Name: hplc coupled with chemical fingerprinting for multi-pattern recognition for identifying the authenticity of clematidis armandii caulis
Uploaded: 2022-11-11T14:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door het project van Sichuan Traditional Chinese Medicine Administration (nr. 2020JC0088, nr. 2021MS203).

1. Methoden voor chemische vingerafdrukdetectie
<ol><li>Chromatografische omstandigheden<ol><li>Bereid de mobiele fase van acetonitril (A) / water (B) voor. Stel een gradiëntprogramma in als volgt in de HPLC-software: 0-20 min, 3% A-10% A; 20-25 min, 10% A-13% A; 25-65 min, 13% A-25% A; 65-75 min, 25%A-40%A; 75-76 min, 40%A-3%A; 76-85 min, 3%A-3%A.</li>
		<li>Houd het debiet van de mobiele fase op 1,0 ml/min.</li>
		<li>Voer de chromatografische scheiding uit op een C18-kolom (250 mm x 4,6 mm, 5 μm) ...

<ol>
	<li>Chen, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Chinese Medicine Specimen Picture Book. , 116 (1935).</li><li>Xiong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lignans+from+the+stems+of+Clematis+armandii+(&amp;#34;Chuan-Mu-Tong&amp;#34;)+and+their+anti-neuroinflammatory+activities.">Lignans from the stems of Clematis armandii (&amp;#34;Chuan-Mu-Tong&amp;#34;) and their anti-neuroinflammatory activities.</a> Journal of Ethnopharmacology. 153 (3), 737-743 (2014).</li><li>Pan, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+lignan+from+the+Chinese+medicinal+plant+Clematis+armandii,+inhibits+A431+cell+growth+via+blocking+p70S6/S6+kinase+pathway.">a lignan from the Chinese medicinal plant Clematis armandii, inhibits A431 cell growth via blocking p70S6/S6 kinase pathway.</a> Integrative Cancer Therapies. 16 (3), 351-359 (2017).</li><li>Chinese Pharmacopoeia Commission. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pharmacopoeia of The People's Republic of China: (Edition 2020). , 38 (2020).</li><li>Wang, D. G., Guo, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Textual+research+on+the+materia+medica+and+authenticity+of+Clematidis+armandii.">Textual research on the materia medica and authenticity of Clematidis armandii.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medicine Research. 18 (11), 2696 (2007).</li><li>Fang, Q. M., Zhang, M., Zhong, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+resources+and+exploitation+of+Caulis+Clematidis+Armandii+in+Sichuan.">The natural resources and exploitation of Caulis Clematidis Armandii in Sichuan.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 20 (5), 404-406 (2005).</li><li>Bai, M. N., Dai, Y. X., Wang, Y., Ren, Y. Y., Tan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+the+identi&#64257;cation+of+Caulis+Clematidis+Armandii.">Study on the identi&#64257;cation of Caulis Clematidis Armandii.</a> Research and Practice on Chinese Medicines. 31 (3), 13-16 (2017).</li><li>Zhou, P. J., Li, X. F., Fu, D. H., Pu, X. Y., Zhu, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacognosy+identification+of+Ethnomedicine+Clematis+ranunculoides+Franchet.">Pharmacognosy identification of Ethnomedicine Clematis ranunculoides Franchet.</a> Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. 34 (3), 432-436 (2017).</li><li>Guo, J. L., Tang, Y., Pei, J., Wang, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+random+amplified+polymorphic+DNA+and+sequence+characterized+amplified+regions+of+Caulis+Clematidis+Armandii.">Study on random amplified polymorphic DNA and sequence characterized amplified regions of Caulis Clematidis Armandii.</a> Journal of Chengdu Medical College. 6 (4), 283-286 (2011).</li><li>Liu, M. Z., Li, M. N., Yao, H., Liu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identification+of+Clematidis+Armandii+Caulis+and+its+adulterants+and+closely+related+species+by+ITS2+sequence.">Molecular identification of Clematidis Armandii Caulis and its adulterants and closely related species by ITS2 sequence.</a> Global Traditional Chinese Medicine. 4 (6), 446-450 (2011).</li><li>Liu, J. J., Chen, X., Wei, Z. Q., Li, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+constituents+and+identification+of+the+caules+of+Clematis+armandii+Franch.and+Clematis+montana+Buch.-Ham.">Chemical constituents and identification of the caules of Clematis armandii Franch.and Clematis montana Buch.-Ham.</a> Natural Product Research and Development. 22 (6), 998-1000 (2010).</li><li>Yang, T. R., Xu, Z., Shi, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+four+compounds+from+Clematis+Montana.">Studies on four compounds from Clematis Montana.</a> Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine. 10 (4), 142-143 (2008).</li><li>Yan, L. H., Xu, L. Z., Zhou, Z. M., Yang, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+constituents+from+stems+of+Clematis+armandii(I).">Chemical constituents from stems of Clematis armandii(I).</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 38 (3), 340-342 (2007).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traditional+uses,+phytochemistry,+pharmacology,+and+toxicology+of+Akebiae+Caulis+and+its+synonyms:+A+review.">Traditional uses, phytochemistry, pharmacology, and toxicology of Akebiae Caulis and its synonyms: A review.</a> Journal of Ethnopharmacology. 277, 114245 (2021).</li><li>Ye, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diuretic+effect+and+material+basis+of+Clematidis+Armandii+Caulis+in+rats.">Diuretic effect and material basis of Clematidis Armandii Caulis in rats.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 44 (9), 1889-1894 (2019).</li><li>Kuang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consistency+study+of+Caulis+Clematidis+Armandii+and+its+traditionally+used+products+and+counterfeit+species+based+on+efficacy+and+pharmacognosy.">Consistency study of Caulis Clematidis Armandii and its traditionally used products and counterfeit species based on efficacy and pharmacognosy.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 36 (3), 115-121 (2020).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+assessment+of+Asarum+heterotropoides+var.+mandshuricum+based+on+HPLC+multi-component+determination+and+multiple+pattern+recognition+method+of+fingerprint.">Quality assessment of Asarum heterotropoides var. mandshuricum based on HPLC multi-component determination and multiple pattern recognition method of fingerprint.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 238-243 (2022).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+multi-components+of+Paeoniae+Alba+Radix+based+on+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition.">Determination of multi-components of Paeoniae Alba Radix based on fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 231-237 (2022).</li><li>Li, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+investigation+for+raw+and+processed+products+of+Euodiae+Fructus+based+on+high-performance+liquid+chromatography+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition.">Comparative investigation for raw and processed products of Euodiae Fructus based on high-performance liquid chromatography fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chemistry &amp; Biodiversity. 18 (8), 2100281 (2021).</li><li>Dong, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+suitable+distribution+areas+of+Kawa+Kimichi+produced+in+Sichuan+province-based+on+remote+sensing+and+GIS-A+case+study+of+Clematis+Armandii.">Study on suitable distribution areas of Kawa Kimichi produced in Sichuan province-based on remote sensing and GIS-A case study of Clematis Armandii.</a> Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology. 17 (11), 2398-2404 (2015).</li><li>Tang, S. W., Pei, J., Li, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+and+histological+identification+of+Chuanmutong.">Morphological and histological identification of Chuanmutong.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 15 (1), 19-21 (2000).</li><li>Li, B., Chen, X., Fang, Q. M., Zhang, B. J., Wei, Z. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+Research+of+Chuanmutong.">Quality Research of Chuanmutong.</a> Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine. 27 (6), 58-60 (2009).</li><li>Wu, W. J., Wan, M. M., Cao, Y. H., Tan, R., Song, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+on+the+Quality+Standard+of+Chuanmutong.">Research on the Quality Standard of Chuanmutong.</a> Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 33 (2), 313-315 (2015).</li><li>Wei, Z. Q., Chen, X., Li, B., Dong, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+stigmasterol+in+Clematis+armandii+Franch+and+Clematis+montana+Buch-Ham.+by+HPLC.">Determination of stigmasterol in Clematis armandii Franch and Clematis montana Buch-Ham. by HPLC.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 20 (3), 574-575 (2009).</li><li>Qing, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+oleanolic+acid+in+Caulis+clematidis+armandii+by+HPLC.">Determination of oleanolic acid in Caulis clematidis armandii by HPLC.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 21 (3), 273-274 (2006).</li><li>Yang, S. D., Wang, R., Fu, D. Y., Guo, J. J., Tan, W. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+on+oleanolic+acid+in+caulis+clematidis+armandii+by+microwave+assisted+extraction-HPLC/MS.">Determination on oleanolic acid in caulis clematidis armandii by microwave assisted extraction-HPLC/MS.</a> Anhui Academy of Agricultural Sciences. 38 (13), 6929-6931 (2010).</li></ol>

De monsterverzameling voor onderzoek is de eerste belangrijke stap naar het construeren van multi-patroonherkenning bij het identificeren van de authenticiteit van Chinese medicinale materialen. Door marktonderzoek ontdekten we dat Sichuan Ya'an, Liangshan en Leshan de belangrijkste productiegebieden van wilde hulpbronnen van Chuanmutong zijn. De verwante rassen van hetzelfde geslacht hebben ook dezelfde geografische spreiding 6,20; CC, DC, DE, XS en SMT worden v...

Chuanmutong, droge Caulis van Clematis armandii Franch. of Clematis montana Buch.-Ham., is een traditionele Chinese geneeskunde die vaak wordt gebruikt in klinieken 1,2,3. Het wordt gebruikt voor de behandeling van urinewegproblemen, oedeem, zweren op de tong en mond, verminderde melkafscheiding, gewrichtsstijfheid en spierpijn veroorzaakt door vochtige warmte4. Chuanmutong is altijd verkregen uit wilde variëteiten, voornamelijk gedistribueerd in het zuidwesten van China, vooral in Sichuan, waar de beste kwaliteit te vinden is 5,6. Het is moeilijk om onderscheid te maken tussen authentieke variëteiten en hun nauw verwante overspelige stoffen vanwege hun vergelijkbare kenmerken 7,8,9,10. De kwaliteitsnorm van Chuanmutong in de 2020-editie van Chinese Farmacopee bepaalt alleen de eigenschappen, microscopische identificatie en dunnelaagidentificatie zonder bepaling van de inhoud, die geen effectieve vervalsingen kunnen identificeren en dus potentiële risico's met zich meebrengen. Bovendien zijn er weinig rapporten die Chuanmutong en aanverwante planten vergelijken en identificeren. Bijgevolg is een kwaliteitscontrolemethode om de authenticiteit van Chuanmutong te garanderen het waard om verder te worden bestudeerd.
De chemische bestanddelen van Chuanmutong zijn voornamelijk samengesteld uit oleanane-type pentacyclische triterpenoïden en hun glycosiden, flavonoïden en organische zuren 11,12,13,14. Onder hen hebben oleanolic acid, β-sitosterol, stigmasterol en ergosterol diuretische effecten van verschillende intensiteiten, wat potentiële farmacodynamische stoffen kunnen zijn voor het bevorderen van diurese en het verlichten van wurggreep15,16. Chemische vingerafdrukken worden verkregen door het scheiden en detecteren van veel chemische componenten in monsters door middel van high-performance vloeistofchromatografie (HPLC), gaschromatografie (GC), enz. Het aannemen van geschikte statistische analysemethoden om de kenmerken van Chuanmutong te analyseren, kan de algehele kwaliteitscontrole en wetenschappelijke identificatie van de traditionele Chinese geneeskunde bepalen 17,18,19.
In deze studie werden 10 partijen authentieke Chuanmutong-variëteiten en vijf partijen overspelige stoffen verzameld. Hun kwaliteit werd vergeleken en geanalyseerd door de HPLC-vingerafdrukmethode in combinatie met multi-patroonherkenning, inclusief clusteranalyse (CA), principal component analysis (PCA), orthogonale partiële least-squares discriminatieanalyse (OPLS-CA) en inhoudsbepaling van de farmacodynamische component. Dit protocol stelt een methode vast voor het identificeren van authentieke rassen met een hoge specificiteit, een nieuwe strategie voor de wetenschappelijke identificatie van authentieke rassen en vervalsingen van Chinese medicinale materialen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2017381038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160; Trading Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>WXBD5243V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Sitosterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;C18 column</td>
			<td>Yuexu Material Technology Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>Welch Ultimate LP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Guoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>19020103</td>
			<td>CMT-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200701</td>
			<td>CMT-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200701</td>
			<td>CMT-3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200901</td>
			<td>CMT-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>210701</td>
			<td>CMT-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Haobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>210401</td>
			<td>CMT-6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200901</td>
			<td>CMT-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Wusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>201201</td>
			<td>CMT-8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Limin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>201001</td>
			<td>CMT-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Yuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China</td>
			<td>210501</td>
			<td>CMT-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang</td>
			<td>Madzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>CC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils.</td>
			<td>Heilin Village, Qiliping Township, Hongya County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>DC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis peterae Hand.-Mazz.</td>
			<td>Huangmu Village, Huangmu Township, Hanyuan County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>DE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils</td>
			<td>Mixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>XS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis finetiana Levl. et Vaniot.</td>
			<td>Wannian Village, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>SMT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic balance</td>
			<td>Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai,&#160; China&#160;</td>
			<td>FA1204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ergosterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>2021112602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2017042043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic acid</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>2016062901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High performance liquid chromatography</td>
			<td>Agilent, USA.</td>
			<td>1260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IBM SPSS Statistics version 26.0</td>
			<td>International Business Machines Corporation, USA</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160; Trading Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>WXBD6409V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>202010302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>n-butyl alcohol</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2020071047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petroleum ether</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2020090125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphoric acid</td>
			<td>Comeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>20200110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SESCF-TCM version 2012</td>
			<td>National Pharmacopoeia Commission, China</td>
			<td>-</td>
			<td>http://114.247.108.158:8888/login</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stigmasterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloromethane</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>20200214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Umetrics SIMCA version 14.1.0.2047</td>
			<td>Umetrics, Sweden</td>
			<td>-</td>
			<td>https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water machine</td>
			<td>Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, China</td>
			<td>UPH-II-10T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleaner</td>
			<td>Kunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, China</td>
			<td>KH3200E</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

hplc coupled with chemical fingerprinting for multi-pattern recognition for identifying the authenticity of clematidis armandii caulis

Een methode voor het identificeren van Chinese medicinale materialen en hun gerelateerde overspeligen werd geconstrueerd door Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, een universeel gebruikte traditionele Chinese geneeskunde) als voorbeeld te nemen. Tien batches van echte Chuanmutong-variëteiten en vijf partijen verwante overspelige stoffen werden geanalyseerd en vergeleken op basis van de high-performance vloeistofchromatografie (HPLC) vingerafdrukken in combinatie met chemometrie, waaronder clusteranalyse (CA), principal component analysis (PCA) en orthogonale partiële kleinste-kwadraten discriminatieanalyse (OPLS-DA). Bovendien werd het gehalte aan β-sitosterol bepaald. De controle chemische vingerafdruk van Chuanmutong werd vastgesteld en 12 gemeenschappelijke pieken werden geïdentificeerd. De overeenkomst tussen de vingerafdruk van 10 partijen echte Chuanmutong-variëteiten en de controlevingerafdruk was 0,910-0,989, terwijl de gelijkenis van vijf partijen overspelige stoffen slechts 0,133-0,720 was. Op basis van de gemeenschappelijke pieken in het chromatogram werden 15 partijen monsters ingedeeld in drie inhoudsniveaus per PCA en werden ze geaggregeerd in vier categorieën per CA, waardoor een duidelijk onderscheid werd gemaakt tussen authentieke Chuanmutong en overspelige stoffen van Chuanmutong. Verder werden zeven differentiële componenten gevonden die authentieke Chuanmutong en overspelige stoffen van Chuanmutong effectief kunnen identificeren via OPLS-DA. Het β-sitosterolgehalte van 10 partijen echte Chuanmutong-variëteiten was 97,53-161,56 μg / g, terwijl het β-sitosterolgehalte van de vijf partijen overspelige stoffen sterk varieerde, waaronder het β-sitosterolgehalte van Clematis peterae Hand.-Mazz. en Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. en Wils. was significant lager dan die van authentieke variëteiten van Chuanmutong. De HPLC-indexcomponentinhoud en chemische vingerafdruk multi-patroon herkenningsmethode die in deze studie is vastgesteld, bieden een nieuwe strategie voor het effectief identificeren van authentieke Chinese medicinale materialen en gerelateerde overspelige stoffen.

Chromatografische vingerafdruk van Chuanmutong en gelijkenisanalyse (SA) De RSD-waarden van de relatieve retentietijd van precisie, herhaalbaarheid en stabiliteit lagen respectievelijk onder 0,46%, 1,65% en 0,53%; de RSD-waarden van het relatieve piekgebied lagen respectievelijk onder de 4,23%, 3,56% en 3,96%. Zoals te zien is in figuur 1A,B, waren er 12 verschillende gemeenschappelijke pieken (van piek 1 tot piek 12) in de HPLC-vingerafdrukken in de 10 authentieke Chuanm...

Watch this Scientific Journal Video about HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis at JoVE.com

HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis

Hier presenteren we een protocol om high-performance vloeistofchromatografie (HPLC) vast te stellen, gekoppeld aan chemische vingerafdruk multi-patroonherkenning, die een nieuwe strategie biedt voor het effectief identificeren van de echte variëteiten van Clematidis Armandii Caulis en zijn overspelige stoffen.

HPLC in combinatie met chemische vingerafdrukken voor multi-patroonherkenning voor het identificeren van de authenticiteit van Clematidis Armandii Caulis

A method for identifying Chinese medicinal materials and their related adulterants was constructed by taking Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, a ...

Dit protocol kan een nieuwe strategie bieden voor het effectief identificeren van de echte materialen van Clematidis armandii caulis en zijn overspeligen. Deze methode kan worden gebruikt in onderzoek naar de kwaliteit van medicinale materialen en biedt een referentie voor het bestuderen van de kwaliteitsnormen van andere Chinese medicinale materialen. Om de monstervoorbereiding te beginnen, maalt u de grondstof tot een uniforme deeltjesgrootte door ze door een nylon gaas met een geschikte binnendiameter te laten gaan.Breng nauwkeurig twee gram van de gemalen grondstof in een gestopte erlenmeyer van 50 milliliter voordat 50 milliliter methanol aan de kolf werd toegevoegd. Plaats de stop op de kolf in ultrasoon verwarmd op 600 watt en 40 kilohertz gedurende 30 minuten. Zeef aan het einde van de incubatie de medicinale extractoplossing door het filterpapier.Breng na het persen vier milliliter van de methanoloplossing met de medicinale extracten over in een maatkolf van 10 milliliter. Voeg er vervolgens zes milliliter water aan toe en meng de oplossing. Laat de oplossing 10 minuten bezinken.Voor HPLC-analyse van de monsters. Begin met het voorbereiden van de mobiele fasen en stel het HPLC-verloopprogramma in zoals beschreven in het manuscript. Filtreer het monster door een 0,45 micro poreus filtermembraan en onderwerp het aan HPLC-analyse.Voer voor elk monster zes keer per dag een analyse uit. Om de stabiliteit van de monsteroplossing te evalueren, analyseert u dezelfde monsteroplossing die gedurende 0, 2, 4, 6, 8, 12 en 24 uur na bereiding bij kamertemperatuur is opgeslagen. Neem zes replica's van hetzelfde monster en detecteer de vingerafdruk in HPLC.Importeer de relevante gegevens in de software met de naam Similarity Evaluation System of Chromatographic Fingerprints of Traditional Chinese Medicine of SESCF TCM versie 2012. Importeer de retentietijd en het piekgebied voor alle 10 batches authentieke Chuanmutong-monsters en vijf partijen overspelige stoffen in SESCF TCM voor analyse. Klik in het hoofdmenu op het ingestelde referentiespectrum en ga naar het venster met parameterinstellingen om de referentiechromatografische vingerafdruk van de authentieke soort Chuanmutong als referentie in te stellen.Stel vervolgens de methode voor het genereren van besturingsspectrum in als de mediane methode met de tijdvensterbreedte van 0,5. Klik vervolgens op meerpuntskalibratie in het hoofdmenu, selecteer de pieken en selecteer vervolgens de optie piekovereenkomst als gemarkeerde pieken. Klik ten slotte op Gelijkenis berekenen om een gelijkenisanalyse van de monsters uit te voeren op basis van de referentiechromatogramafdrukken van Chuanmutong.Om systemische clusteranalyse uit te voeren, opent u relevante statistische analysesoftware en klikt u op bestand om de gegevens van 10 batches authentieke monsters en vijf batches overspelige stoffen in de software te importeren. Ga in het menu onder het tabblad Classificatie naar Analyse en systeemclustering. Selecteer de gemeenschappelijke piekgebieden van 10 partijen authentieke monsters en vijf partijen overspelige stoffen als variabelen.Stel het aantal clusters in op vier. Klik vervolgens op Methode om de clustermethode als intergroepverbinding te selecteren. Kies het meetinterval als Pearson-correlatie en gebruik het tabblad OK om de clusteranalysekaart te tekenen.Voor principecomponentenanalyse of PCA opent u de software voor gegevensanalyse. Klik op bestand in het menu en maak een nieuw regulier project. Importeer het piekgebied van 12 veelvoorkomende pieken in een Excel of vergelijkbare spreadsheet uit het HPLC-systeem.Druk op de knop Voltooien om de gegevensimport te voltooien. Om het modeltype met PCA in te stellen, klikt u op Nieuw om een nieuw model te maken en vervolgens de gegevens te passen met behulp van autofit en tabbladen toe te voegen. Ga naar scores om de PCA-scorekaart te krijgen.Om de Orthogonal Partial Least Squares Discrimination Analysis of OPLSDA te gebruiken. Genereer de PCA-scorekaart zoals eerder gedemonstreerd. Stel het modeltype in met de OPLSDA door te klikken op Nieuw en Nieuw als model één Voordat u gaat schalen in het selecteren van par voor iedereen, drukt u vervolgens op AutoFit in scores om de OPLSDA-scorekaart te genereren.Om het variabele belang en de projectie te schatten, gaat u naar het softwaremenu voor gegevensanalyse en gaat u naar Analyseren, gevolgd door het aantal in te stellen op 200 onder per mutaties. Verkrijg de R-kwadraat- en Q-kwadraatwaarden uit de OPLSDA-score en klik op VIP- en VIP-voorspellend om de VIP-kaart te krijgen. HPLC-vingerafdrukken van de 10 authentieke Chuanmutong-monsters toonden 12 verschillende gemeenschappelijke pieken waarvan de relatief grote en goed opgeloste.Piek nummer 10 werd gebruikt als referentiepiek om de relatieve retentietijden van de rustpieken te schatten. De authentieke monsters vertoonden gelijkenisgraden die zeer dicht bij een van de overeenkomsten in goede consistentie impliceren. De gelijkenisgraden tussen de vijf partijen overspeligen en de controle-Chuanmutong waren echter vrij laag.De HPLC-vingerafdrukken van de vijf overspeligen bleken af te wijken van de authentieke monsters, voornamelijk in de regio met bewaartijden variërend van 28 tot 55 minuten. PCA toonde een duidelijke overeenkomst tussen de authentieke rassen en hun verschil met de overspelige stoffen, behalve voor de overspelige CC.Vergelijkbare resultaten werden ook verkregen uit clusteranalyse wanneer de classificatieafstand 20 was. De scorematrix gegenereerd op basis van OPLSDA gaf geen kruising aan tussen de monsterpunten van authentieke monsters en de overspeligen.Nogmaals, overspelige CC leek meer op de authentieke variëteiten dan de andere overspelige stoffen. Volgens de VIP-kaart werden de pieken met waarden groter dan één geïdentificeerd als de belangrijkste markercomponenten die het verschil veroorzaken tussen authentieke monsters en de overspeligen. Het gehalte aan bèta-sitosterol, een actief bestanddeel in Chuanmutong, werd gedetecteerd in alle vijf partijen overspelige stoffen, maar de inhoud varieerde sterk.Dit protocol stelt verschillende analysemethoden vast om alle informatie over medicinale materialen vanuit meerdere hoeken weer te geven en overal de authenticiteit van Chuanmutong medicinale materialen te schatten.

Research

JoVE Journal

Chemistry

HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis

Preparation of Highly Porous Coordination Polymer Coatings on Macroporous Polymer Monoliths for Enhanced Enrichment of Phosphopeptides

Voorbereiding van de zeer poreuze Coordination Polymer Coatings op Macroporeuze Polymer Monoliths voor Enhanced Verrijking van fosfopeptiden

We describe a protocol for the preparation of hybrid materials based on highly porous coordination polymer coatings on the internal surface of macroporous ...

Facile Synthesis of Worm-like Micelles by Visible Light Mediated Dispersion Polymerization Using Photoredox Catalyst

Facile Synthese van Worm-micellen door het zichtbare licht Mediated Dispersion polymerisatie onder toepassing van Photoredox Catalyst

Presented herein is a protocol for the facile synthesis of worm-like micelles by visible light mediated dispersion polymerization. This approach begins ...

Determining the Chemical Composition of Corrosion Inhibitor/Metal Interfaces with XPS: Minimizing Post Immersion Oxidation

Het bepalen van de chemische samenstelling van Corrosion Inhibitor / Metal Interfaces met XPS: minimaliseren Bericht Immersion Oxidatie

An approach for acquiring more reliable X-ray photoelectron spectroscopy data from corrosion inhibitor/metal interfaces is described. More specifically, ...

A Straightforward Method for Glucosinolate Extraction and Analysis with High-pressure Liquid Chromatography (HPLC)

A Straightforward Method for Glucosinolate Extraction and Analysis with High-pressure Liquid Chromatography HPLC

Een eenvoudige methode voor glucosinolaat Extractie en analyse met hoge-druk vloeistofchromatografie (HPLC)

Glucosinolates are a well-studied and highly diverse class of natural plant compounds. They play important roles in plant resistance, rapeseed oil ...

Chemical Precipitation Method for the Synthesis of Nb2O5 Modified Bulk Nickel Catalysts with High Specific Surface Area

Chemical Precipitation Method for the Synthesis of Nb2O5 Modified Bulk Nickel Catalysts with High Specific Surface Area

Chemische neerslag methode voor de synthese van Nb2O5 bewerkt Bulk nikkel katalysatoren met hoge specifieke oppervlakte

We demonstrate a method for the synthesis of NixNb1-xO catalysts with sponge-like and fold-like nanostructures. By varying the Nb:Ni ratio, a series of ...

Methionine Functionalized Biocompatible Block Copolymers for Targeted Plasmid DNA Delivery

Methionine Gefunctionaliseerde biocompatibele blok copolymeren voor gerichte plasmide DNA-levering

Reversible addition-fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization integrates the advantages of radical polymerization and living polymerization. This ...

Extraction of Lignin with High &#946;-O-4 Content by Mild Ethanol Extraction and Its Effect on the Depolymerization Yield

Extractie van lignine met een hoog gehalte van de β-O-4 door milde Ethanol extractie en het Effect daarvan op het rendement van de Depolymerization

Lignin valorization strategies are a key factor for achieving more economically competitive biorefineries based on lignocellulosic biomass. Most of the ...

A Two-Step Pyrolysis-Gas Chromatography Method with Mass Spectrometric Detection for Identification of Tattoo Ink Ingredients and Counterfeit Products

Een twee-stap pyrolyse-Gas Chromatografie methode met massa spectrometrische detectie voor de identificatie van tatoeage inkt ingrediënten en namaakproducten

Tattoo inks are complex mixtures of ingredients. Each of them possesses different chemical properties which have to be addressed upon chemical analysis. ...

Tuning the Acidity of Pt/ CNTs Catalysts for Hydrodeoxygenation of Diphenyl Ether

Tuning van de zuurgraad van PT/CNTs katalysatoren voor Hydrodeoxygenatie van difenyl ether

We herein present a method for the synthesis of HNbWO6, HNbMoO6, HTaWO6 solid acid nanosheet modified Pt/CNTs. By varying the weight of various solid acid ...

Integrated Cell Manipulation Platform Coupled with the Single-probe for Mass Spectrometry Analysis of Drugs and Metabolites in Single Suspension Cells

Geïntegreerde cel manipulatie platform in combinatie met de single-probe voor massaspectrometrie analyse van drugs en metabolieten in enkele schorsing cellen

Single cell mass spectrometry (SCMS) enables sensitive detection and accurate analysis of broad ranges of cellular species on the individual-cell level. ...