Name: long-term culture and monitoring of isolated caenorhabditis elegans on solid media in multi-well devices
Uploaded: 2022-12-09T14:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Long-Term Culture and Monitoring of Isolated Caenorhabditis elegans on Solid Media in Multi-Well Devices at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من قبل NIH R35GM133588 إلى G.L.S. ، وهي جائزة محفز من الأكاديمية الوطنية الأمريكية للطب إلى G.L.S. ، وصندوق مبادرة التكنولوجيا والبحوث في ولاية أريزونا الذي يديره مجلس حكام أريزونا ، ومؤسسة إليسون الطبية.

1. إعداد حلول الأسهم والوسائط
ملاحظة: قبل البدء في إعداد الأجهزة متعددة الآبار ، قم بإعداد حلول ووسائط المخزون التالية.
<ol><li>حلول المخزون لوسائط نمو الديدان الخيطية (NGM) و NGM منخفضة الذوبان (lmNGM):<ol><li>تحضير 1 M K 2 HPO4: أضف 174.18 جم من K2HPO4 إلى زجاجة سعة 1 لتر ، وامل?...

<ol>
	<li>Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Caenorhabditis+elegans+life+span+on+solid+media.">Measuring Caenorhabditis elegans life span on solid media.</a> Journal of Visualized Experiments. (27), e1152 (2009).</li><li>Xian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WormFarm:+A+quantitative+control+and+measurement+device+toward+automated+Caenorhabditis+elegans+aging+analysis.">WormFarm: A quantitative control and measurement device toward automated Caenorhabditis elegans aging analysis.</a> Aging Cell. 12 (3), 398-409 (2013).</li><li>Rahman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NemaLife+chip:+A+micropillar-based+microfluidic+culture+device+optimized+for+aging+studies+in+crawling+C.+elegans.">NemaLife chip: A micropillar-based microfluidic culture device optimized for aging studies in crawling C. elegans.</a> Scientific Reports. 10, 16190 (2020).</li><li>Chronis, N., Zimmer, M., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidics+for+in+vivo+imaging+of+neuronal+and+behavioral+activity+in+Caenorhabditis+elegans.">Microfluidics for in vivo imaging of neuronal and behavioral activity in Caenorhabditis elegans.</a> Nature Methods. 4 (9), 727-731 (2007).</li><li>Clark, A. S., Huayta, J., Arulalan, K. S., San-Miguel, A., Liu, X., Sun, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+devices+for+imaging+and+manipulation+of+C.+elegans.">Microfluidic devices for imaging and manipulation of C. elegans.</a> Micro and Nano Systems for Biophysical Studies of Cells and Small Organisms. 13, 295-321 (2021).</li><li>Levine, E., Lee, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+approaches+for+Caenorhabditis+elegans+research.">Microfluidic approaches for Caenorhabditis elegans research.</a> Animal Cells and Systems. 24 (6), 311-320 (2020).</li><li>Atakan, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+platform+for+long-term+culture+and+high-content+phenotyping+of+single+C.+elegans+worms.">Automated platform for long-term culture and high-content phenotyping of single C. elegans worms.</a> Scientific Reports. 9, 14340 (2019).</li><li>Solis, G. M., Petrascheck, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Caenorhabditis+elegans+life+span+in+96+well+microtiter+plates.">Measuring Caenorhabditis elegans life span in 96 well microtiter plates.</a> Journal of Visualized Experiments. (49), e2496 (2011).</li><li>Leung, C. K., Deonarine, A., Strange, K., Choe, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screening+and+biosensing+with+fluorescent+C.+elegans+strains.">High-throughput screening and biosensing with fluorescent C. elegans strains.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), e2745 (2011).</li><li>Laranjeiro, R., Harinath, G., Burke, D., Braeckman, B. P., Driscoll, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+swim+sessions+in+C.+elegans+induce+key+features+of+mammalian+exercise.">Single swim sessions in C. elegans induce key features of mammalian exercise.</a> BMC Biology. 15 (1), 30 (2017).</li><li>&#199;elen, &. #. 3. 0. 4. ;., Doh, J. H., Sabanayagam, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+liquid+cultivation+on+gene+expression+and+phenotype+of+C.+elegans.">Effects of liquid cultivation on gene expression and phenotype of C. elegans.</a> BMC Genomics. 19 (1), 562 (2018).</li><li>Pittman, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+apparatus+for+individual+C.+elegans+culture.">A simple apparatus for individual C. elegans culture.</a> Methods in Molecular Biology. 2144, 29-45 (2020).</li><li>Churgin, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+imaging+of+Caenorhabditis+elegans+in+a+microfabricated+device+reveals+variation+in+behavioral+decline+during+aging.">Longitudinal imaging of Caenorhabditis elegans in a microfabricated device reveals variation in behavioral decline during aging.</a> eLife. 6, 26652 (2017).</li><li>Jushaj, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+criteria+for+locomotion-based+healthspan+evaluation+in+C.+elegans+using+the+WorMotel+system.">Optimized criteria for locomotion-based healthspan evaluation in C. elegans using the WorMotel system.</a> PLoS One. 15 (3), 0229583 (2020).</li><li>Mittal, K. K., Mickey, M. R., Singal, D. P., Terasaki, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotyping+for+homotransplantation.+18.+Refinement+of+microdroplet+lymphocyte+cytotoxicity+test.">Serotyping for homotransplantation. 18. Refinement of microdroplet lymphocyte cytotoxicity test.</a> Transplantation. 6 (8), 913-927 (1968).</li><li>Espejo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+culture+of+individual+Caenorhabditis+elegans+on+solid+media+for+longitudinal+fluorescence+monitoring+and+aversive+interventions.">Long-term culture of individual Caenorhabditis elegans on solid media for longitudinal fluorescence monitoring and aversive interventions.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2022).</li><li>Porta-de-la-Riva, M., Fontrodona, L., Villanueva, A., Cer&#243;n, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+Caenorhabditis+elegans+methods:+synchronization+and+observation.">Basic Caenorhabditis elegans methods: synchronization and observation.</a> Journal of Visualized Experiments. (64), e4019 (2012).</li><li>Freitas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Worm+Paparazzi+-+A+high+throughput+lifespan+and+healthspan+analysis+platform+for+individual+Caenorhabditis+elegans.">Worm Paparazzi - A high throughput lifespan and healthspan analysis platform for individual Caenorhabditis elegans.</a> University of Arizona. , (2021).</li><li>Moore, B. T., Jordan, J. M., Baugh, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WormSizer:+High-throughput+analysis+of+nematode+size+and+shape.">WormSizer: High-throughput analysis of nematode size and shape.</a> PLoS One. 8 (2), e57142 (2013).</li><li>Husson, S. J., Costa, W. S., Schmitt, C., Gottschalk, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keeping+track+of+worm+trackers.">Keeping track of worm trackers.</a> WormBook. , (2013).</li><li>Roussel, N., Sprenger, J., Tappan, S. J., Glaser, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+tracking+and+quantification+of+C.+elegans+body+shape+and+locomotion+through+coiling,+entanglement,+and+omega+bends.">Robust tracking and quantification of C. elegans body shape and locomotion through coiling, entanglement, and omega bends.</a> Worm. 3 (4), 982437 (2014).</li><li>Grubbs, J. J., vander Linden, A. M., Raizen, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+sleep+by+KIN-29+is+not+developmental.">Regulation of sleep by KIN-29 is not developmental.</a> microPublication Biology. 2020, (2020).</li><li>Iannacone, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RFamide+receptor+DMSR-1+regulates+stress-induced+sleep+in+C.+elegans.">The RFamide receptor DMSR-1 regulates stress-induced sleep in C. elegans.</a> eLife. 6, 19837 (2017).</li><li>McClanahan, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quiescent+state+following+mild+sensory+arousal+in+Caenorhabditis+elegans+is+potentiated+by+stress.">A quiescent state following mild sensory arousal in Caenorhabditis elegans is potentiated by stress.</a> Scientific Reports. 10, 4140 (2020).</li><li>Churgin, M. A., McCloskey, R. J., Peters, E., Fang-Yen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonistic+serotonergic+and+octopaminergic+neural+circuits+mediate+food-dependent+locomotory+behavior+in+Caenorhabditis+elegans.">Antagonistic serotonergic and octopaminergic neural circuits mediate food-dependent locomotory behavior in Caenorhabditis elegans.</a> The Journal of Neuroscience. 37 (33), 7811-7823 (2017).</li><li>Kenyon, C., Chang, J., Gensch, E., Rudner, A., Tabtiang, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+C.+elegans+mutant+that+lives+twice+as+long+as+wild+type.">A C. elegans mutant that lives twice as long as wild type.</a> Nature. 366 (6454), 461-464 (1993).</li><li>Murphy, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+that+act+downstream+of+DAF-16+to+influence+the+lifespan+of+Caenorhabditis+elegans.">Genes that act downstream of DAF-16 to influence the lifespan of Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 424 (6946), 277-283 (2003).</li><li>Hulme, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifespan-on-a-chip:+Microfluidic+chambers+for+performing+lifelong+observation+of+C+.+elegans.">Lifespan-on-a-chip: Microfluidic chambers for performing lifelong observation of C . elegans.</a> Lab on a Chip. 10 (5), 589-597 (2010).</li><li>Lionaki, E., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+and+longitudinal+analysis+of+aging+and+senescent+decline+in+Caenorhabditis+elegans.">High-throughput and longitudinal analysis of aging and senescent decline in Caenorhabditis elegans.</a> Methods in Molecular Biology. 965, 485-500 (2013).</li><li>Szewczyk, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+development+and+lifespan+extension+as+features+of+metabolic+lifestyle+alteration+in+C.+elegans+under+dietary+restriction.">Delayed development and lifespan extension as features of metabolic lifestyle alteration in C. elegans under dietary restriction.</a> The Journal of Experimental Biology. 209, 4129-4139 (2006).</li><li>Ghosh, R., Emmons, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Episodic+swimming+behavior+in+the+nematode+C.+elegans.">Episodic swimming behavior in the nematode C. elegans.</a> The Journal of Experimental Biology. 211, 3703-3711 (2008).</li><li>Hartman, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Swimming+exercise+and+transient+food+deprivation+in+Caenorhabditis+elegans+promote+mitochondrial+maintenance+and+protect+against+chemical-induced+mitotoxicity.">Swimming exercise and transient food deprivation in Caenorhabditis elegans promote mitochondrial maintenance and protect against chemical-induced mitotoxicity.</a> Scientific Reports. 8, 8359 (2018).</li><li>Yemini, E., Jucikas, T., Grundy, L. J., Brown, A. E. X., Schafer, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+database+of+Caenorhabditis+elegans+behavioral+phenotypes.">A database of Caenorhabditis elegans behavioral phenotypes.</a> Nature Methods. 10 (9), 877-879 (2013).</li></ol>

يعد نظام WorMotel أداة قوية لجمع البيانات الفردية لمئات من C. elegans المعزولة بمرور الوقت. بعد الدراسات السابقة التي استخدمت أجهزة متعددة الآبار للتطبيقات في السكون التنموي والسلوك الحركي والشيخوخة ، كان الهدف من هذا العمل هو تحسين إعداد الأجهزة متعددة الآبار للمراقبة طويلة الأجل للنشاط و?...

يشيع استخدام Caenorhabditis elegans في دراسات الشيخوخة بسبب وقت جيلها القصير (حوالي 3 أيام) ، وقصر عمرها (حوالي 3 أسابيع) ، وسهولة الزراعة في المختبر ، ودرجة عالية من الحفظ التطوري للعمليات الجزيئية والمسارات مع الثدييات ، والتوافر الواسع لتقنيات التلاعب الجيني. في سياق دراسات الشيخوخة ، تسمح C. elegans بالتوليد السريع لبيانات طول العمر والسكان المسنين لتحليل الأنماط الظاهرية المتأخرة في الحيوانات الحية. يتضمن النهج النموذجي لإجراء دراسات شيخوخة الديدان القياس اليدوي لعمر مجموعة من الديدان المحفوظة في مجموعات من 20 إلى 70 حيوانا على وسائط نمو نيماتودا أجار صلبة (NGM) في ألواح بتري 6 سم1. يسمح استخدام المجموعات المتزامنة مع العمر بقياس العمر أو الأنماط الظاهرية المستعرضة في الحيوانات الفردية عبر السكان ، ولكن هذه الطريقة تمنع مراقبة خصائص الحيوانات الفردية بمرور الوقت. هذا النهج هو أيضا كثيفة العمالة ، وبالتالي تقييد حجم السكان الذين يمكن اختبارهم.
هناك عدد محدود من طرق الاستزراع التي تسمح بالمراقبة الطولية ل C. elegans الفردية طوال حياتها ، ولكل منها مجموعة مميزة من المزايا والعيوب. تسمح أجهزة الموائع الدقيقة ، بما في ذلك WormFarm2 و NemaLife3 وشريحة "السلوك"4 ، من بين أجهزة أخرى5،6،7 ، بمراقبة الحيوانات الفردية بمرور الوقت. وبالمثل ، فإن استزراع الديدان في الاستزراع السائل باستخدام ألواح متعددة الآبار يسمح بمراقبة الحيوانات الفردية أو مجموعات صغيرة من C. elegans بمرور الوقت 8,9. تمثل البيئة السائلة سياقا بيئيا متميزا عن بيئة الثقافة الشائعة على الوسائط الصلبة في ألواح بتري ، والتي يمكن أن تغير جوانب فسيولوجيا الحيوان ذات الصلة بالشيخوخة ، بما في ذلك محتوى الدهون والتعبير عن جينات الاستجابة للإجهاد10،11. القدرة على مقارنة هذه الدراسات مباشرة بغالبية البيانات التي تم جمعها عن الشيخوخة C. elegans محدودة بسبب الاختلافات في المتغيرات البيئية المهمة المحتملة. Worm Corral12 هو أحد الأساليب التي تم تطويرها لإيواء الحيوانات الفردية في بيئة تكرر بشكل أوثق ثقافة الوسائط الصلبة النموذجية. يحتوي Worm Corral على غرفة محكمة الغلق لكل على شريحة مجهرية باستخدام هيدروجيل ، مما يسمح بالمراقبة الطولية للحيوانات المعزولة. تستخدم هذه الطريقة التصوير القياسي برايت فيلد لتسجيل البيانات المورفولوجية ، مثل حجم الجسم ونشاطه. ومع ذلك ، يتم وضع الحيوانات في بيئة هيدروجيل كأجنة ، حيث تظل دون إزعاج طوال حياتها. وهذا يتطلب استخدام خلفيات وراثية متحولة أو محورة وراثيا معقمة مشروطا ، مما يحد من القدرة على الفحص الجيني ، حيث يجب عبور كل طفرة جديدة أو جين تحوير إلى خلفية ذات عقم مشروط ، والقدرة على فحص الأدوية ، حيث لا يمكن تطبيق العلاجات إلا مرة واحدة على الحيوانات كأجنة.
تسمح طريقة بديلة طورها مختبر Fang-Yen بزراعة الديدان على الوسائط الصلبة في الآبار الفردية لجهاز polydimethylsiloxane (PDMS) الدقيق يسمى WorMotel13,14. يتم وضع كل جهاز في صينية بئر واحدة (أي بنفس أبعاد لوحة 96 بئرا) ويحتوي على 240 بئرا مفصولة بخندق مملوء بمحلول مكروه لمنع الديدان من الانتقال بين الآبار. يمكن لكل بئر إيواء دودة واحدة طوال فترة حياتها. الجهاز محاط بكريات جل بولي أكريلاميد الممتصة للماء (يشار إليها باسم "بلورات الماء") ، ويتم إغلاق الدرج بفيلم مختبر Parafilm للحفاظ على الرطوبة وتقليل جفاف الوسائط. يسمح هذا النظام بجمع بيانات الصحة والعمر للحيوانات الفردية ، في حين أن استخدام الوسائط الصلبة يلخص بشكل أفضل البيئة التي تعاني منها الحيوانات في الغالبية العظمى من دراسات عمر C. elegans المنشورة ، مما يسمح بمزيد من المقارنات المباشرة. في الآونة الأخيرة ، تم تطوير تقنية مماثلة باستخدام صواني البوليسترين الدقيقة التي كانت تستخدم في الأصل لمقايسات السمية المجهرية15 بدلا من جهاز PDMS16. تسمح طريقة microtray بجمع البيانات الفردية للديدان المستزرعة على وسائط صلبة وقد حسنت القدرة على احتواء الديدان في ظل ظروف من شأنها أن تسبب عادة الفرار (على سبيل المثال ، الضغوطات أو القيود الغذائية) ، مع المفاضلة هي أن كل microtray يمكن أن تحتوي فقط على 96 حيوانا16 ، في حين أن الجهاز متعدد الآبار المستخدم هنا يمكن أن يحتوي على ما يصل إلى 240 حيوانا.
يظهر هنا بروتوكول مفصل لإعداد الأجهزة متعددة الآبار التي تم تحسينها من أجل الاتساق من لوحة إلى أخرى وإعداد أجهزة متعددة بالتوازي. تم تكييف هذا البروتوكول من البروتوكول الأصلي من مختبر Fang-Yen13. على وجه التحديد ، هناك أوصاف لتقنيات لتقليل التلوث ، وتحسين التجفيف المتسق لكل من الوسائط الصلبة ومصدر الغذاء البكتيري ، وتقديم RNAi والأدوية. يمكن استخدام هذا النظام لتتبع الصحة الفردية والعمر والأنماط الظاهرية الأخرى ، مثل حجم الجسم وشكله. تتوافق هذه الأجهزة متعددة الآبار مع الأنظمة عالية الإنتاجية الحالية لقياس العمر الافتراضي ، والتي يمكن أن تزيل الكثير من العمل اليدوي المتضمن في تجارب العمر التقليدية وتوفر الفرصة لقياس طول العمر الآلي والمباشر وتتبع الصحة في C. elegans الفردية على نطاق واسع.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2.5 lb weight</td>
			<td>CAP Barbell</td>
			<td>RP-002.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrylic sheets (6 in x 4 in x 3/8 in)</td>
			<td>Falken Design</td>
			<td>ACRYLIC-CL-3-8/1224</td>
			<td>Large sheet cut to smaller sizes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclavable squeeze bottle</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>2405-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto agar</td>
			<td>BD Difco</td>
			<td>214030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto peptone</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>211677</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basin, 25 mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89094-664</td>
			<td>Disposable pipette basin&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cabinet style vacuum desiccator&#160;</td>
			<td>SP Bel-Art</td>
			<td>F42400-4001</td>
			<td>Do not need to use dessicant, only using as a vacuum chamber.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>349615000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caenorhabditis elegans N2</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td>N2</td>
			<td>Wildtype strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbenicillin&#160;</td>
			<td>GoldBio</td>
			<td>C-103-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>360902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>ICN Biomedicals Inc</td>
			<td>101380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compressed oxygen tank</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>UN1072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuSO4</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>C493-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry bead bath incubator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11-718-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli OP50&#160;</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td>OP50</td>
			<td>Standard labratory food for C. elegans</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>ex0276-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Floxuridine</td>
			<td>Research Products International</td>
			<td>F10705-1.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization oven</td>
			<td>Techne</td>
			<td>731-0177</td>
			<td>Used to cure PDMS mixture, any similar oven will suffice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubators</td>
			<td>Shel Lab</td>
			<td>2020</td>
			<td>20 &#176;C incubator for maintaining worm strains and 37 &#176;C incubator to grow bacteria&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl &#223;-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td>GoldBio</td>
			<td>I2481C100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P288-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P286-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>KimTech</td>
			<td>34155</td>
			<td>Task wipes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth, Lennox</td>
			<td>BD Difco</td>
			<td>240230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low melt agarose</td>
			<td>Research Products International</td>
			<td>A20070-250.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>M-8900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave&#160;</td>
			<td>Sharp</td>
			<td>R-530DK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multichannel repeat pipette, 20&#8211;200 &#181;L LTS EDP3</td>
			<td>Rainin</td>
			<td>17013800</td>
			<td>The exact model used is no longer sold, a similar model&#39;s catalog number has been provided</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP358-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc OmniTray</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>264728</td>
			<td>Clear polystyrene trays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-374-10</td>
			<td>Double-wide (4 in)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri plate, 100 mM&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25384-342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri plate, 60 mM&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasma cleaner</td>
			<td>Plasma Etch, Inc.</td>
			<td>PE-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLATINUM vacuum pump</td>
			<td>JB Industries</td>
			<td>DV-142N&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PolyJet 3D printer</td>
			<td>Stratasys&#160;</td>
			<td>Objet500 Connex3</td>
			<td>PolyJet 3D printing services provided by ProtoCAM (Matrial: Vero Rigid; Finish: Matte; Color: Gloss; Resolution: X-axis: 600 dpi, Y-axis: 600 dpi, Z-axis: 1600 dpi)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking incubator</td>
			<td>Lab-Line</td>
			<td>3526CC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>smartSpatula</td>
			<td>LevGo, Inc.</td>
			<td>17211</td>
			<td>Disposable spatula</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superabsorbent polymer (AgSAP Type S)</td>
			<td>M2 Polymer Technologies</td>
			<td>Type S</td>
			<td>Referred to in main text as &#34;water crystals&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYLGARD 184 Silicone Elastomer base</td>
			<td>The Dow Chemical Company</td>
			<td>2065622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYLGARD 184 Silicone Elastomer curing agent</td>
			<td>The Dow Chemical Company</td>
			<td>2085925</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter (0.22 &#181;m)</td>
			<td>Nest Scientific USA Inc.&#160;</td>
			<td>380111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 10 mL&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14955453</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TWEEN 20</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>J20605-AP</td>
			<td>Detergent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum pump oil</td>
			<td>VWR</td>
			<td>54996-082</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VeroBlackPlus</td>
			<td>Stratasys&#160;</td>
			<td>RGD875</td>
			<td>Rigid 3D printing filament</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh boat</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>WB30304</td>
			<td>Large enough for PDMS mixture volume</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

long-term culture and monitoring of isolated caenorhabditis elegans on solid media in multi-well devices

تعد الديدان الخيطية Caenorhabditis elegans من بين أكثر الأنظمة النموذجية شيوعا المستخدمة في أبحاث الشيخوخة نظرا لتقنيات الاستزراع البسيطة وغير المكلفة ، ودورة التكاثر السريع (~ 3 أيام) ، والعمر القصير (~ 3 أسابيع) ، والعديد من الأدوات المتاحة للتلاعب الجيني والتحليل الجزيئي. النهج الأكثر شيوعا لإجراء دراسات الشيخوخة في C. elegans ، بما في ذلك تحليل البقاء على قيد الحياة ، ينطوي على زراعة مجموعات من عشرات إلى مئات الحيوانات معا على وسائط نمو الديدان الخيطية الصلبة (NGM) في لوحات بتري. بينما يجمع هذا النهج بيانات عن مجموعة من الحيوانات ، فإن معظم البروتوكولات لا تتعقب الحيوانات الفردية بمرور الوقت. يظهر هنا بروتوكول محسن للاستزراع طويل الأجل للحيوانات الفردية على أجهزة بولي ديميثيل سيلوكسان (PDMS) المصنعة تسمى WorMotels. يسمح كل جهاز باستزراع ما يصل إلى 240 حيوانا في آبار صغيرة تحتوي على NGM ، مع عزل كل بئر بواسطة خندق يحتوي على كبريتات النحاس يمنع الحيوانات من الفرار. بناء على وصف WorMotel الأصلي ، توفر هذه الورقة بروتوكولا مفصلا لقولبة كل جهاز وإعداده وتعبئته ، مع وصف للمضاعفات الفنية الشائعة ونصائح لاستكشاف الأخطاء وإصلاحها. ضمن هذا البروتوكول ، توجد تقنيات للتحميل المتسق ل NGM صغير الحجم ، والتجفيف المتسق لكل من NGM والأغذية البكتيرية ، وخيارات لتقديم التدخلات الدوائية ، والتعليمات والقيود العملية لإعادة استخدام أجهزة PDMS ، ونصائح لتقليل الجفاف ، حتى في البيئات منخفضة الرطوبة. تسمح هذه التقنية بالمراقبة الطولية لمختلف المعلمات الفسيولوجية ، بما في ذلك النشاط المحفز ، والنشاط غير المحفز ، وحجم الجسم ، وهندسة الحركة ، والعمر الصحي ، والبقاء على قيد الحياة ، في بيئة مشابهة للتقنية القياسية للثقافة الجماعية على الوسائط الصلبة في ألواح بتري. تتوافق هذه الطريقة مع جمع البيانات عالية الإنتاجية عند استخدامها جنبا إلى جنب مع برامج الفحص المجهري والتحليل الآلي. أخيرا ، تمت مناقشة قيود هذه التقنية ، بالإضافة إلى مقارنة هذا النهج بطريقة تم تطويرها مؤخرا تستخدم الصواني الدقيقة لاستزراع الديدان الخيطية المعزولة على الوسائط الصلبة.

يمكن استخدام نظام ثقافة WorMotel لجمع مجموعة متنوعة من البيانات ، بما في ذلك ما يتعلق بالعمر الافتراضي والعمر الصحي والنشاط. استخدمت الدراسات المنشورة أجهزة متعددة الآبار لدراسة العمر والصحة 13،14 ، والسكون والنوم 22،23،24 ، والسلوك <sup class=...

Watch this Scientific Journal Video about Long-Term Culture and Monitoring of Isolated Caenorhabditis elegans on Solid Media in Multi-Well Devices at JoVE.com

Long-Term Culture and Monitoring of Isolated Caenorhabditis elegans on Solid Media in Multi-Well Devices

يظهر هنا بروتوكول محسن لزراعة الديدان الخيطية الفردية المعزولة على وسائط صلبة في أجهزة متعددة الآبار دقيقة الصنع. يسمح هذا النهج بمراقبة الحيوانات الفردية طوال حياتها لمجموعة متنوعة من الأنماط الظاهرية المتعلقة بالشيخوخة والصحة ، بما في ذلك النشاط وحجم الجسم وشكله وهندسة الحركة والبقاء على قيد الحياة.

ثقافة طويلة الأجل ومراقبة Caenorhabditis elegans المعزولة على الوسائط الصلبة في الأجهزة متعددة الآبار

The nematode Caenorhabditis elegans is among the most common model systems used in aging research owing to its simple and inexpensive culture techniques, ...

عندما ندرس الشيخوخة و elegans البحر ، فإننا عادة ما نتابع مجموعة من الحيوانات بمرور الوقت. هذا يعطينا لمحة عما تفعله هذه العملية التي تدرسها في السكان في كل نقطة زمنية ولكنها لا تخبرك كيف تتغير العملية في الحيوانات الفردية بمرور الوقت. تسمح لنا بيئات الاستزراع الحيواني الفردية هذه بمتابعة التغيرات الديناميكية في العمليات الجزيئية والعمليات الفسيولوجية في الحيوانات الفردية بمرور الوقت لمئات الحيوانات بالتوازي.نجد أن هناك شيئين رئيسيين يمكن أن يؤثرا حقا على جودة أنظمة الاستزراع متعددة الآبار هذه. أحدهما إما فوق أو تحت تجفيف الآبار والثاني هو التلوث. ونحاول أن نلاحظ في جميع أنحاء البروتوكول خطوات محددة حيث يمكنك محاولة التخفيف من هذه المشاكل.إظهار البروتوكول اليوم سيكون إميلي غارديا. إنها فنية في مختبري وقد قامت بالكثير من العمل لتحسين هذا البروتوكول. بعد تحضير جميع الكواشف ، امزج 60 جراما من قاعدة PDMS وستة جرامات من عامل المعالجة لكل قالب في قارب كبير يمكن التخلص منه باستخدام ملعقة يمكن التخلص منها.ضع خليط PDMS في غرفة مفرغة لمدة 30 دقيقة عند سالب 0.08 ميجا باسكال لإزالة الفقاعات. صب وملء خليط PDMS في كل قالب مطبوع 3D. ضع القالب المملوء وأي خليط PDMS إضافي في غرفة التفريغ لمدة 25 دقيقة عند سالب 0.08 ميجا باسكال.قم بإزالة القالب المملوء من غرفة التفريغ وقم بفرقعة أي فقاعات متبقية باستخدام ملعقة يمكن التخلص منها. بدءا من حافة واحدة ، قم بخفض لوح أكريليك مسطح ببطء أعلى القالب المملوء PDMS. في حالة حدوث تكوين الفقاعة ، تابع كما هو موضح في المخطوطة.ضع وزنا 2.5 رطل على الأكريليك وضع القوالب المرجحة في الفرن. دعهم يشفون عند 55 درجة مئوية طوال الليل. في نهاية الحضانة ، قم بإزالة الأوزان والقوالب من الفرن.بعد ذلك ، اعمل شفرة حلاقة بين الأكريليك و PDMS المعالج لكسر الختم باستخدام ماكينة حلاقة أو ملعقة معدنية ، قم بفك جوانب PDMS المعالجة بعناية وإزالتها من القالب. لف جهاز PDMS بورق الألمنيوم. أغلقه بشريط الأوتوكلاف وقم بتعقيمه عن طريق التعقيم في دورة جافة لمدة 15 دقيقة على الأقل عند 121 درجة مئوية و 15 رطلا لكل بوصة مربعة من ضغط القياس.لتحضير الجهاز متعدد الآبار ، سخن حاضنة حمام حبة جافة إلى 90 درجة مئوية. قم بفك غلاف جهاز متعدد الآبار معقم وقطع درجة صغيرة في الزاوية اليمنى العليا من الجهاز. ضع ما يصل إلى ثلاثة أجهزة غير مغلفة في منظف البلازما مع توجيه الآبار لأعلى وقم بتشغيل منظف البلازما.قم بتعقيم صينية بوليسترين بئر واحدة لكل جهاز عن طريق رش الجزء الداخلي من الدرج بنسبة 70٪ من الإيثانول ومسحه حتى يجف بمسح المهام. أخرج كل جهاز من منظف البلازما بيد قفاز وضعه في صينية نظيفة. ثم ضع حوض ماصة سعة 25 ملليلتر يمكن التخلص منه في حاضنة حمام حبة مسخنة مسبقا عند 90 درجة مئوية.خذ أنبوبا واحدا من خليط LMNGM المتصلب مسبقا لكل جهاز ليتم ملؤه وضعه في دورق زجاجي سعة 200 ملليلتر. قم بإزالة الغطاء و Parafilm والميكروويف حتى تذوب الوسائط بدرجة كافية للصب. صب الخليط المسبق LMNGM المنصهر في دورق معقم آخر سعة 200 ملليلتر.يمكن دمج أنابيب اختبار متعددة في هذه الكأس الزجاجية إذا تم ملء أكثر من جهاز واحد في المرة الواحدة. ضع الخليط المسبق LMNGM في الميكروويف لمدة 20 ثانية إضافية. إذا بدأ الخليط المسبق في الغليان ، أوقف الميكروويف واتركه يستقر.أخرج الخليط المنصهر LMNGM مسبقا من الميكروويف وقم بتبريده إلى 60 درجة مئوية. أضف مكونات LMNGM المتبقية إلى خليط الخلط المسبق واسكب LMNGM المنصهر في حوض 25 ملليلتر في حمام الخرز. املأ آبار الجهاز باستخدام ماصة مكرر متعددة القنوات سعة 200 ميكرولتر.اضبط المكرر لتوزيع حصص 14 ميكرولتر وتركيب خمسة أطراف ماصة. قم بتحميل الأطراف باستخدام LMNGM المنصهر ووزع أول 14 ميكرولترا مرة أخرى في الحوض المحتوي على LMNGM. التحرك بسرعة ولكن بعناية ، قم بتوزيع 14 ميكرولترا في الآبار الداخلية للجهاز وتوزيع LMNGM المتبقي مرة أخرى في الحوض لأن القسمة النهائية عادة ما تكون أقل من 14 ميكرولتر.بعد ذلك ، اضبط المكرر على توزيع حصص 15 ميكرولتر وملء الحلقة الخارجية للآبار. باستخدام ماصة 200 ميكرولتر ، قم بتوزيع 200 ميكرولتر من محلول كبريتات النحاس في خندق الجهاز في كل زاوية. تجنب الإفراط في ملء الخندق وتأكد من أن كبريتات النحاس لا تلمس السطح العلوي للآبار.إذا لم تتدفق كبريتات النحاس بسهولة عبر الخندق بأكمله ، فاستخدم معول سلك بلاتيني قصير للمساعدة في كسر التوتر وسحب كبريتات النحاس عبر الخندق. بعد تدفق كبريتات النحاس عبر الخندق بأكمله ، قم بإزالة أكبر قدر ممكن من كبريتات النحاس باستخدام ماصة 200 ميكرولتر أو شفط مع فراغ. باستخدام زجاجة ضغط ، أضف بلورات الماء في الفراغات بين الجهاز وجدران الدرج.أغلق غطاء الدرج ولف الجوانب الأربعة بقطعة من Parafilm. أضف قطعتين إضافيتين من Parafilm لإغلاق اللوحة تماما. باستخدام ماصة مكرر ، اكتشف كل بئر بخمسة ميكرولترات من البكتيريا المركزة.تجنب الاتصال المباشر بسطح LMNGM. جفف الأجهزة باستخدام صندوق تجفيف مصمم خصيصا يمكن بناؤه بأقل تكلفة باستخدام مراوح علبة الكمبيوتر ومرشحات HEPA. تحت نطاق التشريح ، افحص الآبار للتأكد من أن جميع الآبار قد جفت بنجاح.باستخدام اختيار البلاتين ، انقل الحيوانات من ألواح الدودة المعدة وأضف دودة واحدة لكل بئر. أضف قطرة من محلول المنظف المحضر إلى داخل غطاء الدرج وافركه بمسح المهمة حتى يجف محلول المنظف. لف الصينية بثلاث قطع من Parafilm كما هو موضح في المخطوطة.يتم حظر امتداد العمر من daf-2 (RNAi) بواسطة طفرة daf-16 null. انخفض العمر الصحي أيضا في وجود daf-2 (RNAi) يتم تقليل متوسط النشاط المتداول لمدة ثلاثة أيام عبر العمر بواسطة daf-16 mutant و daf-2 (RNAi) يظهر التباين في العمر والعمر الصحي عبر الحيوانات الفردية مقارنة إما من حيث القيمة المطلقة أو كجزء من إجمالي العمر. يرتبط النشاط التراكمي عبر العمر للحيوانات الفردية بشكل أفضل بالعمر من نشاط الحيوانات الفردية في أي يوم محدد عبر العمر.من المهم ملء الآبار وإضافة الديدان في أسرع وقت ممكن. وإلا يمكن أن تجف الآبار ولن تنجو الديدان. هذا النظام متوافق مع التصوير الآلي الذي يمكن استخدامه لجمع بيانات عالية الإنتاجية مثل العمر والنشاط وحجم الجسم أو شكله.

Research

JoVE Journal

Biology

Long-Term Culture and Monitoring of Isolated Caenorhabditis elegans on Solid Media in Multi-Well Devices

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

قياس انواع معينة ايليجانس سبان الحياة على وسائل الاعلام الصلبة

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The nematode ...

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

اللوحة الصلبة المستندة إلى تقييد الغذائية في انواع معينة ايليجانس</em

Reduction of food intake without malnutrition or starvation is known to increase lifespan and delay the onset of various age-related diseases in a wide ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

الوقت الفاصل بين مرحلة التطور الجنيني المبكر من الميكروسكوب في انواع معينة ايليجانس

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Long-term Culture of Human Breast Cancer Specimens and Their Analysis Using Optical Projection Tomography

على المدى الطويل ثقافة الإنسان العينات والتحليل سرطان الثدي وذلك باستخدام التصوير المقطعي الإسقاط الضوئية

Breast cancer is a leading cause of mortality in the Western world. It is well established that the spread of breast cancer, first locally and later ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

على المدى الطويل اختبار السمية المهلكة مع القشريات الأرتيميا franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

الأساسية<em&gt; Caenorhabditis ايليجانس</em&gt; طرق: التزامن والمراقبة

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

استخراج البروستاجلاندين والتحليل في<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Culturing Caenorhabditis elegans in Axenic Liquid Media and Creation of Transgenic Worms by Microparticle Bombardment

Culturing Caenorhabditis elegans in Axenic Liquid Media and Creation of Transgenic Worms by Microparticle Bombardment

زراعة<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em &gt; في ممحوضة السائل وسائل الإعلام وإنشاء المعدلة وراثيا الديدان عن طريق قصف Microparticle

In this protocol, we present the required materials, and the procedure for making modified&#160;C. elegans&#160;Habituation and Reproduction media ...

Isolation, Transfection, and Long-Term Culture of Adult Mouse and Rat Cardiomyocytes

العزلة، وTransfection، والثقافة طويلة الأجل من الماوس الكبار والجرذان Cardiomyocytes

Ex vivo culture of the adult mammalian cardiomyocytes (CMs) presents the most relevant experimental system for the in vitro study of cardiac biology. ...

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

التصوير الخالي من التسميات لديناميكيات تخزين الدهون في Elegans Caenorhabditis باستخدام المجهر التشتت رامان المحفزة

Lipid metabolism is a fundamental physiological process necessary for cellular and organism health. Dysregulation of lipid metabolism often elicits ...