Name: single-cell suspension preparation from nile tilapia intestine for single-cell sequencing
Uploaded: 2023-02-10T14:00:00
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Die Autoren bedanken sich für die Unterstützung durch die Hainan Provincial Natural Science Foundation of China (Nr. 320QN211) und das Forschungsfondsprogramm des Guangdong Provincial Key Laboratory of Aquatic Animal Disease Control and Healthy Culture of China (Nr. PBEA2021ZD01).

Alle Tierprotokolle während dieser Studie wurden vom Institutional Animal Care and Use Committee der Universität Hainan genehmigt (Protokollnummer: HNUAUCC-2022-00063; Datum der Genehmigung: 03.03.2022). Eine Liste der in diesem Experiment verwendeten Geräte und Verbrauchsmaterialien finden Sie in der Materialtabelle. Eine Zusammenfassung des aktuellen Protokolls ist in Abbildung 1 dargestellt.
1. Fischzubereitung
<ol><li>Bes...

Dieses Protokoll beschreibt die Herstellung einer hochwertigen einzelligen Suspension aus Nil-Tilapia-Darm. Vor der Dissoziation ist die Entfernung von Fett und Mesenterium aus dem Darm notwendig, insbesondere bei fleischfressenden Fischdärmen mit viel Fett. Die Verwendung einer Spritze anstelle von hartem Schaben zum Abwaschen des Darminhalts reduziert die mechanische Schädigung der Zellen. Um die Lebensfähigkeit der Zellen zu gewährleisten, ist es auch wichtig, die Temperatur für die Gewebedissektion und das Spül...

Zellen sind die Grundbausteine von Organismen. Im Vergleich zu Bulk-Gewebestudien können Studien auf Einzelzellebene die Zellheterogenität widerspiegeln und Informationen mit höherer Auflösung liefern1. In den letzten Jahren haben Forscher Einzelzellsequenzierungstechnologien für Genom-, Transkriptom-, Epigenom- oder Multi-Omik-Studien auf Einzelzellebene bei Säugetieren, Zebrafischen und anderenModellorganismen angewendet und von großen Durchbrüchen berichtet 2,3,4,5,6,7 . Während sich die meisten Studien auf Modellorganismen konzentriert haben, gibt es nur wenige Referenzprotokolle oder kommerzielle Dissoziationskits für die Einzelzellsequenzierung bei wirtschaftlichen Fischarten, was die Anwendung der Einzelzellsequenzierung in der Aquakulturforschung einschränkt. Daher ist die Entwicklung von Gewebedissoziationsprotokollen, die qualitativ hochwertige Einzelzellsuspensionen mit hoher Zellviabilität und Nukleinsäureintegrität herstellen, von entscheidender Bedeutung.
Die Optimierung des Gewebedissoziationsprotokolls mit dem geeigneten Enzym oder der Enzymkombination ist von entscheidender Bedeutung, um genügend lebensfähige Zellen mit minimaler Schädigung zu erhalten. Welches Enzym für die Gewebedissoziation am effektivsten ist, hängt vom Gewebetyp ab. Bei Säugetieren wurden mehrere Enzyme zur Herstellung von Einzelzellsuspensionen für festes Gewebe von Säugetieren verwendet, darunter Kollagenase, Dispase, Trypsin, Papain, Elastase, Hyaluronidase, Liberase, Accutase und TrypLE 8,9. Die Trypsinverdauung in Kombination mit mechanischer Störung wurde häufig verwendet, um Gewebe für die Zellkultur bei Fischen zu dissoziieren 10,11,12,13,14. Trypsin wurde auch für die Gewebedissoziation im Rattendarm15 und im Zebrafisch-Kiemengewebe16 verwendet oder dem Verdauungscocktail zugesetzt. Aus mehreren Gründen ist Trypsin jedoch nicht die beste Option für die Einzelzellsequenzierung. Trypsin allein ist bei der Gewebedissoziation in der Regel unwirksam. Zusätzlich induziert Trypsin DNA-Strangbrüche 17,18 und RNA-Abbau19.
Papain baut die Proteine ab, aus denen die Tight Junctions zwischen den Zellen bestehen. In Nervenzellen und glatten Muskelzellen von Säugetieren ist Papain effizienter und weniger zerstörerisch als andere Proteasen20,21. Wie Trypsin führt Papain jedoch zu einer freien DNA-induzierten Aggregation von Zellen aufgrund der Zelllyse, die während der enzymatischen Verdauung stattfindet9. Elastase baut Elastin ab, das typischerweise in Haut, Lunge, Bändern, Sehnen und Gefäßgewebe vorkommt22. Es wird häufig in Kombination mit Kollagenase, Dispase oder Trypsin zur Dissoziation von Lungengewebe verwendet8. Hyaluronidase spaltet die glykosidischen Bindungen der Hyaluronsäure und trägt zur Verdauung der extrazellulären Matrix in verschiedenen Bindegeweben und der Haut bei 9,23.
Im Allgemeinen sind Kollagenase und Dispase gute Optionen für den Abbau der extrazellulären Matrix. Sie wurden bei der Dissoziation von Menschen-, Maus- und Zebrafischdärmenverwendet 24,25,26,27. Kollagenase zerstört die Peptidbindung im Kollagen, fördert die Verdauung der extrazellulären Matrix und setzt die Zellen in Suspension frei, so dass Kollagenase häufig für die Dissoziation von festem Gewebe von Mensch und Maus verwendet wird, einschließlich für die Leber 28,29, Milz30, Bauchspeicheldrüse31 und Darm 25. Dispase ist eine Protease, die die N-terminalen Peptidbindungen unpolarer Aminosäurereste hydrolysiert und milder als Kollagenase ist. Es spaltet die Bestandteile der extrazellulären Matrix, wie Fibronektin, Typ-IV-Kollagen und in geringerem Maße Typ-I-Kollagen, ohne die Zell-Zell-Verbindungen zu beeinträchtigen. Dispase wird separat oder zusammen mit anderen Enzymen zur Gewebedissoziation verwendet, z. B. für Darm25,32, Gehirn 33, Leber 34 usw. Darüber hinaus sind kommerziell erhältliche Verdauungscocktails, einschließlich Liberase, Accutase und TrypLE, auch gute Alternativen für die Dissoziation fester Gewebe, insbesondere für Haut, Leber und Niere 8,9.
Nil-Tilapia (Oreochromis niloticus) gehört zur Familie der Cichlidae aus der Ordnung der Perciformes. Er ist eine der am häufigsten gezüchteten Süßwasserfischarten in tropischen und subtropischen Gebieten mit einer Jahresproduktion von 4,5 Millionen Tonnen im Jahr 202235. Er ist eine der am besten untersuchten Aquakulturfischarten mit einem gut annotierten Genom. Nil-Tilapia ist aufgrund seiner kurzen Generationszeit, seiner einfachen Aufzucht und seiner Anpassungsfähigkeit an eine Vielzahl von Aufzuchtumgebungen ein ideales Forschungsmodell für Aquakulturfischarten. Der Darm ist von großem Forschungsinteresse, da er das Organ der Ernährung, der Verdauung und Resorption, des Stoffwechsels und der Immunität der Schleimhäute ist. Der Darm ist Lebensraum mikrobieller Populationen und ein essentielles Immungewebe36. Es ist immunologisch aktiv, da zahlreiche Immunzelltypen vorhanden sind, darunter Makrophagen, B-Zellen, Granulozyten und T-Zellen.
In der aktuellen Studie haben wir ein Protokoll zur Herstellung einer hochwertigen Einzelzellsuspension aus dem Nil-Tilapia-Darm entwickelt, um Einzelzellstudien in Aquakulturfischarten zu ermöglichen. Entsprechend den Eigenschaften dieser gewebespezifischen Enzyme und der Vorarbeiten ist Kollagenase/Dispase geeignet, um Tilapia-Darmgewebe zu dissoziieren. Der letzte Enzymtyp, der bei der Herstellung von Einzelzellsuspensionen zu berücksichtigen ist, ist DNase-I, der die Zellaggregation verhindert, indem er freie DNA abbaut, die durch die Lyse toter Zellen während der enzymatischen Verdauung freigesetzt wird, ohne apoptotische Wege zu initiieren9 , und die Ausbeute an lebenden Zellen erhöht36. Zusätzlich wird dem Waschpuffer Rinderserumalbumin (BSA) zugesetzt, um die Zellverklumpung zu reduzieren und die Lebensfähigkeit der Zellen zu verbessern. Mehrere Reagenzienhersteller beschreiben BSA als Enzymstabilisator. Die Zugabe von 0,04 %-1 % BSA zu PBS (phosphatgepufferte Kochsalzlösung) wurde verwendet, um eine Waschlösung zur Herstellung von Einzelzell-Sequenzierungssuspensionen ohne nachteilige Auswirkungen zu entwickeln38. Die Zugabe eines niedrigen BSA-Verhältnisses könnte dazu beitragen, die Lebensfähigkeit der Zellen zu erhalten und die durch freie DNA induzierte Aggregation von Zellen aufgrund der Zelllyse zu vermeiden. Dieses Protokoll kann auch eine wertvolle Referenz für die Entwicklung von Zelldissoziationsprotokollen aus dem Darm anderer Aquakulturfischarten darstellen.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22-&#956;m Sterile Filter</td>
			<td>Solarbio Life Sciences</td>
			<td>SLGV033RB</td>
			<td>It is used to filter and sterilize the enzyme solution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40-&#956;m Cell Strainer</td>
			<td>Solarbio Life Sciences</td>
			<td>F8200</td>
			<td>Cell Strainer is applied to eliminate undigested tissue pieces.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SRE0098</td>
			<td>Powder; dilute 0.04 g BSA with 100 mL 1&#215; DPBS to prepare 0.04% BSA-DPBS washing bffer. Store at 2 - 8 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase II</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A004202</td>
			<td>Dilute with PBS to a final concentration of 1 mg/mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase/dispase</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10269638-001</td>
			<td>Dilute with PBS to a final concentration of 1 mg/mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D4818</td>
			<td>Dilute with PBS to a final concentration of 1 mg/mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>AMPD1</td>
			<td>DNase I helps reduce cell clumping.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline (DPBS), Ca2+/Mg2+-free</td>
			<td>Solarbio Life Sciences</td>
			<td>E607009-0500</td>
			<td>Store at room temperature.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elastase</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A600438</td>
			<td>Dilute with PBS to a final concentration of 0.5 mg/mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16000-044</td>
			<td>Serum, used at volume of 5% in digetstion solution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted&#160;Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>qTOWER3G</td>
			<td>It is used to examine cell viability.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liberase</td>
			<td>Roche</td>
			<td>5401119001</td>
			<td>Dilute with PBS to a final concentration of 0.25 mg/mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nile tilpia (Oreochromis niloticus)</td>
			<td>ProGift Aquaculture Technology Co. Ltd.</td>
			<td>NA</td>
			<td>Healthy fish with no disease signs (Mean body weight: 100 g).&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (PBS)</td>
			<td>Solarbio Life Sciences</td>
			<td>P1020</td>
			<td>Store at room temperature.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerated Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5424</td>
			<td>It is used to spin down the tissue and cell petet.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNase inhibitor</td>
			<td>NEB</td>
			<td>M0314L</td>
			<td>Inhibit RNase activity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid-phase RNase-Be-Gone Reagent</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>B644201-0050</td>
			<td>It is used to remove the RNase from tools such as dissecting scissors and glass pipettes. Store at room temperature.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine methanesulfonate (MS-222)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E10521</td>
			<td>For fish euthanasia.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C0040</td>
			<td>It is used for staining dead cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>E607001</td>
			<td>Dilute with PBS to a final concentration of 1 mg/mL.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

single-cell suspension preparation from nile tilapia intestine for single-cell sequencing

Nil-Tilapia ist eine der am häufigsten kultivierten Süßwasserfischarten weltweit und ein weit verbreitetes Forschungsmodell für Aquakulturfischstudien. Die Herstellung von qualitativ hochwertigen Einzelzellsuspensionen ist für Einzelzellstudien wie Einzelzell-RNA oder Genomsequenzierung unerlässlich. Es gibt jedoch kein gebrauchsfertiges Protokoll für Aquakulturfischarten, insbesondere für den Darm von Tilapia. Die wirksamen Dissoziationsenzyme variieren je nach Gewebetyp. Daher ist es wichtig, das Gewebedissoziationsprotokoll durch die Auswahl des geeigneten Enzyms oder der Enzymkombination zu optimieren, um genügend lebensfähige Zellen mit minimaler Schädigung zu erhalten. Diese Studie veranschaulicht ein optimiertes Protokoll zur Herstellung einer hochwertigen Einzelzellsuspension aus Nil-Tilapia-Darm mit einer Enzymkombination aus Kollagenase/Dispase. Diese Kombination ist hochwirksam für die Dissoziation mit der Verwendung von Rinderserumalbumin und DNase, um die Zellaggregation nach der Verdauung zu reduzieren. Der Zellausstoß erfüllt die Anforderungen für die Einzelzellsequenzierung mit einer Zellviabilität von 90 % und einer hohen Zellkonzentration. Dieses Protokoll kann auch modifiziert werden, um eine einzellige Suspension aus dem Darm anderer Fischarten herzustellen. Diese Forschung stellt ein effizientes Referenzprotokoll dar und reduziert den Bedarf an zusätzlichen Versuchen bei der Herstellung von Einzelzellsuspensionen für Aquakulturfischarten.

Dieses Protokoll beschreibt die Herstellung einer hochwertigen Einzelzellsuspension aus Nil-Tilapia-Darm für die Einzelzellsequenzierung (Abbildung 1). Diese Forschung zeigt, dass die Kollagenase/Dispase-Mischung eine gute Dissoziationswirkung hat und mild für das Darmgewebe ist. Die Auswahl des optimalen Verdauungsenzyms ist entscheidend für die Herstellung einer hochwertigen einzelligen Suspension. In den Vorarbeiten wurden die Dissoziationseffizienzen mehrerer häufig verwendeter Enzym...

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Single-Cell Suspension Preparation from Nile Tilapia Intestine for Single-Cell Sequencing

Hier demonstrieren wir die Herstellung einer hochwertigen Einzelzellsuspension aus Tilapia-Darm für die Einzelzell-Sequenzierung.

Einzelzell-Suspensionspräparat aus Nil-Tilapia-Darm für die Einzelzell-Sequenzierung

Nile tilapia is one of the most commonly cultured freshwater fish species worldwide and is a widely used research model for aquaculture fish studies. The ...

Dieses Protokoll bietet eine zuverlässige Referenz für die Herstellung einer hochwertigen Einzelzellsuspension aus dem Nil-Tilapia-Darm, um Einzelzellstudien in Aquakulturfischarten zu erleichtern. Die Technologie ist hocheffizient und kann unter den meisten Laborbedingungen eingesetzt werden. Es reduziert den Bedarf an zusätzlichen Versuchen zur Herstellung von Einzelzellsuspensionen für Aquakulturfischarten.Beginnen Sie damit, sechs Monate alte Nil-Tilapia-Fische 15 Minuten lang in gut belüftetem, sterilem Wasser abzuspülen, um lose gebundene Bakterien von der Oberfläche abzuwaschen. Zur Herstellung des enzymatischen Zelldissoziationsreagenzes wird die Kollagenase-Dispase in PBS auf eine Endkonzentration von einem Milligramm pro Milliliter verdünnt. Mischen Sie 95 Volumenprozent der hergestellten enzymatischen Lösung und 5 Volumenprozent FBS.Anschließend die Zentrifuge vor Gebrauch auf vier Grad Celsius vorkühlen. Legen Sie den eingeschläferten Fisch für die Gewebedissektion auf Eis und sammeln Sie drei bis vier Zentimeter des Darmmittelteils. Entfernen Sie das Fett und das Mesenterium mit einer Pinzette.Entfernen Sie das Fett, das an der Darmoberfläche haftet, und die elastische und formbare klare Schleimhaut. Spülen Sie das Darmfragment vorsichtig mit sterilem, eiskaltem PBS mit einer Spritze ab, um den Darminhalt und den Schleim abzuwaschen. Zerlegen Sie das Fragment nach mehreren Wäschen in kleine Stücke und geben Sie sie in ein 1,5-Milliliter-Röhrchen mit einem Milliliter eiskaltem PBS.Zentrifugieren Sie die Mischung bei 300 x g bei vier Grad Celsius für fünf Minuten. Und ersetzen Sie den Überstand durch einen Milliliter eiskaltes 0,08%BSA-DPBS. Mit einer Glaspipette vorsichtig absaugen, um die Gewebefragmente zu resuspendieren.Nachdem Sie die Stücke noch einmal gewaschen haben, entfernen Sie den Überstand und fügen Sie einen Milliliter des vorbereiteten enzymatischen Dissoziationsreagenzes hinzu. Mischen Sie außerdem fünf Mikroliter RNA-Inhibitor mit dem Dissoziationsreagenz für die Einzelzell-RNA-Sequenzierung. Stellen Sie das Röhrchen in ein temperiertes Wasserbad mit 37 Grad Celsius und drehen Sie das Röhrchen während der Inkubationszeit von 30 bis 60 Minuten alle fünf Minuten manuell um.Sobald die Röhrchen gedreht sind, entfernen Sie das enzymatische Zelldissoziationsreagenz mit weit geöffneten Spitzen. Fügen Sie einen Milliliter eiskaltes 0,08%BSA-DPBS hinzu und pipettieren Sie die Zellen vorsichtig auf und ab, um eine Zellzerstörung zu verhindern. Nach der Zentrifusion und dem erneuten Resuspendieren der Zellen wird das mit 0,08 % BSA-DPBS vorbenetzte 40-Mikrometer-Zellsieb auf ein konisches 50-Milliliter-Röhrchen gegeben.Führen Sie die Zellsuspension durch das Sieb. Klopfen Sie auf das Sieb, spülen Sie es dann mit 200 Mikrolitern DPBS aus und sammeln Sie die Suspension am Boden des Röhrchens. Nachdem Sie die Suspension in ein 1,5-Milliliter-Röhrchen umgefüllt haben, fügen Sie fünf Mikroliter DNA hinzu und inkubieren Sie die Suspension 15 Minuten lang bei 15 bis 20 Grad Celsius.Entfernen Sie nach dem Zentrifugieren den Überstand und resuspendieren Sie das Zellpellet in 400 Mikrolitern eiskaltem DPBS ohne Kalzium- und Magnesiumionen. Pipettieren Sie dann vorsichtig mit weiten Spitzen auf und ab, um die Zellen zu mischen, und wiederholen Sie diesen Vorgang noch einmal. Zum Färben wird die Zellsuspension in 0,4%iger Trypanblaulösung in einem gleichen Verhältnis gemischt und drei Minuten bei Raumtemperatur inkubiert.Dann 10 Mikroliter der Mischung auf den Objektträger geben. Zählen Sie die lebensfähigen und toten Zellen unter dem Mikroskop in drei Feldern und berechnen Sie den Prozentsatz der Zellviabilität. Die Dissoziationseffizienzen mehrerer häufig verwendeter Enzyme wurden verglichen.Es wurde nachgewiesen, dass die Kollagenase-Dispase-Mischung einen besseren Dissoziationseffekt hat als die Kollagenase-Dispase oder Trypsin allein und mehrere andere Enzymmischungen. Die mikroskopische Untersuchung zeigte, dass die Darmzellen eine hohe Lebensfähigkeit aufwiesen und sich als Einzelzellen verteilten. Die meisten Zellen waren lebensfähig, während einige wenige aufgrund der permeablisierten Zellmembran abgestorben waren.Achten Sie auf die Art des verwendeten PBS. Die enzymatische Verdauungslösung kann nicht mit Calcium/Magnesium-freiem PBS verwendet werden, da das Enzym Calcium/Magnesium-Ionen benötigt, um effektiv zu funktionieren. Das Verfahren erleichtert Einzelzellstudien an Aquakulturfischarten und bietet eine wertvolle Referenz für die Entwicklung von Zelldissoziationsprotokollen von Aquakulturfischarten.

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

Erstellung von Einzel-Zellsuspensionen aus Maus-Milz mit dem gentleMACS Dissociator

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

Forschung

Biologie

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

Standardisierte Erstellung von Einzel-Zellsuspensionen aus Maus Lungengewebe mit dem gentleMACS Dissociator

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Generierung von Einzel-Zellsuspensionen aus Maus Nervengewebe

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

Einzel-Zell-Saug-Recordings aus Maus Zapfen-Photorezeptoren

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

Single Cell Transcriptional Profiling of Adult Mouse Cardiomyocytes

Single Cell Transcriptional Profiling der erwachsenen Maus Kardiomyozyten

While numerous studies have examined gene expression changes from homogenates of heart tissue, this prevents studying the inherent stochastic variation ...

Single-cell Microinjection for Cell Communication Analysis

Einzellige Mikroinjektions für Zellkommunikationsanalyse

Gap junctions are intercellular channels that allow the communication of neighboring cells. This communication depends on the contribution of a ...

Isolation of Nuclei from Flash-Frozen Liver Tissue for Single-Cell Multiomics

Isolierung von Zellkernen aus schockgefrorenem Lebergewebe für Einzelzell-Multiomics

The liver is a complex and heterogenous tissue responsible for carrying out many critical physiological functions, such as the maintenance of energy ...

Isolation and Transcriptome Analysis of Plant Cell Types

Isolierung und Transkriptomanalyse pflanzlicher Zelltypen

In multicellular organisms, developmental programming and environmental responses can be highly divergent in different cell types or even within cells, ...

Fluorescence-Activated Single-Cell Sorting of Human Mesenchymal Stem Cells

Single-Cell Sorting of Immunophenotyped Mesenchymal Stem Cells from Human Exfoliated Deciduous Teeth

Importance of Single Cell Sorting in Isolating Purified Populations of Mesenchymal Stem Cells (Video) | JoVE

Einzelzellsortierung von immunphänotypisierten mesenchymalen Stammzellen aus humanen abgeblätterten Milchzähnen

The mesenchymal stem cells (MSCs) of an organism possess an extraordinary capacity to differentiate into multiple lineages of adult cells in the body and ...

Two-Step Cell Digestion of Mouse Carotid Artery

Preparation of a Single-Cell Suspension from Mouse Carotid Arteries for Single-Cell Sequencing

Vascular Tissue Dissociation and Exploring Single-Cell Subclusters for Targeted Therapy (Video) | JoVE

Herstellung einer Einzelzellsuspension aus den Halsschlagadern der Maus für die Einzelzellsequenzierung

Carotid arteries are major blood vessels in the neck that supply blood and oxygen to the brain, but carotid stenosis occurs when carotid arteries are ...