Name: long-term culture and monitoring of isolated caenorhabditis elegans on solid media in multi-well devices
Uploaded: 2022-12-09T14:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Long-Term Culture and Monitoring of Isolated Caenorhabditis elegans on Solid Media in Multi-Well Devices at JoVE.com

Diese Arbeit wurde unterstützt durch NIH R35GM133588 an G.L.S., einen United States National Academy of Medicine Catalyst Award an G.L.S., den State of Arizona Technology and Research Initiative Fund, der vom Arizona Board of Regents verwaltet wird, und die Ellison Medical Foundation.

1. Aufbereitung von Stammlösungen und Medien
Anmerkungen: Bevor Sie mit der Vorbereitung der Multiwell-Geräte beginnen, bereiten Sie die folgenden Stammlösungen und -medien vor.
<ol><li>Stammlösungen für Nematoden-Nährmedien (NGM) und Low-Melt-NGM (lmNGM):<ol><li>1 M K 2 HPO4 vorbereiten: 174,18 g K2HPO4 in eine1-Liter-Flasche geben und bis zu 1 Liter mit sterilem deionisiertem Wasser füllen. 30 Minuten lang autoklavieren (121 °C, 15 ...

<ol>
	<li>Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Caenorhabditis+elegans+life+span+on+solid+media.">Measuring Caenorhabditis elegans life span on solid media.</a> Journal of Visualized Experiments. (27), e1152 (2009).</li><li>Xian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WormFarm:+A+quantitative+control+and+measurement+device+toward+automated+Caenorhabditis+elegans+aging+analysis.">WormFarm: A quantitative control and measurement device toward automated Caenorhabditis elegans aging analysis.</a> Aging Cell. 12 (3), 398-409 (2013).</li><li>Rahman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NemaLife+chip:+A+micropillar-based+microfluidic+culture+device+optimized+for+aging+studies+in+crawling+C.+elegans.">NemaLife chip: A micropillar-based microfluidic culture device optimized for aging studies in crawling C. elegans.</a> Scientific Reports. 10, 16190 (2020).</li><li>Chronis, N., Zimmer, M., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidics+for+in+vivo+imaging+of+neuronal+and+behavioral+activity+in+Caenorhabditis+elegans.">Microfluidics for in vivo imaging of neuronal and behavioral activity in Caenorhabditis elegans.</a> Nature Methods. 4 (9), 727-731 (2007).</li><li>Clark, A. S., Huayta, J., Arulalan, K. S., San-Miguel, A., Liu, X., Sun, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+devices+for+imaging+and+manipulation+of+C.+elegans.">Microfluidic devices for imaging and manipulation of C. elegans.</a> Micro and Nano Systems for Biophysical Studies of Cells and Small Organisms. 13, 295-321 (2021).</li><li>Levine, E., Lee, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+approaches+for+Caenorhabditis+elegans+research.">Microfluidic approaches for Caenorhabditis elegans research.</a> Animal Cells and Systems. 24 (6), 311-320 (2020).</li><li>Atakan, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+platform+for+long-term+culture+and+high-content+phenotyping+of+single+C.+elegans+worms.">Automated platform for long-term culture and high-content phenotyping of single C. elegans worms.</a> Scientific Reports. 9, 14340 (2019).</li><li>Solis, G. M., Petrascheck, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Caenorhabditis+elegans+life+span+in+96+well+microtiter+plates.">Measuring Caenorhabditis elegans life span in 96 well microtiter plates.</a> Journal of Visualized Experiments. (49), e2496 (2011).</li><li>Leung, C. K., Deonarine, A., Strange, K., Choe, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screening+and+biosensing+with+fluorescent+C.+elegans+strains.">High-throughput screening and biosensing with fluorescent C. elegans strains.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), e2745 (2011).</li><li>Laranjeiro, R., Harinath, G., Burke, D., Braeckman, B. P., Driscoll, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+swim+sessions+in+C.+elegans+induce+key+features+of+mammalian+exercise.">Single swim sessions in C. elegans induce key features of mammalian exercise.</a> BMC Biology. 15 (1), 30 (2017).</li><li>&#199;elen, &. #. 3. 0. 4. ;., Doh, J. H., Sabanayagam, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+liquid+cultivation+on+gene+expression+and+phenotype+of+C.+elegans.">Effects of liquid cultivation on gene expression and phenotype of C. elegans.</a> BMC Genomics. 19 (1), 562 (2018).</li><li>Pittman, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+apparatus+for+individual+C.+elegans+culture.">A simple apparatus for individual C. elegans culture.</a> Methods in Molecular Biology. 2144, 29-45 (2020).</li><li>Churgin, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+imaging+of+Caenorhabditis+elegans+in+a+microfabricated+device+reveals+variation+in+behavioral+decline+during+aging.">Longitudinal imaging of Caenorhabditis elegans in a microfabricated device reveals variation in behavioral decline during aging.</a> eLife. 6, 26652 (2017).</li><li>Jushaj, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+criteria+for+locomotion-based+healthspan+evaluation+in+C.+elegans+using+the+WorMotel+system.">Optimized criteria for locomotion-based healthspan evaluation in C. elegans using the WorMotel system.</a> PLoS One. 15 (3), 0229583 (2020).</li><li>Mittal, K. K., Mickey, M. R., Singal, D. P., Terasaki, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotyping+for+homotransplantation.+18.+Refinement+of+microdroplet+lymphocyte+cytotoxicity+test.">Serotyping for homotransplantation. 18. Refinement of microdroplet lymphocyte cytotoxicity test.</a> Transplantation. 6 (8), 913-927 (1968).</li><li>Espejo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+culture+of+individual+Caenorhabditis+elegans+on+solid+media+for+longitudinal+fluorescence+monitoring+and+aversive+interventions.">Long-term culture of individual Caenorhabditis elegans on solid media for longitudinal fluorescence monitoring and aversive interventions.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2022).</li><li>Porta-de-la-Riva, M., Fontrodona, L., Villanueva, A., Cer&#243;n, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+Caenorhabditis+elegans+methods:+synchronization+and+observation.">Basic Caenorhabditis elegans methods: synchronization and observation.</a> Journal of Visualized Experiments. (64), e4019 (2012).</li><li>Freitas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Worm+Paparazzi+-+A+high+throughput+lifespan+and+healthspan+analysis+platform+for+individual+Caenorhabditis+elegans.">Worm Paparazzi - A high throughput lifespan and healthspan analysis platform for individual Caenorhabditis elegans.</a> University of Arizona. , (2021).</li><li>Moore, B. T., Jordan, J. M., Baugh, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WormSizer:+High-throughput+analysis+of+nematode+size+and+shape.">WormSizer: High-throughput analysis of nematode size and shape.</a> PLoS One. 8 (2), e57142 (2013).</li><li>Husson, S. J., Costa, W. S., Schmitt, C., Gottschalk, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keeping+track+of+worm+trackers.">Keeping track of worm trackers.</a> WormBook. , (2013).</li><li>Roussel, N., Sprenger, J., Tappan, S. J., Glaser, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+tracking+and+quantification+of+C.+elegans+body+shape+and+locomotion+through+coiling,+entanglement,+and+omega+bends.">Robust tracking and quantification of C. elegans body shape and locomotion through coiling, entanglement, and omega bends.</a> Worm. 3 (4), 982437 (2014).</li><li>Grubbs, J. J., vander Linden, A. M., Raizen, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+sleep+by+KIN-29+is+not+developmental.">Regulation of sleep by KIN-29 is not developmental.</a> microPublication Biology. 2020, (2020).</li><li>Iannacone, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RFamide+receptor+DMSR-1+regulates+stress-induced+sleep+in+C.+elegans.">The RFamide receptor DMSR-1 regulates stress-induced sleep in C. elegans.</a> eLife. 6, 19837 (2017).</li><li>McClanahan, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quiescent+state+following+mild+sensory+arousal+in+Caenorhabditis+elegans+is+potentiated+by+stress.">A quiescent state following mild sensory arousal in Caenorhabditis elegans is potentiated by stress.</a> Scientific Reports. 10, 4140 (2020).</li><li>Churgin, M. A., McCloskey, R. J., Peters, E., Fang-Yen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonistic+serotonergic+and+octopaminergic+neural+circuits+mediate+food-dependent+locomotory+behavior+in+Caenorhabditis+elegans.">Antagonistic serotonergic and octopaminergic neural circuits mediate food-dependent locomotory behavior in Caenorhabditis elegans.</a> The Journal of Neuroscience. 37 (33), 7811-7823 (2017).</li><li>Kenyon, C., Chang, J., Gensch, E., Rudner, A., Tabtiang, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+C.+elegans+mutant+that+lives+twice+as+long+as+wild+type.">A C. elegans mutant that lives twice as long as wild type.</a> Nature. 366 (6454), 461-464 (1993).</li><li>Murphy, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+that+act+downstream+of+DAF-16+to+influence+the+lifespan+of+Caenorhabditis+elegans.">Genes that act downstream of DAF-16 to influence the lifespan of Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 424 (6946), 277-283 (2003).</li><li>Hulme, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifespan-on-a-chip:+Microfluidic+chambers+for+performing+lifelong+observation+of+C+.+elegans.">Lifespan-on-a-chip: Microfluidic chambers for performing lifelong observation of C . elegans.</a> Lab on a Chip. 10 (5), 589-597 (2010).</li><li>Lionaki, E., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+and+longitudinal+analysis+of+aging+and+senescent+decline+in+Caenorhabditis+elegans.">High-throughput and longitudinal analysis of aging and senescent decline in Caenorhabditis elegans.</a> Methods in Molecular Biology. 965, 485-500 (2013).</li><li>Szewczyk, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+development+and+lifespan+extension+as+features+of+metabolic+lifestyle+alteration+in+C.+elegans+under+dietary+restriction.">Delayed development and lifespan extension as features of metabolic lifestyle alteration in C. elegans under dietary restriction.</a> The Journal of Experimental Biology. 209, 4129-4139 (2006).</li><li>Ghosh, R., Emmons, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Episodic+swimming+behavior+in+the+nematode+C.+elegans.">Episodic swimming behavior in the nematode C. elegans.</a> The Journal of Experimental Biology. 211, 3703-3711 (2008).</li><li>Hartman, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Swimming+exercise+and+transient+food+deprivation+in+Caenorhabditis+elegans+promote+mitochondrial+maintenance+and+protect+against+chemical-induced+mitotoxicity.">Swimming exercise and transient food deprivation in Caenorhabditis elegans promote mitochondrial maintenance and protect against chemical-induced mitotoxicity.</a> Scientific Reports. 8, 8359 (2018).</li><li>Yemini, E., Jucikas, T., Grundy, L. J., Brown, A. E. X., Schafer, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+database+of+Caenorhabditis+elegans+behavioral+phenotypes.">A database of Caenorhabditis elegans behavioral phenotypes.</a> Nature Methods. 10 (9), 877-879 (2013).</li></ol>

Das WorMotel-System ist ein leistungsstarkes Werkzeug, um individualisierte Daten für Hunderte von isolierten C. elegans im Laufe der Zeit zu sammeln. In Anlehnung an die vorangegangenen Studien mit Multi-Well-Geräten für Anwendungen in der Entwicklungsruhe, im Bewegungsverhalten und im Altern war es das Ziel dieser Arbeit, die Präparation von Multi-Well-Geräten für die Langzeitüberwachung von Aktivität, Gesundheit und Lebensdauer in einem höheren Durchsatz zu optimieren. Diese Arbeit liefert ein detail...

Caenorhabditis elegans werden aufgrund ihrer kurzen Generationszeit (ca. 3 Tage), ihrer kurzen Lebensdauer (ca. 3 Wochen), ihrer einfachen Kultivierung im Labor, ihres hohen Maßes an evolutionärer Erhaltung molekularer Prozesse und Signalwege bei Säugetieren und ihrer breiten Verfügbarkeit genetischer Manipulationstechniken häufig in Alternsstudien eingesetzt. Im Rahmen von Alterungsstudien ermöglichen C. elegans die schnelle Generierung von Langlebigkeitsdaten und gealterten Populationen für die Analyse von Phänotypen im späten Leben lebender Tiere. Der typische Ansatz für die Durchführung von Studien zur Wurmalterung besteht darin, die Lebensdauer einer Population von Würmern, die in Gruppen von 20 bis 70 Tieren gehalten wird, manuell auf festen Agar-Nematoden-Wachstumsmedien (NGM) in 6-cm-Petriplatten zu messen1. Die Verwendung alterssynchronisierter Populationen ermöglicht die Messung der Lebensspanne oder der Querschnittsphänotypen bei einzelnen Tieren in der gesamten Population, aber diese Methode schließt die Überwachung der Merkmale einzelner Tiere im Laufe der Zeit aus. Dieser Ansatz ist auch arbeitsintensiv und schränkt daher die Größe der Population ein, die getestet werden kann.
Es gibt eine begrenzte Anzahl von Kulturmethoden, die die longitudinale Überwachung einzelner C. elegans während ihrer gesamten Lebensspanne ermöglichen, und jede hat eine Reihe von Vor- und Nachteilen. Mikrofluidik-Geräte, darunter WormFarm2, NemaLife3 und der "Verhaltens"-Chip4, unter anderem 5,6,7, ermöglichen die Überwachung einzelner Tiere über einen längeren Zeitraum. Die Kultivierung von Würmern in Flüssigkultur unter Verwendung von Multi-Well-Platten ermöglicht in ähnlicher Weise die Überwachung einzelner Tiere oder kleiner Populationen von C. elegans über einen längeren Zeitraum 8,9. Die flüssige Umgebung stellt einen anderen Umweltkontext dar als die übliche Kulturumgebung auf festen Medien in Petriplatten, die altersrelevante Aspekte der Tierphysiologie verändern können, einschließlich des Fettgehalts und der Expression von Stressreaktionsgenen10,11. Die Möglichkeit, diese Studien direkt mit der Mehrzahl der Daten zu vergleichen, die über alternde C. elegans erhoben wurden, ist durch Unterschiede in potenziell wichtigen Umweltvariablen eingeschränkt. Der Worm Corral12 ist ein Ansatz, der entwickelt wurde, um einzelne Tiere in einer Umgebung unterzubringen, die der typischen Solid-Media-Kultur näher kommt. Der Worm Corral enthält für jedes Tier eine versiegelte Kammer auf einem Objektträger mit Hydrogel, die die Längsbeobachtung isolierter Tiere ermöglicht. Diese Methode verwendet Standard-Hellfeld-Bildgebung, um morphologische Daten wie Körpergröße und -aktivität aufzuzeichnen. Die Tiere werden jedoch als Embryonen in die Hydrogel-Umgebung gebracht, wo sie während ihrer gesamten Lebensspanne ungestört bleiben. Dies erfordert die Verwendung von bedingt sterilen mutierten oder transgenen genetischen Hintergründen, was sowohl die Kapazität für ein genetisches Screening einschränkt, da jede neue Mutation oder jedes Transgen in einen Hintergrund mit bedingter Sterilität gekreuzt werden muss, als auch die Kapazität für ein Arzneimittelscreening, da Behandlungen nur einmal bei den Tieren als Embryonen angewendet werden können.
Eine alternative Methode, die vom Fang-Yen-Labor entwickelt wurde, ermöglicht die Kultivierung von Würmern auf festen Medien in einzelnen Vertiefungen eines mikrofabrizierten Polydimethylsiloxan-Geräts (PDMS) namens WorMotel13,14. Jedes Gerät befindet sich in einer Single-Well-Schale (d. h. mit den gleichen Abmessungen wie eine 96-Well-Platte) und verfügt über 240 Vertiefungen, die durch einen Graben getrennt sind, der mit einer aversiven Lösung gefüllt ist, um zu verhindern, dass die Würmer zwischen den Vertiefungen wandern. Jeder Brunnen kann für die Dauer seiner Lebensdauer einen einzelnen Wurm beherbergen. Das Gerät ist von wasserabsorbierenden Polyacrylamid-Gel-Pellets (als "Wasserkristalle" bezeichnet) umgeben, und die Schale ist mit Parafilm-Laborfolie versiegelt, um die Luftfeuchtigkeit aufrechtzuerhalten und das Austrocknen des Mediums zu minimieren. Dieses System ermöglicht es, Daten über die Gesundheitsspanne und die Lebensdauer einzelner Tiere zu sammeln, während die Verwendung fester Medien die von den Tieren in der überwiegenden Mehrheit der veröffentlichten Studien zur Lebensspanne von C. elegans erlebte Umgebung besser rekapituliert und somit direktere Vergleiche ermöglicht. Kürzlich wurde eine ähnliche Technik entwickelt, bei der Polystyrol-Mikroschalen verwendet wurden, die ursprünglich für Mikrozytotoxizitätsassays15 anstelle des PDMS-Geräts16 verwendet wurden. Die Microtray-Methode ermöglicht die Erfassung individualisierter Daten für Würmer, die auf festen Medien kultiviert wurden, und hat eine verbesserte Fähigkeit, Würmer unter Bedingungen einzudämmen, die typischerweise zur Flucht führen würden (z. B. Stressoren oder Ernährungseinschränkungen), wobei der Kompromiss darin besteht, dass jede Mikroschale nur 96 Tiere enthalten kann16, während das hier verwendete Multi-Well-Gerät bis zu 240 Tiere enthalten kann.
Hier wird ein detailliertes Protokoll für die Herstellung von Multi-Well-Geräten vorgestellt, das für die Konsistenz von Platte zu Platte und die parallele Herstellung mehrerer Geräte optimiert ist. Dieses Protokoll wurde aus dem ursprünglichen Protokoll des Fang-Yen-Labors13 adaptiert. Insbesondere gibt es Beschreibungen für Techniken zur Minimierung der Kontamination, zur Optimierung der gleichmäßigen Trocknung sowohl des festen Mediums als auch der bakteriellen Nahrungsquelle sowie zur Abgabe von RNAi und Medikamenten. Dieses System kann verwendet werden, um die individuelle Gesundheitsspanne, die Lebensdauer und andere Phänotypen wie Körpergröße und -form zu verfolgen. Diese Multi-Well-Geräte sind mit bestehenden Hochdurchsatzsystemen zur Messung der Lebensdauer kompatibel, wodurch ein Großteil der manuellen Arbeit, die mit herkömmlichen Lebensdauerexperimenten verbunden ist, entfallen kann und die Möglichkeit einer automatisierten, direkten Langlebigkeitsmessung und Gesundheitsverfolgung bei einzelnen C. elegans in großem Maßstab bietet.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2.5 lb weight</td>
			<td>CAP Barbell</td>
			<td>RP-002.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrylic sheets (6 in x 4 in x 3/8 in)</td>
			<td>Falken Design</td>
			<td>ACRYLIC-CL-3-8/1224</td>
			<td>Large sheet cut to smaller sizes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclavable squeeze bottle</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>2405-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto agar</td>
			<td>BD Difco</td>
			<td>214030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto peptone</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>211677</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basin, 25 mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89094-664</td>
			<td>Disposable pipette basin&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cabinet style vacuum desiccator&#160;</td>
			<td>SP Bel-Art</td>
			<td>F42400-4001</td>
			<td>Do not need to use dessicant, only using as a vacuum chamber.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>349615000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caenorhabditis elegans N2</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td>N2</td>
			<td>Wildtype strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbenicillin&#160;</td>
			<td>GoldBio</td>
			<td>C-103-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>360902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>ICN Biomedicals Inc</td>
			<td>101380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compressed oxygen tank</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>UN1072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuSO4</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>C493-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry bead bath incubator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11-718-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli OP50&#160;</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td>OP50</td>
			<td>Standard labratory food for C. elegans</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>ex0276-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Floxuridine</td>
			<td>Research Products International</td>
			<td>F10705-1.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization oven</td>
			<td>Techne</td>
			<td>731-0177</td>
			<td>Used to cure PDMS mixture, any similar oven will suffice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubators</td>
			<td>Shel Lab</td>
			<td>2020</td>
			<td>20 &#176;C incubator for maintaining worm strains and 37 &#176;C incubator to grow bacteria&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl &#223;-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td>GoldBio</td>
			<td>I2481C100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P288-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P286-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>KimTech</td>
			<td>34155</td>
			<td>Task wipes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth, Lennox</td>
			<td>BD Difco</td>
			<td>240230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low melt agarose</td>
			<td>Research Products International</td>
			<td>A20070-250.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>M-8900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave&#160;</td>
			<td>Sharp</td>
			<td>R-530DK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multichannel repeat pipette, 20&#8211;200 &#181;L LTS EDP3</td>
			<td>Rainin</td>
			<td>17013800</td>
			<td>The exact model used is no longer sold, a similar model&#39;s catalog number has been provided</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP358-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc OmniTray</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>264728</td>
			<td>Clear polystyrene trays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-374-10</td>
			<td>Double-wide (4 in)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri plate, 100 mM&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25384-342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri plate, 60 mM&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasma cleaner</td>
			<td>Plasma Etch, Inc.</td>
			<td>PE-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLATINUM vacuum pump</td>
			<td>JB Industries</td>
			<td>DV-142N&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PolyJet 3D printer</td>
			<td>Stratasys&#160;</td>
			<td>Objet500 Connex3</td>
			<td>PolyJet 3D printing services provided by ProtoCAM (Matrial: Vero Rigid; Finish: Matte; Color: Gloss; Resolution: X-axis: 600 dpi, Y-axis: 600 dpi, Z-axis: 1600 dpi)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking incubator</td>
			<td>Lab-Line</td>
			<td>3526CC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>smartSpatula</td>
			<td>LevGo, Inc.</td>
			<td>17211</td>
			<td>Disposable spatula</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superabsorbent polymer (AgSAP Type S)</td>
			<td>M2 Polymer Technologies</td>
			<td>Type S</td>
			<td>Referred to in main text as &#34;water crystals&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYLGARD 184 Silicone Elastomer base</td>
			<td>The Dow Chemical Company</td>
			<td>2065622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYLGARD 184 Silicone Elastomer curing agent</td>
			<td>The Dow Chemical Company</td>
			<td>2085925</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter (0.22 &#181;m)</td>
			<td>Nest Scientific USA Inc.&#160;</td>
			<td>380111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 10 mL&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14955453</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TWEEN 20</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>J20605-AP</td>
			<td>Detergent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum pump oil</td>
			<td>VWR</td>
			<td>54996-082</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VeroBlackPlus</td>
			<td>Stratasys&#160;</td>
			<td>RGD875</td>
			<td>Rigid 3D printing filament</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh boat</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>WB30304</td>
			<td>Large enough for PDMS mixture volume</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

long-term culture and monitoring of isolated caenorhabditis elegans on solid media in multi-well devices

Der Fadenwurm Caenorhabditis elegans gehört aufgrund seiner einfachen und kostengünstigen Kulturtechniken, seines schnellen Reproduktionszyklus (~3 Tage), seiner kurzen Lebensdauer (~3 Wochen) und zahlreicher verfügbarer Werkzeuge für die genetische Manipulation und molekulare Analyse zu den am häufigsten verwendeten Modellsystemen in der Alternsforschung. Der gebräuchlichste Ansatz zur Durchführung von Alterungsstudien bei C. elegans, einschließlich der Überlebensanalyse, besteht darin, Populationen von Dutzenden bis Hunderten von Tieren zusammen auf festen Nematoden-Wachstumsmedien (NGM) in Petriplatten zu kultivieren. Während bei diesem Ansatz Daten über eine Population von Tieren gesammelt werden, verfolgen die meisten Protokolle einzelne Tiere nicht über einen längeren Zeitraum. Hier wird ein optimiertes Protokoll für die Langzeitkultivierung von Einzeltieren auf mikrofabrizierten Polydimethylsiloxan (PDMS)-Geräten, den sogenannten WorMotels, vorgestellt. Jedes Gerät ermöglicht die Kultivierung von bis zu 240 Tieren in kleinen Vertiefungen, die NGM enthalten, wobei jede Vertiefung durch einen kupfersulfathaltigen Graben isoliert wird, der die Tiere an der Flucht hindert. Aufbauend auf der ursprünglichen WorMotel-Beschreibung enthält dieses Dokument ein detailliertes Protokoll für das Formen, Vorbereiten und Bestücken jedes Geräts mit Beschreibungen häufiger technischer Komplikationen und Ratschlägen zur Fehlerbehebung. Innerhalb dieses Protokolls enthalten Techniken für die konsistente Beladung von NGM in kleinen Mengen, die konsistente Trocknung sowohl des NGM als auch der bakteriellen Nahrung, Optionen für die Verabreichung pharmakologischer Interventionen, Anweisungen und praktische Einschränkungen bei der Wiederverwendung von PDMS-Geräten sowie Tipps zur Minimierung der Austrocknung, selbst in Umgebungen mit niedriger Luftfeuchtigkeit. Diese Technik ermöglicht die longitudinale Überwachung verschiedener physiologischer Parameter, einschließlich stimulierter Aktivität, unstimulierter Aktivität, Körpergröße, Bewegungsgeometrie, Gesundheitsspanne und Überleben, in einer Umgebung, die der Standardtechnik für Gruppenkulturen auf festen Medien in Petriplatten ähnelt. Diese Methode ist in Verbindung mit automatisierter Mikroskopie- und Analysesoftware mit der Datenerfassung mit hohem Durchsatz kompatibel. Abschließend werden die Grenzen dieser Technik diskutiert und ein Vergleich dieses Ansatzes mit einer kürzlich entwickelten Methode durchgeführt, bei der Mikroschalen verwendet werden, um isolierte Nematoden auf festen Medien zu kultivieren.

Das WorMotel-Kultursystem kann verwendet werden, um eine Vielzahl von Daten zu sammeln, unter anderem über Lebensdauer, Gesundheitsspanne und Aktivität. In veröffentlichten Studien wurden Multi-Well-Geräte verwendet, um die Lebensdauer und die Gesundheitsspanne 13,14, die Ruhephase und den Schlaf 22,23,24 und das Verhalten 25 zu untersuchen. D...

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Long-Term Culture and Monitoring of Isolated Caenorhabditis elegans on Solid Media in Multi-Well Devices

Hier wird ein optimiertes Protokoll für die Kultivierung isolierter einzelner Nematoden auf festen Medien in mikrofabrizierten Multi-Well-Bauelementen vorgestellt. Dieser Ansatz ermöglicht es, einzelne Tiere ihr ganzes Leben lang auf eine Vielzahl von Phänotypen im Zusammenhang mit dem Altern und der Gesundheit zu überwachen, einschließlich Aktivität, Körpergröße und -form, Bewegungsgeometrie und Überleben.

Langzeitkultur und Monitoring von isolierten Caenorhabditis elegans auf festen Medien in Multi-Well-Geräten

The nematode Caenorhabditis elegans is among the most common model systems used in aging research owing to its simple and inexpensive culture techniques, ...

Wenn wir das Altern und die Meereseleganen untersuchen, verfolgen wir in der Regel eine Population von Tieren im Laufe der Zeit. Dies gibt uns einen Einblick in das, was dieser Prozess, den Sie untersuchen, in der Population zu jedem Zeitpunkt bewirkt, aber es sagt Ihnen nicht, wie sich der Prozess bei einzelnen Tieren im Laufe der Zeit verändert. Diese Einzeltierkulturumgebungen ermöglichen es uns, dynamische Veränderungen in molekularen Prozessen und physiologischen Prozessen in einzelnen Tieren im Laufe der Zeit für Hunderte von Tieren parallel zu verfolgen.Wir stellen fest, dass es zwei wichtige Dinge gibt, die sich wirklich auf die Qualität dieser Multi-Well-Kultursysteme auswirken können. Einer ist entweder die Über- oder Untertrocknung der Brunnen und der zweite ist die Kontamination. Und wir versuchen, während des gesamten Protokolls spezifische Schritte zu beachten, bei denen Sie versuchen können, diese Probleme zu entschärfen.Das Protokoll wird heute von Emily Gardea demonstriert. Sie ist Technikerin in meinem Labor und hat viel Arbeit geleistet, um dieses Protokoll zu optimieren. Nachdem Sie alle Reagenzien vorbereitet haben, mischen Sie 60 Gramm PDMS-Basis und sechs Gramm Härter pro Form in einem großen Einwegboot mit einem Einwegspatel.Legen Sie das PDMS-Gemisch für 30 Minuten bei minus 0,08 Mega Pascal in eine Vakuumkammer, um Blasen zu entfernen. Gießen und füllen Sie die PDMS-Mischung in jede 3D-gedruckte Form. Stellen Sie die gefüllte Form und die überschüssige PDMS-Mischung für 25 Minuten bei minus 0,08 Mega Pascal in die Vakuumkammer.Nehmen Sie die gefüllte Form aus der Vakuumkammer und lassen Sie alle verbleibenden Blasen mit einem Einwegspatel platzen. Beginnen Sie mit einer Kante und senken Sie langsam eine flache Acrylplatte auf die mit PDMS gefüllte Form. Wenn es zu einer Blasenbildung kommt, gehen Sie wie im Manuskript beschrieben vor.Legen Sie ein Gewicht von 2,5 Pfund auf das Acryl und stellen Sie die beschwerten Formen in den Ofen. Lassen Sie sie bei 55 Grad Celsius über Nacht aushärten. Am Ende der Inkubation die Gewichte und die Formen aus dem Ofen nehmen.Als nächstes arbeiten Sie mit einer Rasierklinge zwischen dem Acryl und dem ausgehärteten PDMS Um das Siegel zu brechen, lösen Sie mit einem Rasierer oder einem Metallspatel vorsichtig die Seiten des ausgehärteten PDMS und nehmen Sie sie aus der Form. Wickeln Sie das PDMS-Gerät in Alufolie ein. Versiegeln Sie es mit Autoklavenband und sterilisieren Sie es durch Autoklavieren in einem Trockenzyklus für mindestens 15 Minuten bei 121 Grad Celsius und einem Überdruck von 15 Pfund pro Quadratzoll.Um das Multiwell-Gerät vorzubereiten, heizen Sie einen trockenen Perlenbad-Inkubator auf 90 Grad Celsius vor. Packen Sie ein autoklaviertes Multiwell-Gerät aus und schneiden Sie eine kleine Kerbe in die obere rechte Ecke des Geräts. Legen Sie bis zu drei unverpackte Geräte mit den Vertiefungen nach oben in den Plasmareiniger und lassen Sie den Plasmareiniger laufen.Sterilisieren Sie eine einzelne Styroporschale pro Gerät, indem Sie die Innenseite der Schale mit 70%igem Ethanol besprühen und mit einem Arbeitstuch trocken wischen. Nehmen Sie jedes Gerät mit einer behandschuhten Hand aus dem Plasmareiniger und legen Sie es in eine gereinigte Schale. Stellen Sie dann ein 25-Milliliter-Einweg-Pipettenbecken in den auf 90 Grad Celsius vorgeheizten Perlenbad-Inkubator.Nehmen Sie pro zu befüllendem Gerät ein Röhrchen mit erstarrter LMNGM-Vormischung und geben Sie es in ein 200-Milliliter-Glasbecherglas. Entfernen Sie die Kappe und den Parafilm und stellen Sie sie in die Mikrowelle, bis das Medium zum Gießen ausreichend geschmolzen ist. Gießen Sie die geschmolzene LMNGM-Vormischung in ein weiteres steriles 200-Milliliter-Becherglas.In diesem Becherglas können mehrere Reagenzgläser kombiniert werden, wenn mehr als ein Gerät gleichzeitig befüllt wird. Erhitzen Sie die LMNGM-Vormischung weitere 20 Sekunden in der Mikrowelle. Wenn die Vormischung zu kochen beginnt, stoppen Sie die Mikrowelle und lassen Sie sie sich absetzen.Die geschmolzene LMNGM-Vormischung aus der Mikrowelle nehmen und auf 60 Grad Celsius abkühlen lassen. Die restlichen LMNGM-Zutaten in die Vormischung geben und das geschmolzene LMNGM in das 25-Milliliter-Becken im Perlenbad gießen. Füllen Sie die Gerätevertiefungen mit einer 200-Mikroliter-Mehrkanal-Repeater-Pipette.Stellen Sie den Repeater so ein, dass er Aliquots von 14 Mikrolitern dosiert, und montieren Sie fünf Pipettenspitzen. Befüllen Sie die Spitzen mit geschmolzenem LMNGM und geben Sie die ersten 14 Mikroliter zurück in das LMNGM-haltige Becken. Geben Sie schnell, aber vorsichtig 14 Mikroliter in die inneren Vertiefungen des Geräts und geben Sie das verbleibende LMNGM zurück in das Becken, da das endgültige Aliquot in der Regel weniger als 14 Mikroliter beträgt.Stellen Sie als Nächstes den Repeater so ein, dass er Aliquots von 15 Mikrolitern abgibt und den äußersten Ring der Vertiefungen füllt. Geben Sie mit einer 200-Mikroliter-Pipette 200 Mikroliter Kupfersulfatlösung in den Gerätegraben in jeder Ecke. Vermeiden Sie eine Überfüllung des Grabens und stellen Sie sicher, dass das Kupfersulfat die Oberfläche der Vertiefungen nicht berührt.Wenn das Kupfersulfat nicht leicht durch den gesamten Graben fließt, verwenden Sie einen kurzen Platindrahtpickel, um die Spannung zu brechen und das Kupfersulfat durch den Graben zu ziehen. Nachdem das Kupfersulfat durch den gesamten Graben geflossen ist, entfernen Sie so viel Kupfersulfat wie möglich mit einer 200-Mikroliter-Pipette oder einer Aspiration mit Vakuum. Geben Sie die Wasserkristalle mit einer Quetschflasche in die Zwischenräume zwischen dem Gerät und den Wänden des Tabletts.Schließen Sie den Schalendeckel und wickeln Sie alle vier Seiten mit einem Stück Parafilm ein. Fügen Sie zwei zusätzliche Parafilm-Stücke hinzu, um die Platte vollständig zu versiegeln. Lokalisieren Sie jede Vertiefung mit einer Repetierpipette mit fünf Mikrolitern konzentrierter Bakterien.Vermeiden Sie den direkten Kontakt mit der LMNGM-Oberfläche. Trocknen Sie die Geräte mit einer speziell angefertigten Trockenbox, die mit Computergehäuselüftern und HEPA-Filtern kostengünstig aufgebaut werden kann. Inspizieren Sie die Vertiefungen unter einem Sezierbereich, um sicherzustellen, dass alle Vertiefungen erfolgreich getrocknet sind.Mit einem Platin-Plektrum die Tiere von den vorbereiteten Wurmplatten überführen und einen Wurm pro Vertiefung hinzufügen. Geben Sie einen Tropfen der vorbereiteten Waschmittellösung auf die Innenseite des Schalendeckels und reiben Sie sie mit einem Arbeitstuch ein, bis die Waschmittellösung getrocknet ist. Wickeln Sie das Tablett mit drei Stücken Parafilm ein, wie im Manuskript beschrieben.Die Verlängerung der Lebensdauer von daf-2(RNAi) wird durch die daf-16 Nullmutation blockiert. Die Gesundheitsspanne verringerte sich auch in Gegenwart von daf-2(RNAi)Der rollierende Drei-Tage-Mittelwert der Aktivität über die Lebensspanne wird durch daf-16-Mutante und daf-2(RNAi) reduziert.Die Variation der Lebens- und Gesundheitsspanne zwischen einzelnen Tieren wird entweder in absoluten Zahlen oder als Bruchteil der gesamten Lebensspanne gezeigt. Die kumulative Aktivität über die Lebensspanne einzelner Tiere korreliert besser mit der Lebensspanne als die Aktivität einzelner Tiere an einem bestimmten Tag über die gesamte Lebensspanne.Es ist wichtig, die Vertiefungen zu füllen und die Würmer so schnell wie möglich hinzuzufügen. Sonst können die Brunnen austrocknen und die Würmer überleben nicht. Dieses System ist kompatibel mit automatisierter Bildgebung, mit der Hochdurchsatzdaten wie Lebensdauer, Aktivität und Körpergröße oder -form erfasst werden können.

Research

JoVE Journal

Biology

Long-Term Culture and Monitoring of Isolated Caenorhabditis elegans on Solid Media in Multi-Well Devices

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

Messung Caenorhabditis elegans Life Span auf festen Medien

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The nematode ...

Forschung

Biologie

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

Solide Plate-basierte diätetische Einschränkung in Caenorhabditis elegans</em

Reduction of food intake without malnutrition or starvation is known to increase lifespan and delay the onset of various age-related diseases in a wide ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Zeitraffer-Mikroskopie der frühen Embryogenese in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Long-term Culture of Human Breast Cancer Specimens and Their Analysis Using Optical Projection Tomography

Langfristige Culture of Human Breast Cancer Proben und deren Analyse mit Hilfe von optischen Projektion Tomography

Breast cancer is a leading cause of mortality in the Western world. It is well established that the spread of breast cancer, first locally and later ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Langfristige letale Toxizität Test mit dem Krustentier Artemia franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Grundlegende<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Methoden: Synchronisation und Observation

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraktion und Analyse in<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Culturing Caenorhabditis elegans in Axenic Liquid Media and Creation of Transgenic Worms by Microparticle Bombardment

Culturing Caenorhabditis elegans in Axenic Liquid Media and Creation of Transgenic Worms by Microparticle Bombardment

Die Züchtung<em&gt; Caenorhabditis elegans</em &gt; In Axenic Flüssige Medien und Erstellung von transgenen Worms durch Mikropartikelbeschuss

In this protocol, we present the required materials, and the procedure for making modified&#160;C. elegans&#160;Habituation and Reproduction media ...

Isolation, Transfection, and Long-Term Culture of Adult Mouse and Rat Cardiomyocytes

Isolation, Transfektion und Langzeitkultur von Erwachsenenmaus und Rattenkardiomyozyten

Ex vivo culture of the adult mammalian cardiomyocytes (CMs) presents the most relevant experimental system for the in vitro study of cardiac biology. ...

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

Markierungsfreie Bildgebung der Lipidspeicherdynamik in Caenorhabditis elegans mit stimulierter Raman-Streumikroskopie

Lipid metabolism is a fundamental physiological process necessary for cellular and organism health. Dysregulation of lipid metabolism often elicits ...