Name: long-term culture of individual caenorhabditis elegans on solid media for longitudinal fluorescence monitoring and aversive interventions
Uploaded: 2022-12-02T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Long-Term Culture of Individual Caenorhabditis elegans on Solid Media for Longitudinal Fluorescence Monitoring and Aversive Interventions at JoVE.com

इस काम को एनआईएच आर 35 जीएम 133588 द्वारा जीएलएस, एलई को एनआईएचटी 32 जीएम 008659 प्रशिक्षण अनुदान, जीएलएस को यूनाइटेड स्टेट्स नेशनल एकेडमी ऑफ मेडिसिन कैटेलिस्ट अवार्ड और एरिज़ोना बोर्ड ऑफ रीजेंट्स द्वारा प्रशासित एरिज़ोना टेक्नोलॉजी एंड रिसर्च इनिशिएटिव फंड द्वारा समर्थित किया गया था।

1. व्यंजनों
नोट: माइक्रोट्रे प्लेट तैयारी शुरू करने से पहले स्टॉक समाधान तैयार करें।
<ol><li>कम-पिघल वाले अगारोस नेमाटोड ग्रोथ मीडिया (एलएमएनजीएम) के लिए स्टॉक समाधान<ol><li>1 लीटर की बोतल में 1 ?...

<ol>
	<li>Shaham, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+in+Cell+Biology.">Methods in Cell Biology.</a> WormBook: The Online Review of C. elegans Biology. , (2006).</li><li>Boulin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eight+genes+are+required+for+functional+reconstitution+of+the+Caenorhabditis+elegans+levamisole-sensitive+acetylcholine+receptor.">Eight genes are required for functional reconstitution of the Caenorhabditis elegans levamisole-sensitive acetylcholine receptor.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (47), 18590-18595 (2008).</li><li>Massie, M. R., Lapoczka, E. M., Boggs, K. D., Stine, K. E., White, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposure+to+the+metabolic+inhibitor+sodium+azide+induces+stress+protein+expression+and+thermotolerance+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Exposure to the metabolic inhibitor sodium azide induces stress protein expression and thermotolerance in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Cell Stress &amp; Chaperones. 8 (1), 1-7 (2003).</li><li>Xian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WormFarm:+a+quantitative+control+and+measurement+device+toward+automated+Caenorhabditis+elegans+aging+analysis.">WormFarm: a quantitative control and measurement device toward automated Caenorhabditis elegans aging analysis.</a> Aging Cell. 12 (3), 398-409 (2013).</li><li>Rahman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NemaLife+chip:+a+micropillar-based+microfluidic+culture+device+optimized+for+aging+studies+in+crawling+C.+elegans.">NemaLife chip: a micropillar-based microfluidic culture device optimized for aging studies in crawling C. elegans.</a> Scientific Reports. 10 (1), 16190 (2020).</li><li>Chronis, N., Zimmer, M., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidics+for+in+vivo+imaging+of+neuronal+and+behavioral+activity+in+Caenorhabditis+elegans.">Microfluidics for in vivo imaging of neuronal and behavioral activity in Caenorhabditis elegans.</a> Nature Methods. 4 (9), 727-731 (2007).</li><li>Clark, A. S., Huayta, J., Arulalan, K. S., San-Miguel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+Devices+for+Imaging+and+Manipulation+of+C.+elegans.">Microfluidic Devices for Imaging and Manipulation of C. elegans.</a> Micro and Nano Systems for Biophysical Studies of Cells and Small Organisms. , 295-321 (2021).</li><li>Levine, E., Lee, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+approaches+for+Caenorhabditis+elegans+research.">Microfluidic approaches for Caenorhabditis elegans research.</a> Animal Cells and Systems. 24 (6), 311-320 (2020).</li><li>Atakan, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+platform+for+long-term+culture+and+high-content+phenotyping+of+single+C.+elegans+worms.">Automated platform for long-term culture and high-content phenotyping of single C. elegans worms.</a> Scientific Reports. 9 (1), 14340 (2019).</li><li>Solis, G. M., Petrascheck, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Caenorhabditis+elegans+life+span+in+96+well+microtiter+plates.">Measuring Caenorhabditis elegans life span in 96 well microtiter plates.</a> Journal of Visualized Experiments. (49), e2496 (2011).</li><li>Leung, C. K., Deonarine, A., Strange, K., Choe, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screening+and+biosensing+with+fluorescent+C.+elegans+strains.">High-throughput screening and biosensing with fluorescent C. elegans strains.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), e2745 (2011).</li><li>Laranjeiro, R., Harinath, G., Burke, D., Braeckman, B. P., Driscoll, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+swim+sessions+in+C.+elegans+induce+key+features+of+mammalian+exercise.">Single swim sessions in C. elegans induce key features of mammalian exercise.</a> BMC Biology. 15 (1), 30 (2017).</li><li>&#199;elen, &. #. 3. 0. 4. ;., Doh, J. H., Sabanayagam, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+liquid+cultivation+on+gene+expression+and+phenotype+of+C.+elegans.">Effects of liquid cultivation on gene expression and phenotype of C. elegans.</a> BMC Genomics. 19 (1), 562 (2018).</li><li>Churgin, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+imaging+of+Caenorhabditis+elegans+in+a+microfabricated+device+reveals+variation+in+behavioral+decline+during+aging.">Longitudinal imaging of Caenorhabditis elegans in a microfabricated device reveals variation in behavioral decline during aging.</a> eLife. 6, 26652 (2017).</li><li>Turner, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+culture+and+monitoring+of+isolated+nematodes+on+solid+media+in+WorMotels.">Long-term culture and monitoring of isolated nematodes on solid media in WorMotels.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2022).</li><li>Pittman, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+apparatus+for+individual+C.+elegans+culture.">A simple apparatus for individual C. elegans culture.</a> Methods in Molecular Biology. 2144, 29-45 (2020).</li><li>Breimann, L., Preusser, F., Preibisch, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-microscopy+methods+in+C.+elegans+research.">Light-microscopy methods in C. elegans research.</a> Current Opinion in Systems Biology. 13, 82-92 (2019).</li><li>Mittal, K. K., Mickey, M. R., Singal, D. P., Terasaki, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotyping+for+homotransplantation.+18.+Refinement+of+microdroplet+lymphocyte+cytotoxicity+test.">Serotyping for homotransplantation. 18. Refinement of microdroplet lymphocyte cytotoxicity test.</a> Transplantation. 6 (8), 913-927 (1968).</li><li>. Worm paparazzi-a high throughput lifespan and healthspan analysis platform for individual Caenorhabditis elegans Available from: <a target="_blank" href="https://repository.arizona.edu/handle/10150/661628">https://repository.arizona.edu/handle/10150/661628</a> (2021)</li><li>Porta-de-la-Riva, M., Fontrodona, L., Villanueva, A., Cer&#243;n, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+Caenorhabditis+elegans+methods:+synchronization+and+observation.">Basic Caenorhabditis elegans methods: synchronization and observation.</a> Journal of Visualized Experiments. (64), e4019 (2012).</li><li>Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Caenorhabditis+elegans+life+span+on+solid+media.">Measuring Caenorhabditis elegans life span on solid media.</a> Journal of Visualized Experiments. (27), e1152 (2009).</li><li>Moore, B. T., Jordan, J. M., Baugh, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WormSizer:+high-throughput+analysis+of+nematode+size+and+shape.">WormSizer: high-throughput analysis of nematode size and shape.</a> PloS One. 8 (2), 57142 (2013).</li><li>Husson, S. J., Costa, W. S., Schmitt, C., Gottschalk, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keeping+track+of+worm+trackers.">Keeping track of worm trackers.</a> WormBook: The Online Review of C. Elegans Biology. , 1-17 (2013).</li><li>Roussel, N., Sprenger, J., Tappan, S. J., Glaser, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+tracking+and+quantification+of+C.+elegans+body+shape+and+locomotion+through+coiling,+entanglement,+and+omega+bends.">Robust tracking and quantification of C. elegans body shape and locomotion through coiling, entanglement, and omega bends.</a> Worm. 3 (4), 982437 (2014).</li><li>Raizen, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lethargus+is+a+Caenorhabditis+elegans+sleep-like+state.">Lethargus is a Caenorhabditis elegans sleep-like state.</a> Nature. 451 (7178), 569-572 (2008).</li><li>Peters, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transcriptional+landscape+of+age+in+human+peripheral+blood.">The transcriptional landscape of age in human peripheral blood.</a> Nature Communications. 6 (1), 8570 (2015).</li><li>Sutphin, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans+orthologs+of+human+genes+differentially+expressed+with+age+are+enriched+for+determinants+of+longevity.">Caenorhabditis elegans orthologs of human genes differentially expressed with age are enriched for determinants of longevity.</a> Aging Cell. 16 (4), 672-682 (2017).</li><li>Felker, D. P., Robbins, C. E., McCormick, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automation+of+C.+elegans+lifespan+measurement.">Automation of C. elegans lifespan measurement.</a> Translational Medicine of Aging. 4, 1-10 (2020).</li></ol>

यहां, हम एक नई संस्कृति प्रणाली का वर्णन करते हैं जो मूल रूप से मानव ल्यूकोसाइट एंटीजन ऊतक टाइपिंग परख के लिए विकसित माइक्रोट्रे को अनुकूलित करता है, ताकि एक ठोस मीडिया वातावरण में समय के साथ एकल सी एलि?...

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3D-printed terasaki inserts</td>
			<td>Custom printing company</td>
			<td>Robot_Terasaki_tray_insert_10-20 
			-2021.STL</td>
			<td>FDM printing, nozzle size 0.6 mm using standard PLA plus filament</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AirClean systems AC624LF vertical laminar flow fume hood</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>36-100-4376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto peptone</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>211677</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Acros organics</td>
			<td>349615000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caenorhabditis elegans N2</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td>N2</td>
			<td>Wildtype strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbenicillin</td>
			<td>Goldbio</td>
			<td>C-103-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>ICN Biomedicals Inc</td>
			<td>101380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli OP50&#160;</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td>OP50</td>
			<td>Standard labratory food for C. elegans</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>ex0276-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisher Vortex Genie 2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>G-560</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FUdR&#160;</td>
			<td>Research Products International</td>
			<td>F10705-1.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrating water crystals&#160;</td>
			<td>M2 Polymer Technologies</td>
			<td>Type S</td>
			<td>Type S super absorbent polymer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl &#223;-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td>GoldBio</td>
			<td>I2481C100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P288-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>KimTech</td>
			<td>34155</td>
			<td>Task wipes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth, Lennox</td>
			<td>BD Difco</td>
			<td>240230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica K5 sCMOS monochrome camera</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>11547112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica M205 FCA Fluorescent Stereo Microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>10450826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low-melt agarose</td>
			<td>Research Products International</td>
			<td>A20070-250.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4&#160;</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>M-8900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher bioreagents</td>
			<td>BP358-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc OmniTray Single-Well Plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>264728</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nystatin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N1538</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palmitic acid</td>
			<td>Acros organics</td>
			<td>129700010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper towels</td>
			<td>Coastwide Professional</td>
			<td>365374</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M</td>
			<td>Parafilm</td>
			<td>16-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stratagene UV Stratalinker 2400</td>
			<td>Stratagene</td>
			<td>400075</td>
			<td>UV crosslinker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Terasaki trays (Lambda)</td>
			<td>One Lambda</td>
			<td>151431</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermolyne Dri-bath</td>
			<td>Thermolyne</td>
			<td>DB28125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>J20605-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

long-term culture of individual caenorhabditis elegans on solid media for longitudinal fluorescence monitoring and aversive interventions

उम्र बढ़ने के जीव विज्ञान का अध्ययन करने के लिए केनोरहाब्डिस एलिगेंस का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। एलिगेंस एजिंग अध्ययनों में मानक अभ्यास ठोस नेमाटोड ग्रोथ मीडिया (एनजीएम) पर कीड़े के समूहों को कल्चर करना है, जिससे जीवित रहने और अन्य शारीरिक फेनोटाइप के लिए जनसंख्या-स्तर के डेटा के कुशल संग्रह की अनुमति मिलती है, और फ्लोरोसेंट बायोमार्कर परिमाणीकरण के लिए उप-आबादी का आवधिक नमूना करण होता है। इस दृष्टिकोण की सीमाएं (1) रुचि के फेनोटाइप्स के लिए आयु प्रक्षेपपथ विकसित करने के लिए समय के साथ व्यक्तिगत कीड़े का पालन करने में असमर्थता है और (2) संस्कृति पर्यावरण के संदर्भ में सीधे फ्लोरोसेंट बायोमार्कर की निगरानी करती है। वैकल्पिक संस्कृति दृष्टिकोण समय के साथ व्यक्तिगत जानवरों की निगरानी के लिए तरल संस्कृति या माइक्रोफ्लुइडिक्स का उपयोग करते हैं, कुछ मामलों में प्रतिदीप्ति परिमाणीकरण सहित, इस व्यापार के साथ कि संस्कृति वातावरण ठोस एनजीएम से प्रासंगिक रूप से अलग है। वोरमोटल ठोस एनजीएम पर पृथक कीड़े की खेती के लिए पहले से वर्णित माइक्रोफैब्रिकेटेड मल्टी-वेल डिवाइस है। प्रत्येक कीड़े को कॉपर सल्फेट से भरी खाई से घिरे एक ठोस एनजीएम वाले कुएं में बनाए रखा जाता है, जो सी एलिगेंस के लिए एक संपर्क विकर्षक है, जिससे व्यक्तिगत जानवरों की अनुदैर्ध्य निगरानी की अनुमति मिलती है। हम कॉपर सल्फेट को उम्र बढ़ने के अनुसंधान में आम प्रतिकूल हस्तक्षेपों के अधीन होने पर कीड़े को भागने से रोकने के लिए अपर्याप्त पाते हैं, जिसमें आहार प्रतिबंध, रोगजनक बैक्टीरिया और रासायनिक एजेंट शामिल हैं जो सेलुलर तनाव को प्रेरित करते हैं। मल्टी-वेल डिवाइस को पॉलीडिमिथाइलसिलोक्सेन से भी ढाला जाता है, जो फ्लोरेसेंस इमेजिंग में उच्च पृष्ठभूमि कलाकृतियों का उत्पादन करता है। यह प्रोटोकॉल व्यावसायिक रूप से उपलब्ध पॉलीस्टाइनिन माइक्रोट्रे का उपयोग करके ठोस एनजीएम पर पृथक राउंडवर्म की खेती के लिए एक नए दृष्टिकोण का वर्णन करता है, जिसे मूल रूप से मानव ल्यूकोसाइट एंटीजन (एचएलए) टाइपिंग के लिए डिज़ाइन किया गया है, जिससे जीवन भर में अस्तित्व, शारीरिक फेनोटाइप और प्रतिदीप्ति के माप की अनुमति मिलती है। एक पामिटिक एसिड अवरोध प्रतिकूल परिस्थितियों की उपस्थिति में भी कीड़े को भागने से रोकता है। प्रत्येक प्लेट 96 जानवरों तक कल्चर कर सकती है और आसानी से आहार प्रतिबंध, आरएनएआई और रासायनिक योजक सहित विभिन्न स्थितियों के अनुकूल होती है, और जीवनकाल और गतिविधि डेटा एकत्र करने के लिए स्वचालित प्रणालियों के साथ संगत है।

यहां वर्णित माइक्रोट्रे-आधारित एकल-कृमि संस्कृति वातावरण का उपयोग विभिन्न प्रकार के फेनोटाइप्स की निगरानी के लिए किया जा सकता है, जिसमें जीवनकाल और स्वास्थ्य अवधि, गतिविधि और आंदोलन, शरीर का आकार और क...

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Long-Term Culture of Individual Caenorhabditis elegans on Solid Media for Longitudinal Fluorescence Monitoring and Aversive Interventions

यहां, हम आजीवन शारीरिक पैरामीटर ट्रैकिंग और प्रतिदीप्ति परिमाणीकरण के लिए ठोस मीडिया पर अलग-अलग नेमाटोड को कल्चर करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। इस संस्कृति प्रणाली में जानवरों को भागने से रोकने के लिए एकल-कृमि कुओं के आसपास एक पामिटिक एसिड बाधा शामिल है, जिससे रोगजनक बैक्टीरिया और रासायनिक तनावों सहित प्रतिकूल हस्तक्षेप के उपयोग की अनुमति मिलती है।

अनुदैर्ध्य प्रतिदीप्ति निगरानी और प्रतिकूल हस्तक्षेप के लिए ठोस मीडिया पर व्यक्तिगत केनोरहाब्डिस एलिगेंस की दीर्घकालिक संस्कृति

Caenorhabditis elegans are widely used to study aging biology. The standard practice in C. elegans aging studies is to culture groups of worms on solid ...

जबकि अन्य ठोस संस्कृति विधियां मौजूद हैं, यह पहली ठोस संस्कृति प्रणाली है जो व्यक्तिगत पशु जीवन और स्वास्थ्य अवधि की स्वचालित अनुदैर्ध्य ट्रैकिंग और एक प्रणाली में फ्लोरोसेंट बायोमाकर्स की अनुदैर्ध्य इमेजिंग की अनुमति देती है। यह प्रोटोकॉल ठोस एनजीएम पर मानक सी.एलिगेंस प्रयोगों के लिए तुलनीय परिणाम प्रदान करता है जो प्रतिकूल हस्तक्षेप और प्रत्यक्ष लाइव फ्लोरेसेंस इमेजिंग दोनों के साथ संगत है। यह प्रणाली उम्र बढ़ने के अनुसंधान के लिए अमूल्य होगी, विशेष रूप से पर्यावरणीय तनावों के दीर्घकालिक जोखिम और विस्तारित अवधि में जीन और प्रोटीन गतिशीलता का अवलोकन करने के बारे में।संदूषण से बचना और कुओं में लगातार सूखना दोनों चुनौतीपूर्ण हैं। हमने इन मुद्दों को कम करने के लिए लिखित प्रोटोकॉल में प्रमुख बिंदुओं पर प्रकाश डाला। शुरू करने के लिए, 500 मिलीग्राम ठोस पामिटिक एसिड को मोर्टार और मूसल में पीस लें।इसे 50 मिलीलीटर शंक्वाकार शीशी में 15 मिलीलीटर ट्वीन 20 के साथ मिलाएं, और क्रिस्टल को भंग करने के लिए भंवर द्वारा मिलाएं। 100% इथेनॉल के 17.5 मिलीलीटर जोड़ें, और जितना संभव हो उतना पामिटिक एसिड को भंग करने के लिए घोल को भंवर करें। फिर 17.5 मिलीलीटर अल्ट्राप्योर पानी, और भंवर को जोर से जोड़ें।धीरे से 80 डिग्री सेल्सियस पर एक मोती स्नान में घोल को गर्म करें जब तक कि पामिटिक एसिड पूरी तरह से घुल न जाए। मोती स्नान को 80 डिग्री सेल्सियस पर फिर से गर्म करें। उपयोग करने से तुरंत पहले, एक अलग बाँझ कंटेनर में प्रति माइक्रोट्रे के एक मिलीलीटर पामिटिक एसिड वर्किंग सॉल्यूशन को एलिकोट करें, और गर्म करने से पहले पामिटिक एसिड समाधान के प्रति एक मिलीलीटर निस्टैटिन के चार माइक्रोलीटर जोड़ें।अब संतृप्ति के लिए इथेनॉल के साथ माइक्रोट्रे के अंदर और बाहर स्प्रे करें, और अतिरिक्त इथेनॉल को हिलाएं। माइक्रोट्रे को स्टरलाइज़ करने के लिए, प्लेट और ढक्कन को यूवी क्रॉसलिंकर में अलग से रखें। 20 मिनट के बाद, प्लेट और ढक्कन को पलटें।इसके बाद, 15 मिलीलीटर शंक्वाकार शीशी को मोती स्नान में पामिटिक एसिड वर्किंग सॉल्यूशन के साथ रखें, और उपयोग से पहले किसी भी दृश्य मान क्रिस्टल को पूरी तरह से घुलने दें। माइक्रोट्रे को दो मिनट के लिए ढक्कन के साथ मोती स्नान के आसपास के किनारे पर रखकर गर्म करें। माइक्रोट्रे ढक्कन को हटा दें, और धीरे-धीरे माइक्रोट्रे की पिछली दीवार पर 200 माइक्रोलीटर पामिटिक एसिड वर्किंग सॉल्यूशन जोड़ें।ढक्कन बदलें, और माइक्रोट्रे को दो से तीन मिनट के लिए मोती स्नान पर बैठने दें ताकि पामिटिक एसिड समाधान माइक्रोट्रे के तल पर बस सके। माइक्रोट्रे को 180 डिग्री घुमाएं, और पामिटिक एसिड वर्किंग सॉल्यूशन जोड़ें जैसा कि पहले दिखाया गया है। पांडुलिपि में वर्णित घटकों को जोड़कर एलएमएनजीएम तैयार करें।फिर बेंच पर रखे प्रत्येक माइक्रोट्रे में 20 माइक्रोलीटर एलएमएनजीएम को पिपेट करें। संदूषण को कम करने के लिए पिपेट को फिर से भरते समय माइक्रोट्रे को कवर करना सुनिश्चित करें। बैक्टीरिया के भोजन के साथ माइक्रोट्रे कुओं को बीज देने के लिए, 20 मिनट के लिए 3, 500 ग्राम पर रातोंरात उगाए गए कल्चर को सेंट्रीफ्यूज करें।सतह पर तैरने वाले को हटा दें, और 85 मिलीमोलर सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ दस गुना एकाग्रता पर बैक्टीरिया संस्कृति को फिर से निलंबित करें। फिर प्रत्येक कुएं में एलएमएनजीएम की सतह पर दस गुना केंद्रित बैक्टीरिया संस्कृति के पांच माइक्रोलीटर को सावधानीपूर्वक पाइप करें। बैक्टीरिया कल्चर को कुएं के किनारे और पामिटिक एसिड में चलाने की अनुमति देने से बचें, क्योंकि यह कीड़े को कुएं को छोड़ने के लिए आकर्षित करेगा।बाँझ 3 डी मुद्रित सम्मिलित को बाँझ एकल-वेल प्लेट में रखें। माइक्रोट्रे को सिंगल-वेल प्लेट में 3 डी मुद्रित एडाप्टर में रखें। माइक्रोट्रे के बाहरी कुएं और एकल-वेल प्लेट की आंतरिक दीवार के बीच 3 डी मुद्रित सम्मिलित के शीर्ष पर पानी के क्रिस्टल को उदारतापूर्वक वितरित करें।यदि कीड़े तुरंत नहीं जोड़े जा रहे हैं, तो अगले दिन उपयोग करने के लिए माइक्रोट्रे को सील करें। ट्रे ढक्कन बंद करें, और माइक्रोट्रे को सील करने के लिए सभी चार पक्षों को लपेटने के लिए पैराफिल्म के एक टुकड़े का उपयोग करें। पैराफिल्म के साथ सीलिंग चरण को तीन परतों के लिए दो बार दोहराएं।वांछित जीवन चरण तक पहुंचने के बाद प्रति अच्छी तरह से एक कीड़ा जोड़ें। सिंगल-वेल प्लेट के ढक्कन में 40 माइक्रोलीटर डिटर्जेंट घोल जोड़ें, और ढक्कन को समान रूप से कोट करने के लिए एक टास्क वाइप का उपयोग करें। डिटर्जेंट समाधान को फैलाने के लिए अतिरिक्त टास्क वाइप्स का उपयोग करें जब तक कि ढक्कन के माध्यम से दृष्टि विकृत न हो।ट्रे के दो किनारों को कवर करने के लिए पैराफिल्म के पहले टुकड़े को थोड़ा खींचें। एक टास्क वाइप के साथ ट्रे के शीर्ष को पोंछें, और किसी भी फिंगरप्रिंट को हटाने के लिए इसे 70% इथेनॉल के साथ नम करें। प्लेट के किनारे या शीर्ष पर धीरे से टैप करके, या प्लेट पर एक उज्ज्वल नीली रोशनी चमकाकर और प्रत्येक जानवर का अवलोकन करके जीवनकाल को मापें।एक जानवर को मृत स्कोर करें यदि वह कुछ सेकंड के भीतर नहीं चलता है। इस कार्य को हर एक से तीन दिनों में दोहराएं जब तक कि सभी कीड़े मर न जाएं। एकल कुओं पर फ्लोरोसेंट इमेजिंग करें।कॉपर सल्फेट और डिथियोथ्रेइटोल के संपर्क में आने से कृमि जीवनकाल और स्वास्थ्य अवधि काफी कम हो गई। इसके विपरीत, कॉपर सल्फेट ने अच्छे स्वास्थ्य में बिताए गए जीवन के अनुपात को कम कर दिया, जबकि डिथियोथ्रेइटोल ने नहीं किया। कॉपर सल्फेट ने सभी उम्र में डिथियोथ्रेइटोल की तुलना में आबादी के भीतर व्यक्तियों में औसत गतिविधि को कम कर दिया।जीवनकाल गतिविधि वक्र के तहत व्यक्तिगत पशु क्षेत्र की जनसंख्या औसत तांबा सल्फेट या डिथियोथ्रेइटोल द्वारा काफी हद तक बिगड़ा हुआ है। 10 वें दिन तक व्यक्तिगत जानवरों के लिए संचयी गतिविधि डिथियोथ्रेइटोल चैलेंज्ड जानवरों के लिए उनके जीवनकाल से संबंधित है, लेकिन अनुपचारित नियंत्रण या कॉपर सल्फेट चैलेंज्ड जानवरों के लिए नहीं। वयस्कता के तीन और आठ दिनों के बीच केवाईएनयू -1 अभिव्यक्ति में भारी वृद्धि देखी जाती है, और उसके बाद उम्र के साथ प्रगतिशील गिरावट होती है।वयस्कता के दिन 14 के माध्यम से संचयी KYNU-1 mScarlet अभिव्यक्ति पशु जीवनकाल के साथ संबंधित है। चूंकि KYNU-1 अभिव्यक्ति पूरे जीवनकाल में गतिशील है, इसलिए हमने अलग-अलग उम्र में KYNU-1 अभिव्यक्ति की तुलना अलग-अलग जानवरों में समग्र अस्तित्व से की। किसी भी समय केवाईएनयू -1 अभिव्यक्ति अस्तित्व के साथ महत्वपूर्ण रूप से सहसंबद्ध नहीं थी।इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, सबसे महत्वपूर्ण कदम पामिटिक एसिड को जोड़ना, आगर को पाइप करना और कीड़े को पेश करना है। यह तकनीक जीवनकाल और स्वास्थ्य अवधि के अनुदैर्ध्य ट्रैकिंग की अनुमति देती है, साथ ही व्यक्तिगत कीड़े में फ्लोरोसेंट बायोमार्कर को एक तरह से जो सीधे एनजीएम परख के बराबर है।

Research

JoVE Journal

Biology

Long-Term Culture of Individual Caenorhabditis elegans on Solid Media for Longitudinal Fluorescence Monitoring and Aversive Interventions

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माप Caenorhabditis एलिगेंस ठोस मीडिया पर लाइफ स्पैन

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Long-term Culture of Human Breast Cancer Specimens and Their Analysis Using Optical Projection Tomography

मानव स्तन कैंसर के नमूने और उनके विश्लेषण का उपयोग ऑप्टिकल प्रोजेक्शन टोमोग्राफी की लंबी अवधि संस्कृति

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Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

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बुनियादी<em&gt; Caenorhabditis एलिगेंस</em&gt; तरीके तुल्यकालन और निरीक्षण:

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संवर्धन<em&gt; Caenorhabditis एलिगेंस</em &gt; Microparticle बमबारी से axenic तरल मीडिया और ट्रांसजेनिक कीड़े के निर्माण में

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Isolation, Transfection, and Long-Term Culture of Adult Mouse and Rat Cardiomyocytes

अलगाव, ट्रांसफैक्शन, और वयस्क माउस और चूहा कार्डियोमायोसाइट्स की दीर्घकालिक संस्कृति

Ex vivo culture of the adult mammalian cardiomyocytes (CMs) presents the most relevant experimental system for the in vitro study of cardiac biology. ...

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

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उत्तेजित रमन स्कैटरिंग माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके कैनोरहैब्डिटिस एलिगेंस में लिपिड स्टोरेज डायनेमिक्स की लेबल-फ्री इमेजिंग

Lipid metabolism is a fundamental physiological process necessary for cellular and organism health. Dysregulation of lipid metabolism often elicits ...

Automating Aggregate Quantification in Caenorhabditis elegans

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कैनोरहाब्डाइटिस एलिगेंस में कुल मात्रा का ठहराव स्वचालित करना

A rise in the prevalence of neurodegenerative protein conformational diseases (PCDs) has fostered a great interest in this subject over the years. This ...