Name: hplc coupled with chemical fingerprinting for multi-pattern recognition for identifying the authenticity of clematidis armandii caulis
Uploaded: 2022-11-11T14:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis at JoVE.com

Ce travail a été soutenu par le projet de l’Administration de la médecine traditionnelle chinoise du Sichuan (n° 2020JC0088, n° 2021MS203).

1. Méthodes de détection chimique des empreintes digitales
<ol><li>Conditions chromatographiques<ol><li>Préparer la phase mobile acétonitrile (A)/eau (B). Définissez un programme de gradient comme suit dans le logiciel HPLC : 0-20 min, 3%A-10%A ; 20-25 min, 10%A-13%A; 25-65 min, 13%A-25%A; 65-75 min, 25%A-40%A; 75-76 min, 40%A-3%A; 76-85 min, 3%A-3%A.</li>
		<li>Maintenir le débit de la phase mobile à 1,0 mL/min.</li>
		<li>Effectuer la séparation chromatographique sur une colonne C18 (250 mm x...

<ol>
	<li>Chen, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Chinese Medicine Specimen Picture Book. , 116 (1935).</li><li>Xiong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lignans+from+the+stems+of+Clematis+armandii+(&amp;#34;Chuan-Mu-Tong&amp;#34;)+and+their+anti-neuroinflammatory+activities.">Lignans from the stems of Clematis armandii (&amp;#34;Chuan-Mu-Tong&amp;#34;) and their anti-neuroinflammatory activities.</a> Journal of Ethnopharmacology. 153 (3), 737-743 (2014).</li><li>Pan, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+lignan+from+the+Chinese+medicinal+plant+Clematis+armandii,+inhibits+A431+cell+growth+via+blocking+p70S6/S6+kinase+pathway.">a lignan from the Chinese medicinal plant Clematis armandii, inhibits A431 cell growth via blocking p70S6/S6 kinase pathway.</a> Integrative Cancer Therapies. 16 (3), 351-359 (2017).</li><li>Chinese Pharmacopoeia Commission. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pharmacopoeia of The People's Republic of China: (Edition 2020). , 38 (2020).</li><li>Wang, D. G., Guo, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Textual+research+on+the+materia+medica+and+authenticity+of+Clematidis+armandii.">Textual research on the materia medica and authenticity of Clematidis armandii.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medicine Research. 18 (11), 2696 (2007).</li><li>Fang, Q. M., Zhang, M., Zhong, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+resources+and+exploitation+of+Caulis+Clematidis+Armandii+in+Sichuan.">The natural resources and exploitation of Caulis Clematidis Armandii in Sichuan.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 20 (5), 404-406 (2005).</li><li>Bai, M. N., Dai, Y. X., Wang, Y., Ren, Y. Y., Tan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+the+identi&#64257;cation+of+Caulis+Clematidis+Armandii.">Study on the identi&#64257;cation of Caulis Clematidis Armandii.</a> Research and Practice on Chinese Medicines. 31 (3), 13-16 (2017).</li><li>Zhou, P. J., Li, X. F., Fu, D. H., Pu, X. Y., Zhu, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacognosy+identification+of+Ethnomedicine+Clematis+ranunculoides+Franchet.">Pharmacognosy identification of Ethnomedicine Clematis ranunculoides Franchet.</a> Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. 34 (3), 432-436 (2017).</li><li>Guo, J. L., Tang, Y., Pei, J., Wang, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+random+amplified+polymorphic+DNA+and+sequence+characterized+amplified+regions+of+Caulis+Clematidis+Armandii.">Study on random amplified polymorphic DNA and sequence characterized amplified regions of Caulis Clematidis Armandii.</a> Journal of Chengdu Medical College. 6 (4), 283-286 (2011).</li><li>Liu, M. Z., Li, M. N., Yao, H., Liu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identification+of+Clematidis+Armandii+Caulis+and+its+adulterants+and+closely+related+species+by+ITS2+sequence.">Molecular identification of Clematidis Armandii Caulis and its adulterants and closely related species by ITS2 sequence.</a> Global Traditional Chinese Medicine. 4 (6), 446-450 (2011).</li><li>Liu, J. J., Chen, X., Wei, Z. Q., Li, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+constituents+and+identification+of+the+caules+of+Clematis+armandii+Franch.and+Clematis+montana+Buch.-Ham.">Chemical constituents and identification of the caules of Clematis armandii Franch.and Clematis montana Buch.-Ham.</a> Natural Product Research and Development. 22 (6), 998-1000 (2010).</li><li>Yang, T. R., Xu, Z., Shi, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+four+compounds+from+Clematis+Montana.">Studies on four compounds from Clematis Montana.</a> Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine. 10 (4), 142-143 (2008).</li><li>Yan, L. H., Xu, L. Z., Zhou, Z. M., Yang, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+constituents+from+stems+of+Clematis+armandii(I).">Chemical constituents from stems of Clematis armandii(I).</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 38 (3), 340-342 (2007).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traditional+uses,+phytochemistry,+pharmacology,+and+toxicology+of+Akebiae+Caulis+and+its+synonyms:+A+review.">Traditional uses, phytochemistry, pharmacology, and toxicology of Akebiae Caulis and its synonyms: A review.</a> Journal of Ethnopharmacology. 277, 114245 (2021).</li><li>Ye, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diuretic+effect+and+material+basis+of+Clematidis+Armandii+Caulis+in+rats.">Diuretic effect and material basis of Clematidis Armandii Caulis in rats.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 44 (9), 1889-1894 (2019).</li><li>Kuang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consistency+study+of+Caulis+Clematidis+Armandii+and+its+traditionally+used+products+and+counterfeit+species+based+on+efficacy+and+pharmacognosy.">Consistency study of Caulis Clematidis Armandii and its traditionally used products and counterfeit species based on efficacy and pharmacognosy.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 36 (3), 115-121 (2020).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+assessment+of+Asarum+heterotropoides+var.+mandshuricum+based+on+HPLC+multi-component+determination+and+multiple+pattern+recognition+method+of+fingerprint.">Quality assessment of Asarum heterotropoides var. mandshuricum based on HPLC multi-component determination and multiple pattern recognition method of fingerprint.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 238-243 (2022).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+multi-components+of+Paeoniae+Alba+Radix+based+on+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition.">Determination of multi-components of Paeoniae Alba Radix based on fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 231-237 (2022).</li><li>Li, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+investigation+for+raw+and+processed+products+of+Euodiae+Fructus+based+on+high-performance+liquid+chromatography+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition.">Comparative investigation for raw and processed products of Euodiae Fructus based on high-performance liquid chromatography fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chemistry &amp; Biodiversity. 18 (8), 2100281 (2021).</li><li>Dong, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+suitable+distribution+areas+of+Kawa+Kimichi+produced+in+Sichuan+province-based+on+remote+sensing+and+GIS-A+case+study+of+Clematis+Armandii.">Study on suitable distribution areas of Kawa Kimichi produced in Sichuan province-based on remote sensing and GIS-A case study of Clematis Armandii.</a> Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology. 17 (11), 2398-2404 (2015).</li><li>Tang, S. W., Pei, J., Li, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+and+histological+identification+of+Chuanmutong.">Morphological and histological identification of Chuanmutong.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 15 (1), 19-21 (2000).</li><li>Li, B., Chen, X., Fang, Q. M., Zhang, B. J., Wei, Z. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+Research+of+Chuanmutong.">Quality Research of Chuanmutong.</a> Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine. 27 (6), 58-60 (2009).</li><li>Wu, W. J., Wan, M. M., Cao, Y. H., Tan, R., Song, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+on+the+Quality+Standard+of+Chuanmutong.">Research on the Quality Standard of Chuanmutong.</a> Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 33 (2), 313-315 (2015).</li><li>Wei, Z. Q., Chen, X., Li, B., Dong, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+stigmasterol+in+Clematis+armandii+Franch+and+Clematis+montana+Buch-Ham.+by+HPLC.">Determination of stigmasterol in Clematis armandii Franch and Clematis montana Buch-Ham. by HPLC.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 20 (3), 574-575 (2009).</li><li>Qing, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+oleanolic+acid+in+Caulis+clematidis+armandii+by+HPLC.">Determination of oleanolic acid in Caulis clematidis armandii by HPLC.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 21 (3), 273-274 (2006).</li><li>Yang, S. D., Wang, R., Fu, D. Y., Guo, J. J., Tan, W. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+on+oleanolic+acid+in+caulis+clematidis+armandii+by+microwave+assisted+extraction-HPLC/MS.">Determination on oleanolic acid in caulis clematidis armandii by microwave assisted extraction-HPLC/MS.</a> Anhui Academy of Agricultural Sciences. 38 (13), 6929-6931 (2010).</li></ol>

La collecte d’échantillons pour la recherche est la première étape clé de la construction de la reconnaissance multi-motifs dans l’identification de l’authenticité des matériaux médicinaux chinois. Grâce à des études de marché, nous avons constaté que Sichuan Ya’an, Liangshan et Leshan sont les principales zones de production des ressources sauvages de Chuanmutong. Les variétés apparentées d’un même genre ont également la même répartition géographique 6,20<...

Chuanmutong, Caulis sec de Clematis armandii Franch. ou Clematis montana Buch.-Ham., est une médecine traditionnelle chinoise couramment utilisée dans les cliniques 1,2,3. Il est utilisé pour traiter les problèmes urinaires, l’œdème, les plaies sur la langue et la bouche, la diminution de la sécrétion de lait, la raideur articulaire et les douleurs musculaires causées par la chaleur humide4. Le Chuanmutong a toujours été obtenu à partir de variétés sauvages, principalement distribuées dans le sud-ouest de la Chine, en particulier dans le Sichuan, où la meilleure qualité peut être trouvée 5,6. Il est difficile de faire la distinction entre les variétés authentiques et leurs adultérants étroitement apparentés en raison de leurs caractéristiques similaires 7,8,9,10. La norme de qualité de Chuanmutong dans l’édition 2020 de la pharmacopée chinoise ne stipule que les propriétés, l’identification microscopique et l’identification sur couche mince sans détermination du contenu, qui ne peuvent pas identifier efficacement les adultérants et présentent donc des risques potentiels. De plus, il existe peu de rapports comparant et identifiant Chuanmutong et les plantes apparentées. Par conséquent, une méthode de contrôle de la qualité pour assurer l’authenticité de Chuanmutong mérite une étude plus approfondie.
Les constituants chimiques de Chuanmutong sont principalement composés de triterpénoïdes pentacycliques de type oléanane et de leurs glycosides, flavonoïdes et acides organiques11,12,13,14. Parmi eux, l’acide oléanolique, le β-sitostérol, le stigmastérol et l’ergostérol ont des effets diurétiques d’intensités différentes, qui peuvent être des substances pharmacodynamiques potentielles pour favoriser la diurèse et soulager la strangurie15,16. Les empreintes chimiques sont obtenues en séparant et en détectant de nombreux composants chimiques contenus dans les échantillons par chromatographie liquide à haute performance (CLHP), chromatographie en phase gazeuse (CG), etc. L’adoption de méthodes d’analyse statistique appropriées pour analyser les caractéristiques de Chuanmutong peut déterminer le contrôle de qualité global et l’identification scientifique de la médecine traditionnelle chinoise17,18,19.
Dans cette étude, 10 lots de variétés authentiques Chuanmutong et cinq lots d’adultérants ont été collectés. Leur qualité a été comparée et analysée par la méthode d’empreintes digitales HPLC combinée à la reconnaissance multi-formes, y compris l’analyse en grappes (AC), l’analyse en composantes principales (ACP), l’analyse orthogonale partielle des moindres carrés (OPLS-CA) et la détermination du contenu de la composante pharmacodynamique. Ce protocole établit une méthode d’identification des variétés authentiques à haute spécificité, une nouvelle stratégie pour l’identification scientifique des variétés authentiques et des adultérants des matières médicinales chinoises.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2017381038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160; Trading Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>WXBD5243V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Sitosterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;C18 column</td>
			<td>Yuexu Material Technology Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>Welch Ultimate LP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Guoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>19020103</td>
			<td>CMT-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200701</td>
			<td>CMT-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200701</td>
			<td>CMT-3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200901</td>
			<td>CMT-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>210701</td>
			<td>CMT-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Haobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>210401</td>
			<td>CMT-6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200901</td>
			<td>CMT-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Wusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>201201</td>
			<td>CMT-8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Limin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>201001</td>
			<td>CMT-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Yuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China</td>
			<td>210501</td>
			<td>CMT-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang</td>
			<td>Madzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>CC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils.</td>
			<td>Heilin Village, Qiliping Township, Hongya County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>DC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis peterae Hand.-Mazz.</td>
			<td>Huangmu Village, Huangmu Township, Hanyuan County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>DE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils</td>
			<td>Mixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>XS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis finetiana Levl. et Vaniot.</td>
			<td>Wannian Village, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>SMT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic balance</td>
			<td>Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai,&#160; China&#160;</td>
			<td>FA1204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ergosterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>2021112602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2017042043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic acid</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>2016062901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High performance liquid chromatography</td>
			<td>Agilent, USA.</td>
			<td>1260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IBM SPSS Statistics version 26.0</td>
			<td>International Business Machines Corporation, USA</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160; Trading Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>WXBD6409V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>202010302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>n-butyl alcohol</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2020071047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petroleum ether</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2020090125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphoric acid</td>
			<td>Comeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>20200110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SESCF-TCM version 2012</td>
			<td>National Pharmacopoeia Commission, China</td>
			<td>-</td>
			<td>http://114.247.108.158:8888/login</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stigmasterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloromethane</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>20200214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Umetrics SIMCA version 14.1.0.2047</td>
			<td>Umetrics, Sweden</td>
			<td>-</td>
			<td>https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water machine</td>
			<td>Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, China</td>
			<td>UPH-II-10T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleaner</td>
			<td>Kunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, China</td>
			<td>KH3200E</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

hplc coupled with chemical fingerprinting for multi-pattern recognition for identifying the authenticity of clematidis armandii caulis

Une méthode d’identification des matériaux médicinaux chinois et de leurs adultérants apparentés a été construite en prenant Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, une médecine traditionnelle chinoise universellement utilisée) comme exemple. Dix lots de variétés authentiques de Chuanmutong et cinq lots d’adultérants apparentés ont été analysés et comparés sur la base des empreintes digitales par chromatographie liquide à haute performance (CLHP) combinées à la chimiométrie, y compris l’analyse en grappes (AC), l’analyse en composantes principales (ACP) et l’analyse orthogonale partielle des moindres carrés (OPLS-DA). En outre, la teneur en β-sitostérol a été déterminée. L’empreinte chimique de contrôle de Chuanmutong a été établie et 12 pics communs ont été identifiés. La similitude entre l’empreinte digitale de 10 lots de variétés authentiques de Chuanmutong et l’empreinte digitale de contrôle était de 0,910-0,989, tandis que la similitude de cinq lots d’adultérants n’était que de 0,133-0,720. Sur la base des pics communs dans le chromatogramme, 15 lots d’échantillons ont été classés en trois niveaux de teneur par PCA, et ont été agrégés en quatre catégories par CA, obtenant une distinction claire entre le Chuanmutong authentique et les adultérants de Chuanmutong. En outre, sept composants différentiels capables d’identifier efficacement les Chuanmutong authentiques et les adultérants de Chuanmutong ont été trouvés grâce à OPLS-DA. La teneur en β-sitostérol de 10 lots de variétés authentiques de Chuanmutong était de 97,53-161,56 μg/g, tandis que la teneur en β-sitostérol des cinq lots d’adultérants variait considérablement, parmi lesquels la teneur en β-sitostérol de Clematis peterae Hand.-Mazz. et Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils. était significativement inférieur à celui des variétés authentiques de Chuanmutong. La méthode de reconnaissance multimodèle par composants de l’indice HPLC et la méthode de reconnaissance multi-formes par empreintes chimiques établies dans cette étude fournissent une nouvelle stratégie pour identifier efficacement les matériaux médicinaux chinois authentiques et les adultérants associés.

Empreinte chromatographique de Chuanmutong et analyse de similarité (SA) Les valeurs RSD du temps de rétention relatif de précision, de répétabilité et de stabilité étaient inférieures à 0,46 %, 1,65 % et 0,53 %, respectivement; les valeurs RSD de la zone de pointe relative étaient inférieures à 4,23%, 3,56% et 3,96%, respectivement. Comme le montrent les figures 1A, B, il y avait 12 pics communs distincts (du pic 1 au pic 12) dans les empreintes HPLC dans <strong class="...

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HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis

Nous présentons ici un protocole pour établir la chromatographie liquide à haute performance (HPLC), couplée à la reconnaissance multi-motifs d’empreintes chimiques par empreintes digitales, qui fournit une nouvelle stratégie pour identifier efficacement les variétés authentiques de Clematidis Armandii Caulis et de ses adultérants.

CLHP couplée à une empreinte chimique pour la reconnaissance multi-motifs afin d’identifier l’authenticité de Clematidis armandii caulis

A method for identifying Chinese medicinal materials and their related adulterants was constructed by taking Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, a ...

Ce protocole peut fournir une nouvelle stratégie pour identifier efficacement les matériaux authentiques de Clematidis armandii caulis et de ses adultérants. Cette méthode peut être utilisée dans la recherche sur la qualité des matériaux médicinaux et fournit une référence pour l’étude des normes de qualité d’autres matériaux médicinaux chinois. Pour commencer la préparation de l’échantillon, broyer la matière première jusqu’à ce qu’elle atteigne une taille de particules uniforme en les faisant passer à travers un maillage en nylon avec un diamètre intérieur approprié.Transférer avec précision peser deux grammes de matière première broyée dans une fiole conique de 50 millilitres bouchée avant d’ajouter 50 millilitres de méthanol dans la fiole. Placer le bouchon sur la fiole dans un ultrason chauffé à 600 watts et 40 kilohertz pendant 30 minutes. À la fin de l’incubation, filtrer la solution d’extrait médicinal à travers le papier filtre.Après filtrage, transférer quatre millilitres de la solution de méthanol contenant les extraits médicinaux dans une fiole jaugée de 10 millilitres. Ensuite, ajoutez-y six millilitres d’eau et mélangez la solution. Laissez la solution reposer pendant 10 minutes.Pour l’analyse CLHP des échantillons. Commencez par préparer les phases mobiles et définissez le programme de gradient HPLC tel que décrit dans le manuscrit. Filtrer l’échantillon à travers une membrane filtrante microporeuse de 0,45 micron et le soumettre à une analyse CLHP.Pour chaque échantillon, effectuez une analyse six fois par jour. Pour évaluer la stabilité de la solution échantillon, analysez la même solution d’échantillon conservée à température ambiante pendant 0, 2, 4, 6, 8, 12 et 24 heures après la préparation. Prélever six répétitions du même échantillon et détecter son empreinte digitale en CLHP.Importez les données pertinentes dans le logiciel nommé Système d’évaluation de la similarité des empreintes chromatographiques de la médecine traditionnelle chinoise ou SESCF TCM version 2012. Importez le temps de rétention et la zone de pic pour les 10 lots d’échantillons authentiques de Chuanmutong ainsi que cinq lots d’adultérants dans SESCF TCM pour analyse. Dans le menu principal, cliquez sur le spectre de référence défini et accédez à la fenêtre des paramètres pour définir l’empreinte chromatographique de référence de l’espèce authentique de Chuanmutong comme référence.Ensuite, définissez la méthode de génération du spectre de contrôle comme méthode médiane avec une largeur de fenêtre temporelle de 0,5. Ensuite, cliquez sur étalonnage multipoint dans le menu principal, sélectionnez les pics, puis sélectionnez l’option de correspondance des pics comme pics marqués. Enfin, cliquez sur Calculer la similarité pour effectuer une analyse de similarité des échantillons basée sur les empreintes digitales chromatographiques de référence de Chuanmutong.Pour effectuer une analyse systémique par grappes, ouvrez le logiciel d’analyse statistique pertinent et cliquez sur le fichier pour importer les données de 10 lots d’échantillons authentiques et de cinq lots d’adultérants dans le logiciel. Dans le menu, sous l’onglet Classification, cliquez sur Analyse et clustering de systèmes. Sélectionnez les zones de pic communes de 10 lots d’échantillons authentiques et de cinq lots d’adultérants comme variables.Définissez le nombre de clusters sur quatre. Ensuite, cliquez sur Méthode pour sélectionner la méthode de clustering comme connexion intergroupe. Choisissez l’intervalle de mesure comme corrélation de Pearson et utilisez l’onglet OK pour dessiner la carte d’analyse de cluster.Pour l’analyse des composants principaux ou l’ACP, ouvrez le logiciel d’analyse des données. Cliquez sur fichier dans le menu et créez un nouveau projet régulier. Importez la zone des pics de 12 pics communs dans une feuille de calcul Excel ou similaire à partir du système HPLC.Appuyez sur le bouton Terminer pour terminer l’importation des données. Pour définir le type de modèle avec PCA, cliquez sur Nouveau pour créer un nouveau modèle, puis ajustez les données à l’aide de l’ajustement automatique et ajoutez des onglets. Accédez aux scores pour obtenir la carte des scores PCA.Pour utiliser l’analyse de discrimination orthogonale partielle des moindres carrés ou OPLSDA. Générez la carte des scores PCA comme illustré précédemment. Définissez le type de modèle avec l’OPLSDA en cliquant sur Nouveau et Nouveau en tant que modèle un Avant de passer à l’échelle en sélectionnant le par pour tous, appuyez ensuite sur AutoFit in scores pour générer la carte de score OPLSDA.Pour estimer l’importance et la projection de la variable, allez dans le menu du logiciel d’analyse de données et allez dans Analyser, puis définissez le nombre sur 200 sous par mutation. Obtenez les valeurs du carré R et du carré Q du score OPLSDA et cliquez sur VIP et VIP prédictif pour obtenir la carte VIP. Les empreintes digitales HPLC des 10 échantillons authentiques de Chuanmutong ont montré 12 pics communs distincts dont le relativement grand et bien résolu.Le pic numéro 10 a été utilisé comme pic de référence pour estimer les temps de rétention relatifs des pics de repos. Les échantillons authentiques ont démontré des degrés de similitude très proches de celui impliquant une grande similitude dans une bonne consistance. Cependant, les degrés de similitude entre les cinq lots d’adultérants et le contrôle Chuanmutong étaient assez faibles.On a observé que les empreintes digitales CLHP des cinq adultérants différaient des échantillons authentiques, principalement dans la région ayant des temps de rétention allant de 28 à 55 minutes. L’ACP a montré une similitude évidente entre les variétés authentiques et leur différence par rapport aux adultérants, à l’exception du CC adultérant.Des résultats similaires ont également été obtenus à partir de l’analyse en grappes lorsque la distance de classification était de 20. La matrice de score générée à partir de l’OPLSDA n’indiquait aucune intersection entre les points d’échantillonnage des échantillons authentiques et les adultérants.Encore une fois, le CC adultérant ressemblait plus aux variétés authentiques qu’aux autres adultérants. Selon la carte VIP, les pics ayant des valeurs supérieures à un ont été identifiés comme les principaux composants marqueurs causant la différence entre les échantillons authentiques et les adultérants. La teneur en bêta-sitostérol, un composant actif trouvé dans Chuanmutong a été détectée dans les cinq lots d’adultérants, mais la teneur variait considérablement.Ce protocole établit diverses méthodes d’analyse pour refléter toutes les informations sur les matériaux médicinaux sous plusieurs angles et tout autour de la façon d’estimer l’authenticité des matériaux médicinaux Chuanmutong.

Research

JoVE Journal

Chemistry

HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis

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