Name: analysis of raw and processed cyperi rhizoma samples using liquid chromatography-tandem mass spectrometry in rats with primary dysmenorrhea
Uploaded: 2022-12-23T14:40:00
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이 작업은 충칭시 보건 및 가족 계획위원회 한의학 과학 기술 프로젝트 (프로젝트 번호 : ZY201802297), 충칭 자연 과학 재단 일반 프로젝트 (프로젝트 번호 : cstc2019jcyj-msxmX065), 충칭 현대 산악 지역 특성 고효율 농업 기술 시스템 혁신 팀 빌딩 계획 2022 [10] 및 충칭시 보건위원회 중국 재료의 핵심 분야 건설 프로젝트의 지원을 받았습니다. 메디카 프로세싱.

모든 동물 관련 실험은 충칭 중의학연구소 실험윤리위원회의 승인을 받아 수행되었다. 8-10주령이고 체중이 200g± 20g인 24마리의 암컷 Sprague Dawley 쥐(SD)를 이 실험에 사용했습니다.
1. 추출의 제조
<ol><li>계산<ol><li>CR 또는 CRV 추출물을 6마리의 Sprague-Dawley 쥐(10g/[kg∙day])의 처리군에 3일 동안 투여할 계획입니다. 1g/mL의 CR 또는 CRV 추출물 농도를 사용하십시오(추출물 1...

TCM의 다양하고 다양한 특성으로 인해 이러한 허브는 때때로 임상 실습에서 효과가 없으며 이는 TCM의 부적절한 가공 및 달임 때문일 수 있습니다. TCM의 메커니즘은 현대 과학 기술29,30의 사용으로 더욱 분명 해지고 있습니다. 이 연구는 CR과 CRV 모두 PD 모델 쥐에서 치료 효과가 있고 CRV의 치료 효과가 더 중요하다는 것을 보여줍니다. CRV의 작용 메커니즘?...

원발성 월경통(PD)은 임상 산부인과에서 가장 흔한 상태입니다. 생식 기관의 골반 병리 없이 월경 전이나 월경 중 요통, 부기, 복통 또는 불편함이 특징입니다1. 유병률에 대한 보고서에 따르면 학생의 85.7%가 PD2를 앓고 있습니다. 저용량 경구 피임약이 표준 치료법이지만 심부 정맥 혈전증과 같은 부작용이 점점 더 주목을 받고 있다3. 경구 피임약 사용자 중 심부 정맥 혈전증의 유병률은 여성 1,000명당 >1명이며, 위험은 처음 6-12개월과 40세 이상 사용자 사이에서 가장 높다4.
중국 전통 의학(TCM)에서 오랫동안 사용된 Cyperi rhizoma(CR)는 Cyperaceae 계통의 Cyperus rotundus L.의 말린 뿌리줄기에서 파생됩니다. CR은 월경 장애를 조절하고 우울증과 통증을 완화합니다5. CR은 산부인과에서 널리 사용되며 여성의 질병을 치료하는 일반 의학으로 간주됩니다6. 식초로 처리된 CR(CRV)은 일반적으로 임상적으로 사용됩니다. CR과 비교하여 CRV는 월경 및 통증 완화에 대한 강화된 조절을 보여줍니다. 현대 연구에 따르면 CR은 cyclooxygenase-2 (COX-2)와 프로스타글란딘 (PG)의 후속 합성을 억제하여 항 염증 효과를 얻습니다. 한편, CR은 부작용 없이 진통 효과를 나타내므로7 CR은 월경통 환자에게 좋은 선택이 된다. 그러나 CRV에 의한 월경 조절 및 통증 완화 제공의 기본 메커니즘은 불분명합니다. CR 연구는 주로 항염증제, 항우울제 및 진통 효과와 같은 활성 화학 성분 및 약리학적 활성의 변화에 중점을 두었습니다 8,9,10,11,12.
TCM의 성분은 복잡하지만 혈액에 흡수되어 특정 혈중 농도에 도달해야 효과가 있다13. TCM의 활성 성분을 스크리닝하는 범위는 혈액 내 성분 결정 전략을 활용하여 좁힐 수 있습니다. 시험관 내에서 화학 성분을 연구할 때 실명을 피할 수 있고, 개별 성분14을 연구할 때 일방성을 피할 수 있다. 혈액 내 CR과 CRV의 조성을 비교함으로써 처리된 CR의 활성 성분 변화를 효과적이고 빠르게 감지할 수 있습니다. 약물 효능은 약물이 신체에 영향을 미치는 과정입니다. 약물의 작용 메커니즘과 관련이있을 수있는 신체의 대사 반응으로 인한 약물 성분의 변화는 대사 학으로 결정할 수 있습니다. 대사노학(Metabonomics)은 중국 전통 의학의 전반적인 효능을 결정하는 것과 일치하는 전체적이고 역동적인 대사 반응을 측정하는 것을 목표로 한다15. 또한, 대사산물은 유전자 발현의 최종 산물이며, 이는 표현형과 가장 밀접한 관련이 있다16. 따라서, 대사노학은 PD의 치료에서 CR과 CRV 사이의 대사 경로의 차이를 탐색하는 데 적합할 수 있다. 액체 크로마토그래피-고분해능 탠덤 질량분석법(LC-MS/MS) 기반 비표적 대사체학은 높은 처리량, 높은 감도 및 고분해능을 특징으로 하며 다양한 소분자 성분을 측정하는 데 사용할 수 있다17,18 . 이 방법은 혈액에 흡수 된 내인성 대사 산물과 외인성 성분을 동시에 결정할 수 있습니다. 대사노학은 TCM19, 약물 독성학 20, 건강 관리 21, 스포츠22, 식품 23 및 기타 분야에 대한 연구에서 널리 사용되었습니다.
본 연구에서는 CRV의 진통 효과 기전을 밝히기 위해 LC-MS/MS 기반 비표적 대사체학을 사용하여 CR 처리된 월경통 모델 쥐와 CRV 처리된 월경통 모델 쥐 사이에서 혈액에 흡수된 외인성 성분과 내인성 대사산물의 차이를 측정했습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetonitrile&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA</td>
			<td>197164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BECKMAN COULTER Microfuge 20</td>
			<td>Beckman&#160;Coulter, Inc.</td>
			<td>MRZ15K047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Estradiol benzoate</td>
			<td>Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd</td>
			<td>C10042616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>formic acid</td>
			<td>Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA</td>
			<td>177799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC 30A system</td>
			<td>Shimadzu, Kyoto, Japan</td>
			<td>228-45162-46</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olive oil</td>
			<td>Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>H25A11P111909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxytocin synthetic</td>
			<td>Zhejiang peptide biology Co., Ltd&#160;</td>
			<td>2019092001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat PGF2&#945; ELISA kit</td>
			<td>Shanghai lmai Bioengineering Co., Ltd</td>
			<td>202101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat PGFE2 ELISA kit</td>
			<td>Shanghai lmai Bioengineering Co., Ltd</td>
			<td>EDL202006217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPF Sprague-Dawley rats</td>
			<td>Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd</td>
			<td>Certificate number SCXK (Hunan) 2019-0004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tecan Infinite 200 PRO&#160;&#160;</td>
			<td>Tecan Austria GmbH, Austria</td>
			<td>1510002987</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triple TOF 4600 system</td>
			<td>SCIEX, Framingham, MA, USA</td>
			<td>BK20641402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>water</td>
			<td>Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA</td>
			<td>152720</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of raw and processed cyperi rhizoma samples using liquid chromatography-tandem mass spectrometry in rats with primary dysmenorrhea

Cyperi rhizoma (CR)는 산부인과에서 널리 사용되며 중국의 여성 질병 치료를위한 일반 의약품입니다. 식초로 처리한 후 CR의 진통 효과가 향상되기 때문에 식초로 처리한 CR(CRV)은 일반적으로 임상적으로 사용됩니다. 그러나, 식초 가공에 의해 진통 효과가 향상되는 메커니즘은 불분명하다. 이 연구에서는 초고압 액체 크로마토그래피탠덤 질량분석법(UPLC-MS/MS) 기술을 사용하여 월경통이 있는 CR 처리 쥐와 CRV 처리 쥐 사이의 외인성 성분 및 대사 산물의 혈중 농도 변화를 조사했습니다. 그 결과 이 쥐의 혈액에서 15가지 성분과 2가지 대사 산물의 수준이 다른 것으로 나타났습니다. 그 중에서도 CRV 그룹의 (-)-myrtenol 및 [(1R, 2S, 3R, 4R) -3- 하이드 록시 -1,4,7,7- 테트라 메틸 사이클로 [2.2.1] 헵트 -2- 일] 아세트산의 수준은 CR 그룹보다 상당히 높았다. CRV는 전염증, 혈소판 응집 및 혈관 수축 활성이 있는 2 시리즈 프로스타노이드 및 4 시리즈 류코트리엔의 수준을 감소시키고 아라키돈산 및 리놀레산 대사와 불포화 지방산의 생합성을 조절하여 진통 효과를 제공했습니다. 이 연구는 식초 가공이 CR의 진통 효과를 향상시키고 CRV의 작용 메커니즘에 대한 우리의 이해에 기여한다는 것을 보여주었습니다.

월경통 모델 실험 분석 대조군에서는 30분 이내에 몸부림치는 반응이 없었는데, 이는 이 쥐들에게 통증을 유발하기 위해 옥시토신과 에스트라디올 벤조에이트를 복강 주사하지 않았기 때문입니다. 모델, CR 및 CRV 그룹의 쥐는 옥시토신 주사 후 상당한 몸부림 반응을 보였다. 이러한 결과는 월경통을 유발하는 에스트라디올 벤조에이트와 옥시토신 조합의 효능을 입증합니다. 모델과 ...

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Analysis of Raw and Processed Cyperi Rhizoma Samples Using Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry in Rats with Primary Dysmenorrhea

여기에서는 원발성 월경통이 있는 쥐에서 초고성능 액체 크로마토그래피-고분해능 탠덤 질량분석법(UPLC-MS/MS)을 사용하여 원시 및 가공된 Cyperi rhizoma(CR) 샘플의 비교 분석을 제시합니다. 대사 산물 및 샘플 성분의 혈중 농도 변화는 CR로 처리 된 쥐와 식초로 처리 된 CR (CRV) 사이에서 조사되었습니다.

원발성 월경통이 있는 쥐에서 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분석법을 사용한 원시 및 처리된 Cyperi Rhizoma 샘플 분석

Cyperi rhizoma (CR) is widely used in gynecology and is a general medicine for treating women's diseases in China. Since the analgesic effect of CR is ...

대사학은 전반적이고 역동적인 대사 반응을 측정하며 중국 전통 의학의 전반적인 효능을 결정하는 것과 일치합니다. 신체의 대사 반응으로 인한 약물 성분의 변화는 대사학을 통해 결정될 수 있습니다. TCM의 활성 성분을 스크리닝하는 범위는 이 기술을 활용하여 좁힐 수 있습니다.일방성은 개별 구성 요소를 연구함으로써 피할 수 있습니다. 이 방법은 동시에 혈액 내로 흡수되는 내인성 대사 산물과 외인성 성분을 결정할 수 있습니다. 대사노학은 TCM, 약물 독성학, 건강 관리, 스포츠, 식품 및 기타 분야에 대한 연구에 널리 사용되었습니다.시작하려면 3일 동안 6마리의 Sprague Dawley 쥐 그룹을 치료하기 위해 식초로 처리한 Cyperi rhizoma(CR) 또는 Cyperi rhizoma(CR)의 추출물을 결정합니다. 이 방정식을 사용하여 쥐당 적용할 CR 또는 CRV의 부피를 계산합니다. CRV를 처리하려면 100 밀리리터 당 5.5 그램 이상의 아세트산을 함유 한 100 그램의 CR과 20 그램의 식초를 완전히 혼합하고 12 시간 동안 배양하십시오.배양 후, 혼합물을 철 팬에서 섭씨 110 내지 120도에서 10 분 동안 볶는다. 그런 다음 혼합물을 제거하고 실온에서 식히십시오. CR 추출물을 준비하려면 CR을 취한 CR 양의 10배인 순수한 물로 2시간 동안 담가 약재가 액체 수준보다 낮은지 확인합니다.다음으로 물과 약의 혼합물을 고열로 끓여서 약한 불에서 20 분 동안 끓입니다. 그런 다음 100메쉬 여과포로 내용물을 걸러내고 여과액을 수집합니다. 이어서, 수집된 여과액을 회전 증발기로 추출물에 넣고 밀리리터당 1그램이 되도록 농축한다.CRV 추출물을 제조하기 위해, CR 추출에 대해 입증된 바와 같이 침지, 끓임 및 농축하는 단계를 수행한다. CR 및 CRV 추출물을 시험하기 위해, 500 마이크로리터의 추출물을 1.5 밀리리터 마이크로원심분리 튜브에서 500 마이크로리터의 메탄올로 피펫팅하고, 혼합하기 위해 30초 동안 와동시킨다. 섭씨 4도에서 16, 500g에서 15분 동안 샘플을 원심분리합니다.그런 다음 상층액을 제거하고 테스트를 위해 샘플 바이알로 옮깁니다. 샘플을 테스트한 후 주성분 분석(PCA)을 수행하고 해석 소프트웨어를 사용하여 모델링을 수행합니다. 대사 산물의 표준화된 데이터를 소프트웨어로 가져온 다음 Autofit을 사용하여 분석 모델을 구축합니다.마지막으로 점수를 사용하여 PCA의 점수 산점도를 구합니다. 직교 부분 최소 제곱 판별 분석(OPLS-DA)을 수행하려면 대사 산물과 CR 및 CRV 그룹에 대한 표준화된 데이터를 소프트웨어로 가져옵니다. 그런 다음 CR 및 CRV 데이터를 생성된 해당 그룹으로 가져옵니다.그런 다음 자동 맞춤을 사용하여 분석 모델을 빌드하고 점수를 사용하여 OPLS-DA의 점수 산점도를 확보하십시오. 마지막으로, VIP를 사용하여 OPLS-DA의 프로젝션 또는 VIP 값에서 변수 유의성을 확보하십시오. 잠재적으로 차등적인 대사 산물을 식별하려면 VIP 값이 1보다 큰 대사 산물을 선별합니다.그런 다음 통계 소프트웨어를 사용하여 학생의 T-검정으로 선별된 대사산물의 P-값을 계산합니다. 다음으로, 차등 대사 산물을 식별하기 위해 주석이 달린 대사 산물을 사용하고 KEGG 데이터베이스에서 일치시킬 차등 대사 산물을 선별합니다. 히트 맵을 그려 CR 및 CRV 그룹의 차등 대사 산물의 변화를 보여줍니다.잠재적인 대사 경로를 검사하려면 MetaboAnalyst 데이터베이스로 이동하십시오. 경로 분석을 사용하여 다양한 대사 산물을 업로드하여 잠재적인 대사 경로를 얻습니다. 다양한 대사산물을 KEGG 데이터베이스에 업로드하여 잠재적인 대사 경로를 분석합니다.분석된 월경통 모델 실험은 프로스타글란딘 수치에 상당한 차이를 보였다. 모델 CR 및 CRV 그룹의 쥐는 옥시토신 주사 후 상당한 몸부림 반응을 보였다. PCA 분석 결과는 모델 그룹과 비교하여 CR 및 CRV의 클러스터가 양이온 및 음이온 모드 모두에서 유의하게 분리되었음을 입증했습니다.OPLS-DA는 대사 차이를 스크리닝하는 데 사용되었으며 산점도 결과는 CR과 CRV 그룹이 분리되었음을 보여주었습니다. 대사 변이를 확인하기 위해 단변량 통계 분석이 수행되었습니다. 화산 플롯이 표시되며, 각 점은 다른 대사 산물에 해당합니다.양성 모드에서 63 개의 대사 산물에서 유의 한 변화가 관찰되었고 음성 모드에서 30 개의 대사 산물에서 유의 한 변화가 관찰되었다. KEGG 및 HDMB 데이터베이스를 사용하여 차등 대사 산물을 결정하고 정확하게 일치하는 화합물을 나열했습니다. CR과 CRV 그룹 사이의 차등 대사 산물의 정량적 값을 계산하고 클러스터링했습니다.색상 패치는 각 대사 산물이 다른 대사 산물에 비해 어떻게 표현되는지를 나타냅니다. CR 그룹과 비교하여 CRV 그룹의 4개 차동 대사 산물 수준은 증가한 반면 양이온 모드에서는 11개의 대사 산물이 감소했습니다. 음이온 모드의 경우 4개의 차등 대사산물이 증가하고 7개의 대사산물이 감소했습니다.KEGG 경로 분석 결과, 차등 대사산물은 양성 및 음성 모드에서 9가지 경로와 관련이 있는 것으로 나타났습니다. 차등 대사 산물이 많을수록 결과가 더 좋아지므로 충분한 대사 경로를 연결할 수 있고 선별된 주요 대사 경로가 더 정확해집니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

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파킨슨병의 Neuropeptides의 든 이미징 질량 분광법

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연구

의학

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롤리팝 - 같은 Ultrafiltration 프로브를 사용하여 인간의 원주민 타액 Peptidome를 샘플링 : 임상 질량 분광법을위한 펩타이드 감지를 단순화하고 향상

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