Name: analysis of raw and processed cyperi rhizoma samples using liquid chromatography-tandem mass spectrometry in rats with primary dysmenorrhea
Uploaded: 2022-12-23T14:40:00
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Este trabalho foi apoiado pela Comissão Municipal de Saúde e Planejamento Familiar de Chongqing Projeto de Ciência e Tecnologia de Medicina Chinesa (Número do Projeto: ZY201802297), Projeto Geral da Fundação de Ciências Naturais de Chongqing (Número do Projeto: cstc2019jcyj-msxmX065), Chongqing Modern Mountain Area Characteristic High-efficiency Agricultural Technology System Innovation Team Building Plan 2022 [10] e Chongqing Municipal Health Commission Key Discipline Construction Project of Chinese Materia Processamento Médico.

Todos os experimentos relacionados a animais foram conduzidos com aprovação do Comitê de Ética em Experimentos do Instituto Chongqing da MTC. Vinte e quatro ratas Sprague Dawley (SD) com 8-10 semanas de idade e pesando 200 g ± 20 g foram utilizadas neste experimento.
1. Preparação da extração
<ol><li>Cálculo<ol><li>Planeie administrar o extracto de CR ou CRV a um grupo de tratamento de seis ratos Sprague-Dawley (10 g/[kg∙dia]) durante 3 dias. Use uma concentraç?...

Devido à grande variedade e natureza diferente dos MTCs, essas ervas às vezes não funcionam na prática clínica, e isso pode ser devido ao processamento inadequado e decocting de MTCs. Os mecanismos da MTC estão se tornando mais evidentes com o uso da ciência e tecnologia contemporâneas29,30. Este estudo mostra que tanto a RC quanto a CRV têm efeitos terapêuticos em ratos modelo de DP e que o efeito terapêutico da CRV é mais substancial. O mecanismo de...

A dismenorreia primária (DP) é a condição mais prevalente na clínica ginecológica. Caracteriza-se por dor nas costas, inchaço, dor abdominal ou desconforto antes ou durante a menstruação, sem patologia pélvica no sistema reprodutivo1. Um relatório sobre sua prevalência mostrou que 85,7% dos estudantes sofrem de DP2. Os anticoncepcionais orais em baixas doses são a terapia padrão, mas seus efeitos adversos, como a trombose venosa profunda, têm chamado cada vez mais atenção3. A prevalência de trombose venosa profunda entre usuárias de anticoncepcional oral é de >1 por 1.000 mulheres, e o risco é maior nos primeiros 6-12 meses e em usuárias com mais de 40 anos4.
Muito utilizado na medicina tradicional chinesa (MTC), Cyperi rhizoma (CR) é derivado do rizoma seco de Cyperus rotundus L. da família Cyperaceae. A RC regula os distúrbios menstruais e alivia a depressão e a dor5. A RC é amplamente utilizada em ginecologia e é considerada um medicamento geral para o tratamento de doenças da mulher6. CR processado com vinagre (CRV) é normalmente usado clinicamente. Em comparação com a RC, a VRC mostra maior regulação da menstruação e alívio da dor. Estudos modernos têm demonstrado que a RC inibe a ciclooxigenase-2 (COX-2) e a subsequente síntese de prostaglandinas (PGs), alcançando assim um efeito anti-inflamatório. Enquanto isso, a RC apresenta efeito analgésico sem efeitos colaterais7, tornando a RC uma boa opção para pacientes com dismenorreia. No entanto, o mecanismo subjacente à regulação da menstruação e ao alívio da dor pelo CRV não está claro. A pesquisa em RC tem se concentrado principalmente em alterações em seus componentes químicos ativos e atividades farmacológicas, como seus efeitos anti-inflamatórios, antidepressivos e analgésicos 8,9,10,11,12.
Embora os ingredientes da MTC sejam complexos, eles são absorvidos pelo sangue e devem atingir uma concentração sanguínea específica para serem eficazes13. O escopo da triagem dos ingredientes ativos da MTC pode ser reduzido utilizando a estratégia de determinação de constituintes no sangue. A cegueira pode ser evitada no estudo dos componentes químicos in vitro, e a unilateralidade pode ser evitada no estudo dos constituintes individuais14. Ao comparar as composições de CR e CRV no sangue, alterações nos ingredientes ativos do CR processado podem ser detectadas de forma eficaz e rápida. A eficácia da droga é o processo pelo qual uma droga influencia o corpo. Alterações nos componentes da droga devido à resposta metabólica do organismo, que podem estar relacionadas ao mecanismo de ação da droga, podem ser determinadas com metabolômicos. Metabonomics visa medir as respostas metabólicas globais e dinâmicas, o que é consistente com a determinação da eficácia global da medicina tradicional chinesa15. Além disso, os metabólitos são o produto final da expressão gênica, que está mais intimamente relacionada aos fenótipos16. Assim, metabolômicas podem ser adequadas para explorar as diferenças nas vias metabólicas entre RC e CRV no tratamento da DP. A metabolômica não direcionada baseada em cromatografia líquida baseada em espectrometria de massas em tandem de alta resolução (LC-MS/MS) é caracterizada por alto rendimento, alta sensibilidade e alta resolução e pode ser usada para medir muitos componentes moleculares pequenos17,18 . Este método pode determinar simultaneamente os metabolitos endógenos e constituintes exógenos absorvidos no sangue. A metabinômica tem sido amplamente utilizada em estudos sobre MTC19, toxicologia de drogas 20, gestão em saúde 21, esportes22, alimentos 23 e outros campos.
Neste estudo, as diferenças nos constituintes exógenos absorvidos no sangue e nos metabólitos endógenos foram medidas entre ratos modelo de dismenorreia tratados com RC e tratados com CRV usando metabolômica não direcionada baseada em LC-MS/MS para revelar os mecanismos dos efeitos analgésicos do CRV.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetonitrile&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA</td>
			<td>197164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BECKMAN COULTER Microfuge 20</td>
			<td>Beckman&#160;Coulter, Inc.</td>
			<td>MRZ15K047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Estradiol benzoate</td>
			<td>Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd</td>
			<td>C10042616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>formic acid</td>
			<td>Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA</td>
			<td>177799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC 30A system</td>
			<td>Shimadzu, Kyoto, Japan</td>
			<td>228-45162-46</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olive oil</td>
			<td>Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>H25A11P111909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxytocin synthetic</td>
			<td>Zhejiang peptide biology Co., Ltd&#160;</td>
			<td>2019092001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat PGF2&#945; ELISA kit</td>
			<td>Shanghai lmai Bioengineering Co., Ltd</td>
			<td>202101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat PGFE2 ELISA kit</td>
			<td>Shanghai lmai Bioengineering Co., Ltd</td>
			<td>EDL202006217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPF Sprague-Dawley rats</td>
			<td>Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd</td>
			<td>Certificate number SCXK (Hunan) 2019-0004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tecan Infinite 200 PRO&#160;&#160;</td>
			<td>Tecan Austria GmbH, Austria</td>
			<td>1510002987</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triple TOF 4600 system</td>
			<td>SCIEX, Framingham, MA, USA</td>
			<td>BK20641402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>water</td>
			<td>Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA</td>
			<td>152720</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of raw and processed cyperi rhizoma samples using liquid chromatography-tandem mass spectrometry in rats with primary dysmenorrhea

Cyperi rhizoma (CR) é amplamente utilizado em ginecologia e é um medicamento geral para o tratamento de doenças das mulheres na China. Uma vez que o efeito analgésico da RC é aumentado após o processamento com vinagre, a RC processada com vinagre (CRV) é geralmente usada clinicamente. No entanto, o mecanismo pelo qual o efeito analgésico é aumentado pelo processamento do vinagre não está claro. Neste estudo, a técnica de cromatografia líquida de ultra-alta pressão acoplada à espectrometria de massas (UPLC-MS/MS) foi usada para examinar as alterações nos níveis sanguíneos dos constituintes exógenos e metabólitos entre ratos com dismenorreia tratados com RC e tratados com CRV. Os resultados revelaram diferentes níveis de 15 constituintes e dois metabólitos no sangue desses ratos. Entre eles, os níveis de (-)-mirtenol e ácido [(1R,2S,3R,4R)-3-hidroxi-1,4,7,7-tetrametilbiciclo[2.2.1]hept-2-il]acético no grupo CRV foram consideravelmente maiores do que no grupo CR. O CRV reduziu o nível de prostanoides de 2 séries e leucotrienos de 4 séries com atividades pró-inflamatórias, de agregação plaquetária e vasoconstritoras e proporcionou efeitos analgésicos pela modulação do metabolismo do ácido araquidônico e do ácido linoleico e da biossíntese de ácidos graxos insaturados. Este estudo revelou que o processamento do vinagre aumenta o efeito analgésico da RC e contribui para o entendimento do mecanismo de ação do CRV.

Análise do experimento do modelo de dismenorreia Não houve resposta de contorção dentro de 30 minutos no grupo controle porque esses ratos não foram injetados intraperitonealmente com ocitocina e benzoato de estradiol para causar dor. Os ratos dos grupos modelo, RC e CRV apresentaram reações de contorção substanciais após a injeção de ocitocina. Esses resultados demonstram a eficácia da combinação de benzoato de estradiol e ocitocina na indução de dismenorreia. As diferenças nos nív...

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Analysis of Raw and Processed Cyperi Rhizoma Samples Using Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry in Rats with Primary Dysmenorrhea

Aqui, uma análise comparativa de amostras de Cyperi rhizoma (CR) cruas e processadas é apresentada usando cromatografia líquida de ultra-alta eficiência e espectrometria de massas em tandem de alta resolução (UPLC-MS/MS) em ratos com dismenorreia primária. As alterações nos níveis sanguíneos dos metabólitos e dos constituintes da amostra foram examinadas entre ratos tratados com CR e CR processados com vinagre (CRV).

Análise de Amostras de Cyperi Rhizoma Cru e Processadas Usando Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massas em Tandem em Ratos com Dismenorreia Primária

Cyperi rhizoma (CR) is widely used in gynecology and is a general medicine for treating women's diseases in China. Since the analgesic effect of CR is ...

Metabonomics mede as respostas metabólicas globais e dinâmicas e é consistente com a determinação da eficácia geral da medicina tradicional chinesa. Alterações nos componentes da droga devido à resposta metabólica do corpo podem ser determinadas com os metabólicos. O escopo da triagem dos ingredientes ativos da MTC pode ser reduzido com a utilização dessa técnica.A unilateralidade pode ser evitada estudando os constituintes individuais. Este método pode ser simultâneo, determinar os metabólitos endógenos e constituintes exógenos absorvidos no sangue. A metabinômica tem sido amplamente utilizada em estudos sobre MTC, toxicologia de drogas, gestão da saúde, esportes, alimentos e outros campos.Para começar, determine o extrato necessário de Cyperi rhizoma, ou CR, ou Cyperi rhizoma processado com vinagre, ou CRV, para tratar um grupo de seis ratos Sprague Dawley por três dias. Calcular o volume de RC ou CRV a ser aplicado por rato usando esta equação. Para processar o CRV, misture bem 100 gramas de CR e 20 gramas de vinagre, que tem mais de 5,5 gramas de ácido acético por 100 mililitros, e incube por 12 horas.Após a incubação, mexa a mistura em uma panela de ferro por 10 minutos a 110 a 120 graus Celsius. Em seguida, retire a mistura e deixe esfriar em temperatura ambiente. Para preparar o extrato de CR, mergulhe o CR por duas horas com água pura 10 vezes a quantidade de CR ingerida, certificando-se de que os materiais medicinais estejam abaixo do nível líquido.Em seguida, leve a mistura de água e remédio para ferver em fogo alto e mantenha fervendo em fogo baixo por 20 minutos. Em seguida, filtre o conteúdo através de um pano filtrante de malha 100 e colete o filtrado. Em seguida, concentre o filtrado coletado em um extrato com um evaporador rotativo para um grama por mililitro.Para preparar o extrato de CRV, execute as etapas de imersão, fervura e concentração, conforme demonstrado para a extração de CR. Para testar os extratos CR e CRV, pipetar 500 microlitros do extrato para 500 microlitros de metanol em tubos de microcentrífuga de 1,5 mililitro e vórtice por 30 segundos para misturar. Centrifugar as amostras durante 15 minutos a 16, 500 g a quatro graus Celsius.Em seguida, remova o sobrenadante e transfira-o para o frasco para amostras para teste. Após testar as amostras, realize a análise de componentes principais, ou PCA, e a modelagem utilizando o software de análise. Importe os dados padronizados dos metabólitos para o software e use o Autofit para criar o modelo de análise.Finalmente, use os escores para obter o gráfico de dispersão da ACP. Para realizar a análise discriminante ortogonal de mínimos quadrados parciais, ou OPLS-DA, importe os dados padronizados dos metabólitos e dos grupos CR e CRV para o software. Em seguida, importe os dados CR e CRV para seus respectivos grupos criados.Em seguida, use Autofit para construir o modelo de análise e use a pontuação para obter o gráfico de dispersão de pontuação do OPLS-DA. Por fim, utilizar o VIP para obter a variável significância na projeção ou o valor VIP no OPLS-DA. Para identificar os metabólitos potencialmente diferenciais, selecione os metabólitos com valores de VIP maiores que um.Em seguida, utilizar o software estatístico para calcular o valor de P dos metabólitos triados pelo teste t de student. Em seguida, para identificar os metabólitos diferenciais, use os metabólitos anotados e selecione os metabólitos diferenciais a serem combinados no banco de dados KEGG. Mostrar as mudanças nos metabólitos diferenciais nos grupos CR e CRV desenhando um mapa de calor.Para examinar as vias metabólicas potenciais, vá para o banco de dados MetaboAnalyst. Use a Análise de Caminhos para carregar os diferentes metabólitos para obter as vias metabólicas potenciais. Carregue os diferentes metabólitos no banco de dados KEGG para analisar as vias metabólicas potenciais.O experimento do modelo de dismenorreia analisado mostrou diferenças significativas nos níveis de prostaglandinas. Os ratos dos grupos modelo CR e CRV apresentaram reações de contorção substanciais após a injeção de ocitocina. Os resultados da análise de ACP demonstraram que os agrupamentos de RC e CRV comparados aos grupos modelo foram significativamente separados nos modos íons positivo e negativo.O OPLS-AD foi utilizado para rastrear diferenças metabólicas, e os resultados do gráfico de dispersão demonstraram que os grupos RC e CRV foram separados. Análises estatísticas univariadas foram realizadas para identificar variações metabólicas. Um gráfico de vulcão é mostrado, em que cada ponto corresponde a um metabólito diferente.Foram observadas alterações significativas em 63 metabólitos no modo positivo e 30 no modo negativo. Os metabólitos diferenciais foram determinados usando os bancos de dados KEGG e HDMB, e os compostos combinados com precisão foram listados. Os valores quantitativos dos metabólitos diferenciais entre os grupos RC e CRV foram calculados e agrupados.As manchas coloridas indicam como cada metabólito é expresso em relação aos outros. Em comparação com o grupo RC, os níveis de quatro metabólitos diferenciais no grupo CRV aumentaram, enquanto 11 metabólitos diminuíram no modo íon positivo. No caso do modo iônico negativo, quatro metabólitos diferenciais aumentaram e sete metabólitos diminuíram.Os resultados da análise da via de KEGG mostraram que os metabólitos diferenciais foram associados com nove vias nos modos positivo e negativo. Quanto mais metabólitos diferenciais, melhores os resultados, de modo que vias metabólicas suficientes podem ser ligadas e as principais vias metabólicas rastreadas serão mais precisas.

Research

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