Name: hplc coupled with chemical fingerprinting for multi-pattern recognition for identifying the authenticity of clematidis armandii caulis
Uploaded: 2022-11-11T14:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי פרויקט מינהל הרפואה הסינית המסורתית של סצ'ואן (מס' 2020JC0088, מס' 2021MS203).

1. שיטות לזיהוי טביעות אצבע כימיות
<ol><li>תנאים כרומטוגרפיים<ol><li>מכינים את השלב הנייד אצטוניטריל (A)/מים (B). הגדר תוכנית הדרגתית באופן הבא בתוכנת HPLC: 0-20 דקות, 3% A-10%A; 20-25 דקות, 10% A-13%A; 25-65 דקות, 13% A-25%A; 65-75 דקות, 25% A-40%A; 75-76 דקות, 40% A-3%A; 76-85 דקות, 3% A-3%A.</li>
		<li>שמור על קצב הזרימה של השלב הנייד ב-1.0 מ"ל...

<ol>
	<li>Chen, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Chinese Medicine Specimen Picture Book. , 116 (1935).</li><li>Xiong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lignans+from+the+stems+of+Clematis+armandii+(&amp;#34;Chuan-Mu-Tong&amp;#34;)+and+their+anti-neuroinflammatory+activities.">Lignans from the stems of Clematis armandii (&amp;#34;Chuan-Mu-Tong&amp;#34;) and their anti-neuroinflammatory activities.</a> Journal of Ethnopharmacology. 153 (3), 737-743 (2014).</li><li>Pan, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+lignan+from+the+Chinese+medicinal+plant+Clematis+armandii,+inhibits+A431+cell+growth+via+blocking+p70S6/S6+kinase+pathway.">a lignan from the Chinese medicinal plant Clematis armandii, inhibits A431 cell growth via blocking p70S6/S6 kinase pathway.</a> Integrative Cancer Therapies. 16 (3), 351-359 (2017).</li><li>Chinese Pharmacopoeia Commission. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pharmacopoeia of The People's Republic of China: (Edition 2020). , 38 (2020).</li><li>Wang, D. G., Guo, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Textual+research+on+the+materia+medica+and+authenticity+of+Clematidis+armandii.">Textual research on the materia medica and authenticity of Clematidis armandii.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medicine Research. 18 (11), 2696 (2007).</li><li>Fang, Q. M., Zhang, M., Zhong, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+resources+and+exploitation+of+Caulis+Clematidis+Armandii+in+Sichuan.">The natural resources and exploitation of Caulis Clematidis Armandii in Sichuan.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 20 (5), 404-406 (2005).</li><li>Bai, M. N., Dai, Y. X., Wang, Y., Ren, Y. Y., Tan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+the+identi&#64257;cation+of+Caulis+Clematidis+Armandii.">Study on the identi&#64257;cation of Caulis Clematidis Armandii.</a> Research and Practice on Chinese Medicines. 31 (3), 13-16 (2017).</li><li>Zhou, P. J., Li, X. F., Fu, D. H., Pu, X. Y., Zhu, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacognosy+identification+of+Ethnomedicine+Clematis+ranunculoides+Franchet.">Pharmacognosy identification of Ethnomedicine Clematis ranunculoides Franchet.</a> Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. 34 (3), 432-436 (2017).</li><li>Guo, J. L., Tang, Y., Pei, J., Wang, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+random+amplified+polymorphic+DNA+and+sequence+characterized+amplified+regions+of+Caulis+Clematidis+Armandii.">Study on random amplified polymorphic DNA and sequence characterized amplified regions of Caulis Clematidis Armandii.</a> Journal of Chengdu Medical College. 6 (4), 283-286 (2011).</li><li>Liu, M. Z., Li, M. N., Yao, H., Liu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identification+of+Clematidis+Armandii+Caulis+and+its+adulterants+and+closely+related+species+by+ITS2+sequence.">Molecular identification of Clematidis Armandii Caulis and its adulterants and closely related species by ITS2 sequence.</a> Global Traditional Chinese Medicine. 4 (6), 446-450 (2011).</li><li>Liu, J. J., Chen, X., Wei, Z. Q., Li, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+constituents+and+identification+of+the+caules+of+Clematis+armandii+Franch.and+Clematis+montana+Buch.-Ham.">Chemical constituents and identification of the caules of Clematis armandii Franch.and Clematis montana Buch.-Ham.</a> Natural Product Research and Development. 22 (6), 998-1000 (2010).</li><li>Yang, T. R., Xu, Z., Shi, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+four+compounds+from+Clematis+Montana.">Studies on four compounds from Clematis Montana.</a> Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine. 10 (4), 142-143 (2008).</li><li>Yan, L. H., Xu, L. Z., Zhou, Z. M., Yang, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+constituents+from+stems+of+Clematis+armandii(I).">Chemical constituents from stems of Clematis armandii(I).</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 38 (3), 340-342 (2007).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traditional+uses,+phytochemistry,+pharmacology,+and+toxicology+of+Akebiae+Caulis+and+its+synonyms:+A+review.">Traditional uses, phytochemistry, pharmacology, and toxicology of Akebiae Caulis and its synonyms: A review.</a> Journal of Ethnopharmacology. 277, 114245 (2021).</li><li>Ye, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diuretic+effect+and+material+basis+of+Clematidis+Armandii+Caulis+in+rats.">Diuretic effect and material basis of Clematidis Armandii Caulis in rats.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 44 (9), 1889-1894 (2019).</li><li>Kuang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consistency+study+of+Caulis+Clematidis+Armandii+and+its+traditionally+used+products+and+counterfeit+species+based+on+efficacy+and+pharmacognosy.">Consistency study of Caulis Clematidis Armandii and its traditionally used products and counterfeit species based on efficacy and pharmacognosy.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 36 (3), 115-121 (2020).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+assessment+of+Asarum+heterotropoides+var.+mandshuricum+based+on+HPLC+multi-component+determination+and+multiple+pattern+recognition+method+of+fingerprint.">Quality assessment of Asarum heterotropoides var. mandshuricum based on HPLC multi-component determination and multiple pattern recognition method of fingerprint.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 238-243 (2022).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+multi-components+of+Paeoniae+Alba+Radix+based+on+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition.">Determination of multi-components of Paeoniae Alba Radix based on fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 231-237 (2022).</li><li>Li, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+investigation+for+raw+and+processed+products+of+Euodiae+Fructus+based+on+high-performance+liquid+chromatography+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition.">Comparative investigation for raw and processed products of Euodiae Fructus based on high-performance liquid chromatography fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chemistry &amp; Biodiversity. 18 (8), 2100281 (2021).</li><li>Dong, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+suitable+distribution+areas+of+Kawa+Kimichi+produced+in+Sichuan+province-based+on+remote+sensing+and+GIS-A+case+study+of+Clematis+Armandii.">Study on suitable distribution areas of Kawa Kimichi produced in Sichuan province-based on remote sensing and GIS-A case study of Clematis Armandii.</a> Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology. 17 (11), 2398-2404 (2015).</li><li>Tang, S. W., Pei, J., Li, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+and+histological+identification+of+Chuanmutong.">Morphological and histological identification of Chuanmutong.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 15 (1), 19-21 (2000).</li><li>Li, B., Chen, X., Fang, Q. M., Zhang, B. J., Wei, Z. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+Research+of+Chuanmutong.">Quality Research of Chuanmutong.</a> Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine. 27 (6), 58-60 (2009).</li><li>Wu, W. J., Wan, M. M., Cao, Y. H., Tan, R., Song, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+on+the+Quality+Standard+of+Chuanmutong.">Research on the Quality Standard of Chuanmutong.</a> Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 33 (2), 313-315 (2015).</li><li>Wei, Z. Q., Chen, X., Li, B., Dong, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+stigmasterol+in+Clematis+armandii+Franch+and+Clematis+montana+Buch-Ham.+by+HPLC.">Determination of stigmasterol in Clematis armandii Franch and Clematis montana Buch-Ham. by HPLC.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 20 (3), 574-575 (2009).</li><li>Qing, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+oleanolic+acid+in+Caulis+clematidis+armandii+by+HPLC.">Determination of oleanolic acid in Caulis clematidis armandii by HPLC.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 21 (3), 273-274 (2006).</li><li>Yang, S. D., Wang, R., Fu, D. Y., Guo, J. J., Tan, W. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+on+oleanolic+acid+in+caulis+clematidis+armandii+by+microwave+assisted+extraction-HPLC/MS.">Determination on oleanolic acid in caulis clematidis armandii by microwave assisted extraction-HPLC/MS.</a> Anhui Academy of Agricultural Sciences. 38 (13), 6929-6931 (2010).</li></ol>

איסוף הדגימות למחקר הוא צעד המפתח הראשון לבניית זיהוי רב-תבניות בזיהוי האותנטיות של חומרי מרפא סיניים. באמצעות מחקר שוק, מצאנו כי סצ'ואן יאן, ליאנגשאן ולשאן הם אזורי הייצור העיקריים של משאבי הבר של צ'ואנמוטונג. גם לזנים הקשורים של אותו סוג יש אותה תפוצה גיאוגרפית 6,20<sup class...

צ'ואנמוטונג, קאולי יבש של קלמטיס ארמנדי פראנץ'. או Clematis מונטנה Buch.-Ham., היא רפואה סינית מסורתית המשמשת בדרך כלל במרפאות 1,2,3. הוא משמש לטיפול בבעיות במתן שתן, בצקת, פצעים על הלשון והפה, ירידה בהפרשת חלב, נוקשות במפרקים וכאבי שרירים הנגרמים על ידי חום לח4. Chuanmutong תמיד הושג מזני בר, המופצים בעיקר בדרום מערב סין, במיוחד בסצ'ואן, שם ניתן למצוא את האיכות הטובה ביותר 5,6. קשה להבחין בין זנים אותנטיים לבין ניאוף קרוב שלהם בשל המאפיינים הדומים שלהם 7,8,9,10. תקן האיכות של Chuanmutong במהדורת 2020 של הפרמקופיאה הסינית קובע רק את המאפיינים, הזיהוי המיקרוסקופי וזיהוי השכבה הדקה ללא קביעת תוכן, שאינם יכולים לזהות ביעילות ניאוף, ולכן יש סיכונים פוטנציאליים. יתר על כן, ישנם דיווחים מעטים המשווים ומזהים צ'ואנמוטונג וצמחים קשורים. כתוצאה מכך, שיטת בקרת איכות כדי להבטיח את האותנטיות של Chuanmutong ראוי למחקר נוסף.
המרכיבים הכימיים של צ'ואנמוטונג מורכבים בעיקר מטריטרפנואידים פנטציקליים מסוג אולנאן והגליקוזידים, הפלבנואידים והחומצות האורגניותשלהם 11,12,13,14. ביניהם, חומצה אולאנולית, β-סיטוסטרול, סטיגמסטרול וארגוסטרול יש השפעות משתנות בעוצמות שונות, אשר עשוי להיות חומרים פרמקודינמיים פוטנציאליים לקידום diuresis והקלה על חנק15,16. טביעות אצבע כימיות מתקבלות על ידי הפרדה וגילוי של רכיבים כימיים רבים הכלולים בדגימות על ידי כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC), כרומטוגרפיית גז (GC) וכו '. אימוץ שיטות ניתוח סטטיסטיות מתאימות לניתוח המאפיינים של Chuanmutong יכול לקבוע את בקרת האיכות הכוללת ואת הזיהוי המדעי של הרפואה הסינית המסורתית17,18,19.
במחקר זה נאספו 10 אצוות של זנים אותנטיים של צ'ואנמוטונג וחמש אצוות של ניאוף. איכותם הושוותה ונותחה על ידי שיטת טביעת האצבע HPLC בשילוב עם זיהוי רב-תבניות, כולל ניתוח אשכולות (CA), ניתוח רכיבים עיקריים (PCA), ניתוח אפליה אורתוגונלית חלקית של ריבועים לפחות (OPLS-CA), וקביעת תוכן של הרכיב הפרמקודינמי. פרוטוקול זה קובע שיטה לזיהוי זנים אותנטיים עם ספציפיות גבוהה, אסטרטגיה חדשה לזיהוי מדעי של זנים אותנטיים וניאוף של חומרי מרפא סיניים.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2017381038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160; Trading Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>WXBD5243V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Sitosterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;C18 column</td>
			<td>Yuexu Material Technology Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>Welch Ultimate LP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Guoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>19020103</td>
			<td>CMT-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200701</td>
			<td>CMT-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200701</td>
			<td>CMT-3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200901</td>
			<td>CMT-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>210701</td>
			<td>CMT-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Haobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>210401</td>
			<td>CMT-6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200901</td>
			<td>CMT-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Wusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>201201</td>
			<td>CMT-8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Limin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>201001</td>
			<td>CMT-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Yuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China</td>
			<td>210501</td>
			<td>CMT-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang</td>
			<td>Madzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>CC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils.</td>
			<td>Heilin Village, Qiliping Township, Hongya County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>DC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis peterae Hand.-Mazz.</td>
			<td>Huangmu Village, Huangmu Township, Hanyuan County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>DE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils</td>
			<td>Mixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>XS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis finetiana Levl. et Vaniot.</td>
			<td>Wannian Village, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>SMT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic balance</td>
			<td>Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai,&#160; China&#160;</td>
			<td>FA1204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ergosterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>2021112602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2017042043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic acid</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>2016062901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High performance liquid chromatography</td>
			<td>Agilent, USA.</td>
			<td>1260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IBM SPSS Statistics version 26.0</td>
			<td>International Business Machines Corporation, USA</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160; Trading Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>WXBD6409V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>202010302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>n-butyl alcohol</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2020071047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petroleum ether</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2020090125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphoric acid</td>
			<td>Comeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>20200110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SESCF-TCM version 2012</td>
			<td>National Pharmacopoeia Commission, China</td>
			<td>-</td>
			<td>http://114.247.108.158:8888/login</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stigmasterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloromethane</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>20200214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Umetrics SIMCA version 14.1.0.2047</td>
			<td>Umetrics, Sweden</td>
			<td>-</td>
			<td>https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water machine</td>
			<td>Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, China</td>
			<td>UPH-II-10T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleaner</td>
			<td>Kunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, China</td>
			<td>KH3200E</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

hplc coupled with chemical fingerprinting for multi-pattern recognition for identifying the authenticity of clematidis armandii caulis

שיטה לזיהוי חומרי מרפא סיניים וחומרי הניאוף הקשורים אליהם נבנתה על ידי לקיחת Clematidis Armandii Caulis (צ'ואנמוטונג, רפואה סינית מסורתית בשימוש אוניברסלי) כדוגמה. עשר אצוות של זני צ'ואנמוטונג מקוריים וחמש אצוות של ניאוף קשורים נותחו והושוו בהתבסס על טביעות האצבע של הכרומטוגרפיה הנוזלית בעלת הביצועים הגבוהים (HPLC) בשילוב עם כימומטריה, כולל ניתוח אשכולות (CA), ניתוח רכיבים עיקריים (PCA) וניתוח אפליה אורתוגונלית של ריבועים מינימליים (OPLS-DA). בנוסף, התוכן של β-sitosterol נקבע. טביעת האצבע הכימית של צ'ואנמוטונג הוקמה, וזוהו 12 פסגות נפוצות. הדמיון בין טביעת האצבע של 10 אצוות של זני צ'ואנמוטונג מקוריים לבין טביעת האצבע של הבקרה היה 0.910-0.989, בעוד שהדמיון בין חמש אצוות של ניאוף היה רק 0.133-0.720. בהתבסס על הפסגות הנפוצות בכרומטוגרמה, 15 אצוות של דגימות סווגו לשלוש רמות תוכן על ידי PCA, ונצברו לארבע קטגוריות על ידי CA, והשיגו הבחנה ברורה בין צ'ואנמוטונג אותנטי לבין ניאוף של צ'ואנמוטונג. יתר על כן, שבעה מרכיבים דיפרנציאליים שיכולים לזהות ביעילות צ'ואנמוטונג אותנטי וחומרי ניאוף של צ'ואנמוטונג נמצאו באמצעות OPLS-DA. תכולת β-סיטוסטרול של 10 אצוות של זני צ'ואנמוטונג מקוריים הייתה 97.53-161.56 מיקרוגרם/גרם, בעוד שתכולת β-סיטוסטרול של חמש קבוצות הניאוף הייתה שונה מאוד, ביניהן תכולת β-סיטוסטרול של Clematis peterae Hand.-Mazz. וקלמטיס גוריאנה רוקסב. ו. פינתי רהד. et Wils. היה נמוך משמעותית מזה של זנים אותנטיים של Chuanmutong. תכולת רכיבי אינדקס HPLC ושיטת זיהוי טביעות אצבע כימיות מרובות תבניות שנקבעו במחקר זה מספקות אסטרטגיה חדשה לזיהוי יעיל של חומרי מרפא סיניים אותנטיים וחומרי ניאוף קשורים.

טביעת אצבע כרומטוגרפית של צ'ואנמוטונג וניתוח דמיון (SA) ערכי ה-RSD של זמן השמירה היחסי של דיוק, חזרתיות ויציבות היו מתחת ל-0.46%, 1.65% ו-0.53%, בהתאמה; ערכי ה-RSD של אזור השיא היחסי היו נמוכים מ-4.23%, 3.56% ו-3.96%, בהתאמה. כפי שניתן לראות באיורים 1A,B, היו 12 פסגות משותפות שונות (משיא 1 עד ...

Watch this Scientific Journal Video about HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis at JoVE.com

HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לביסוס כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC), בשילוב עם זיהוי רב-תבניות של טביעות אצבע כימיות, המספק אסטרטגיה חדשה לזיהוי יעיל של הזנים האמיתיים של Clematidis Armandii Caulis וחומרי הניאוף שלו.

HPLC בשילוב עם טביעת אצבע כימית לזיהוי תבניות מרובות לזיהוי האותנטיות של קלמטידיס ארמנדי קאולי

A method for identifying Chinese medicinal materials and their related adulterants was constructed by taking Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, a ...

פרוטוקול זה יכול לספק אסטרטגיה חדשה לזיהוי יעיל של החומרים המקוריים של קאולית Clematidis armandii וחומרי הניאוף שלה. שיטה זו יכולה לשמש במחקר איכות החומר הרפואי והיא מספקת התייחסות לחקר תקני האיכות של חומרים רפואיים סיניים אחרים. כדי להתחיל בהכנת הדגימה טוחנים את חומר הגלם לגודל חלקיקים אחיד על ידי העברתם דרך רשת ניילון בקוטר פנימי מתאים.ההעברה שקלה במדויק שני גרם של חומר הגלם הטחון לתוך בקבוק חרוטי של 50 מיליליטר לפני הוספת 50 מיליליטר של מתנול לתוך הצלוחית. שים את הפקק על הבקבוק ב קולי מחומם ב 600 וואט ו 40 קילוהרץ במשך 30 דקות. בסוף הדגירה, מסננים את תמיסת התמצית הרפואית דרך נייר הסינון.לאחר מאמץ, מעבירים ארבעה מיליליטר מתמיסת המתנול המכילה את התמציות הרפואיות לתוך בקבוק נפחי של 10 מיליליטר. לאחר מכן מוסיפים שישה מיליליטר מים אליו ומערבבים את הפתרון. אפשר את הפתרון להתיישב במשך 10 דקות.לניתוח HPLC של הדגימות. התחל על ידי הכנת השלבים הניידים והגדר את תוכנית ההדרגה של HPLC כמתואר בכתב היד. סנן את הדגימה דרך קרום מסנן מיקרו-נקבובי בגודל 0.45 מיקרון והכפיף אותה לניתוח HPLC.עבור כל מדגם, בצע ניתוח שש פעמים ביום. כדי להעריך את היציבות של תמיסת הדגימה, נתח את אותה תמיסת דגימה המאוחסנת בטמפרטורת החדר עבור 0, 2, 4, 6, 8, 12 ו- 24 שעות לאחר ההכנה. קח שישה עותקים משוכפלים של אותה דגימה וזהה את טביעת האצבע שלה ב-HPLC.ייבא את הנתונים הרלוונטיים לתוכנה בשם מערכת הערכת דמיון של טביעות אצבע כרומטוגרפיות של רפואה סינית מסורתית או SESCF TCM גרסה 2012. ייבא את זמן השמירה ואזור השיא עבור כל 10 האצוות של דגימות צ'ואנמוטונג אותנטיות, כמו גם חמש אצוות של ניאוף לתוך SESCF TCM לניתוח. בתפריט הראשי, לחץ על ספקטרום הייחוס שנקבע ועבור לחלון הגדרות הפרמטרים כדי להגדיר את טביעת האצבע הכרומטוגרפית של המין האותנטי של Chuanmutong כהפניה.לאחר מכן, הגדר את שיטת יצירת ספקטרום הבקרה כשיטה החציונית עם רוחב חלון הזמן של 0.5. לאחר מכן, לחץ על כיול מרובה נקודות בתפריט הראשי, בחר את הפסגות ולאחר מכן בחר באפשרות התאמת השיא כפסגות מסומנות. לבסוף, לחץ על חשב דמיון כדי לבצע ניתוח דמיון של הדגימות בהתבסס על טביעות האצבע הכרומטוגרמיות של צ'ואנמוטונג.כדי לבצע ניתוח אשכולות מערכתי פתח תוכנת ניתוח סטטיסטית רלוונטית, ולחץ על הקובץ כדי לייבא את הנתונים של 10 אצוות של דגימות אותנטיות וחמש אצוות של ניאוף לתוך התוכנה. בתפריט, תחת הכרטיסיה סיווג עבור אל לחץ על ניתוח ואשכולות מערכת. בחר את אזורי השיא המשותפים של 10 אצוות של דגימות אותנטיות וחמש אצוות של ניאוף כמשתנים.הגדר את מספר האשכולות לארבעה. לאחר מכן, לחץ על שיטה כדי לבחור את שיטת האשכולות כחיבור בין קבוצות. בחר את מרווח המדידה כמתאם פירסון והשתמש בכרטיסיה בסדר כדי לצייר את מפת ניתוח האשכולות.לניתוח רכיבים עקרוניים או PCA, פתח את תוכנת ניתוח הנתונים. לחץ על קובץ בתפריט, וצור פרויקט רגיל חדש. יבא את אזור השיא של 12 פסגות נפוצות בגיליון אלקטרוני של Excel או בגיליון אלקטרוני דומה ממערכת HPLC.הכה את סיום כפתור להשלמת ייבוא הנתונים. כדי להגדיר את סוג הדגם עם PCA, לחץ על חדש כדי ליצור מודל חדש ולאחר מכן התאם את הנתונים באמצעות התאמה אוטומטית והוסף כרטיסיות. עבור אל ציונים כדי לקבל את מפת ציוני PCA.כדי להשתמש בניתוח האפליה של ריבועים לפחות חלקיים אורתוגונליים או OPLSDA. צור את מפת ציוני ה- PCA כפי שהודגם קודם לכן. הגדר את סוג המודל עם OPLSDA על-ידי לחיצה על חדש וחדש כמודל אחד לפני שתעבור לקנה מידה בבחירת par עבור כולם, ולאחר מכן לחץ על התאמה אוטומטית בניקוד כדי ליצור את מפת התוצאות של OPLSDA.כדי להעריך את החשיבות המשתנה ואת ההקרנה, עבור לתפריט תוכנת ניתוח הנתונים ועבור אל נתח ולאחר מכן הגדר את המספר ל-200 מתחת לכל מוטציה. קבל את הערכים הריבועיים R ו- Q מציון OPLSDA ולחץ על חיזוי VIP ו- VIP כדי לקבל את מפת ה- VIP. טביעות אצבע HPLC של 10 דגימות צ'ואנמוטונג אותנטיות הראו 12 פסגות משותפות נפרדות, מתוכן הגדולות יחסית ונפתרו היטב.שיא מספר 10 שימש כשיא הייחוס כדי להעריך את זמני השמירה היחסיים של פסגות השאר. הדגימות האותנטיות הדגימו דרגות דמיון קרובות מאוד לאחת מהן המרמזות על דמיון גבוה בעקביות טובה. עם זאת, דרגות הדמיון בין חמש קבוצות הניאוף לבין צ'ואנמוטונג הבקרה היו נמוכות למדי.טביעות האצבע של HPLC של חמשת הנואפים נצפו כשונות מהדגימות האותנטיות, בעיקר באזור בעל זמני שמירה הנעים בין 28 ל -55 דקות. PCA הראה דמיון ברור בין הזנים האותנטיים לבין ההבדל ביניהם לבין הניאוף CC.תוצאות דומות התקבלו גם מניתוח אשכולות כאשר מרחק הסיווג היה 20. מטריצת הניקוד שנוצרה מ- OPLSDA לא הצביעה על שום צומת בין נקודות הדגימה של דגימות אותנטיות לבין הניאוף.שוב, CC נואף דומה לזנים האותנטיים יותר משאר הניאוף. על פי מפת ה-VIP, פסגות בעלות ערכים גדולים מאחד זוהו כמרכיבי הסמן העיקריים הגורמים להבדל בין דגימות אותנטיות לבין הניאוף. התוכן של בטא-סיטוסטרול, מרכיב פעיל שנמצא בצ'ואנמוטונג זוהה בכל חמש הקבוצות של ניאוף, אך התוכן השתנה מאוד.פרוטוקול זה קובע שיטות ניתוח שונות כדי לשקף את כל המידע על חומרים רפואיים מזוויות רבות ובכל רחבי הדרך כדי להעריך את האותנטיות של חומרים רפואיים Chuanmutong.

Research

JoVE Journal

Chemistry

HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis

Preparation of Highly Porous Coordination Polymer Coatings on Macroporous Polymer Monoliths for Enhanced Enrichment of Phosphopeptides

הכנת תיאום מאוד נקבובי פולימר ציפויים על מונוליתים פולימר Macroporous להעשרה משופרת של Phosphopeptides

We describe a protocol for the preparation of hybrid materials based on highly porous coordination polymer coatings on the internal surface of macroporous ...

Facile Synthesis of Worm-like Micelles by Visible Light Mediated Dispersion Polymerization Using Photoredox Catalyst

סינתזה קלילה של Micelles תולעת דמוית ידי גלוי אור מתווכת פילמור נפיצה שימוש Photoredox Catalyst

Presented herein is a protocol for the facile synthesis of worm-like micelles by visible light mediated dispersion polymerization. This approach begins ...

Determining the Chemical Composition of Corrosion Inhibitor/Metal Interfaces with XPS: Minimizing Post Immersion Oxidation

קביעת ההרכב הכימי של ממשקי קורוזיה מונעים / מתכת עם XPS: חמצון טבילת הודעת מזעור

An approach for acquiring more reliable X-ray photoelectron spectroscopy data from corrosion inhibitor/metal interfaces is described. More specifically, ...

A Straightforward Method for Glucosinolate Extraction and Analysis with High-pressure Liquid Chromatography (HPLC)

A Straightforward Method for Glucosinolate Extraction and Analysis with High-pressure Liquid Chromatography HPLC

שיטה פשוטה עבור Glucosinolate הפקה וניתוח עם כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה (HPLC)

Glucosinolates are a well-studied and highly diverse class of natural plant compounds. They play important roles in plant resistance, rapeseed oil ...

Chemical Precipitation Method for the Synthesis of Nb2O5 Modified Bulk Nickel Catalysts with High Specific Surface Area

Chemical Precipitation Method for the Synthesis of Nb2O5 Modified Bulk Nickel Catalysts with High Specific Surface Area

שיטת משקעים כימיים לסינתזה של Nb2O5 ששינה בצובר זרזים ניקל עם סגולי גבוה

We demonstrate a method for the synthesis of NixNb1-xO catalysts with sponge-like and fold-like nanostructures. By varying the Nb:Ni ratio, a series of ...

Methionine Functionalized Biocompatible Block Copolymers for Targeted Plasmid DNA Delivery

מתיונין מתפקד ביולוגית ביויוננים בלוק תואם למשלוח דנ א ממוקד

Reversible addition-fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization integrates the advantages of radical polymerization and living polymerization. This ...

Extraction of Lignin with High &#946;-O-4 Content by Mild Ethanol Extraction and Its Effect on the Depolymerization Yield

מיצוי של ליגנין עם תכולה גבוהה של β-O-4 על-ידי הפקת אתנול מתון והשפעתו על התשואה Depolymerization

Lignin valorization strategies are a key factor for achieving more economically competitive biorefineries based on lignocellulosic biomass. Most of the ...

A Two-Step Pyrolysis-Gas Chromatography Method with Mass Spectrometric Detection for Identification of Tattoo Ink Ingredients and Counterfeit Products

דו-שלב פירוליזה-גז כרומטוגרפיה שיטה עם זיהוי ספקטרומטרי המוני לזיהוי של החומרים דיו קעקועים מוצרים מזויפים

Tattoo inks are complex mixtures of ingredients. Each of them possesses different chemical properties which have to be addressed upon chemical analysis. ...

Tuning the Acidity of Pt/ CNTs Catalysts for Hydrodeoxygenation of Diphenyl Ether

כוונון החומציות של מזרזים Pt/CNTs להידרוחמצון אתר

We herein present a method for the synthesis of HNbWO6, HNbMoO6, HTaWO6 solid acid nanosheet modified Pt/CNTs. By varying the weight of various solid acid ...

Integrated Cell Manipulation Platform Coupled with the Single-probe for Mass Spectrometry Analysis of Drugs and Metabolites in Single Suspension Cells

משולב תאים מניפולציה פלטפורמה ביחד עם יחיד-בדיקה עבור ניתוח ספקטרומטר המסה של תרופות מטבוליטים בתאים ההשעיה יחיד

Single cell mass spectrometry (SCMS) enables sensitive detection and accurate analysis of broad ranges of cellular species on the individual-cell level. ...