Name: long-term culture and monitoring of isolated caenorhabditis elegans on solid media in multi-well devices
Uploaded: 2022-12-09T14:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Long-Term Culture and Monitoring of Isolated Caenorhabditis elegans on Solid Media in Multi-Well Devices at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי NIH R35GM133588 ל- G.L.S., פרס Catalyst של האקדמיה הלאומית לרפואה של ארצות הברית ל- G.L.S., קרן יוזמת הטכנולוגיה והמחקר של מדינת אריזונה המנוהלת על ידי מועצת העוצרים של אריזונה, והקרן הרפואית אליסון.

1. הכנת פתרונות מלאי ומדיה
הערה: לפני תחילת הכנת המכשירים מרובי הקידוחים, הכן את פתרונות המלאי והמדיה הבאים.
<ol><li>פתרונות מלאי עבור מדיה לגידול נמטודות (NGM) ו-NGM בהתכה נמוכה (lmNGM):<ol><li>הכינו 1 M K 2 HPO4: הוסיפו 174.18 גרם של K2HPO4 לבקבוק של 1 ליטר, ומלאו אותו עד 1 ליטר ב?...

<ol>
	<li>Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Caenorhabditis+elegans+life+span+on+solid+media.">Measuring Caenorhabditis elegans life span on solid media.</a> Journal of Visualized Experiments. (27), e1152 (2009).</li><li>Xian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WormFarm:+A+quantitative+control+and+measurement+device+toward+automated+Caenorhabditis+elegans+aging+analysis.">WormFarm: A quantitative control and measurement device toward automated Caenorhabditis elegans aging analysis.</a> Aging Cell. 12 (3), 398-409 (2013).</li><li>Rahman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NemaLife+chip:+A+micropillar-based+microfluidic+culture+device+optimized+for+aging+studies+in+crawling+C.+elegans.">NemaLife chip: A micropillar-based microfluidic culture device optimized for aging studies in crawling C. elegans.</a> Scientific Reports. 10, 16190 (2020).</li><li>Chronis, N., Zimmer, M., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidics+for+in+vivo+imaging+of+neuronal+and+behavioral+activity+in+Caenorhabditis+elegans.">Microfluidics for in vivo imaging of neuronal and behavioral activity in Caenorhabditis elegans.</a> Nature Methods. 4 (9), 727-731 (2007).</li><li>Clark, A. S., Huayta, J., Arulalan, K. S., San-Miguel, A., Liu, X., Sun, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+devices+for+imaging+and+manipulation+of+C.+elegans.">Microfluidic devices for imaging and manipulation of C. elegans.</a> Micro and Nano Systems for Biophysical Studies of Cells and Small Organisms. 13, 295-321 (2021).</li><li>Levine, E., Lee, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+approaches+for+Caenorhabditis+elegans+research.">Microfluidic approaches for Caenorhabditis elegans research.</a> Animal Cells and Systems. 24 (6), 311-320 (2020).</li><li>Atakan, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+platform+for+long-term+culture+and+high-content+phenotyping+of+single+C.+elegans+worms.">Automated platform for long-term culture and high-content phenotyping of single C. elegans worms.</a> Scientific Reports. 9, 14340 (2019).</li><li>Solis, G. M., Petrascheck, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Caenorhabditis+elegans+life+span+in+96+well+microtiter+plates.">Measuring Caenorhabditis elegans life span in 96 well microtiter plates.</a> Journal of Visualized Experiments. (49), e2496 (2011).</li><li>Leung, C. K., Deonarine, A., Strange, K., Choe, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screening+and+biosensing+with+fluorescent+C.+elegans+strains.">High-throughput screening and biosensing with fluorescent C. elegans strains.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), e2745 (2011).</li><li>Laranjeiro, R., Harinath, G., Burke, D., Braeckman, B. P., Driscoll, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+swim+sessions+in+C.+elegans+induce+key+features+of+mammalian+exercise.">Single swim sessions in C. elegans induce key features of mammalian exercise.</a> BMC Biology. 15 (1), 30 (2017).</li><li>&#199;elen, &. #. 3. 0. 4. ;., Doh, J. H., Sabanayagam, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+liquid+cultivation+on+gene+expression+and+phenotype+of+C.+elegans.">Effects of liquid cultivation on gene expression and phenotype of C. elegans.</a> BMC Genomics. 19 (1), 562 (2018).</li><li>Pittman, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+apparatus+for+individual+C.+elegans+culture.">A simple apparatus for individual C. elegans culture.</a> Methods in Molecular Biology. 2144, 29-45 (2020).</li><li>Churgin, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+imaging+of+Caenorhabditis+elegans+in+a+microfabricated+device+reveals+variation+in+behavioral+decline+during+aging.">Longitudinal imaging of Caenorhabditis elegans in a microfabricated device reveals variation in behavioral decline during aging.</a> eLife. 6, 26652 (2017).</li><li>Jushaj, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+criteria+for+locomotion-based+healthspan+evaluation+in+C.+elegans+using+the+WorMotel+system.">Optimized criteria for locomotion-based healthspan evaluation in C. elegans using the WorMotel system.</a> PLoS One. 15 (3), 0229583 (2020).</li><li>Mittal, K. K., Mickey, M. R., Singal, D. P., Terasaki, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotyping+for+homotransplantation.+18.+Refinement+of+microdroplet+lymphocyte+cytotoxicity+test.">Serotyping for homotransplantation. 18. Refinement of microdroplet lymphocyte cytotoxicity test.</a> Transplantation. 6 (8), 913-927 (1968).</li><li>Espejo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+culture+of+individual+Caenorhabditis+elegans+on+solid+media+for+longitudinal+fluorescence+monitoring+and+aversive+interventions.">Long-term culture of individual Caenorhabditis elegans on solid media for longitudinal fluorescence monitoring and aversive interventions.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2022).</li><li>Porta-de-la-Riva, M., Fontrodona, L., Villanueva, A., Cer&#243;n, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+Caenorhabditis+elegans+methods:+synchronization+and+observation.">Basic Caenorhabditis elegans methods: synchronization and observation.</a> Journal of Visualized Experiments. (64), e4019 (2012).</li><li>Freitas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Worm+Paparazzi+-+A+high+throughput+lifespan+and+healthspan+analysis+platform+for+individual+Caenorhabditis+elegans.">Worm Paparazzi - A high throughput lifespan and healthspan analysis platform for individual Caenorhabditis elegans.</a> University of Arizona. , (2021).</li><li>Moore, B. T., Jordan, J. M., Baugh, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WormSizer:+High-throughput+analysis+of+nematode+size+and+shape.">WormSizer: High-throughput analysis of nematode size and shape.</a> PLoS One. 8 (2), e57142 (2013).</li><li>Husson, S. J., Costa, W. S., Schmitt, C., Gottschalk, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keeping+track+of+worm+trackers.">Keeping track of worm trackers.</a> WormBook. , (2013).</li><li>Roussel, N., Sprenger, J., Tappan, S. J., Glaser, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+tracking+and+quantification+of+C.+elegans+body+shape+and+locomotion+through+coiling,+entanglement,+and+omega+bends.">Robust tracking and quantification of C. elegans body shape and locomotion through coiling, entanglement, and omega bends.</a> Worm. 3 (4), 982437 (2014).</li><li>Grubbs, J. J., vander Linden, A. M., Raizen, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+sleep+by+KIN-29+is+not+developmental.">Regulation of sleep by KIN-29 is not developmental.</a> microPublication Biology. 2020, (2020).</li><li>Iannacone, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RFamide+receptor+DMSR-1+regulates+stress-induced+sleep+in+C.+elegans.">The RFamide receptor DMSR-1 regulates stress-induced sleep in C. elegans.</a> eLife. 6, 19837 (2017).</li><li>McClanahan, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quiescent+state+following+mild+sensory+arousal+in+Caenorhabditis+elegans+is+potentiated+by+stress.">A quiescent state following mild sensory arousal in Caenorhabditis elegans is potentiated by stress.</a> Scientific Reports. 10, 4140 (2020).</li><li>Churgin, M. A., McCloskey, R. J., Peters, E., Fang-Yen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonistic+serotonergic+and+octopaminergic+neural+circuits+mediate+food-dependent+locomotory+behavior+in+Caenorhabditis+elegans.">Antagonistic serotonergic and octopaminergic neural circuits mediate food-dependent locomotory behavior in Caenorhabditis elegans.</a> The Journal of Neuroscience. 37 (33), 7811-7823 (2017).</li><li>Kenyon, C., Chang, J., Gensch, E., Rudner, A., Tabtiang, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+C.+elegans+mutant+that+lives+twice+as+long+as+wild+type.">A C. elegans mutant that lives twice as long as wild type.</a> Nature. 366 (6454), 461-464 (1993).</li><li>Murphy, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+that+act+downstream+of+DAF-16+to+influence+the+lifespan+of+Caenorhabditis+elegans.">Genes that act downstream of DAF-16 to influence the lifespan of Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 424 (6946), 277-283 (2003).</li><li>Hulme, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifespan-on-a-chip:+Microfluidic+chambers+for+performing+lifelong+observation+of+C+.+elegans.">Lifespan-on-a-chip: Microfluidic chambers for performing lifelong observation of C . elegans.</a> Lab on a Chip. 10 (5), 589-597 (2010).</li><li>Lionaki, E., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+and+longitudinal+analysis+of+aging+and+senescent+decline+in+Caenorhabditis+elegans.">High-throughput and longitudinal analysis of aging and senescent decline in Caenorhabditis elegans.</a> Methods in Molecular Biology. 965, 485-500 (2013).</li><li>Szewczyk, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+development+and+lifespan+extension+as+features+of+metabolic+lifestyle+alteration+in+C.+elegans+under+dietary+restriction.">Delayed development and lifespan extension as features of metabolic lifestyle alteration in C. elegans under dietary restriction.</a> The Journal of Experimental Biology. 209, 4129-4139 (2006).</li><li>Ghosh, R., Emmons, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Episodic+swimming+behavior+in+the+nematode+C.+elegans.">Episodic swimming behavior in the nematode C. elegans.</a> The Journal of Experimental Biology. 211, 3703-3711 (2008).</li><li>Hartman, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Swimming+exercise+and+transient+food+deprivation+in+Caenorhabditis+elegans+promote+mitochondrial+maintenance+and+protect+against+chemical-induced+mitotoxicity.">Swimming exercise and transient food deprivation in Caenorhabditis elegans promote mitochondrial maintenance and protect against chemical-induced mitotoxicity.</a> Scientific Reports. 8, 8359 (2018).</li><li>Yemini, E., Jucikas, T., Grundy, L. J., Brown, A. E. X., Schafer, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+database+of+Caenorhabditis+elegans+behavioral+phenotypes.">A database of Caenorhabditis elegans behavioral phenotypes.</a> Nature Methods. 10 (9), 877-879 (2013).</li></ol>

מערכת WorMotel היא כלי רב עוצמה לאיסוף נתונים אישיים עבור מאות C. elegans מבודדים לאורך זמן. בעקבות המחקרים הקודמים שהשתמשו במכשירים מרובי בארות ליישומים בשקט התפתחותי, התנהגות מוטורית והזדקנות, מטרת עבודה זו הייתה לייעל את ההכנה של מכשירים מרובי בארות לניטור ארוך טווח של פעילות, בריאות ותוח...

Caenorhabditis elegans נפוצים במחקרי הזדקנות בגלל זמן הדור הקצר שלהם (כ -3 ימים), תוחלת חיים קצרה (כ -3 שבועות), קלות הגידול במעבדה, רמה גבוהה של שימור אבולוציוני של תהליכים מולקולריים ומסלולים עם יונקים, וזמינות רחבה של טכניקות מניפולציה גנטית. בהקשר של מחקרי הזדקנות, C. elegans מאפשרים יצירה מהירה של נתוני אריכות ימים ואוכלוסיות מבוגרות לניתוח פנוטיפים מאוחרים בבעלי חיים חיים. הגישה הטיפוסית לביצוע מחקרי הזדקנות תולעים כוללת מדידה ידנית של תוחלת החיים של אוכלוסיית תולעים המתוחזקת בקבוצות של 20 עד 70 בעלי חיים על מצע גידול נמטודות אגר מוצק (NGM) בלוחות פטרי בגודל 6 ס"מ1. שימוש באוכלוסיות מסונכרנות גיל מאפשר מדידה של תוחלת חיים או פנוטיפים חתך בבעלי חיים בודדים על פני האוכלוסייה, אך שיטה זו מונעת ניטור המאפיינים של בעלי חיים בודדים לאורך זמן. גישה זו היא גם עתירת עבודה, ובכך מגבילה את גודל האוכלוסייה שניתן לבדוק.
ישנן מספר מצומצם של שיטות תרבית המאפשרות ניטור אורכי של C. elegans בודדים לאורך כל חייהם, ולכל אחד מהם יש מערכת ייחודית של יתרונות וחסרונות. מכשירי מיקרופלואידיקה, כולל WormFarm2, NemaLife3 ושבב "התנהגות"4, בין היתר 5,6,7, מאפשרים ניטור של בעלי חיים בודדים לאורך זמן. גידול תולעים בתרבית נוזלית באמצעות לוחות מרובי בארות מאפשר באופן דומה ניטור של בעלי חיים בודדים או אוכלוסיות קטנות של C. elegans לאורך זמן 8,9. הסביבה הנוזלית מייצגת הקשר סביבתי שונה מסביבת התרבית הנפוצה על מצע מוצק בצלחות פטרי, אשר יכול לשנות היבטים בפיזיולוגיה של בעלי חיים הרלוונטיים להזדקנות, כולל תכולת שומן וביטוי גנים של תגובת דחק10,11. היכולת להשוות ישירות מחקרים אלה לרוב הנתונים שנאספו על הזדקנות C. elegans מוגבלת על ידי הבדלים במשתנים סביבתיים חשובים פוטנציאליים. Worm Corral12 היא גישה אחת שפותחה כדי לשכן בעלי חיים בודדים בסביבה שמשכפלת באופן הדוק יותר תרבות מדיה מוצקה טיפוסית. קורל התולעת מכיל תא אטום לכל בעל חיים במגלשת מיקרוסקופ באמצעות הידרוג'ל, המאפשר ניטור אורכי של בעלי חיים מבודדים. שיטה זו משתמשת בדימות שדה בהיר סטנדרטי כדי להקליט נתונים מורפולוגיים, כגון גודל גוף ופעילות. עם זאת, בעלי חיים ממוקמים בסביבת הידרוג'ל כעוברים, שם הם נשארים ללא הפרעה לאורך כל חייהם. זה דורש שימוש ברקע גנטי מוטנטי או טרנסגני סטרילי מותנה, מה שמגביל הן את היכולת לבדיקות גנטיות, שכן כל מוטציה או טרנסגן חדש צריך לעבור לרקע עם עקרות מותנית, והן את היכולת לבדיקת תרופות, שכן טיפולים יכולים להיות מיושמים רק פעם אחת על בעלי החיים כעוברים.
שיטה חלופית שפותחה על ידי מעבדת פאנג-ין מאפשרת גידול תולעים על מדיה מוצקה בבארות בודדות של מכשיר פולידימתילסילוקסאן (PDMS) מיקרו-מפוברק הנקרא WorMotel13,14. כל מכשיר ממוקם בתוך מגש באר אחת (כלומר, עם אותם ממדים כמו צלחת 96 בארות) ויש לו 240 בארות המופרדות על ידי חפיר מלא בתמיסה מרתיעה כדי למנוע את התולעים מלעבור בין בארות. כל באר יכולה לאכלס תולעת בודדת למשך תוחלת החיים שלה. המכשיר מוקף בכדורי ג'ל פוליאקרילאמיד סופגי מים (המכונים "גבישי מים"), והמגש אטום בסרט מעבדה Parafilm כדי לשמור על הלחות ולמזער את התייבשות המדיה. מערכת זו מאפשרת לאסוף נתוני תוחלת חיים ותוחלת חיים עבור בעלי חיים בודדים, בעוד שהשימוש במדיה מוצקה משחזר טוב יותר את הסביבה שחוו בעלי חיים ברוב המכריע של מחקרי תוחלת החיים של C. elegans שפורסמו, ובכך מאפשר השוואה ישירה יותר. לאחרונה פותחה טכניקה דומה באמצעות מיקרו-מגשים מפוליסטירן ששימשו במקור לבדיקות מיקרוציטוטוקסיות15 במקום מכשיר PDMS16. שיטת המיקרו-מגש מאפשרת איסוף נתונים פרטניים עבור תולעים שגודלו בתרבית על מצע מוצק ויש לה יכולת משופרת להכיל תולעים בתנאים שבדרך כלל יגרמו לבריחה (למשל, גורמי עקה או הגבלה תזונתית), כאשר התמורה היא שכל מיקרו-מגש יכול להכיל רק 96 בעלי חיים16, בעוד שהמכשיר הרב-באר המשמש כאן יכול להכיל עד 240 בעלי חיים.
מוצג כאן פרוטוקול מפורט להכנת התקנים מרובי בארות המותאם לעקביות צלחת לצלחת והכנת מכשירים מרובים במקביל. פרוטוקול זה הותאם מהפרוטוקול המקורי ממעבדת פאנג-ין13. באופן ספציפי, ישנם תיאורים לטכניקות כדי למזער זיהום, לייעל את הייבוש העקבי הן של המדיה המוצקה והן של מקור המזון החיידקי, ולספק RNAi ותרופות. מערכת זו יכולה לשמש למעקב אחר תוחלת הבריאות האישית, תוחלת החיים ופנוטיפים אחרים, כגון גודל הגוף וצורתו. התקנים מרובי בארות אלה תואמים למערכות קיימות בעלות תפוקה גבוהה למדידת תוחלת חיים, אשר יכולות להסיר חלק ניכר מהעבודה הידנית הכרוכה בניסויים מסורתיים בתוחלת חיים ולספק הזדמנות למדידה אוטומטית וישירה של אריכות ימים ומעקב בריאות ב- C. elegans בודדים בקנה מידה גדול.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2.5 lb weight</td>
			<td>CAP Barbell</td>
			<td>RP-002.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrylic sheets (6 in x 4 in x 3/8 in)</td>
			<td>Falken Design</td>
			<td>ACRYLIC-CL-3-8/1224</td>
			<td>Large sheet cut to smaller sizes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclavable squeeze bottle</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>2405-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto agar</td>
			<td>BD Difco</td>
			<td>214030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto peptone</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>211677</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basin, 25 mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89094-664</td>
			<td>Disposable pipette basin&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cabinet style vacuum desiccator&#160;</td>
			<td>SP Bel-Art</td>
			<td>F42400-4001</td>
			<td>Do not need to use dessicant, only using as a vacuum chamber.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>349615000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caenorhabditis elegans N2</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td>N2</td>
			<td>Wildtype strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbenicillin&#160;</td>
			<td>GoldBio</td>
			<td>C-103-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>360902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>ICN Biomedicals Inc</td>
			<td>101380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compressed oxygen tank</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>UN1072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuSO4</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>C493-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry bead bath incubator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11-718-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli OP50&#160;</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td>OP50</td>
			<td>Standard labratory food for C. elegans</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>ex0276-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Floxuridine</td>
			<td>Research Products International</td>
			<td>F10705-1.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization oven</td>
			<td>Techne</td>
			<td>731-0177</td>
			<td>Used to cure PDMS mixture, any similar oven will suffice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubators</td>
			<td>Shel Lab</td>
			<td>2020</td>
			<td>20 &#176;C incubator for maintaining worm strains and 37 &#176;C incubator to grow bacteria&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl &#223;-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td>GoldBio</td>
			<td>I2481C100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P288-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P286-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>KimTech</td>
			<td>34155</td>
			<td>Task wipes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth, Lennox</td>
			<td>BD Difco</td>
			<td>240230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low melt agarose</td>
			<td>Research Products International</td>
			<td>A20070-250.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>M-8900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave&#160;</td>
			<td>Sharp</td>
			<td>R-530DK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multichannel repeat pipette, 20&#8211;200 &#181;L LTS EDP3</td>
			<td>Rainin</td>
			<td>17013800</td>
			<td>The exact model used is no longer sold, a similar model&#39;s catalog number has been provided</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP358-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc OmniTray</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>264728</td>
			<td>Clear polystyrene trays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-374-10</td>
			<td>Double-wide (4 in)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri plate, 100 mM&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25384-342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri plate, 60 mM&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasma cleaner</td>
			<td>Plasma Etch, Inc.</td>
			<td>PE-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLATINUM vacuum pump</td>
			<td>JB Industries</td>
			<td>DV-142N&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PolyJet 3D printer</td>
			<td>Stratasys&#160;</td>
			<td>Objet500 Connex3</td>
			<td>PolyJet 3D printing services provided by ProtoCAM (Matrial: Vero Rigid; Finish: Matte; Color: Gloss; Resolution: X-axis: 600 dpi, Y-axis: 600 dpi, Z-axis: 1600 dpi)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking incubator</td>
			<td>Lab-Line</td>
			<td>3526CC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>smartSpatula</td>
			<td>LevGo, Inc.</td>
			<td>17211</td>
			<td>Disposable spatula</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superabsorbent polymer (AgSAP Type S)</td>
			<td>M2 Polymer Technologies</td>
			<td>Type S</td>
			<td>Referred to in main text as &#34;water crystals&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYLGARD 184 Silicone Elastomer base</td>
			<td>The Dow Chemical Company</td>
			<td>2065622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYLGARD 184 Silicone Elastomer curing agent</td>
			<td>The Dow Chemical Company</td>
			<td>2085925</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter (0.22 &#181;m)</td>
			<td>Nest Scientific USA Inc.&#160;</td>
			<td>380111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 10 mL&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14955453</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TWEEN 20</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>J20605-AP</td>
			<td>Detergent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum pump oil</td>
			<td>VWR</td>
			<td>54996-082</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VeroBlackPlus</td>
			<td>Stratasys&#160;</td>
			<td>RGD875</td>
			<td>Rigid 3D printing filament</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh boat</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>WB30304</td>
			<td>Large enough for PDMS mixture volume</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

long-term culture and monitoring of isolated caenorhabditis elegans on solid media in multi-well devices

הנמטודה Caenorhabditis elegans היא בין מערכות המודל הנפוצות ביותר המשמשות במחקר ההזדקנות בשל טכניקות התרבית הפשוטות והזולות שלה, מחזור רבייה מהיר (~ 3 ימים), תוחלת חיים קצרה (~ 3 שבועות), וכלים זמינים רבים למניפולציה גנטית וניתוח מולקולרי. הגישה הנפוצה ביותר לביצוע מחקרי הזדקנות ב- C. elegans, כולל ניתוח הישרדות, כוללת גידול אוכלוסיות של עשרות עד מאות בעלי חיים יחד על מצע גידול נמטודות מוצקות (NGM) בלוחות פטרי. בעוד גישה זו אוספת נתונים על אוכלוסיית בעלי חיים, רוב הפרוטוקולים אינם עוקבים אחר בעלי חיים בודדים לאורך זמן. מוצג כאן פרוטוקול אופטימלי לגידול ארוך טווח של בעלי חיים בודדים על מכשירי פולידימתילסילוקסאן (PDMS) מיקרו-מפוברקים הנקראים WorMotels. כל מכשיר מאפשר לגדל עד 240 בעלי חיים בבארות קטנות המכילות גז טבעי טבעי, כאשר כל באר מבודדת על ידי חפיר המכיל נחושת גופרתית המונע מבעלי החיים לברוח. בהתבסס על התיאור המקורי של WorMotel, מאמר זה מספק פרוטוקול מפורט לעיצוב, הכנה ואכלוס של כל מכשיר, עם תיאורים של סיבוכים טכניים נפוצים ועצות לפתרון בעיות. פרוטוקול זה כולל טכניקות לטעינה עקבית של גז טבעי בנפח קטן, ייבוש עקבי הן של גז טבעי טבעי והן של מזון חיידקי, אפשרויות למתן התערבויות פרמקולוגיות, הוראות ומגבלות מעשיות לשימוש חוזר במכשירי PDMS, וטיפים למזעור התייבשות, אפילו בסביבות עם לחות נמוכה. טכניקה זו מאפשרת ניטור אורכי של פרמטרים פיזיולוגיים שונים, כולל פעילות מגורה, פעילות לא מגורה, גודל גוף, גיאומטריה תנועתית, תוחלת בריאות והישרדות, בסביבה דומה לטכניקה הסטנדרטית לתרבות קבוצתית על מדיה מוצקה בלוחות פטרי. שיטה זו תואמת לאיסוף נתונים בתפוקה גבוהה כאשר משתמשים בה בשילוב עם תוכנת מיקרוסקופיה וניתוח אוטומטית. לבסוף, נדונות מגבלותיה של טכניקה זו, כמו גם השוואה של גישה זו לשיטה שפותחה לאחרונה המשתמשת במיקרו-מגשים לתרבית נמטודות מבודדות על מדיה מוצקה.

ניתן להשתמש במערכת התרבות של WorMotel כדי לאסוף מגוון נתונים, כולל לגבי תוחלת חיים, תוחלת חיים ופעילות. מחקרים שפורסמו השתמשו במכשירים מרובי בארות כדי לחקור את תוחלת החיים ותוחלת הבריאות 13,14, שקט ושינה 22,23,24 והתנהגות <sup class="x...

Watch this Scientific Journal Video about Long-Term Culture and Monitoring of Isolated Caenorhabditis elegans on Solid Media in Multi-Well Devices at JoVE.com

Long-Term Culture and Monitoring of Isolated Caenorhabditis elegans on Solid Media in Multi-Well Devices

מוצג כאן פרוטוקול אופטימלי לגידול נמטודות בודדות מבודדות על מדיה מוצקה בהתקנים מרובי בארות מיקרו-מפוברקים. גישה זו מאפשרת לעקוב אחר בעלי חיים בודדים לאורך חייהם עבור מגוון פנוטיפים הקשורים להזדקנות ולבריאות, כולל פעילות, גודל וצורת גוף, גיאומטריה של תנועה והישרדות.

תרבית ארוכת טווח וניטור של Caenorhabditis elegans מבודדים על מדיה מוצקה במכשירים מרובי בארות

The nematode Caenorhabditis elegans is among the most common model systems used in aging research owing to its simple and inexpensive culture techniques, ...

כאשר אנו חוקרים הזדקנות ואלגני ים, אנו בדרך כלל עוקבים אחר אוכלוסיית בעלי חיים לאורך זמן. זה נותן לנו הצצה למה שהתהליך שאתם חוקרים עושה באוכלוסייה בכל נקודת זמן, אבל זה לא אומר לכם איך התהליך משתנה אצל בעלי חיים בודדים לאורך זמן. סביבות תרבית של בעלי חיים בודדים אלה מאפשרות לנו לעקוב אחר שינויים דינמיים בתהליכים מולקולריים ובתהליכים פיזיולוגיים בבעלי חיים בודדים לאורך זמן עבור מאות בעלי חיים במקביל.אנו מוצאים כי ישנם שני דברים עיקריים שיכולים באמת להשפיע על האיכות של מערכות תרבות מרובות בארות אלה. האחד הוא ייבוש הבארות או מתחתיו, והשני הוא זיהום. ואנחנו מנסים לציין לאורך כל הפרוטוקול צעדים ספציפיים שבהם אתה יכול לנסות להקל על בעיות אלה.מי שתדגים את הפרוטוקול היום תהיה אמילי גרדאה. היא טכנאית במעבדה שלי ועשתה הרבה עבודה כדי לייעל את הפרוטוקול הזה. לאחר הכנת כל הריאגנטים, מערבבים 60 גרם בסיס PDMS ושישה גרם חומר מרפא לכל תבנית בסירה חד פעמית גדולה באמצעות מרית חד פעמית.הניחו את תערובת PDMS בתא ואקום למשך 30 דקות בטמפרטורה של מינוס 0.08 מגה פסקל כדי להסיר בועות. יוצקים וממלאים את תערובת PDMS לכל תבנית מודפסת בתלת-ממד. הכניסו את התבנית המלאה וכל תערובת PDMS נוספת לתא הוואקום למשך 25 דקות במינוס 0.08 מגה פסקל.מוציאים את התבנית המלאה מתא הוואקום ומפוצצים את כל הבועות שנותרו בעזרת מרית חד פעמית. מתחילים בקצה אחד, מורידים לאט יריעת אקריליק שטוחה מעל תבנית מלאה PDMS. אם מתרחשת היווצרות בועה, המשך כמתואר בכתב היד.מניחים משקולת של 2.5 קילו על האקריליק ומכניסים את התבניות המשוקללות לתנור. תנו להם לרפא ב 55 מעלות צלזיוס בן לילה. בתום הדגירה מוציאים את המשקולות והתבניות מהתנור.לאחר מכן, לעבוד סכין גילוח בין אקריליק לבין PDMS נרפא כדי לשבור את החותם באמצעות סכין גילוח או מרית מתכת, בזהירות לשחרר את הצדדים של PDMS נרפא ולהסיר אותם מן התבנית. עטפו את התקן PDMS ברדיד אלומיניום. אטמו אותו בסרט הדבקה אוטומטי ועיקרו אותו על ידי אוטוקלאבינג במחזור יבש למשך 15 דקות לפחות בלחץ מד של 121 מעלות צלזיוס ו-15 פאונד לאינץ' מרובע.כדי להכין את המכשיר רב באר, לחמם מראש אינקובטור אמבטיה חרוזים יבש ל 90 מעלות צלזיוס. בטל עטיפת התקן מרובה בארות אוטומטי וחתוך חריץ קטן בפינה השמאלית העליונה של המכשיר. הכניסו עד שלושה מכשירים לא עטופים לשואב הפלזמה כשהבארות פונות כלפי מעלה והפעילו את מנקה הפלזמה.יש לעקר מגש פוליסטירן אחד לכל מכשיר על ידי ריסוס החלק הפנימי של המגש באתנול 70% וניגוב יבש במגבון משימה. הסר כל מכשיר ממנקה הפלזמה ביד כפפה והנח אותו במגש ניקוי. לאחר מכן מניחים אגן פיפטה חד פעמי של 25 מיליליטר באינקובטור אמבט החרוזים שחומם מראש ב 90 מעלות צלזיוס.יש למלא שפופרת אחת של תערובת LMNGM מוצקה לכל מכשיר והניחו אותה בכד זכוכית של 200 מיליליטר. מסירים את הפקק ואת הפרפילם ומחממים במיקרוגל עד שהמדיה נמסה מספיק כדי לשפוך. יוצקים את תערובת LMNGM המותכת מראש לתוך עוד סטרילית של 200 מיליליטר.ניתן לשלב מספר מבחנות בכד זה אם ממלאים יותר ממכשיר אחד בכל פעם. חממו במיקרוגל את התערובת המקדימה של LMNGM למשך 20 שניות נוספות. אם התערובת המוקדמת מתחילה לרתוח, עצרו את המיקרוגל ואפשרו לו לשקוע.הוציאו את תערובת ה-LMNGM המותכת מהמיקרוגל וקררו אותה ל-60 מעלות צלזיוס. הוסיפו את שאר מרכיבי LMNGM לתערובת שערבבו מראש ומזגו את LMNGM המותך לאגן 25 מיליליטר באמבט החרוזים. מלא את בארות המכשיר באמצעות פיפטה משחזר רב ערוצי 200 מיקרוליטר.הגדר את המשחזר כדי לחלק aliquots של 14 מיקרוליטר ו mount חמישה קצוות פיפטה. טען את הקצוות עם LMNGM מותך ושחרר את 14 המיקרוליטרים הראשונים בחזרה לאגן המכיל LMNGM. נע במהירות אך בזהירות, שחרר 14 מיקרוליטר לתוך הבארות הפנימיות של המכשיר ושחרר את LMNGM הנותרים בחזרה לאגן כמו aliquot הסופי הוא בדרך כלל פחות מ 14 מיקרוליטר.לאחר מכן, להגדיר את המשחזר כדי לחלק aliquots של 15 מיקרוליטר ולמלא את הטבעת החיצונית ביותר של בארות. באמצעות פיפטה של 200 מיקרוליטר, שחררו 200 מיקרוליטר של תמיסת נחושת גופרתית לחפיר המכשיר בכל פינה. הימנע ממילוי יתר של החפיר וודא שהנחושת הגופרתית אינה נוגעת במשטח העליון של הבארות.אם הנחושת הגופרתית אינה זורמת בקלות דרך החפיר כולו, השתמש בחוט פלטינה קצר כדי לעזור לשבור את המתח ולגרור את גופרתי הנחושת דרך החפיר. לאחר שנחושת גופרתית זרמה דרך החפיר כולו, להסיר כמה שיותר נחושת גופרתית באמצעות פיפטה 200 מיקרוליטר או שאיפה עם ואקום. באמצעות בקבוק לחיצה, מוסיפים את גבישי המים ברווחים שבין המכשיר לדפנות המגש.סגור את מכסה המגש ועטוף את כל ארבעת הצדדים בחתיכת Parafilm. הוסיפו שתי חתיכות פרפילם נוספות כדי לאטום את הצלחת לחלוטין. בעזרת פיפטה מהדר מזהים כל באר חמישה מיקרוליטרים של חיידקים מרוכזים.הימנע ממגע ישיר עם משטח LMNGM. יבשו את המכשירים באמצעות קופסת ייבוש בהתאמה אישית, אותה ניתן לבנות בעלות מינימלית באמצעות מאווררי מארז מחשב ומסנני HEPA. תחת היקף דיסקציה, בדוק בארות כדי לוודא שכל הבארות התייבשו בהצלחה.בעזרת פיק פלטינה, מעבירים את בעלי החיים מצלחות התולעת המוכנות ומוסיפים תולעת אחת לכל באר. הוסיפו טיפה של תמיסת ניקוי מוכנה לחלק הפנימי של מכסה המגש ושפשפו עם מגבון משימה עד שתמיסת חומרי הניקוי מתייבשת. עטפו את המגש בשלוש חתיכות של פרפילם כמתואר בכתב היד.הארכת תוחלת החיים מ-daf-2(RNAi) חסומה על-ידי מוטציית האפס daf-16. תוחלת הבריאות ירדה גם בנוכחות daf-2(RNAi)ממוצע הפעילות המתגלגל של שלושה ימים לאורך תוחלת החיים מופחת על ידי מוטציה של daf-16 ו- daf-2(RNAi)השונות בתוחלת החיים ובתוחלת הבריאות בין בעלי חיים בודדים בהשוואה במונחים מוחלטים או כשבריר מתוחלת החיים הכוללת מוצגת. הפעילות המצטברת לאורך תוחלת החיים של בעלי חיים בודדים מתואמת טוב יותר עם תוחלת החיים מאשר הפעילות של בעלי חיים בודדים בכל יום ספציפי לאורך תוחלת החיים.חשוב למלא את הבארות ולהוסיף את התולעים מהר ככל האפשר. אחרת הבארות יכולות להתייבש והתולעים לא ישרדו. מערכת זו תואמת להדמיה אוטומטית שניתן להשתמש בה כדי לאסוף נתונים בתפוקה גבוהה כגון תוחלת חיים, פעילות וגודל גוף או צורה.

Research

JoVE Journal

Biology

Long-Term Culture and Monitoring of Isolated Caenorhabditis elegans on Solid Media in Multi-Well Devices

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

מדידת Caenorhabditis elegans חיים טווח על מדיה מוצק

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The nematode ...

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

Solid פלייט מבוססי הגבלת תזונתיים ב Caenorhabditis elegans</em

Reduction of food intake without malnutrition or starvation is known to increase lifespan and delay the onset of various age-related diseases in a wide ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

זמן לשגות מיקרוסקופית של העובר בשלב מוקדם Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Long-term Culture of Human Breast Cancer Specimens and Their Analysis Using Optical Projection Tomography

לטווח ארוך של תרבות האדם סרטן השד דוגמאות וניתוח שלהם באמצעות טומוגרפיה הקרנה אופטית

Breast cancer is a leading cause of mortality in the Western world. It is well established that the spread of breast cancer, first locally and later ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

לטווח ארוך רעילות מבחן קטלני עם לסרטן הארטמיה franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

בסיסי<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; שיטות: סנכרון תצפית

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

הפקה וניתוח בפרוסטגלנדין<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Culturing Caenorhabditis elegans in Axenic Liquid Media and Creation of Transgenic Worms by Microparticle Bombardment

Culturing Caenorhabditis elegans in Axenic Liquid Media and Creation of Transgenic Worms by Microparticle Bombardment

Culturing<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em &gt; בAxenic נוזלית מדיה ובריאה של תולעים מהונדסים ידי microparticle הפצצה

In this protocol, we present the required materials, and the procedure for making modified&#160;C. elegans&#160;Habituation and Reproduction media ...

Isolation, Transfection, and Long-Term Culture of Adult Mouse and Rat Cardiomyocytes

בידוד, טרנס-תירבה ותרבות ארוכת טווח של עכבר מבוגר וקרדיומיוציטים עכברים וחולדות

Ex vivo culture of the adult mammalian cardiomyocytes (CMs) presents the most relevant experimental system for the in vitro study of cardiac biology. ...

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

הדמיה ללא תווית של דינמיקת אחסון השומנים באלגנים של Caenorhabditis באמצעות מיקרוסקופיית פיזור ראמאן מגורה

Lipid metabolism is a fundamental physiological process necessary for cellular and organism health. Dysregulation of lipid metabolism often elicits ...