Name: hplc coupled with chemical fingerprinting for multi-pattern recognition for identifying the authenticity of clematidis armandii caulis
Uploaded: 2022-11-11T14:40:00
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Questo lavoro è stato sostenuto dal Progetto della Sichuan Traditional Chinese Medicine Administration (n. 2020JC0088, n. 2021MS203).

1. Metodi per il rilevamento chimico delle impronte digitali
<ol><li>Condizioni cromatografiche<ol><li>Preparare la fase mobile acetonitrile (A)/acqua (B). Impostare un programma di gradiente come segue nel software HPLC: 0-20 min, 3% A-10% A; 20-25 min, 10%A-13%A; 25-65 min, 13%A-25%A; 65-75 min, 25%A-40%A; 75-76 min, 40%A-3%A; 76-85 min, 3%A-3%A.</li>
		<li>Mantenere la portata della fase mobile a 1,0 ml/min.</li>
		<li>Effettuare la separazione cromatografica su una colonna C18 (250 mm x 4,6 mm, 5 ?...

<ol>
	<li>Chen, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Chinese Medicine Specimen Picture Book. , 116 (1935).</li><li>Xiong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lignans+from+the+stems+of+Clematis+armandii+(&amp;#34;Chuan-Mu-Tong&amp;#34;)+and+their+anti-neuroinflammatory+activities.">Lignans from the stems of Clematis armandii (&amp;#34;Chuan-Mu-Tong&amp;#34;) and their anti-neuroinflammatory activities.</a> Journal of Ethnopharmacology. 153 (3), 737-743 (2014).</li><li>Pan, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+lignan+from+the+Chinese+medicinal+plant+Clematis+armandii,+inhibits+A431+cell+growth+via+blocking+p70S6/S6+kinase+pathway.">a lignan from the Chinese medicinal plant Clematis armandii, inhibits A431 cell growth via blocking p70S6/S6 kinase pathway.</a> Integrative Cancer Therapies. 16 (3), 351-359 (2017).</li><li>Chinese Pharmacopoeia Commission. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pharmacopoeia of The People's Republic of China: (Edition 2020). , 38 (2020).</li><li>Wang, D. G., Guo, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Textual+research+on+the+materia+medica+and+authenticity+of+Clematidis+armandii.">Textual research on the materia medica and authenticity of Clematidis armandii.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medicine Research. 18 (11), 2696 (2007).</li><li>Fang, Q. M., Zhang, M., Zhong, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+resources+and+exploitation+of+Caulis+Clematidis+Armandii+in+Sichuan.">The natural resources and exploitation of Caulis Clematidis Armandii in Sichuan.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 20 (5), 404-406 (2005).</li><li>Bai, M. N., Dai, Y. X., Wang, Y., Ren, Y. Y., Tan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+the+identi&#64257;cation+of+Caulis+Clematidis+Armandii.">Study on the identi&#64257;cation of Caulis Clematidis Armandii.</a> Research and Practice on Chinese Medicines. 31 (3), 13-16 (2017).</li><li>Zhou, P. J., Li, X. F., Fu, D. H., Pu, X. Y., Zhu, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacognosy+identification+of+Ethnomedicine+Clematis+ranunculoides+Franchet.">Pharmacognosy identification of Ethnomedicine Clematis ranunculoides Franchet.</a> Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. 34 (3), 432-436 (2017).</li><li>Guo, J. L., Tang, Y., Pei, J., Wang, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+random+amplified+polymorphic+DNA+and+sequence+characterized+amplified+regions+of+Caulis+Clematidis+Armandii.">Study on random amplified polymorphic DNA and sequence characterized amplified regions of Caulis Clematidis Armandii.</a> Journal of Chengdu Medical College. 6 (4), 283-286 (2011).</li><li>Liu, M. Z., Li, M. N., Yao, H., Liu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identification+of+Clematidis+Armandii+Caulis+and+its+adulterants+and+closely+related+species+by+ITS2+sequence.">Molecular identification of Clematidis Armandii Caulis and its adulterants and closely related species by ITS2 sequence.</a> Global Traditional Chinese Medicine. 4 (6), 446-450 (2011).</li><li>Liu, J. J., Chen, X., Wei, Z. Q., Li, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+constituents+and+identification+of+the+caules+of+Clematis+armandii+Franch.and+Clematis+montana+Buch.-Ham.">Chemical constituents and identification of the caules of Clematis armandii Franch.and Clematis montana Buch.-Ham.</a> Natural Product Research and Development. 22 (6), 998-1000 (2010).</li><li>Yang, T. R., Xu, Z., Shi, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+four+compounds+from+Clematis+Montana.">Studies on four compounds from Clematis Montana.</a> Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine. 10 (4), 142-143 (2008).</li><li>Yan, L. H., Xu, L. Z., Zhou, Z. M., Yang, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+constituents+from+stems+of+Clematis+armandii(I).">Chemical constituents from stems of Clematis armandii(I).</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 38 (3), 340-342 (2007).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traditional+uses,+phytochemistry,+pharmacology,+and+toxicology+of+Akebiae+Caulis+and+its+synonyms:+A+review.">Traditional uses, phytochemistry, pharmacology, and toxicology of Akebiae Caulis and its synonyms: A review.</a> Journal of Ethnopharmacology. 277, 114245 (2021).</li><li>Ye, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diuretic+effect+and+material+basis+of+Clematidis+Armandii+Caulis+in+rats.">Diuretic effect and material basis of Clematidis Armandii Caulis in rats.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 44 (9), 1889-1894 (2019).</li><li>Kuang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consistency+study+of+Caulis+Clematidis+Armandii+and+its+traditionally+used+products+and+counterfeit+species+based+on+efficacy+and+pharmacognosy.">Consistency study of Caulis Clematidis Armandii and its traditionally used products and counterfeit species based on efficacy and pharmacognosy.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 36 (3), 115-121 (2020).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+assessment+of+Asarum+heterotropoides+var.+mandshuricum+based+on+HPLC+multi-component+determination+and+multiple+pattern+recognition+method+of+fingerprint.">Quality assessment of Asarum heterotropoides var. mandshuricum based on HPLC multi-component determination and multiple pattern recognition method of fingerprint.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 238-243 (2022).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+multi-components+of+Paeoniae+Alba+Radix+based+on+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition.">Determination of multi-components of Paeoniae Alba Radix based on fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 231-237 (2022).</li><li>Li, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+investigation+for+raw+and+processed+products+of+Euodiae+Fructus+based+on+high-performance+liquid+chromatography+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition.">Comparative investigation for raw and processed products of Euodiae Fructus based on high-performance liquid chromatography fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chemistry &amp; Biodiversity. 18 (8), 2100281 (2021).</li><li>Dong, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+suitable+distribution+areas+of+Kawa+Kimichi+produced+in+Sichuan+province-based+on+remote+sensing+and+GIS-A+case+study+of+Clematis+Armandii.">Study on suitable distribution areas of Kawa Kimichi produced in Sichuan province-based on remote sensing and GIS-A case study of Clematis Armandii.</a> Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology. 17 (11), 2398-2404 (2015).</li><li>Tang, S. W., Pei, J., Li, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+and+histological+identification+of+Chuanmutong.">Morphological and histological identification of Chuanmutong.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 15 (1), 19-21 (2000).</li><li>Li, B., Chen, X., Fang, Q. M., Zhang, B. J., Wei, Z. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+Research+of+Chuanmutong.">Quality Research of Chuanmutong.</a> Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine. 27 (6), 58-60 (2009).</li><li>Wu, W. J., Wan, M. M., Cao, Y. H., Tan, R., Song, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+on+the+Quality+Standard+of+Chuanmutong.">Research on the Quality Standard of Chuanmutong.</a> Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 33 (2), 313-315 (2015).</li><li>Wei, Z. Q., Chen, X., Li, B., Dong, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+stigmasterol+in+Clematis+armandii+Franch+and+Clematis+montana+Buch-Ham.+by+HPLC.">Determination of stigmasterol in Clematis armandii Franch and Clematis montana Buch-Ham. by HPLC.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 20 (3), 574-575 (2009).</li><li>Qing, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+oleanolic+acid+in+Caulis+clematidis+armandii+by+HPLC.">Determination of oleanolic acid in Caulis clematidis armandii by HPLC.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 21 (3), 273-274 (2006).</li><li>Yang, S. D., Wang, R., Fu, D. Y., Guo, J. J., Tan, W. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+on+oleanolic+acid+in+caulis+clematidis+armandii+by+microwave+assisted+extraction-HPLC/MS.">Determination on oleanolic acid in caulis clematidis armandii by microwave assisted extraction-HPLC/MS.</a> Anhui Academy of Agricultural Sciences. 38 (13), 6929-6931 (2010).</li></ol>

La raccolta di campioni per la ricerca è il primo passo chiave per costruire il riconoscimento multi-pattern nell'identificazione dell'autenticità dei materiali medicinali cinesi. Attraverso ricerche di mercato, abbiamo scoperto che Sichuan Ya'an, Liangshan e Leshan sono le principali aree di produzione delle risorse selvatiche di Chuanmutong. Anche le varietà affini dello stesso genere hanno la stessa distribuzione geografica 6,20; CC, DC, DE, XS e SMT sono s...

Chuanmutong, Caulis secco di Clematis armandii Franch. o Clematis montana Buch.-Ham., è una medicina tradizionale cinese comunemente usata nelle cliniche 1,2,3. È usato per il trattamento di problemi urinari, edema, piaghe sulla lingua e sulla bocca, diminuzione della secrezione di latte, rigidità articolare e dolori muscolari causati dal calore umido4. Chuanmutong è sempre stato ottenuto da varietà selvatiche, distribuite principalmente nel sud-ovest della Cina, in particolare nel Sichuan, dove la migliore qualità può essere trovata 5,6. È difficile distinguere tra varietà autentiche e adulteranti strettamente correlati a causa delle loro caratteristiche simili 7,8,9,10. Lo standard di qualità di Chuanmutong nell'edizione 2020 della Farmacopea cinese stabilisce solo le proprietà, l'identificazione microscopica e l'identificazione dello strato sottile senza determinazione del contenuto, che non possono identificare efficacemente gli adulteranti e quindi hanno potenziali rischi. Inoltre, ci sono pochi rapporti che confrontano e identificano Chuanmutong e piante correlate. Di conseguenza, un metodo di controllo della qualità per garantire l'autenticità di Chuanmutong merita ulteriori studi.
I costituenti chimici di Chuanmutong sono composti principalmente da triterpenoidi pentaciclici di tipo oleanano e dai loro glicosidi, flavonoidi e acidi organici11,12,13,14. Tra questi, l'acido oleanolico, il β-sitosterolo, lo stigmasterolo e l'ergosterolo hanno effetti diuretici di diversa intensità, che possono essere potenziali sostanze farmacodinamiche per promuovere la diuresi e alleviare la stranguria15,16. Le impronte digitali chimiche sono ottenute separando e rilevando molti componenti chimici contenuti nei campioni mediante cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC), gascromatografia (GC), ecc. L'adozione di appropriati metodi di analisi statistica per analizzare le caratteristiche di Chuanmutong può determinare il controllo complessivo della qualità e l'identificazione scientifica della medicina tradizionale cinese17,18,19.
In questo studio sono stati raccolti 10 lotti di varietà autentiche Chuanmutong e cinque lotti di adulteranti. La loro qualità è stata confrontata e analizzata con il metodo delle impronte digitali HPLC combinato con il riconoscimento multi-pattern, tra cui l'analisi dei cluster (CA), l'analisi delle componenti principali (PCA), l'analisi della discriminazione dei minimi quadrati parziali ortogonali (OPLS-CA) e la determinazione del contenuto della componente farmacodinamica. Questo protocollo stabilisce un metodo per identificare varietà autentiche con elevata specificità, una nuova strategia per l'identificazione scientifica di varietà autentiche e adulteranti di materiali medicinali cinesi.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2017381038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160; Trading Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>WXBD5243V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Sitosterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;C18 column</td>
			<td>Yuexu Material Technology Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>Welch Ultimate LP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Guoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>19020103</td>
			<td>CMT-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200701</td>
			<td>CMT-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200701</td>
			<td>CMT-3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200901</td>
			<td>CMT-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>210701</td>
			<td>CMT-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Haobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>210401</td>
			<td>CMT-6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200901</td>
			<td>CMT-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Wusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>201201</td>
			<td>CMT-8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Limin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>201001</td>
			<td>CMT-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Yuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China</td>
			<td>210501</td>
			<td>CMT-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang</td>
			<td>Madzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>CC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils.</td>
			<td>Heilin Village, Qiliping Township, Hongya County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>DC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis peterae Hand.-Mazz.</td>
			<td>Huangmu Village, Huangmu Township, Hanyuan County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>DE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils</td>
			<td>Mixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>XS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis finetiana Levl. et Vaniot.</td>
			<td>Wannian Village, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>SMT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic balance</td>
			<td>Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai,&#160; China&#160;</td>
			<td>FA1204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ergosterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>2021112602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2017042043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic acid</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>2016062901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High performance liquid chromatography</td>
			<td>Agilent, USA.</td>
			<td>1260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IBM SPSS Statistics version 26.0</td>
			<td>International Business Machines Corporation, USA</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160; Trading Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>WXBD6409V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>202010302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>n-butyl alcohol</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2020071047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petroleum ether</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2020090125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphoric acid</td>
			<td>Comeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>20200110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SESCF-TCM version 2012</td>
			<td>National Pharmacopoeia Commission, China</td>
			<td>-</td>
			<td>http://114.247.108.158:8888/login</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stigmasterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloromethane</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>20200214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Umetrics SIMCA version 14.1.0.2047</td>
			<td>Umetrics, Sweden</td>
			<td>-</td>
			<td>https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water machine</td>
			<td>Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, China</td>
			<td>UPH-II-10T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleaner</td>
			<td>Kunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, China</td>
			<td>KH3200E</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

hplc coupled with chemical fingerprinting for multi-pattern recognition for identifying the authenticity of clematidis armandii caulis

Un metodo per identificare i materiali medicinali cinesi e i relativi adulteranti è stato costruito prendendo come esempio Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, una medicina tradizionale cinese universalmente usata). Dieci lotti di varietà Chuanmutong autentiche e cinque lotti di adulteranti correlati sono stati analizzati e confrontati sulla base delle impronte digitali della cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) combinate con la chemiometria, tra cui l'analisi dei cluster (CA), l'analisi delle componenti principali (PCA) e l'analisi della discriminazione dei minimi quadrati parziali ortogonali (OPLS-DA). Inoltre, è stato determinato il contenuto di β-sitosterolo. È stata stabilita l'impronta chimica di controllo di Chuanmutong e sono stati identificati 12 picchi comuni. La somiglianza tra l'impronta digitale di 10 lotti di varietà Chuanmutong autentiche e l'impronta digitale di controllo era 0,910-0,989, mentre la somiglianza di cinque lotti di adulteranti era solo 0,133-0,720. Sulla base dei picchi comuni nel cromatogramma, 15 lotti di campioni sono stati classificati in tre livelli di contenuto dalla PCA e sono stati aggregati in quattro categorie da CA, ottenendo una chiara distinzione tra Chuanmutong autentico e adulteranti di Chuanmutong. Inoltre, sette componenti differenziali che possono identificare efficacemente l'autentico Chuanmutong e gli adulteranti di Chuanmutong sono stati trovati attraverso OPLS-DA. Il contenuto di β-sitosterolo di 10 lotti di varietà Chuanmutong autentiche era 97,53-161,56 μg / g, mentre il contenuto di β-sitosterolo dei cinque lotti di adulteranti variava notevolmente, tra cui il contenuto di β-sitosterolo di Clematis peterae Hand.-Mazz. e Clematis gouriana Roxb. finetii Rehd. et Wils. era significativamente inferiore a quello delle varietà autentiche di Chuanmutong. Il contenuto dei componenti dell'indice HPLC e il metodo di riconoscimento multi-pattern delle impronte digitali chimiche stabilito in questo studio forniscono una nuova strategia per identificare efficacemente i materiali medicinali cinesi autentici e i relativi adulteranti.

Impronta digitale cromatografica di Chuanmutong e analisi di similarità (SA) I valori RSD del tempo di ritenzione relativo di precisione, ripetibilità e stabilità erano inferiori rispettivamente allo 0,46%, 1,65% e 0,53%; i valori RSD dell'area di picco relativa erano inferiori rispettivamente al 4,23%, 3,56% e 3,96%. Come mostrato nelle figure 1A,B, c'erano 12 distinti picchi comuni (dal picco 1 al picco 12) nelle impronte digitali HPLC nei 10 campioni autentici di Ch...

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HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis

Qui, presentiamo un protocollo per stabilire la cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC), accoppiata con il riconoscimento multi-pattern delle impronte digitali chimiche, che fornisce una nuova strategia per identificare efficacemente le varietà autentiche di Clematidis Armandii Caulis e dei suoi adulteranti.

HPLC accoppiato con impronte digitali chimiche per il riconoscimento multi-pattern per identificare l'autenticità di Clematidis armandii caulis

A method for identifying Chinese medicinal materials and their related adulterants was constructed by taking Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, a ...

Questo protocollo può fornire una nuova strategia per identificare efficacemente i materiali genuini di Clematidis armandii caulis e dei suoi adulteranti. Questo metodo può essere utilizzato nella ricerca sulla qualità dei materiali medicinali e fornisce un riferimento per lo studio degli standard di qualità di altri materiali medicinali cinesi. Per iniziare la preparazione del campione, macinare la materia prima per uniformare la dimensione delle particelle facendole passare attraverso una rete di nylon con un diametro interno appropriato.Trasferire accuratamente pesato due grammi della materia prima macinata in un pallone conico da 50 millilitri tappato prima di aggiungere 50 millilitri di metanolo nel pallone. Mettere il tappo sul pallone in ultrasuoni riscaldato a 600 watt e 40 kilohertz per 30 minuti. Alla fine dell'incubazione, filtrare la soluzione di estratto medicinale attraverso la carta da filtro.Dopo lo sforzo, trasferire quattro millilitri della soluzione di metanolo contenente gli estratti medicinali in un matraccio tarato da 10 millilitri. Quindi aggiungere sei millilitri di acqua e mescolare la soluzione. Lasciare riposare la soluzione per 10 minuti.Per l'analisi HPLC dei campioni. Inizia preparando le fasi mobili e imposta il programma di gradiente HPLC come descritto nel manoscritto. Filtrare il campione attraverso una membrana filtrante microporosa da 0,45 micron e sottoporlo all'analisi HPLC.Per ogni campione, eseguire l'analisi sei volte al giorno. Per valutare la stabilità della soluzione campione, analizzare la stessa soluzione campione conservata a temperatura ambiente per 0, 2, 4, 6, 8, 12 e 24 ore dopo la preparazione. Prendi sei repliche dello stesso campione e rileva la sua impronta digitale in HPLC.Importare i dati rilevanti nel software denominato Sistema di valutazione della somiglianza delle impronte digitali cromatografiche della medicina tradizionale cinese o SESCF TCM versione 2012. Importare il tempo di ritenzione e l'area di picco per tutti i 10 lotti di campioni Chuanmutong autentici e cinque lotti di adulteranti in SESCF TCM per l'analisi. Nel menu principale, fare clic sullo spettro di riferimento impostato e andare alla finestra delle impostazioni dei parametri per impostare l'impronta cromatografica di riferimento delle specie autentiche di Chuanmutong come riferimento.Quindi, impostare il metodo di generazione dello spettro di controllo come metodo mediano con la larghezza della finestra temporale di 0,5. Quindi, fare clic su calibrazione multipunto nel menu principale, selezionare i picchi e quindi selezionare l'opzione di corrispondenza dei picchi come picchi contrassegnati. Infine, fare clic su Calcola somiglianza per eseguire un'analisi di somiglianza dei campioni in base alle impronte digitali del cromatogramma di riferimento di Chuanmutong.Per eseguire l'analisi sistemica dei cluster, aprire il software di analisi statistica pertinente e fare clic su file per importare i dati di 10 lotti di campioni autentici e cinque lotti di adulteranti nel software. Nel menu, nella scheda Classificazione, fare clic su Analisi e clustering del sistema. Selezionare le aree di picco comuni di 10 lotti di campioni autentici e cinque lotti di adulteranti come variabili.Impostare il numero di cluster su quattro. Quindi, fare clic su Metodo per selezionare il Metodo di clustering come connessione intergruppo. Scegliere l'intervallo di misurazione come correlazione di Pearson e utilizzare la scheda OK per disegnare la mappa di analisi del cluster.Per l'analisi dei componenti principali o PCA, aprire il software di analisi dei dati. Fare clic su file nel menu e creare un nuovo progetto regolare. Importare l'area di picco di 12 picchi comuni in un foglio di calcolo Excel o simile dal sistema HPLC.Premi il pulsante Fine per completare l'importazione dei dati. Per impostare il tipo di modello con PCA, fare clic su Nuovo per creare un nuovo modello e quindi adattare i dati utilizzando l'adattamento automatico e aggiungere schede. Vai ai punteggi per ottenere la mappa del punteggio PCA.Utilizzare l'analisi di discriminazione dei minimi quadrati parziali ortogonali o OPLSDA. Generare la mappa del punteggio PCA come illustrato in precedenza. Impostare il tipo di modello con OPLSDA facendo clic su Nuovo e Nuovo come modello uno Prima di andare in scala selezionando par per tutti, quindi premere su AutoFit in punteggi per generare la mappa del punteggio OPLSDA.Per stimare l'importanza e la proiezione della variabile vai al menu del software di analisi dei dati e vai su Analizza seguito impostando il numero a 200 sotto per mutazioni. Ottieni i valori quadrati R e Q quadrati dal punteggio OPLSDA e fai clic su VIP e VIP predictive per ottenere la mappa VIP. Le impronte digitali HPLC dei 10 campioni autentici di Chuanmutong hanno mostrato 12 picchi comuni distinti di cui relativamente grandi e ben risolti.Il picco numero 10 è stato utilizzato come picco di riferimento per stimare i tempi di ritenzione relativi dei picchi di riposo. I campioni autentici hanno dimostrato gradi di somiglianza molto vicini a uno che implica un'elevata somiglianza in buona coerenza. Tuttavia, i gradi di somiglianza tra i cinque lotti di adulteranti e il controllo Chuanmutong erano piuttosto bassi.È stato osservato che le impronte digitali HPLC dei cinque adulteranti differivano dai campioni autentici, principalmente nella regione con tempi di ritenzione compresi tra 28 e 55 minuti. La PCA ha mostrato un'evidente somiglianza tra le varietà autentiche e la loro differenza dagli adulteranti, ad eccezione del CC adulterante. Risultati simili sono stati ottenuti anche dall'analisi dei cluster quando la distanza di classificazione era 20. La matrice di punteggio generata da OPLSDA non ha indicato alcuna intersezione tra i punti campione di campioni autentici e gli adulteranti.Ancora una volta, il CC adulterante assomigliava alle varietà autentiche più degli altri adulteranti. Secondo la mappa VIP i picchi con valori superiori a uno sono stati identificati come i principali componenti marcatori che causano la differenza tra campioni autentici e adulteranti. Il contenuto di beta-sitosterolo, un componente attivo trovato in Chuanmutong è stato rilevato in tutti e cinque i lotti di adulteranti, ma il contenuto variava notevolmente.Questo protocollo stabilisce vari metodi di analisi per riflettere tutte le informazioni sui materiali medicinali da più angolazioni e in tutto il modo per stimare l'autenticità dei materiali medicinali Chuanmutong.

Research

JoVE Journal

Chemistry

HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis

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