Name: analysis of raw and processed cyperi rhizoma samples using liquid chromatography-tandem mass spectrometry in rats with primary dysmenorrhea
Uploaded: 2022-12-23T14:40:00
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Questo lavoro è stato sostenuto dalla Commissione municipale per la salute e la pianificazione familiare di Chongqing Progetto di scienza e tecnologia della medicina cinese (numero di progetto: ZY201802297), Progetto generale della Fondazione di scienze naturali di Chongqing (Numero progetto: cstc2019jcyj-msxmX065), Piano di team building per l'innovazione del sistema di innovazione del sistema di innovazione della zona montuosa moderna di Chongqing 2022 [10] e Progetto di costruzione della disciplina chiave della Commissione sanitaria municipale di Chongqing di Chinese Materia Elaborazione Medica.

Tutti gli esperimenti relativi agli animali sono stati condotti con l'approvazione del Comitato etico degli esperimenti dell'Istituto di MTC di Chongqing. In questo esperimento sono stati utilizzati ventiquattro ratti femmina di Sprague Dawley (SD) che avevano 8-10 settimane e pesavano 200 g ± 20 g.
1. Preparazione dell'estrazione
<ol><li>Calcolo<ol><li>Pianificare la somministrazione dell'estratto di CR o CRV a un gruppo di trattamento di sei ratti Sprague-Dawley (10 g/[kg...

A causa della grande varietà e della diversa natura dei TCM, queste erbe a volte non funzionano nella pratica clinica, e questo può essere dovuto alla lavorazione e al decotto inappropriati dei TCM. I meccanismi della MTC stanno diventando più evidenti con l'uso della scienza e della tecnologia contemporanee29,30. Questo studio mostra che sia la CR che la CRV hanno effetti terapeutici nei ratti modello PD e che l'effetto terapeutico del CRV è più sostanziale...

La dismenorrea primaria (PD) è la condizione più diffusa in ginecologia clinica. È caratterizzata da mal di schiena, gonfiore, dolore addominale o disagio prima o durante le mestruazioni senza patologia pelvica nel sistema riproduttivo1. Un rapporto sulla sua prevalenza ha mostrato che l'85,7% degli studenti soffre di PD2. I contraccettivi orali a basso dosaggio sono la terapia standard, ma i loro effetti collaterali avversi, come la trombosi venosa profonda, hanno attirato una crescente attenzione3. La prevalenza della trombosi venosa profonda tra gli utilizzatori di contraccettivi orali è di >1 per 1.000 donne e il rischio è più alto durante i primi 6-12 mesi e negli utenti di età superiore ai 40 anni4.
A lungo utilizzato nella medicina tradizionale cinese (MTC), Cyperi rhizoma (CR) deriva dal rizoma essiccato del Cyperus rotundus L. della famiglia delle Cyperaceae. La CR regola i disturbi mestruali e allevia la depressione e il dolore5. La CR è ampiamente usata in ginecologia ed è considerata una medicina generale per il trattamento delle malattie femminili6. La CR trattata con aceto (CRV) è tipicamente utilizzata clinicamente. Rispetto alla CR, la CRV mostra una maggiore regolazione delle mestruazioni e del sollievo dal dolore. Studi moderni hanno dimostrato che la CR inibisce la cicloossigenasi-2 (COX-2) e la successiva sintesi delle prostaglandine (PG), ottenendo così un effetto antinfiammatorio. Nel frattempo, CR mostra un effetto analgesico senza effetti collaterali7, rendendo CR una buona scelta per i pazienti con dismenorrea. Tuttavia, il meccanismo alla base della regolazione delle mestruazioni e della fornitura di sollievo dal dolore da parte della CRV non è chiaro. La ricerca sulla CR si è concentrata principalmente sui cambiamenti nei suoi componenti chimici attivi e nelle attività farmacologiche, come i suoi effetti antinfiammatori, antidepressivi e analgesici 8,9,10,11,12.
Sebbene gli ingredienti della MTC siano complessi, vengono assorbiti nel sangue e devono raggiungere una concentrazione ematica specifica per essere efficaci13. L'ambito dello screening dei principi attivi della MTC può essere ristretto utilizzando la strategia di determinazione dei costituenti nel sangue. La cecità può essere evitata nello studio dei componenti chimici in vitro e l'unilateralità può essere evitata nello studio dei singoli costituenti14. Confrontando le composizioni di CR e CRV nel sangue, i cambiamenti nei principi attivi della CR elaborata possono essere rilevati in modo efficace e rapido. L'efficacia del farmaco è il processo attraverso il quale un farmaco influenza il corpo. I cambiamenti nei componenti del farmaco dovuti alla risposta metabolica del corpo, che possono essere correlati al meccanismo d'azione del farmaco, possono essere determinati con la metabonomia. La metabonomica mira a misurare le risposte metaboliche complessive e dinamiche, il che è coerente con la determinazione dell'efficacia complessiva della medicina tradizionale cinese15. Inoltre, i metaboliti sono il prodotto finale dell'espressione genica, che è più strettamente correlata ai fenotipi16. Pertanto, la metabonomica può essere adatta per esplorare le differenze nelle vie metaboliche tra CR e CRV nel trattamento della malattia di Parkinson. La metabolomica non mirata basata sulla cromatografia liquida tandem ad alta risoluzione (LC-MS/MS) è caratterizzata da elevata produttività, alta sensibilità e alta risoluzione e può essere utilizzata per misurare molti diversi piccoli componenti molecolari17,18 . Questo metodo può determinare simultaneamente i metaboliti endogeni e i costituenti esogeni assorbiti nel sangue. La metabonomica è stata ampiamente utilizzata negli studi su MTC19, tossicologia dei farmaci 20, gestione della salute 21, sport22, cibo 23 e altri campi.
In questo studio, le differenze nei costituenti esogeni assorbiti nel sangue e nei metaboliti endogeni sono state misurate tra ratti modello di dismenorrea trattati con CRV e dismenorrea trattati con CRV utilizzando metabolomica non mirata basata su LC-MS / MS per rivelare i meccanismi degli effetti analgesici del CRV.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetonitrile&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA</td>
			<td>197164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BECKMAN COULTER Microfuge 20</td>
			<td>Beckman&#160;Coulter, Inc.</td>
			<td>MRZ15K047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Estradiol benzoate</td>
			<td>Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd</td>
			<td>C10042616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>formic acid</td>
			<td>Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA</td>
			<td>177799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC 30A system</td>
			<td>Shimadzu, Kyoto, Japan</td>
			<td>228-45162-46</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olive oil</td>
			<td>Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>H25A11P111909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxytocin synthetic</td>
			<td>Zhejiang peptide biology Co., Ltd&#160;</td>
			<td>2019092001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat PGF2&#945; ELISA kit</td>
			<td>Shanghai lmai Bioengineering Co., Ltd</td>
			<td>202101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat PGFE2 ELISA kit</td>
			<td>Shanghai lmai Bioengineering Co., Ltd</td>
			<td>EDL202006217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPF Sprague-Dawley rats</td>
			<td>Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd</td>
			<td>Certificate number SCXK (Hunan) 2019-0004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tecan Infinite 200 PRO&#160;&#160;</td>
			<td>Tecan Austria GmbH, Austria</td>
			<td>1510002987</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triple TOF 4600 system</td>
			<td>SCIEX, Framingham, MA, USA</td>
			<td>BK20641402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>water</td>
			<td>Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA</td>
			<td>152720</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of raw and processed cyperi rhizoma samples using liquid chromatography-tandem mass spectrometry in rats with primary dysmenorrhea

Cyperi rhizoma (CR) è ampiamente usato in ginecologia ed è una medicina generale per il trattamento delle malattie delle donne in Cina. Poiché l'effetto analgesico della CR è potenziato dopo la lavorazione con aceto, la CR elaborata con aceto (CRV) viene generalmente utilizzata clinicamente. Tuttavia, il meccanismo con cui l'effetto analgesico è potenziato dalla lavorazione dell'aceto non è chiaro. In questo studio, la tecnica di spettrometria di massa tandem per cromatografia liquida ad altissima pressione (UPLC-MS/MS) è stata utilizzata per esaminare i cambiamenti nei livelli ematici dei costituenti esogeni e dei metaboliti tra ratti trattati con CR e ratti trattati con CRV con dismenorrea. I risultati hanno rivelato livelli diversi di 15 costituenti e due metaboliti nel sangue di questi ratti. Tra questi, i livelli di (-)-mirtenolo e acido [(1R,2S,3R,4R)-3-idrossi-1,4,7,7-tetrametilbiciclo[2.2.1]ep-2-il]acetico nel gruppo CRV erano considerevolmente più alti rispetto al gruppo CR. Il CRV ha ridotto il livello di prostanoidi della serie 2 e dei leucotrieni della serie 4 con attività proinfiammatorie, di aggregazione piastrinica e di vasocostrizione e ha fornito effetti analgesici modulando il metabolismo dell'acido arachidonico e dell'acido linoleico e la biosintesi degli acidi grassi insaturi. Questo studio ha rivelato che la lavorazione dell'aceto migliora l'effetto analgesico della CR e contribuisce alla nostra comprensione del meccanismo d'azione del CRV.

Analisi dell'esperimento modello di dismenorrea Non c'è stata alcuna risposta di contorsione entro 30 minuti nel gruppo di controllo perché questi ratti non sono stati iniettati per via intraperitoneale con ossitocina ed estradiolo benzoato per causare dolore. I ratti nei gruppi modello, CR e CRV hanno mostrato sostanziali reazioni di contorcersi dopo l'iniezione di ossitocina. Questi risultati dimostrano l'efficacia della combinazione di estradiolo benzoato e ossitocina per indurre dismenorrea. Le ...

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Analysis of Raw and Processed Cyperi Rhizoma Samples Using Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry in Rats with Primary Dysmenorrhea

Qui, viene presentata un'analisi comparativa di campioni grezzi e lavorati di rizoma di Cyperi (CR) utilizzando la spettrometria di massa tandem ad altissima prestazione per cromatografia liquida ad alta risoluzione (UPLC-MS / MS) nei ratti con dismenorrea primaria. Le variazioni dei livelli ematici dei metaboliti e dei costituenti del campione sono state esaminate tra ratti trattati con CR e CR trattati con aceto (CRV).

Analisi di campioni di rizoma di Cyperi grezzi e lavorati mediante cromatografia liquida-spettrometria di massa tandem in ratti con dismenorrea primaria

Cyperi rhizoma (CR) is widely used in gynecology and is a general medicine for treating women's diseases in China. Since the analgesic effect of CR is ...

La metabonomica misura le risposte metaboliche complessive e dinamiche ed è coerente con la determinazione dell'efficacia complessiva della medicina tradizionale cinese. I cambiamenti nei componenti del farmaco dovuti alla risposta metabolica del corpo possono essere determinati con la metabonomia. L'ambito dello screening dei principi attivi della MTC può essere ristretto utilizzando questa tecnica.L'unilateralità può essere evitata studiando i singoli costituenti. Questo metodo può essere simultaneo, determinare i metaboliti endogeni e i costituenti esogeni assorbiti nel sangue. La metabonomica è stata ampiamente utilizzata negli studi sulla MTC, tossicologia dei farmaci, gestione della salute, sport, cibo e altri campi.Per iniziare, determinare l'estratto richiesto di Cyperi rhizoma, o CR, o Cyperi rhizoma trattato con aceto, o CRV, per trattare un gruppo di sei ratti Sprague Dawley per tre giorni. Calcolare il volume di CR o CRV da applicare per ratto utilizzando questa equazione. Per elaborare il CRV, mescolare accuratamente 100 grammi di CR e 20 grammi di aceto, che ha più di 5,5 grammi di acido acetico per 100 millilitri, e incubare per 12 ore.Dopo l'incubazione, saltare in padella il composto in una padella di ferro per 10 minuti a 110-120 gradi Celsius. Quindi, rimuovere la miscela e lasciarla raffreddare a temperatura ambiente. Per preparare l'estratto di CR, immergere il CR per due ore con acqua pura 10 volte la quantità di CR assunta, assicurandosi che i materiali medicinali siano al di sotto del livello del liquido.Quindi, portare a ebollizione la miscela di acqua e medicina a fuoco alto e tenerla bollente a fuoco basso per 20 minuti. Quindi, filtrare il contenuto attraverso un panno filtrante a maglie 100 e raccogliere il filtrato. Quindi, concentrare il filtrato raccolto in un estratto con un evaporatore rotante a un grammo per millilitro.Per preparare l'estratto di CRV, eseguire le fasi di ammollo, bollitura e concentrazione come dimostrato per l'estrazione CR. Per testare gli estratti CR e CRV, pipettare 500 microlitri dell'estratto in 500 microlitri di metanolo in provette da microcentrifuga da 1,5 millilitri e vortice per 30 secondi per miscelare. Centrifugare i campioni per 15 minuti a 16.500 g a quattro gradi Celsius.Quindi, rimuovere il surnatante e trasferirlo nel flaconcino del campione per il test. Dopo aver testato i campioni, eseguire l'analisi dei componenti principali, o PCA, e la modellazione utilizzando il software di analisi. Importare i dati standardizzati dei metaboliti nel software, quindi utilizzare Autofit per costruire il modello di analisi.Infine, utilizzare i punteggi per ottenere il grafico a dispersione del punteggio della PCA. Per eseguire l'analisi ortogonale parziale dei minimi quadrati, o OPLS-DA, importare i dati standardizzati sui metaboliti e sui gruppi CR e CRV nel software. Quindi, importare i dati CR e CRV nei rispettivi gruppi creati.Quindi, utilizzare Adatta automaticamente per creare il modello di analisi e utilizzare il punteggio per ottenere il grafico a dispersione del punteggio di OPLS-DA. Infine, utilizzare VIP per ottenere la significatività variabile nella proiezione o il valore VIP nell'OPLS-DA. Per identificare i metaboliti potenzialmente differenziali, escludere i metaboliti con valori VIP maggiori di uno.Quindi, utilizzare il software statistico per calcolare il valore P dei metaboliti sottoposti a screening mediante il test T dello studente. Successivamente, per identificare i metaboliti differenziali, utilizzare i metaboliti annotati ed escludere i metaboliti differenziali da abbinare nel database KEGG. Mostra i cambiamenti nei metaboliti differenziali nei gruppi CR e CRV disegnando una mappa di calore.Per esaminare le potenziali vie metaboliche, vai al database MetaboAnalyst. Utilizzare Pathways Analysis per caricare i diversi metaboliti per ottenere le potenziali vie metaboliche. Caricare i diversi metaboliti nel database KEGG per analizzare le potenziali vie metaboliche.L'esperimento del modello di dismenorrea analizzato ha mostrato differenze significative nei livelli di prostaglandine. I ratti nei gruppi modello CR e CRV hanno mostrato sostanziali reazioni di contorcersi dopo l'iniezione di ossitocina. I risultati dell'analisi PCA hanno dimostrato che i cluster di CR e CRV rispetto ai gruppi modello erano significativamente separati in entrambe le modalità di ioni positivi e negativi.L'OPLS-DA è stato utilizzato per lo screening delle differenze metaboliche e i risultati del grafico a dispersione hanno dimostrato che i gruppi CR e CRV erano separati. Sono state eseguite analisi statistiche univariate per identificare le variazioni metaboliche. Viene mostrato un grafico del vulcano, in cui ogni punto corrisponde a un metabolita diverso.Cambiamenti significativi sono stati osservati in 63 metaboliti in modalità positiva e 30 in modalità negativa. I metaboliti differenziali sono stati determinati utilizzando i database KEGG e HDMB e sono stati elencati i composti accuratamente abbinati. I valori quantitativi dei metaboliti differenziali tra i gruppi CR e CRV sono stati calcolati e raggruppati.Le macchie di colore indicano come ogni metabolita è espresso rispetto agli altri. Rispetto al gruppo CR, i livelli di quattro metaboliti differenziali nel gruppo CRV sono aumentati mentre 11 metaboliti sono diminuiti nella modalità ionica positiva. Nel caso della modalità a ioni negativi, quattro metaboliti differenziali sono aumentati e sette metaboliti sono diminuiti.I risultati dell'analisi del pathway KEGG hanno mostrato che i metaboliti differenziali erano associati a nove vie nelle modalità positiva e negativa. Più metaboliti differenziali, migliori sono i risultati, quindi è possibile collegare abbastanza vie metaboliche e le vie metaboliche chiave sottoposte a screening saranno più accurate.

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