Name: hplc coupled with chemical fingerprinting for multi-pattern recognition for identifying the authenticity of clematidis armandii caulis
Uploaded: 2022-11-11T14:40:00
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Este trabajo fue apoyado por el Proyecto de Administración de Medicina Tradicional China de Sichuan (no. 2020JC0088, no. 2021MS203).

1. Métodos de detección química de huellas dactilares
<ol><li>Condiciones cromatográficas<ol><li>Preparar la fase móvil acetonitrilo (A)/agua (B). Establezca un programa de degradado de la siguiente manera en el software HPLC: 0-20 min, 3%A-10%A; 20-25 min, 10%A-13%A; 25-65 min, 13%A-25%A; 65-75 min, 25%A-40%A; 75-76 min, 40%A-3%A; 76-85 min, 3%A-3%A.</li>
		<li>Mantener el caudal de la fase móvil a 1,0 mL/min.</li>
		<li>Realizar la separación cromatográfica en una columna C18 (250 mm x 4,6 mm...

<ol>
	<li>Chen, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Chinese Medicine Specimen Picture Book. , 116 (1935).</li><li>Xiong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lignans+from+the+stems+of+Clematis+armandii+(&amp;#34;Chuan-Mu-Tong&amp;#34;)+and+their+anti-neuroinflammatory+activities.">Lignans from the stems of Clematis armandii (&amp;#34;Chuan-Mu-Tong&amp;#34;) and their anti-neuroinflammatory activities.</a> Journal of Ethnopharmacology. 153 (3), 737-743 (2014).</li><li>Pan, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+lignan+from+the+Chinese+medicinal+plant+Clematis+armandii,+inhibits+A431+cell+growth+via+blocking+p70S6/S6+kinase+pathway.">a lignan from the Chinese medicinal plant Clematis armandii, inhibits A431 cell growth via blocking p70S6/S6 kinase pathway.</a> Integrative Cancer Therapies. 16 (3), 351-359 (2017).</li><li>Chinese Pharmacopoeia Commission. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pharmacopoeia of The People's Republic of China: (Edition 2020). , 38 (2020).</li><li>Wang, D. G., Guo, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Textual+research+on+the+materia+medica+and+authenticity+of+Clematidis+armandii.">Textual research on the materia medica and authenticity of Clematidis armandii.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medicine Research. 18 (11), 2696 (2007).</li><li>Fang, Q. M., Zhang, M., Zhong, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+resources+and+exploitation+of+Caulis+Clematidis+Armandii+in+Sichuan.">The natural resources and exploitation of Caulis Clematidis Armandii in Sichuan.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 20 (5), 404-406 (2005).</li><li>Bai, M. N., Dai, Y. X., Wang, Y., Ren, Y. Y., Tan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+the+identi&#64257;cation+of+Caulis+Clematidis+Armandii.">Study on the identi&#64257;cation of Caulis Clematidis Armandii.</a> Research and Practice on Chinese Medicines. 31 (3), 13-16 (2017).</li><li>Zhou, P. J., Li, X. F., Fu, D. H., Pu, X. Y., Zhu, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacognosy+identification+of+Ethnomedicine+Clematis+ranunculoides+Franchet.">Pharmacognosy identification of Ethnomedicine Clematis ranunculoides Franchet.</a> Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. 34 (3), 432-436 (2017).</li><li>Guo, J. L., Tang, Y., Pei, J., Wang, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+random+amplified+polymorphic+DNA+and+sequence+characterized+amplified+regions+of+Caulis+Clematidis+Armandii.">Study on random amplified polymorphic DNA and sequence characterized amplified regions of Caulis Clematidis Armandii.</a> Journal of Chengdu Medical College. 6 (4), 283-286 (2011).</li><li>Liu, M. Z., Li, M. N., Yao, H., Liu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identification+of+Clematidis+Armandii+Caulis+and+its+adulterants+and+closely+related+species+by+ITS2+sequence.">Molecular identification of Clematidis Armandii Caulis and its adulterants and closely related species by ITS2 sequence.</a> Global Traditional Chinese Medicine. 4 (6), 446-450 (2011).</li><li>Liu, J. J., Chen, X., Wei, Z. Q., Li, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+constituents+and+identification+of+the+caules+of+Clematis+armandii+Franch.and+Clematis+montana+Buch.-Ham.">Chemical constituents and identification of the caules of Clematis armandii Franch.and Clematis montana Buch.-Ham.</a> Natural Product Research and Development. 22 (6), 998-1000 (2010).</li><li>Yang, T. R., Xu, Z., Shi, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+four+compounds+from+Clematis+Montana.">Studies on four compounds from Clematis Montana.</a> Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine. 10 (4), 142-143 (2008).</li><li>Yan, L. H., Xu, L. Z., Zhou, Z. M., Yang, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+constituents+from+stems+of+Clematis+armandii(I).">Chemical constituents from stems of Clematis armandii(I).</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 38 (3), 340-342 (2007).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traditional+uses,+phytochemistry,+pharmacology,+and+toxicology+of+Akebiae+Caulis+and+its+synonyms:+A+review.">Traditional uses, phytochemistry, pharmacology, and toxicology of Akebiae Caulis and its synonyms: A review.</a> Journal of Ethnopharmacology. 277, 114245 (2021).</li><li>Ye, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diuretic+effect+and+material+basis+of+Clematidis+Armandii+Caulis+in+rats.">Diuretic effect and material basis of Clematidis Armandii Caulis in rats.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 44 (9), 1889-1894 (2019).</li><li>Kuang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consistency+study+of+Caulis+Clematidis+Armandii+and+its+traditionally+used+products+and+counterfeit+species+based+on+efficacy+and+pharmacognosy.">Consistency study of Caulis Clematidis Armandii and its traditionally used products and counterfeit species based on efficacy and pharmacognosy.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 36 (3), 115-121 (2020).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+assessment+of+Asarum+heterotropoides+var.+mandshuricum+based+on+HPLC+multi-component+determination+and+multiple+pattern+recognition+method+of+fingerprint.">Quality assessment of Asarum heterotropoides var. mandshuricum based on HPLC multi-component determination and multiple pattern recognition method of fingerprint.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 238-243 (2022).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+multi-components+of+Paeoniae+Alba+Radix+based+on+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition.">Determination of multi-components of Paeoniae Alba Radix based on fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 231-237 (2022).</li><li>Li, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+investigation+for+raw+and+processed+products+of+Euodiae+Fructus+based+on+high-performance+liquid+chromatography+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition.">Comparative investigation for raw and processed products of Euodiae Fructus based on high-performance liquid chromatography fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chemistry &amp; Biodiversity. 18 (8), 2100281 (2021).</li><li>Dong, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+suitable+distribution+areas+of+Kawa+Kimichi+produced+in+Sichuan+province-based+on+remote+sensing+and+GIS-A+case+study+of+Clematis+Armandii.">Study on suitable distribution areas of Kawa Kimichi produced in Sichuan province-based on remote sensing and GIS-A case study of Clematis Armandii.</a> Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology. 17 (11), 2398-2404 (2015).</li><li>Tang, S. W., Pei, J., Li, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+and+histological+identification+of+Chuanmutong.">Morphological and histological identification of Chuanmutong.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 15 (1), 19-21 (2000).</li><li>Li, B., Chen, X., Fang, Q. M., Zhang, B. J., Wei, Z. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+Research+of+Chuanmutong.">Quality Research of Chuanmutong.</a> Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine. 27 (6), 58-60 (2009).</li><li>Wu, W. J., Wan, M. M., Cao, Y. H., Tan, R., Song, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+on+the+Quality+Standard+of+Chuanmutong.">Research on the Quality Standard of Chuanmutong.</a> Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 33 (2), 313-315 (2015).</li><li>Wei, Z. Q., Chen, X., Li, B., Dong, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+stigmasterol+in+Clematis+armandii+Franch+and+Clematis+montana+Buch-Ham.+by+HPLC.">Determination of stigmasterol in Clematis armandii Franch and Clematis montana Buch-Ham. by HPLC.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 20 (3), 574-575 (2009).</li><li>Qing, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+oleanolic+acid+in+Caulis+clematidis+armandii+by+HPLC.">Determination of oleanolic acid in Caulis clematidis armandii by HPLC.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 21 (3), 273-274 (2006).</li><li>Yang, S. D., Wang, R., Fu, D. Y., Guo, J. J., Tan, W. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+on+oleanolic+acid+in+caulis+clematidis+armandii+by+microwave+assisted+extraction-HPLC/MS.">Determination on oleanolic acid in caulis clematidis armandii by microwave assisted extraction-HPLC/MS.</a> Anhui Academy of Agricultural Sciences. 38 (13), 6929-6931 (2010).</li></ol>

La recolección de muestras para la investigación es el primer paso clave para construir el reconocimiento de múltiples patrones en la identificación de la autenticidad de los materiales medicinales chinos. A través de la investigación de mercado, descubrimos que Sichuan Ya'an, Liangshan y Leshan son las principales áreas de producción de recursos silvestres de Chuanmutong. Las variedades relacionadas del mismo género también tienen la misma distribución geográfica 6,20<sup c...

Chuanmutong, Caulis seco de Clematis armandii Franch. o Clematis montana Buch.-Ham., es una medicina tradicional china comúnmente utilizada en clínicas 1,2,3. Se utiliza para tratar problemas urinarios, edema, llagas en la lengua y la boca, disminución de la secreción de leche, rigidez articular y dolor muscular causado por el calor húmedo4. Chuanmutong siempre se ha obtenido a partir de variedades silvestres, distribuidas principalmente en el suroeste de China, especialmente en Sichuan, donde la mejor calidad se puede encontrar 5,6. Es difícil distinguir entre variedades auténticas y sus adulterantes estrechamente relacionados debido a sus características similares 7,8,9,10. El estándar de calidad de Chuanmutong en la edición 2020 de la Farmacopea China solo estipula las propiedades, la identificación microscópica y la identificación en capa delgada sin determinación de contenido, que no pueden identificar eficazmente los adulterantes y, por lo tanto, tienen riesgos potenciales. Además, hay pocos informes que comparen e identifican Chuanmutong y plantas relacionadas. En consecuencia, un método de control de calidad para garantizar la autenticidad de Chuanmutong es digno de estudio adicional.
Los componentes químicos de Chuanmutong están compuestos principalmente de triterpenoides pentacíclicos de tipo oleanano y sus glucósidos, flavonoides y ácidos orgánicos11,12,13,14. Entre ellos, el ácido oleanólico, el β-sitosterol, el estigmasterol y el ergosterol tienen efectos diuréticos de diferentes intensidades, que pueden ser sustancias farmacodinámicas potenciales para promover la diuresis y aliviar la estranguria15,16. Las huellas químicas se obtienen separando y detectando muchos componentes químicos contenidos en las muestras mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), cromatografía de gases (GC), etc. La adopción de métodos de análisis estadístico apropiados para analizar las características de Chuanmutong puede determinar el control de calidad general y la identificación científica de la medicina tradicional china17,18,19.
En este estudio, se recolectaron 10 lotes de variedades auténticas de Chuanmutong y cinco lotes de adulterantes. Su calidad se comparó y analizó mediante el método de huellas dactilares HPLC combinado con el reconocimiento de patrones múltiples, incluido el análisis de conglomerados (AC), el análisis de componentes principales (PCA), el análisis ortogonal de discriminación parcial de mínimos cuadrados (OPLS-CA) y la determinación del contenido del componente farmacodinámico. Este protocolo establece un método para identificar variedades auténticas con alta especificidad, una nueva estrategia para la identificación científica de variedades auténticas y adulterantes de materiales medicinales chinos.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2017381038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160; Trading Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>WXBD5243V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Sitosterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;C18 column</td>
			<td>Yuexu Material Technology Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>Welch Ultimate LP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Guoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>19020103</td>
			<td>CMT-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200701</td>
			<td>CMT-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200701</td>
			<td>CMT-3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200901</td>
			<td>CMT-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>210701</td>
			<td>CMT-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Haobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>210401</td>
			<td>CMT-6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200901</td>
			<td>CMT-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Wusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>201201</td>
			<td>CMT-8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Limin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>201001</td>
			<td>CMT-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Yuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China</td>
			<td>210501</td>
			<td>CMT-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang</td>
			<td>Madzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>CC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils.</td>
			<td>Heilin Village, Qiliping Township, Hongya County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>DC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis peterae Hand.-Mazz.</td>
			<td>Huangmu Village, Huangmu Township, Hanyuan County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>DE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils</td>
			<td>Mixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>XS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis finetiana Levl. et Vaniot.</td>
			<td>Wannian Village, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>SMT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic balance</td>
			<td>Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai,&#160; China&#160;</td>
			<td>FA1204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ergosterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>2021112602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2017042043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic acid</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>2016062901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High performance liquid chromatography</td>
			<td>Agilent, USA.</td>
			<td>1260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IBM SPSS Statistics version 26.0</td>
			<td>International Business Machines Corporation, USA</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160; Trading Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>WXBD6409V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>202010302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>n-butyl alcohol</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2020071047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petroleum ether</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2020090125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphoric acid</td>
			<td>Comeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>20200110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SESCF-TCM version 2012</td>
			<td>National Pharmacopoeia Commission, China</td>
			<td>-</td>
			<td>http://114.247.108.158:8888/login</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stigmasterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloromethane</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>20200214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Umetrics SIMCA version 14.1.0.2047</td>
			<td>Umetrics, Sweden</td>
			<td>-</td>
			<td>https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water machine</td>
			<td>Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, China</td>
			<td>UPH-II-10T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleaner</td>
			<td>Kunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, China</td>
			<td>KH3200E</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

hplc coupled with chemical fingerprinting for multi-pattern recognition for identifying the authenticity of clematidis armandii caulis

Un método para identificar los materiales medicinales chinos y sus adulterantes relacionados se construyó tomando como ejemplo Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, una medicina tradicional china universalmente utilizada). Se analizaron y compararon diez lotes de variedades genuinas de Chuanmutong y cinco lotes de adulterantes relacionados con la base de las huellas dactilares de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) combinadas con quimiometría, incluido el análisis de conglomerados (CA), el análisis de componentes principales (PCA) y el análisis ortogonal de discriminación parcial de mínimos cuadrados (OPLS-DA). Además, se determinó el contenido de β-sitosterol. Se estableció la huella dactilar química de control de Chuanmutong y se identificaron 12 picos comunes. La similitud entre la huella digital de 10 lotes de variedades genuinas de Chuanmutong y la huella digital de control fue de 0.910-0.989, mientras que la similitud de cinco lotes de adulterantes fue de solo 0.133-0.720. Sobre la base de los picos comunes en el cromatograma, 15 lotes de muestras se clasificaron en tres niveles de contenido por PCA, y se agregaron en cuatro categorías por CA, logrando una clara distinción entre Chuanmutong auténtico y adulterantes de Chuanmutong. Además, se encontraron siete componentes diferenciales que pueden identificar efectivamente Chuanmutong auténtico y adulterantes de Chuanmutong a través de OPLS-DA. El contenido de β-sitosterol de 10 lotes de variedades genuinas de Chuanmutong fue de 97.53-161.56 μg / g, mientras que el contenido de β-sitosterol de los cinco lotes de adulterantes varió mucho, entre los cuales el contenido de β-sitosterol de Clematis peterae Hand.-Mazz. y Clematis gouriana Roxb. var. finetii Rehd. et Wils. fue significativamente menor que la de las variedades auténticas de Chuanmutong. El contenido del componente del índice HPLC y el método de reconocimiento de huellas dactilares químicas de múltiples patrones establecido en este estudio proporcionan una nueva estrategia para identificar eficazmente los materiales medicinales chinos auténticos y los adulterantes relacionados.

Huella cromatográfica de Chuanmutong y análisis de similitud (SA) Los valores de RSD del tiempo de retención relativo de precisión, repetibilidad y estabilidad fueron inferiores a 0,46%, 1,65% y 0,53%, respectivamente; los valores de RSD del área pico relativa fueron inferiores a 4,23%, 3,56% y 3,96%, respectivamente. Como se muestra en las Figuras 1A, B, hubo 12 picos comunes distintos (desde el pico 1 hasta el pico 12) en las huellas dactilares de ...

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HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis

Aquí, presentamos un protocolo para establecer la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), junto con el reconocimiento químico de huellas dactilares multipatrón, que proporciona una nueva estrategia para identificar eficazmente las variedades genuinas de Clematidis Armandii Caulis y sus adulterantes.

HPLC junto con huellas dactilares químicas para el reconocimiento de múltiples patrones para identificar la autenticidad de Clematidis armandii caulis

A method for identifying Chinese medicinal materials and their related adulterants was constructed by taking Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, a ...

Este protocolo puede proporcionar una nueva estrategia para identificar eficazmente los materiales genuinos de Clematidis armandii caulis y sus adulterantes. Este método se puede utilizar en la investigación de la calidad del material medicinal y proporciona una referencia para estudiar los estándares de calidad de otros materiales medicinales chinos. Para comenzar la preparación de la muestra, muele la materia prima a un tamaño de partícula uniforme pasándola a través de una malla de nylon con un diámetro interior apropiado.Transfiera con precisión dos gramos de la materia prima molida en un matraz cónico de 50 mililitros tapado antes de agregar 50 mililitros de metanol al matraz. Coloque el tapón en el matraz en ultrasonido calentado a 600 vatios y 40 kilohercios durante 30 minutos. Al final de la incubación, cuele la solución de extracto medicinal a través del papel de filtro.Después de colar, transferir cuatro mililitros de la solución de metanol que contiene los extractos medicinales a un matraz aforado de 10 mililitros. Luego agregue seis mililitros de agua y mezcle la solución. Deje que la solución se asiente durante 10 minutos.Para el análisis HPLC de las muestras. Comience preparando las fases móviles y establezca el programa de gradiente de HPLC como se describe en el manuscrito. Filtrar la muestra a través de una membrana filtrante microporosa de 0,45 micras y someterla a análisis de HPLC.Para cada muestra, realice el análisis seis veces al día. Para evaluar la estabilidad de la solución de muestra, analice la misma solución de muestra almacenada a temperatura ambiente durante 0, 2, 4, 6, 8, 12 y 24 horas después de la preparación. Tome seis réplicas de la misma muestra y detecte su huella digital en HPLC.Importe los datos relevantes en el software denominado Sistema de evaluación de similitud de huellas dactilares cromatográficas de la medicina tradicional china o SESCF TCM versión 2012. Importe el tiempo de retención y el área pico para los 10 lotes de muestras auténticas de Chuanmutong, así como cinco lotes de adulterantes en SESCF TCM para su análisis. En el menú principal, haga clic en el espectro de referencia establecido y vaya a la ventana de configuración de parámetros para establecer la huella cromatográfica de referencia de la especie auténtica de Chuanmutong como referencia.A continuación, establezca el método de generación del espectro de control como el método mediano con el ancho de la ventana de tiempo de 0.5. Luego, haga clic en calibración multipunto en el menú principal, seleccione los picos y luego seleccione la opción de coincidencia de picos como picos marcados. Finalmente, haga clic en Calcular similitud para realizar un análisis de similitud de las muestras basado en las huellas dactilares de cromatograma de referencia de Chuanmutong.Para realizar el análisis sistémico de conglomerados, abra el software de análisis estadístico relevante y haga clic en el archivo para importar los datos de 10 lotes de muestras auténticas y cinco lotes de adulterantes al software. En el menú, en la pestaña Clasificación, haga clic en Análisis y agrupación en clústeres del sistema. Seleccione las áreas pico comunes de 10 lotes de muestras auténticas y cinco lotes de adulterantes como variables.Establezca el número de clústeres en cuatro. A continuación, haga clic en Método para seleccionar el Método de agrupación en clústeres como conexión entre grupos. Elija el intervalo de medición como correlación de Pearson y utilice la ficha Aceptar para dibujar el mapa de análisis de conglomerados.Para el análisis de componentes principales o PCA, abra el software de análisis de datos. Haga clic en archivo en el menú y cree un nuevo proyecto normal. Importe el área de pico de 12 picos comunes en una hoja de cálculo de Excel o similar desde el sistema HPLC.Presione el botón Finalizar para completar la importación de datos. Para establecer el tipo de modelo con PCA, haga clic en Nuevo para crear un nuevo modelo y luego ajuste los datos usando autoajuste y agregar pestañas. Vaya a puntajes para obtener el mapa de puntaje de PCA.Para utilizar el Análisis Ortogonal de Discriminación de Mínimos Cuadrados Parciales u OPLSDA. Genere el mapa de puntuación PCA como se demostró anteriormente. Establezca el tipo de modelo con OPLSDA haciendo clic en Nuevo y Nuevo como modelo uno Antes de ir a escala seleccionando par para todos, luego presione AutoAjustar en puntajes para generar el mapa de puntaje OPLSDA.Para estimar la importancia de la variable y la proyección, vaya al menú del software de análisis de datos y vaya a Analizar, seguido de establecer el número en 200 por mutación. Obtenga los valores de R cuadrado y Q cuadrado de la puntuación OPLSDA y haga clic en VIP y VIP predictivo para obtener el mapa VIP. Las huellas dactilares de HPLC de las 10 muestras auténticas de Chuanmutong mostraron 12 picos comunes distintos, de los cuales el relativamente grande y bien resuelto.El pico número 10 se utilizó como pico de referencia para estimar los tiempos de retención relativos de los picos de descanso. Las muestras auténticas demostraron grados de similitud muy cercanos a uno, lo que implica una alta similitud en buena consistencia. Sin embargo, los grados de similitud entre los cinco lotes de adulterantes y el control Chuanmutong eran bastante bajos.Se observó que las huellas dactilares de HPLC de los cinco adulterantes diferían de las muestras auténticas, principalmente en la región con tiempos de retención que oscilaban entre 28 y 55 minutos. El ACP mostró una similitud evidente entre las variedades auténticas y su diferencia con respecto a los adulterantes, excepto por el adulterante CC.También se obtuvieron resultados similares del análisis de conglomerados cuando la distancia de clasificación fue de 20. La matriz de puntuación generada a partir de OPLSDA no indicó intersección entre los puntos de muestra de muestras auténticas y los adulterantes.Una vez más, el adulterante CC se parecía más a las variedades auténticas que los otros adulterantes. Según el mapa VIP, los picos con valores superiores a uno se identificaron como los principales componentes marcadores que causan la diferencia entre las muestras auténticas y los adulterantes. El contenido de beta-sitosterol, un componente activo encontrado en Chuanmutong se detectó en los cinco lotes de adulterantes, pero el contenido varió mucho.Este protocolo establece varios métodos de análisis para reflejar toda la información sobre los materiales medicinales desde múltiples ángulos y en todo el camino para estimar la autenticidad de los materiales medicinales Chuanmutong.

Research

JoVE Journal

Chemistry

HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis

Preparation of Highly Porous Coordination Polymer Coatings on Macroporous Polymer Monoliths for Enhanced Enrichment of Phosphopeptides

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Investigación

Química

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