI in vivo.היא משחזרת באופן הדוק פתולוגיות הקשורות לפגיעה מוחית טראומטית אנושית, ובכך הופכת אותה לאחת השיטות המוגדרות היטב של TBI ניסיוני. בהתחשב בכך שה-LFPI משמש לשחזור תסמיני TBI אנושיים, הוא מאפשר לנו לארגן ניסויים שחוקרים היבטים שונים של פגיעות מוח טראומטיות בתקווה למצוא אמצעים טיפוליים. קשה במיוחד להסיר בועות אוויר בפתח המילוי או במתמר בשל הראות המוגבלת באזורים אלה.כשאתם ממלאים את האזורים האלה, היו סבלניים, איטיים והיזהרו לא להכניס אוויר. כדי להתחיל, נתק בזהירות את המזרקים המחוברים לבית המתמר וליציאת המילוי ואת הכבל המחובר למתמר הלחץ. שחרר את ידיות היד בחלק האחורי של המכשיר מהדקי הצילינדר כדי לשחרר את הצילינדר.הסר את הבוכנה בקצה הצילינדר, המתמר, בית המתמר וטבעות הבוכנה. מסננים את הנוזל מהצילינדר, מוסיפים לגליל חומר ניקוי עדין כמו חומר ניקוי לשטיפת כלים, ומקרצפים קלות בעזרת מברשת כלים או בקבוק. כדי להבטיח שכל חומר הניקוי נשטף לחלוטין, מלאו את הגליל במים ושטפו היטב.החל שכבה דקה של ג'ל נפט על בוכנה בוכנה וחבר את בוכנה בוכנה עם הבוכנה בולט כ 32 מ"מ מן הצילינדר. מרחו שכבה דקה של וזלין גם על שאר ה-O-rings וחברו אותם לצילינדר למעט טבעת ה-O בפתח המילוי. עוטפים את סרט הטפלון פעמיים סביב חוטי המתמר.חבר מזרק 10 מיליליטר מלא בנוזל נטול גז וללא בועות אוויר לרכזת נעילת Luer שעל בית המתמר. החזיקו את המתמר כשהקצה המושחל מצביע כלפי מעלה ומלאו לחלוטין את הבאר בתוך האזור המושחל של המתמר בנוזל נטול הגזים. המטרה כאן היא למלא היטב את המתמר מבלי להכניס בועות אוויר.יש להיזהר שלא לפגוע בקרום העדין שבתחתית הבאר. כאשר הצילינדר ממוקם בזווית כדי למנוע מאוויר להיכנס מחדש לבית המתמר, חברו את בית המתמר לצילינדר והשתמשו במפתח ברגים כדי להדק אותו היטב. הסר את המכסה מפתח המילוי והצילינדר ברגע שהנוזל ששוחרר מהגז מגיע לכשני שלישים מקיבולת הצילינדר.מניחים את הגליל בצורה אופקית ומסיימים למלא את הגליל בנוזל נטול גזים. החלף את המכסה ביציאת המילוי וסגור את כל הסטופקוקים. תמרן את הצילינדר כדי להפעיל בועות אוויר ליציאת המילוי.פתח את הסטופרקוק בפתח המילוי והזריק נוזל באמצעות המזרק על בית המתמר כדי לדחוף בועות אוויר החוצה מהיציאה. בדוק את המכשיר כולו וודא שאין בועות אוויר. הוסף מזרק 10 מיליליטר מלא בנוזל נטול גז לרכזת נעילת Luer במכסה המילוי וחבר מחדש את הגליל לבסיס באמצעות ברגי היד.ודא שהגליל אופקי ומסודר עם מרכז הפטיש המשוקלל על המטוטלת. התמונה של צורת גל הלחץ המיוצרת על ידי מכשיר LFPI מנוקה ומתפקד כראוי מוצגת באיור זה. בעת ביצוע פציעה או בדיקת מכשיר LFPI, צורת גל הלחץ צריכה להראות שיא חד יחיד.נוכחות של בועות אוויר במכשיר תגרום לצורת גל עם כמה פסגות קצרות. יציאות האוסילוסקופ עבור הזרקת אוויר לא מזוהם, 5 מיליליטר של הזרקת אוויר, 10 מיליליטר של הזרקת אוויר, ו 15 מיליליטר של הזרקת אוויר מוצגים כאן. הטכניקות המוצגות בסרטון זה מפחיתות את הסבירות של החדרת גזים למכשיר ועוזרות להסיר כיסים קטנים של גז שעלולים לזהם את הנוזל.לכן, הסרת בועות אוויר היא הצעד החשוב ביותר לזכור בעת שימוש במכשיר LFPI. אז אחרי ההליך הזה, המעבדה שלנו מסוגלת לגרום לפציעות בעכברים ולהשתמש בפרוסות מוח חיות כדי לרשום פעילות עצבית. אתה יכול למעשה למצוא את אחד הסרטונים שלנו על זה באתר של JoVE.המכשיר הזה שינה את כללי המשחק בעולם של TBI. כיום זוהי השיטה הנפוצה ביותר לגרימת פציעה במודלים של בעלי חיים, והיא סללה את הדרך למציאת טיפולים טובים יותר לפגיעה מוחית טראומטית בבני אדם.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation, Enrichment, and Maintenance of Medulloblastoma Stem Cells

, בידוד והעשרה, ותחזוקה של גזע תאים מדולובלסטומה

Brain tumors have been suggested to possess a small population of stem cells that are the root cause of tumorigenesis. Neurosphere assays have been ...

The NeuroStar TMS Device: Conducting the FDA Approved Protocol for Treatment of Depression

התקן TMS NeuroStar: ניהול ה-FDA פרוטוקול מאושר לטיפול דיכאון

The Neuronetics NeuroStar Transcranial Magnetic Stimulation (TMS) System is a class II medical device that produces brief duration, pulsed magnetic ...

Lateral Fluid Percussion: Model of Traumatic Brain Injury in Mice

נוזל הקשה Lateral: דגם של פגיעה מוחית טראומטית של עכברים

Traumatic brain injury (TBI) research has attained renewed momentum due to the increasing awareness of head injuries, which result in morbidity and ...

Isolation of Cerebrospinal Fluid from Rodent Embryos for use with Dissected Cerebral Cortical Explants

בידוד של נוזל השדרתי מעוברים מכרסמים לשימוש עם explants מוחות קליפתיים גזור

The CSF is a complex fluid with a dynamically varying proteome throughout development and in adulthood. During embryonic development, the nascent CSF ...

Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective

Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective

רכישת באיכות גבוהה וידאו דיגיטלי של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; Behaviors הזחל ומבוגרים מנקודת מבט רוחבי

Drosophila melanogaster is a powerful experimental model system for studying the function of the nervous system. Gene mutations that cause dysfunction of ...

3D Modeling of the Lateral Ventricles and Histological Characterization of Periventricular Tissue in Humans and Mouse

3D דוגמנות של רוחב החדרים והיסטולוגית אפיון רקמות סביב חדרי מוח בבני אדם ועכבר

The ventricular system carries and circulates cerebral spinal fluid (CSF) and facilitates clearance of solutes and toxins from the brain. The functional ...

A Large Lateral Craniotomy Procedure for Mesoscale Wide-field Optical Imaging of Brain Activity

נוהל Craniotomy Lateral גדול עבור דימות אופטי Mesoscale רחב בתחום של פעילות המוח

The craniotomy is a commonly performed procedure to expose the brain for in vivo experiments. In mouse research, most labs utilize a small craniotomy, ...

Live Imaging of the Ependymal Cilia in the Lateral Ventricles of the Mouse Brain

הדמיה חיה של צילה Ependymal בחדרים לרוחב של מוח העכבר

Multiciliated ependymal cells line the ventricles in the adult brain. Abnormal function or structure of ependymal cilia is associated with various ...

A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

שיטה לגרום סגור ראש הפגיעה מוחית טראומטית ב<em&gt; דרוזופילה</em

Traumatic brain injury (TBI) affects millions of people each year, causing impairment of physical, cognitive, and behavioral functions and death. Studies ...