Name: hplc coupled with chemical fingerprinting for multi-pattern recognition for identifying the authenticity of clematidis armandii caulis
Uploaded: 2022-11-11T14:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis at JoVE.com

Detta arbete stöddes av projektet Sichuan Traditional Chinese Medicine Administration (nr 2020JC0088, nr 2021MS203).

1. Metoder för kemisk fingeravtrycksdetektering
<ol><li>Kromatografiska förhållanden<ol><li>Förbered acetonitril (A)/vatten (B) mobil fas. Ställ in ett gradientprogram enligt följande i HPLC-programvaran: 0-20 min, 3% A-10% A; 20-25 min, 10% A-13% A; 25-65 min, 13%A-25%A; 65-75 min, 25% A-40% A; 75-76 min, 40%A-3%A; 76-85 min, 3%A-3%A.</li>
		<li>Håll flödeshastigheten för den mobila fasen vid 1,0 ml/min.</li>
		<li>Utför den kromatografiska separationen på en C18-kolonn (250 mm x 4,6 mm, 5 ...

<ol>
	<li>Chen, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Chinese Medicine Specimen Picture Book. , 116 (1935).</li><li>Xiong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lignans+from+the+stems+of+Clematis+armandii+(&amp;#34;Chuan-Mu-Tong&amp;#34;)+and+their+anti-neuroinflammatory+activities.">Lignans from the stems of Clematis armandii (&amp;#34;Chuan-Mu-Tong&amp;#34;) and their anti-neuroinflammatory activities.</a> Journal of Ethnopharmacology. 153 (3), 737-743 (2014).</li><li>Pan, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+lignan+from+the+Chinese+medicinal+plant+Clematis+armandii,+inhibits+A431+cell+growth+via+blocking+p70S6/S6+kinase+pathway.">a lignan from the Chinese medicinal plant Clematis armandii, inhibits A431 cell growth via blocking p70S6/S6 kinase pathway.</a> Integrative Cancer Therapies. 16 (3), 351-359 (2017).</li><li>Chinese Pharmacopoeia Commission. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pharmacopoeia of The People's Republic of China: (Edition 2020). , 38 (2020).</li><li>Wang, D. G., Guo, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Textual+research+on+the+materia+medica+and+authenticity+of+Clematidis+armandii.">Textual research on the materia medica and authenticity of Clematidis armandii.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medicine Research. 18 (11), 2696 (2007).</li><li>Fang, Q. M., Zhang, M., Zhong, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+resources+and+exploitation+of+Caulis+Clematidis+Armandii+in+Sichuan.">The natural resources and exploitation of Caulis Clematidis Armandii in Sichuan.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 20 (5), 404-406 (2005).</li><li>Bai, M. N., Dai, Y. X., Wang, Y., Ren, Y. Y., Tan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+the+identi&#64257;cation+of+Caulis+Clematidis+Armandii.">Study on the identi&#64257;cation of Caulis Clematidis Armandii.</a> Research and Practice on Chinese Medicines. 31 (3), 13-16 (2017).</li><li>Zhou, P. J., Li, X. F., Fu, D. H., Pu, X. Y., Zhu, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacognosy+identification+of+Ethnomedicine+Clematis+ranunculoides+Franchet.">Pharmacognosy identification of Ethnomedicine Clematis ranunculoides Franchet.</a> Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. 34 (3), 432-436 (2017).</li><li>Guo, J. L., Tang, Y., Pei, J., Wang, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+random+amplified+polymorphic+DNA+and+sequence+characterized+amplified+regions+of+Caulis+Clematidis+Armandii.">Study on random amplified polymorphic DNA and sequence characterized amplified regions of Caulis Clematidis Armandii.</a> Journal of Chengdu Medical College. 6 (4), 283-286 (2011).</li><li>Liu, M. Z., Li, M. N., Yao, H., Liu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identification+of+Clematidis+Armandii+Caulis+and+its+adulterants+and+closely+related+species+by+ITS2+sequence.">Molecular identification of Clematidis Armandii Caulis and its adulterants and closely related species by ITS2 sequence.</a> Global Traditional Chinese Medicine. 4 (6), 446-450 (2011).</li><li>Liu, J. J., Chen, X., Wei, Z. Q., Li, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+constituents+and+identification+of+the+caules+of+Clematis+armandii+Franch.and+Clematis+montana+Buch.-Ham.">Chemical constituents and identification of the caules of Clematis armandii Franch.and Clematis montana Buch.-Ham.</a> Natural Product Research and Development. 22 (6), 998-1000 (2010).</li><li>Yang, T. R., Xu, Z., Shi, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+four+compounds+from+Clematis+Montana.">Studies on four compounds from Clematis Montana.</a> Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine. 10 (4), 142-143 (2008).</li><li>Yan, L. H., Xu, L. Z., Zhou, Z. M., Yang, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+constituents+from+stems+of+Clematis+armandii(I).">Chemical constituents from stems of Clematis armandii(I).</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 38 (3), 340-342 (2007).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traditional+uses,+phytochemistry,+pharmacology,+and+toxicology+of+Akebiae+Caulis+and+its+synonyms:+A+review.">Traditional uses, phytochemistry, pharmacology, and toxicology of Akebiae Caulis and its synonyms: A review.</a> Journal of Ethnopharmacology. 277, 114245 (2021).</li><li>Ye, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diuretic+effect+and+material+basis+of+Clematidis+Armandii+Caulis+in+rats.">Diuretic effect and material basis of Clematidis Armandii Caulis in rats.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 44 (9), 1889-1894 (2019).</li><li>Kuang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consistency+study+of+Caulis+Clematidis+Armandii+and+its+traditionally+used+products+and+counterfeit+species+based+on+efficacy+and+pharmacognosy.">Consistency study of Caulis Clematidis Armandii and its traditionally used products and counterfeit species based on efficacy and pharmacognosy.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 36 (3), 115-121 (2020).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+assessment+of+Asarum+heterotropoides+var.+mandshuricum+based+on+HPLC+multi-component+determination+and+multiple+pattern+recognition+method+of+fingerprint.">Quality assessment of Asarum heterotropoides var. mandshuricum based on HPLC multi-component determination and multiple pattern recognition method of fingerprint.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 238-243 (2022).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+multi-components+of+Paeoniae+Alba+Radix+based+on+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition.">Determination of multi-components of Paeoniae Alba Radix based on fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 231-237 (2022).</li><li>Li, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+investigation+for+raw+and+processed+products+of+Euodiae+Fructus+based+on+high-performance+liquid+chromatography+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition.">Comparative investigation for raw and processed products of Euodiae Fructus based on high-performance liquid chromatography fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chemistry &amp; Biodiversity. 18 (8), 2100281 (2021).</li><li>Dong, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+suitable+distribution+areas+of+Kawa+Kimichi+produced+in+Sichuan+province-based+on+remote+sensing+and+GIS-A+case+study+of+Clematis+Armandii.">Study on suitable distribution areas of Kawa Kimichi produced in Sichuan province-based on remote sensing and GIS-A case study of Clematis Armandii.</a> Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology. 17 (11), 2398-2404 (2015).</li><li>Tang, S. W., Pei, J., Li, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+and+histological+identification+of+Chuanmutong.">Morphological and histological identification of Chuanmutong.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 15 (1), 19-21 (2000).</li><li>Li, B., Chen, X., Fang, Q. M., Zhang, B. J., Wei, Z. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+Research+of+Chuanmutong.">Quality Research of Chuanmutong.</a> Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine. 27 (6), 58-60 (2009).</li><li>Wu, W. J., Wan, M. M., Cao, Y. H., Tan, R., Song, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+on+the+Quality+Standard+of+Chuanmutong.">Research on the Quality Standard of Chuanmutong.</a> Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 33 (2), 313-315 (2015).</li><li>Wei, Z. Q., Chen, X., Li, B., Dong, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+stigmasterol+in+Clematis+armandii+Franch+and+Clematis+montana+Buch-Ham.+by+HPLC.">Determination of stigmasterol in Clematis armandii Franch and Clematis montana Buch-Ham. by HPLC.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 20 (3), 574-575 (2009).</li><li>Qing, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+oleanolic+acid+in+Caulis+clematidis+armandii+by+HPLC.">Determination of oleanolic acid in Caulis clematidis armandii by HPLC.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 21 (3), 273-274 (2006).</li><li>Yang, S. D., Wang, R., Fu, D. Y., Guo, J. J., Tan, W. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+on+oleanolic+acid+in+caulis+clematidis+armandii+by+microwave+assisted+extraction-HPLC/MS.">Determination on oleanolic acid in caulis clematidis armandii by microwave assisted extraction-HPLC/MS.</a> Anhui Academy of Agricultural Sciences. 38 (13), 6929-6931 (2010).</li></ol>

Provsamlingen för forskning är det första viktiga steget för att konstruera igenkänning av flera mönster för att identifiera äktheten hos kinesiska medicinska material. Genom marknadsundersökningar fann vi att Sichuan Ya'an, Liangshan och Leshan är de viktigaste produktionsområdena för vilda resurser i Chuanmutong. De besläktade sorterna av samma släkte har också samma geografiska fördelning 6,20; CC, DC, DE, XS och SMT missbrukas ofta som Chuangm...

Chuanmutong, torr Caulis av Clematis armandii Franch. eller Clematis montana Buch.-Ham., är en traditionell kinesisk medicin som vanligtvis används i kliniker 1,2,3. Det används för behandling av urinproblem, ödem, sår på tungan och munnen, minskad mjölksekretion, ledstelhet och muskelsmärta orsakad av fuktig värme4. Chuanmutong har alltid erhållits från vilda sorter, främst fördelade i sydvästra Kina, särskilt i Sichuan, där den bästa kvaliteten finns 5,6. Det är svårt att skilja mellan autentiska sorter och deras närbesläktade äktenskapsbrott på grund av deras liknande egenskaper 7,8,9,10. Kvalitetsstandarden för Chuanmutong i 2020 års upplaga av Chinese Pharmacopoeia anger endast egenskaper, mikroskopisk identifiering och tunnskiktsidentifiering utan innehållsbestämning, som inte effektivt kan identifiera äktenskapsbrytare och därmed har potentiella risker. Dessutom, Det finns få rapporter som jämför och identifierar Chuanmutong och relaterade växter. Följaktligen är en kvalitetskontrollmetod för att säkerställa äktheten hos Chuanmutong värd att studera ytterligare.
De kemiska beståndsdelarna i Chuanmutong består huvudsakligen av pentacykliska triterpenoider av oleanansk typ och deras glykosider, flavonoider och organiska syror11,12,13,14. Bland dem har oleanolsyra, β-sitosterol, stigmasterol och ergosterol diuretiska effekter av olika intensiteter, vilket kan vara potentiella farmakodynamiska substanser för att främja diures och lindra strypning15,16. Kemiska fingeravtryck erhålls genom att separera och detektera många kemiska komponenter som ingår i prover genom högpresterande vätskekromatografi (HPLC), gaskromatografi (GC) etc. Att anta lämpliga statistiska analysmetoder för att analysera egenskaperna hos Chuanmutong kan bestämma den övergripande kvalitetskontrollen och vetenskapliga identifieringen av traditionell kinesisk medicin17,18,19.
I denna studie samlades 10 satser av Chuanmutong autentiska sorter och fem satser äktenskapsbrott. Deras kvalitet jämfördes och analyserades med HPLC-fingeravtrycksmetoden i kombination med multimönsterigenkänning, inklusive klusteranalys (CA), huvudkomponentanalys (PCA), ortogonal partiell minsta-kvadratdiskrimineringsanalys (OPLS-CA) och innehållsbestämning av den farmakodynamiska komponenten. I detta protokoll fastställs en metod för att identifiera autentiska sorter med hög specificitet, en ny strategi för vetenskaplig identifiering av autentiska sorter och äktenskapsbrytare av kinesiska medicinska material.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2017381038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160; Trading Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>WXBD5243V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Sitosterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;C18 column</td>
			<td>Yuexu Material Technology Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>Welch Ultimate LP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Guoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>19020103</td>
			<td>CMT-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200701</td>
			<td>CMT-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200701</td>
			<td>CMT-3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200901</td>
			<td>CMT-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>210701</td>
			<td>CMT-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Haobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>210401</td>
			<td>CMT-6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>200901</td>
			<td>CMT-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Wusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>201201</td>
			<td>CMT-8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Limin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China&#160;</td>
			<td>201001</td>
			<td>CMT-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chuanmutong</td>
			<td>Yuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China</td>
			<td>210501</td>
			<td>CMT-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang</td>
			<td>Madzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>CC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils.</td>
			<td>Heilin Village, Qiliping Township, Hongya County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>DC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis peterae Hand.-Mazz.</td>
			<td>Huangmu Village, Huangmu Township, Hanyuan County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>DE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils</td>
			<td>Mixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>XS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clematis finetiana Levl. et Vaniot.</td>
			<td>Wannian Village, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>SMT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic balance</td>
			<td>Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai,&#160; China&#160;</td>
			<td>FA1204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ergosterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>2021112602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2017042043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic acid</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>2016062901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High performance liquid chromatography</td>
			<td>Agilent, USA.</td>
			<td>1260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IBM SPSS Statistics version 26.0</td>
			<td>International Business Machines Corporation, USA</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160; Trading Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>WXBD6409V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td>
			<td>202010302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>n-butyl alcohol</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2020071047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petroleum ether</td>
			<td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>2020090125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphoric acid</td>
			<td>Comeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td>
			<td>20200110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SESCF-TCM version 2012</td>
			<td>National Pharmacopoeia Commission, China</td>
			<td>-</td>
			<td>http://114.247.108.158:8888/login</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stigmasterol</td>
			<td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China</td>
			<td>20210201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloromethane</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>20200214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Umetrics SIMCA version 14.1.0.2047</td>
			<td>Umetrics, Sweden</td>
			<td>-</td>
			<td>https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water machine</td>
			<td>Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, China</td>
			<td>UPH-II-10T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleaner</td>
			<td>Kunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, China</td>
			<td>KH3200E</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

hplc coupled with chemical fingerprinting for multi-pattern recognition for identifying the authenticity of clematidis armandii caulis

En metod för att identifiera kinesiska medicinska material och deras relaterade äktenskapsbrott konstruerades genom att ta Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, en universellt använd traditionell kinesisk medicin) som ett exempel. Tio satser äkta Chuanmutong-sorter och fem satser av relaterade äktenskapsbrytare analyserades och jämfördes baserat på högpresterande vätskekromatografi (HPLC) fingeravtryck i kombination med kemometri, inklusive klusteranalys (CA), huvudkomponentanalys (PCA) och ortogonal partiell minsta-kvadratdiskrimineringsanalys (OPLS-DA). Dessutom bestämdes innehållet i β-sitosterol. Chuanmutongs kontrollkemiska fingeravtryck fastställdes och 12 vanliga toppar identifierades. Likheten mellan fingeravtrycket från 10 satser äkta Chuanmutong-sorter och kontrollfingeravtrycket var 0,910-0,989, medan likheten mellan fem satser äktenskapsbrytare endast var 0,133-0,720. Baserat på de vanliga topparna i kromatogrammet klassificerades 15 satser av prover i tre innehållsnivåer av PCA och aggregerades i fyra kategorier av CA, vilket uppnådde en tydlig skillnad mellan autentiska Chuanmutong och äktenskapsbrytare av Chuanmutong. Vidare hittades sju differentiella komponenter som effektivt kan identifiera autentiska Chuanmutong och äktenskapsbrott i Chuanmutong genom OPLS-DA. Halten β-sitosterol i 10 satser äkta Chuanmutong-sorter var 97,53-161,56 μg/g, medan β-sitosterolhalten i de fem satserna äktenskapsbrott varierade kraftigt, bland annat β-sitosterolhalten i Clematis peterae Hand.-Mazz. och Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils. var betydligt lägre än för autentiska sorter av Chuanmutong. HPLC-indexkomponentinnehållet och den kemiska fingeravtrycksmetoden för flermönsterigenkänning som etablerats i denna studie ger en ny strategi för att effektivt identifiera autentiska kinesiska medicinska material och relaterade äktenskapsbrott.

Kromatografiskt fingeravtryck av Chuanmutong och likhetsanalys (SA) RSD-värdena för den relativa retentionstiden för precision, repeterbarhet och stabilitet var under 0,46%, 1,65% respektive 0,53%; RSD-värdena för den relativa topparean var under 4,23%, 3,56% respektive 3,96%. Som visas i figurerna 1A,B fanns det 12 distinkta gemensamma toppar (från topp 1 till topp 12) i HPLC-fingeravtrycken i de 10 autentiska Chuanmutong-proverna. Eftersom toppomr...

Watch this Scientific Journal Video about HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis at JoVE.com

HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis

Här presenterar vi ett protokoll för att upprätta högpresterande vätskekromatografi (HPLC), i kombination med kemisk fingeravtrycksigenkänning med flera mönster, vilket ger en ny strategi för att effektivt identifiera de äkta sorterna av Clematidis Armandii Caulis och dess äktenskapsbrytare.

HPLC i kombination med kemiska fingeravtryck för multimönsterigenkänning för att identifiera äktheten hos Clematidis Armandii Caulis

A method for identifying Chinese medicinal materials and their related adulterants was constructed by taking Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, a ...

Detta protokoll kan ge en ny strategi för att effektivt identifiera de äkta materialen i Clematidis armandii caulis och dess äktenskapsbrott. Denna metod kan användas i forskning om läkemedelsmaterialkvalitet och den ger en referens för att studera kvalitetsstandarderna för andra kinesiska medicinska material. För att påbörja provberedningen slipa råmaterialet till enhetlig partikelstorlek genom att leda dem genom ett nylonnät med lämplig innerdiameter.Överför noggrant vägda två gram av den malda råvaran till en proppad 50 ml E-kolv innan 50 ml metanol tillsätts i kolven. Sätt proppen på kolven i ultraljud uppvärmd vid 600 watt och 40 kilohertz i 30 minuter. Vid slutet av inkubationen spänner du den medicinska extraktlösningen genom filterpapperet.Efter töjning, överför fyra milliliter metanollösning innehållande de medicinska extrakten till en 10 ml mätkolv. Tillsätt sedan sex milliliter vatten till det och blanda lösningen. Låt lösningen sätta sig i 10 minuter.För HPLC-analys av proverna. Börja med att förbereda de mobila faserna och ställ in HPLC-gradientprogrammet enligt beskrivningen i manuskriptet. Filtrera provet genom ett 0,45 mikro mikroporöst filtermembran och utsätt det för HPLC-analys.För varje prov, utför analys sex gånger om dagen. För att utvärdera provlösningens stabilitet, analysera samma provlösning som lagras vid rumstemperatur i 0, 2, 4, 6, 8, 12 och 24 timmar efter beredningen. Ta sex replikat av samma prov och detektera dess fingeravtryck i HPLC.Importera relevanta data till programvaran med namnet Similarity Evaluation System of Chromatographic Fingerprints of Traditional Chinese Medicine eller SESCF TCM version 2012. Importera retentionstid och topparea för alla 10 satser av autentiska Chuanmutong-prover samt fem satser äktenskapsbrytare till SESCF TCM för analys. I huvudmenyn klickar du på det inställda referensspektrumet och går till parameterinställningsfönstret för att ställa in referenskromatografiska fingeravtryck för den autentiska arten Chuanmutong som referens.Ställ sedan in kontrollspektrumgenereringsmetod som medianmetod med tidsfönstrets bredd på 0,5. Klicka sedan på flerpunktskalibrering i huvudmenyn, välj topparna och välj sedan toppmatchningsalternativet som markerade toppar. Klicka slutligen på Beräkna likhet för att utföra en likhetsanalys av proverna baserat på referenskromatogrammets fingeravtryck från Chuanmutong.För att utföra systemisk klusteranalys öppna relevant statistisk analysprogramvara och klicka på filen för att importera data från 10 satser autentiska prover och fem satser äktenskapsbrott till programvaran. I menyn, under fliken Klassificering, klickar du på Analys och systemklustring. Välj de gemensamma toppområdena för 10 satser autentiska prover och fem satser äktenskapsbrytare som variabler.Ange antalet kluster till fyra. Klicka sedan på Metod för att välja klustringsmetod som intergruppsanslutning. Välj mätintervallet som Pearson-korrelation och använd fliken Okej för att rita klusteranalyskartan.För principkomponentanalys eller PCA, öppna dataanalysprogramvaran. Klicka på fil på menyn och skapa ett nytt vanligt projekt. Importera topparean för 12 vanliga toppar i ett Excel eller liknande kalkylblad från HPLC-systemet.Slå Finish för att slutföra dataimporten. För att ställa in modelltypen med PCA, klicka på Ny för att skapa en ny modell och sedan anpassa data med autofit och lägga till flikar. Gå till poäng för att få PCA-poängkartan.Att använda ortogonal partiell minsta kvadratdiskrimineringsanalys eller OPLSDA. Generera PCA-poängkartan som visats tidigare. Ange modelltypen med OPLSDA genom att klicka på Ny och Ny som modell ett Innan du går till skala för att välja par för alla, tryck sedan på Autopassa i poäng för att generera OPLSDA-poängkartan.För att uppskatta den variabla betydelsen och projektionen, gå till dataanalysprogramvarumenyn och gå till Analysera följt av att ställa in numret till 200 under per mutationer. Hämta R-kvadrat- och Q-kvadratvärdena från OPLSDA-poängen och klicka på VIP- och VIP-prediktiv för att få VIP-kartan. HPLC-fingeravtryck av de 10 autentiska Chuanmutong-proverna visade 12 distinkta gemensamma toppar varav de relativt stora och väl upplösta.Topp nummer 10 användes som referenstopp för att uppskatta de relativa retentionstiderna för vilotopparna. De autentiska proverna visade likhetsgrader mycket nära en som antyder hög likhet i god konsistens. Likhetsgraderna mellan de fem satserna av äktenskapsbrytare och kontrollen Chuanmutong var dock ganska låga.HPLC-fingeravtrycken hos de fem äktenskapsbrytarna observerades skilja sig från de autentiska proverna, främst i regionen med retentionstider från 28 till 55 minuter. PCA visade en uppenbar likhet mellan de autentiska sorterna och deras skillnad från äktenskapsbrytarna, förutom äktenskapsbrottet CC.Liknande resultat erhölls också från klusteranalys när klassificeringsavståndet var 20. Poängmatrisen som genererades från OPLSDA indikerade ingen skärningspunkt mellan provpunkterna för autentiska prover och äktenskapsbrytarna.Återigen liknade äktenskapsbrott CC de autentiska sorterna mer än de andra äktenskapsbrytarna. Enligt VIP-kartan identifierades topparna med värden större än en som huvudmarkörkomponenterna vilket orsakade skillnaden mellan autentiska prover och äktenskapsbrytarna. Innehållet av beta-sitosterol, en aktiv komponent som finns i Chuanmutong, detekterades i alla fem satser av äktenskapsbrott, men innehållet varierade kraftigt.Detta protokoll fastställer olika analysmetoder för att återspegla all information om medicinska material från flera vinklar och på hela vägen för att uppskatta äktheten hos Chuanmutong-medicinska material.

Research

JoVE Journal

Chemistry

HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis

Preparation of Highly Porous Coordination Polymer Coatings on Macroporous Polymer Monoliths for Enhanced Enrichment of Phosphopeptides

Framställning av mycket porösa samordningspolymerbeläggningar på Makroporösa polymermonoliter för Enhanced Anrikning av fosfopeptider

We describe a protocol for the preparation of hybrid materials based on highly porous coordination polymer coatings on the internal surface of macroporous ...

Facile Synthesis of Worm-like Micelles by Visible Light Mediated Dispersion Polymerization Using Photoredox Catalyst

Facile Syntes av maskliknande Miceller med synligt ljus medierad dispersionspolymerisation Använda Photoredox Catalyst

Presented herein is a protocol for the facile synthesis of worm-like micelles by visible light mediated dispersion polymerization. This approach begins ...

Determining the Chemical Composition of Corrosion Inhibitor/Metal Interfaces with XPS: Minimizing Post Immersion Oxidation

Fastställande av kemiska sammansättningen av Korrosionsinhibitor / metall gränssnitt med XPS: Minimera Post Immersion Oxidation

An approach for acquiring more reliable X-ray photoelectron spectroscopy data from corrosion inhibitor/metal interfaces is described. More specifically, ...

A Straightforward Method for Glucosinolate Extraction and Analysis with High-pressure Liquid Chromatography (HPLC)

A Straightforward Method for Glucosinolate Extraction and Analysis with High-pressure Liquid Chromatography HPLC

En enkel metod för glukosinolater Extraktion och analys med Högtrycks vätskekromatografi (HPLC)

Glucosinolates are a well-studied and highly diverse class of natural plant compounds. They play important roles in plant resistance, rapeseed oil ...

Chemical Precipitation Method for the Synthesis of Nb2O5 Modified Bulk Nickel Catalysts with High Specific Surface Area

Chemical Precipitation Method for the Synthesis of Nb2O5 Modified Bulk Nickel Catalysts with High Specific Surface Area

Kemisk fällning metod för syntesen av Nb2O5 modifierad Bulk Nickel katalysatorer med höga specifika yta

We demonstrate a method for the synthesis of NixNb1-xO catalysts with sponge-like and fold-like nanostructures. By varying the Nb:Ni ratio, a series of ...

Methionine Functionalized Biocompatible Block Copolymers for Targeted Plasmid DNA Delivery

Metionin funktionaliserade biokompatibla Blocksampolymerer för riktad plasmid DNA-leverans

Reversible addition-fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization integrates the advantages of radical polymerization and living polymerization. This ...

Extraction of Lignin with High &#946;-O-4 Content by Mild Ethanol Extraction and Its Effect on the Depolymerization Yield

Utvinning av Lignin med högt β-O-4 innehåll av Mild etanol utvinning och dess effekt på Depolymerization avkastningen

Lignin valorization strategies are a key factor for achieving more economically competitive biorefineries based on lignocellulosic biomass. Most of the ...

A Two-Step Pyrolysis-Gas Chromatography Method with Mass Spectrometric Detection for Identification of Tattoo Ink Ingredients and Counterfeit Products

En två-stegs pyrolys-gaskromatografi metod med masspektrometrisk detektion för identifiering av Tattoo Ink ingredienser och förfalskade produkter

Tattoo inks are complex mixtures of ingredients. Each of them possesses different chemical properties which have to be addressed upon chemical analysis. ...

Tuning the Acidity of Pt/ CNTs Catalysts for Hydrodeoxygenation of Diphenyl Ether

Justering av surhetsgraden hos PT/CNTs-katalysatorer för Hydrodesyresättning av difenyleter

We herein present a method for the synthesis of HNbWO6, HNbMoO6, HTaWO6 solid acid nanosheet modified Pt/CNTs. By varying the weight of various solid acid ...

Integrated Cell Manipulation Platform Coupled with the Single-probe for Mass Spectrometry Analysis of Drugs and Metabolites in Single Suspension Cells

Integrerad cell manipulation Platform tillsammans med Single-Probe för masspektrometri analys av droger och metaboliter i singel SUS pension celler

Single cell mass spectrometry (SCMS) enables sensitive detection and accurate analysis of broad ranges of cellular species on the individual-cell level. ...