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05:55 min
February 10th, 2023
DOI :
10.3791/64686-v
Chapters
0:04
Introduction
0:50
Fish Sperm Collection
2:11
DNA Extraction and Amplification
3:14
PCR Amplicon Separation by Gel Electrophoresis
4:20
Results: Mutation Analysis of Sperm
5:16
Conclusion
Transcript
该协议描述了一种使用F0 CRISPR注射的斑马鱼精子快速筛选数千个基因组的方法。这种技术在其可访问性方面是有利的。我们的方法不是昂贵的、专门的基于测序的方法,而是使用PCR限制性内切酶和凝胶电泳来筛选F0男性携带者以进行插入缺失或特异性基因组编辑。
这个过程最困难的部分是快速获得精子,但如果我们与大量畸形鱼一起工作,它将成为体外受精的好技术,因此这是我们杂交给我们带来麻烦的鱼的简单方法。首先为野生型和F0鱼设置繁殖池,并在夜间孵化水箱。第二天麻醉雄鱼后,用漏勺将其转移到一堆干
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Summary
CRISPR-Cas技术彻底改变了基因组编辑领域。然而,寻找和分离所需的种系编辑仍然是一个主要瓶颈。因此,该协议描述了一种使用标准PCR,限制性酶切和凝胶电泳技术快速筛选F0 CRISPR注射斑马鱼精子以进行种系编辑的稳健方法。
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筛选精子以快速分离斑马鱼的种系编辑
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