Name: hplc coupled with chemical fingerprinting for multi-pattern recognition for identifying the authenticity of clematidis armandii caulis
Uploaded: 2022-11-11T14:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af Project of Sichuan Traditional Chinese Medicine Administration (nr. 2020JC0088, nr. 2021MS203).

1. Metoder til detektion af kemiske fingeraftryk
<ol><li>Kromatografiske forhold<ol><li>Forbered acetonitril (A) / vand (B) mobil fase. Indstil et gradientprogram som følger i HPLC-softwaren: 0-20 min, 3% A-10%A; 20-25 min, 10%A-13%A; 25-65 min, 13%A-25%A; 65-75 minutter, 25%A-40%A; 75-76 min, 40%A-3%A; 76-85 min, 3%A-3%A.</li>
		<li>Hold strømningshastigheden for den mobile fase på 1,0 ml/min.</li>
		<li>Den kromatografiske adskillelse udføres på en C18-søjle (250 mm x 4,6 mm, 5 μm), der holdes...

<ol>
	<li>Chen, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Chinese Medicine Specimen Picture Book. , 116 (1935).</li><li>Xiong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lignans+from+the+stems+of+Clematis+armandii+(&amp;#34;Chuan-Mu-Tong&amp;#34;)+and+their+anti-neuroinflammatory+activities.">Lignans from the stems of Clematis armandii (&amp;#34;Chuan-Mu-Tong&amp;#34;) and their anti-neuroinflammatory activities.</a> Journal of Ethnopharmacology. 153 (3), 737-743 (2014).</li><li>Pan, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+lignan+from+the+Chinese+medicinal+plant+Clematis+armandii,+inhibits+A431+cell+growth+via+blocking+p70S6/S6+kinase+pathway.">a lignan from the Chinese medicinal plant Clematis armandii, inhibits A431 cell growth via blocking p70S6/S6 kinase pathway.</a> Integrative Cancer Therapies. 16 (3), 351-359 (2017).</li><li>Chinese Pharmacopoeia Commission. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pharmacopoeia of The People's Republic of China: (Edition 2020). , 38 (2020).</li><li>Wang, D. G., Guo, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Textual+research+on+the+materia+medica+and+authenticity+of+Clematidis+armandii.">Textual research on the materia medica and authenticity of Clematidis armandii.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medicine Research. 18 (11), 2696 (2007).</li><li>Fang, Q. M., Zhang, M., Zhong, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+resources+and+exploitation+of+Caulis+Clematidis+Armandii+in+Sichuan.">The natural resources and exploitation of Caulis Clematidis Armandii in Sichuan.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 20 (5), 404-406 (2005).</li><li>Bai, M. N., Dai, Y. X., Wang, Y., Ren, Y. Y., Tan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+the+identi&#64257;cation+of+Caulis+Clematidis+Armandii.">Study on the identi&#64257;cation of Caulis Clematidis Armandii.</a> Research and Practice on Chinese Medicines. 31 (3), 13-16 (2017).</li><li>Zhou, P. J., Li, X. F., Fu, D. H., Pu, X. Y., Zhu, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacognosy+identification+of+Ethnomedicine+Clematis+ranunculoides+Franchet.">Pharmacognosy identification of Ethnomedicine Clematis ranunculoides Franchet.</a> Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. 34 (3), 432-436 (2017).</li><li>Guo, J. L., Tang, Y., Pei, J., Wang, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+random+amplified+polymorphic+DNA+and+sequence+characterized+amplified+regions+of+Caulis+Clematidis+Armandii.">Study on random amplified polymorphic DNA and sequence characterized amplified regions of Caulis Clematidis Armandii.</a> Journal of Chengdu Medical College. 6 (4), 283-286 (2011).</li><li>Liu, M. Z., Li, M. N., Yao, H., Liu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identification+of+Clematidis+Armandii+Caulis+and+its+adulterants+and+closely+related+species+by+ITS2+sequence.">Molecular identification of Clematidis Armandii Caulis and its adulterants and closely related species by ITS2 sequence.</a> Global Traditional Chinese Medicine. 4 (6), 446-450 (2011).</li><li>Liu, J. J., Chen, X., Wei, Z. Q., Li, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+constituents+and+identification+of+the+caules+of+Clematis+armandii+Franch.and+Clematis+montana+Buch.-Ham.">Chemical constituents and identification of the caules of Clematis armandii Franch.and Clematis montana Buch.-Ham.</a> Natural Product Research and Development. 22 (6), 998-1000 (2010).</li><li>Yang, T. R., Xu, Z., Shi, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+four+compounds+from+Clematis+Montana.">Studies on four compounds from Clematis Montana.</a> Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine. 10 (4), 142-143 (2008).</li><li>Yan, L. H., Xu, L. Z., Zhou, Z. M., Yang, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+constituents+from+stems+of+Clematis+armandii(I).">Chemical constituents from stems of Clematis armandii(I).</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 38 (3), 340-342 (2007).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traditional+uses,+phytochemistry,+pharmacology,+and+toxicology+of+Akebiae+Caulis+and+its+synonyms:+A+review.">Traditional uses, phytochemistry, pharmacology, and toxicology of Akebiae Caulis and its synonyms: A review.</a> Journal of Ethnopharmacology. 277, 114245 (2021).</li><li>Ye, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diuretic+effect+and+material+basis+of+Clematidis+Armandii+Caulis+in+rats.">Diuretic effect and material basis of Clematidis Armandii Caulis in rats.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 44 (9), 1889-1894 (2019).</li><li>Kuang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consistency+study+of+Caulis+Clematidis+Armandii+and+its+traditionally+used+products+and+counterfeit+species+based+on+efficacy+and+pharmacognosy.">Consistency study of Caulis Clematidis Armandii and its traditionally used products and counterfeit species based on efficacy and pharmacognosy.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 36 (3), 115-121 (2020).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+assessment+of+Asarum+heterotropoides+var.+mandshuricum+based+on+HPLC+multi-component+determination+and+multiple+pattern+recognition+method+of+fingerprint.">Quality assessment of Asarum heterotropoides var. mandshuricum based on HPLC multi-component determination and multiple pattern recognition method of fingerprint.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 238-243 (2022).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+multi-components+of+Paeoniae+Alba+Radix+based+on+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition.">Determination of multi-components of Paeoniae Alba Radix based on fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 231-237 (2022).</li><li>Li, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+investigation+for+raw+and+processed+products+of+Euodiae+Fructus+based+on+high-performance+liquid+chromatography+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition.">Comparative investigation for raw and processed products of Euodiae Fructus based on high-performance liquid chromatography fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chemistry &amp; Biodiversity. 18 (8), 2100281 (2021).</li><li>Dong, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+suitable+distribution+areas+of+Kawa+Kimichi+produced+in+Sichuan+province-based+on+remote+sensing+and+GIS-A+case+study+of+Clematis+Armandii.">Study on suitable distribution areas of Kawa Kimichi produced in Sichuan province-based on remote sensing and GIS-A case study of Clematis Armandii.</a> Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology. 17 (11), 2398-2404 (2015).</li><li>Tang, S. W., Pei, J., Li, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+and+histological+identification+of+Chuanmutong.">Morphological and histological identification of Chuanmutong.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 15 (1), 19-21 (2000).</li><li>Li, B., Chen, X., Fang, Q. M., Zhang, B. J., Wei, Z. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+Research+of+Chuanmutong.">Quality Research of Chuanmutong.</a> Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine. 27 (6), 58-60 (2009).</li><li>Wu, W. J., Wan, M. M., Cao, Y. H., Tan, R., Song, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+on+the+Quality+Standard+of+Chuanmutong.">Research on the Quality Standard of Chuanmutong.</a> Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 33 (2), 313-315 (2015).</li><li>Wei, Z. Q., Chen, X., Li, B., Dong, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+stigmasterol+in+Clematis+armandii+Franch+and+Clematis+montana+Buch-Ham.+by+HPLC.">Determination of stigmasterol in Clematis armandii Franch and Clematis montana Buch-Ham. by HPLC.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 20 (3), 574-575 (2009).</li><li>Qing, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+oleanolic+acid+in+Caulis+clematidis+armandii+by+HPLC.">Determination of oleanolic acid in Caulis clematidis armandii by HPLC.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 21 (3), 273-274 (2006).</li><li>Yang, S. D., Wang, R., Fu, D. Y., Guo, J. J., Tan, W. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+on+oleanolic+acid+in+caulis+clematidis+armandii+by+microwave+assisted+extraction-HPLC/MS.">Determination on oleanolic acid in caulis clematidis armandii by microwave assisted extraction-HPLC/MS.</a> Anhui Academy of Agricultural Sciences. 38 (13), 6929-6931 (2010).</li></ol>

Prøveindsamlingen til forskning er det første vigtige skridt til at konstruere multi-mønster genkendelse til at identificere ægtheden af kinesiske medicinske materialer. Gennem markedsundersøgelser fandt vi, at Sichuan Ya'an, Liangshan og Leshan er de vigtigste produktionsområder for vilde ressourcer i Chuanmutong. De beslægtede sorter af samme slægt har også samme geografiske udbredelse 6,20; CC, DC, DE, XS og SMT misbruges ofte som Chuangmutong<sup cla...

Chuanmutong, tør Caulis af Clematis armandii Franch. eller Clematis montana Buch.-Ham., er en traditionel kinesisk medicin, der almindeligvis anvendes i klinikker 1,2,3. Det bruges til behandling af urinproblemer, ødem, sår på tungen og munden, nedsat mælkesekretion, ledstivhed og muskelsmerter forårsaget af fugtig varme4. Chuanmutong er altid opnået fra vilde sorter, hovedsageligt fordelt i det sydvestlige Kina, især i Sichuan, hvor den bedste kvalitet kan findes 5,6. Det er vanskeligt at skelne mellem autentiske sorter og deres nært beslægtede forfalskninger på grund af deres lignende egenskaber 7,8,9,10. Kvalitetsstandarden for Chuanmutong i 2020-udgaven af kinesisk farmakopé fastsætter kun egenskaber, mikroskopisk identifikation og tyndlagsidentifikation uden indholdsbestemmelse, som ikke effektivt kan identificere forfalskninger og derfor har potentielle risici. Desuden er der få rapporter, der sammenligner og identificerer Chuanmutong og beslægtede planter. Derfor er en kvalitetskontrolmetode for at sikre ægtheden af Chuanmutong værd at undersøge yderligere.
De kemiske bestanddele af Chuanmutong består hovedsageligt af pentacykliske triterpenoider af oleanan-typen og deres glycosider, flavonoider og organiske syrer11,12,13,14. Blandt dem har oleanolsyre, β-sitosterol, stigmasterol og ergosterol vanddrivende virkninger af forskellig intensitet, hvilket kan være potentielle farmakodynamiske stoffer til fremme af diurese og lindring af stranguri15,16. Kemiske fingeraftryk opnås ved at adskille og detektere mange kemiske komponenter indeholdt i prøver ved højtydende væskekromatografi (HPLC), gaskromatografi (GC) osv. Vedtagelse af passende statistiske analysemetoder til analyse af Chuanmutongs egenskaber kan bestemme den overordnede kvalitetskontrol og videnskabelige identifikation af traditionel kinesisk medicin17,18,19.
I denne undersøgelse blev 10 partier Chuanmutong autentiske sorter og fem partier af forfalskningsmidler indsamlet. Deres kvalitet blev sammenlignet og analyseret ved HPLC-fingeraftryksmetoden kombineret med multimønstergenkendelse, herunder klyngeanalyse (CA), hovedkomponentanalyse (PCA), ortogonal delvis mindste kvadraters diskriminationsanalyse (OPLS-CA) og indholdsbestemmelse af den farmakodynamiske komponent. Denne protokol fastlægger en metode til identifikation af autentiske sorter med høj specificitet, en ny strategi for videnskabelig identifikation af autentiske sorter og forfalskninger af kinesiske lægemidler.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2017381038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160; Trading Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>WXBD5243V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Sitosterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;C18 column</td>
			<td>Yuexu Material Technology Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>Welch Ultimate LP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Guoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>19020103</td>
			<td>CMT-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200701</td>
			<td>CMT-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200701</td>
			<td>CMT-3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200901</td>
			<td>CMT-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>210701</td>
			<td>CMT-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Haobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>210401</td>
			<td>CMT-6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200901</td>
			<td>CMT-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Wusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>201201</td>
			<td>CMT-8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Limin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>201001</td>
			<td>CMT-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Yuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China</td>
			<td>210501</td>
			<td>CMT-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang</td>
			<td>Madzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>CC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils.</td>
			<td>Heilin Village, Qiliping Township, Hongya County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>DC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis peterae Hand.-Mazz.</td>
			<td>Huangmu Village, Huangmu Township, Hanyuan County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>DE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils</td>
			<td>Mixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>XS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis finetiana Levl. et Vaniot.</td>
			<td>Wannian Village, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>SMT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic balance</td>
			<td>Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai,&#160; China&#160;</td>
			<td>FA1204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ergosterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>2021112602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2017042043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic acid</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>2016062901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High performance liquid chromatography</td>
			<td>Agilent, USA.</td>
			<td>1260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IBM SPSS Statistics version 26.0</td>
			<td>International Business Machines Corporation, USA</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160; Trading Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>WXBD6409V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>202010302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>n-butyl alcohol</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2020071047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petroleum ether</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2020090125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphoric acid</td>
			<td>Comeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>20200110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SESCF-TCM version 2012</td>
			<td>National Pharmacopoeia Commission, China</td>
			<td>-</td>
			<td>http://114.247.108.158:8888/login</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stigmasterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloromethane</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>20200214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Umetrics SIMCA version 14.1.0.2047</td>
			<td>Umetrics, Sweden</td>
			<td>-</td>
			<td>https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water machine</td>
			<td>Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, China</td>
			<td>UPH-II-10T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleaner</td>
			<td>Kunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, China</td>
			<td>KH3200E</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

hplc coupled with chemical fingerprinting for multi-pattern recognition for identifying the authenticity of clematidis armandii caulis

En metode til identifikation af kinesiske medicinske materialer og deres relaterede forfalskninger blev konstrueret ved at tage Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, en universelt anvendt traditionel kinesisk medicin) som et eksempel. Ti batcher af ægte Chuanmutong-sorter og fem batcher af relaterede forfalskningsmidler blev analyseret og sammenlignet baseret på højtydende væskekromatografi (HPLC) fingeraftryk kombineret med kemometri, herunder klyngeanalyse (CA), hovedkomponentanalyse (PCA) og ortogonal delvis mindste kvadratdiskriminationsanalyse (OPLS-DA). Derudover blev indholdet af β-sitosterol bestemt. Chuanmutongs kontrolkemiske fingeraftryk blev etableret, og 12 almindelige toppe blev identificeret. Ligheden mellem fingeraftrykket af 10 partier ægte Chuanmutong-sorter og kontrolfingeraftrykket var 0,910-0,989, mens ligheden mellem fem batcher af forfalskningsmidler kun var 0,133-0,720. Baseret på de almindelige toppe i kromatogrammet blev 15 batcher af prøver klassificeret i tre indholdsniveauer af PCA og blev aggregeret i fire kategorier af CA, hvilket opnåede en klar sondring mellem autentisk Chuanmutong og forfalskninger af Chuanmutong. Desuden blev syv differentielle komponenter, der effektivt kan identificere autentiske Chuanmutong og forfalskninger af Chuanmutong, fundet gennem OPLS-DA. Det β-sitosterol indhold af 10 partier ægte Chuanmutong sorter var 97,53-161,56 μg/g, mens indholdet af β-sitosterol i de fem partier af forfalskninger varierede meget, blandt hvilke β-sitosterol indholdet af Clematis peterae Hand.-Mazz. og Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils. var betydeligt lavere end for autentiske sorter af Chuanmutong. HPLC-indekskomponentindholdet og den kemiske fingeraftryksgenkendelsesmetode med flere mønstre, der er etableret i denne undersøgelse, giver en ny strategi til effektivt at identificere autentiske kinesiske medicinske materialer og relaterede forfalskningsmidler.

Kromatografisk fingeraftryk af Chuanmutong og lighedsanalyse (SA) RSD-værdierne for den relative retentionstid for præcision, repeterbarhed og stabilitet var henholdsvis under 0,46%, 1,65% og 0,53%; RSD-værdierne for det relative topområde var henholdsvis under 4,23%, 3,56% og 3,96%. Som vist i figur 1A, B var der 12 forskellige fælles toppe (fra top 1 til top 12) i HPLC-fingeraftrykkene i de 10 autentiske Chuanmutong-prøver. Da topområdet i nr. 10...

Watch this Scientific Journal Video about HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis at JoVE.com

HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis

Her præsenterer vi en protokol til etablering af højtydende væskekromatografi (HPLC) kombineret med kemisk fingeraftryksgenkendelse af flere mønstre, hvilket giver en ny strategi til effektivt at identificere de ægte sorter af Clematidis Armandii Caulis og dets forfalskningsmidler.

HPLC kombineret med kemisk fingeraftryk til genkendelse af flere mønstre til identifikation af ægtheden af Clematidis Armandii Caulis

A method for identifying Chinese medicinal materials and their related adulterants was constructed by taking Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, a ...

Denne protokol kan give en ny strategi til effektivt at identificere de ægte materialer i Clematidis armandii caulis og dets forfalskninger. Denne metode kan bruges i kvalitetsforskning af medicinsk materiale, og den giver en reference til at studere kvalitetsstandarderne for andre kinesiske lægemidler. For at begynde prøveforberedelsen slibes råmaterialet til ensartet partikelstørrelse ved at føre dem gennem et nylonnet med en passende indre diameter.Overfør nøjagtigt vejet to gram af det malede råmateriale i en proppet 50 ml konisk kolbe, inden der tilsættes 50 ml methanol i kolben. Sæt proppen på kolben i ultralyd opvarmet til 600 watt og 40 kilohertz i 30 minutter. Ved afslutningen af inkubationen spændes den medicinske ekstraktopløsning gennem filterpapiret.Efter belastning overføres fire milliliter af methanolopløsningen indeholdende de medicinske ekstrakter til en 10 ml volumetrisk kolbe. Tilsæt derefter seks milliliter vand til det og bland opløsningen. Lad opløsningen sætte sig i 10 minutter.Til HPLC-analyse af prøverne. Start med at forberede de mobile faser og indstil HPLC-gradientprogrammet som beskrevet i manuskriptet. Prøven filtreres gennem en 0,45 mikron mikroporøs filtermembran, og den underkastes HPLC-analyse.For hver prøve skal du udføre analyse seks gange om dagen. For at evaluere stabiliteten af prøveopløsningen analyseres den samme prøveopløsning, der opbevares ved stuetemperatur i 0, 2, 4, 6, 8, 12 og 24 timer efter tilberedning. Tag seks replikater af den samme prøve, og registrer dens fingeraftryk i HPLC.Importer de relevante data til softwaren med navnet Similarity Evaluation System of Chromatographic Fingerprints of Traditional Chinese Medicine eller SESCF TCM version 2012. Importér retentionstiden og topområdet for alle 10 batcher af autentiske Chuanmutong-prøver samt fem batcher af forfalskningsmidler til SESCF TCM til analyse. I hovedmenuen skal du klikke på det indstillede referencespektrum og gå til parameterindstillingsvinduet for at indstille referencekromatografisk fingeraftryk af de autentiske arter af Chuanmutong som reference.Indstil derefter kontrolspektrumgenereringsmetode som medianmetode med tidsvinduets bredde på 0,5. Klik derefter på flerpunktskalibrering i hovedmenuen, vælg toppe, og vælg derefter indstillingen for topmatchning som markerede toppe. Klik til sidst på Beregn lighed for at udføre en lighedsanalyse af prøverne baseret på Chuanmutongs referencekromatogramfingeraftryk.For at udføre systemisk klyngeanalyse skal du åbne relevant statistisk analysesoftware og klikke på filen for at importere dataene fra 10 batcher af autentiske prøver og fem batcher af forfalskninger til softwaren. I menuen skal du under fanen Klassificering klikke på Analyse og systemklynger. Vælg de fælles topområder for 10 batcher af autentiske prøver og fem batcher af forfalskninger som variabler.Indstil antallet af klynger til fire. Klik derefter på Metode for at vælge Klyngemetode som mellemgruppeforbindelse. Vælg måleintervallet som Pearson-korrelation, og brug fanen Okay til at tegne klyngeanalysekortet.For principkomponentanalyse eller PCA skal du åbne dataanalysesoftwaren. Klik på fil i menuen, og opret et nyt almindeligt projekt. Importer topområdet på 12 almindelige toppe i et Excel eller lignende regneark fra HPLC-systemet.Tryk på Finish knappen for at fuldføre dataimporten. For at indstille modeltypen med PCA skal du klikke på Ny for at oprette en ny model og derefter tilpasse dataene ved hjælp af autofit og tilføje faner. Gå til scoringer for at få PCA-scorekortet.For at bruge Orthogonal Partial Least Squares Discrimination Analysis eller OPLSDA. Generer PCA-scorekortet som vist tidligere. Indstil modeltypen med OPLSDA ved at klikke på Ny og Ny som model et Før du går til skala for at vælge par for alle, skal du derefter trykke på AutoFit i scores for at generere OPLSDA-scorekortet.For at estimere den variable betydning og projektion skal du gå til menuen dataanalysesoftware og gå til Analyser efterfulgt af at indstille tallet til 200 under pr. mutationer. Hent R-kvadrat- og Q-kvadratværdierne fra OPLSDA-scoren, og klik på VIP- og VIP-forudsigelse for at få VIP-kortet. HPLC-fingeraftryk af de 10 autentiske Chuanmutong-prøver viste 12 forskellige fælles toppe, hvoraf de relativt store og velløste.Top nummer 10 blev brugt som referencetop til at estimere de relative retentionstider for resten toppe. De autentiske prøver viste lighedsgrader meget tæt på en, der antydede høj lighed i god konsistens. Imidlertid var lighedsgraderne mellem de fem partier af forfalskninger og kontrollen Chuanmutong ret lave.HPLC-fingeraftrykkene fra de fem forfalskninger blev observeret at afvige fra de autentiske prøver, hovedsageligt i regionen med retentionstider fra 28 til 55 minutter. PCA viste en åbenbar lighed mellem de autentiske sorter og deres forskel fra forfalskningsmidlerne, bortset fra forfalskningsmidlet CC.Lignende resultater blev også opnået fra klyngeanalyse, når klassificeringsafstanden var 20. Scorematrixen genereret fra OPLSDA angav intet skæringspunkt mellem prøvepunkterne for autentiske prøver og forfalskningerne.Igen lignede utro CC de autentiske sorter mere end de andre ægteskabsbrydere. Ifølge VIP-kortet blev toppe med værdier større end en identificeret som de vigtigste markørkomponenter, der forårsagede forskellen mellem autentiske prøver og forfalskninger. Indholdet af beta-sitosterol, en aktiv komponent fundet i Chuanmutong blev påvist i alle fem partier af forfalskningsmidler, men indholdet varierede meget.Denne protokol etablerer forskellige analysemetoder til at afspejle al information om medicinske materialer fra flere vinkler og i hele vejen for at estimere ægtheden af Chuanmutong medicinske materialer.

Research

JoVE Journal

Chemistry

HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis

Preparation of Highly Porous Coordination Polymer Coatings on Macroporous Polymer Monoliths for Enhanced Enrichment of Phosphopeptides

Udarbejdelse af meget porøse Koordinering Polymer Belægninger på Makroporøse Polymer Monoliths for styrkede Berigelse af phosphopeptider

We describe a protocol for the preparation of hybrid materials based on highly porous coordination polymer coatings on the internal surface of macroporous ...

Facile Synthesis of Worm-like Micelles by Visible Light Mediated Dispersion Polymerization Using Photoredox Catalyst

Facile Syntese af ormelignende Miceller af synligt lys Mediated Dispersion polymerisering Brug Photoredox Catalyst

Presented herein is a protocol for the facile synthesis of worm-like micelles by visible light mediated dispersion polymerization. This approach begins ...

Determining the Chemical Composition of Corrosion Inhibitor/Metal Interfaces with XPS: Minimizing Post Immersion Oxidation

Bestemmelse af kemiske sammensætning af korrosionsinhibitor / Metal Grænseflader med XPS: Minimering Indlæg Immersion Oxidation

An approach for acquiring more reliable X-ray photoelectron spectroscopy data from corrosion inhibitor/metal interfaces is described. More specifically, ...

A Straightforward Method for Glucosinolate Extraction and Analysis with High-pressure Liquid Chromatography (HPLC)

A Straightforward Method for Glucosinolate Extraction and Analysis with High-pressure Liquid Chromatography HPLC

En enkel metode til glucosinolater Ekstraktion og analyse med Højtryks-væskekromatografi (HPLC)

Glucosinolates are a well-studied and highly diverse class of natural plant compounds. They play important roles in plant resistance, rapeseed oil ...

Chemical Precipitation Method for the Synthesis of Nb2O5 Modified Bulk Nickel Catalysts with High Specific Surface Area

Chemical Precipitation Method for the Synthesis of Nb2O5 Modified Bulk Nickel Catalysts with High Specific Surface Area

Kemisk udfældning metode til syntese af Nb2O5 ændret Bulk nikkel katalysatorer med høje specifikke overfladeareal

We demonstrate a method for the synthesis of NixNb1-xO catalysts with sponge-like and fold-like nanostructures. By varying the Nb:Ni ratio, a series of ...

Methionine Functionalized Biocompatible Block Copolymers for Targeted Plasmid DNA Delivery

Methionin Funktionaliserede biokompatible blok copolymere til målrettet plasmid DNA levering

Reversible addition-fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization integrates the advantages of radical polymerization and living polymerization. This ...

Extraction of Lignin with High &#946;-O-4 Content by Mild Ethanol Extraction and Its Effect on the Depolymerization Yield

Ekstraktion af Lignin med højt indhold af β-O-4 ved Mild Ethanol udvinding og dens virkning på Depolymerization udbyttet

Lignin valorization strategies are a key factor for achieving more economically competitive biorefineries based on lignocellulosic biomass. Most of the ...

A Two-Step Pyrolysis-Gas Chromatography Method with Mass Spectrometric Detection for Identification of Tattoo Ink Ingredients and Counterfeit Products

En to-trins pyrolyse-gaskromatografi metode med massespektrometrisk detektion til identifikation af tatovering blæk ingredienser og forfalskede produkter

Tattoo inks are complex mixtures of ingredients. Each of them possesses different chemical properties which have to be addressed upon chemical analysis. ...

Tuning the Acidity of Pt/ CNTs Catalysts for Hydrodeoxygenation of Diphenyl Ether

Tuning surhedsgraden af PT/CNTs katalysatorer for Hydrodeoxygenering af diphenyl ether

We herein present a method for the synthesis of HNbWO6, HNbMoO6, HTaWO6 solid acid nanosheet modified Pt/CNTs. By varying the weight of various solid acid ...

Integrated Cell Manipulation Platform Coupled with the Single-probe for Mass Spectrometry Analysis of Drugs and Metabolites in Single Suspension Cells

Integreret celle manipulation platform kombineret med enkelt-sonde for massespektrometri analyse af narkotika og metabolitter i enkelt suspension celler

Single cell mass spectrometry (SCMS) enables sensitive detection and accurate analysis of broad ranges of cellular species on the individual-cell level. ...