Name: analysis of raw and processed cyperi rhizoma samples using liquid chromatography-tandem mass spectrometry in rats with primary dysmenorrhea
Uploaded: 2022-12-23T14:40:00
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Este trabajo fue apoyado por el Proyecto de Ciencia y Tecnología de Medicina China de la Comisión Municipal de Salud y Planificación Familiar de Chongqing (Número de proyecto: ZY201802297), Proyecto general de la Fundación de Ciencias Naturales de Chongqing (Número de proyecto: cstc2019jcyj-msxmX065), Característica del área montañosa moderna de Chongqing Plan de construcción de equipos de innovación del sistema de tecnología agrícola de alta eficiencia 2022 [10], y el Proyecto de construcción de disciplina clave de la Comisión Municipal de Salud de Chongqing de materia china Procesamiento de medicamentos.

Todos los experimentos relacionados con animales se llevaron a cabo con la aprobación del Comité de Ética de Experimentos del Instituto de MTC de Chongqing. En este experimento se utilizaron veinticuatro ratas hembras Sprague Dawley (SD) que tenían entre 8 y 10 semanas de edad y pesaban 200 g ± 20 g.
1. Preparación de la extracción
<ol><li>Cálculo<ol><li>Planifique administrar el extracto de RC o CRV a un grupo de tratamiento de seis ratas Sprague-Dawley (10 g/[kg∙...

Debido a la amplia variedad y naturaleza diferente de las MTC, estas hierbas a veces no funcionan en la práctica clínica, y esto puede deberse al procesamiento y decocción inapropiados de las MTC. Los mecanismos de la MTC son cada vez más evidentes con el uso de la ciencia y la tecnología contemporáneas29,30. Este estudio muestra que tanto la RC como la CRV tienen efectos terapéuticos en ratas modelo de EP y que el efecto terapéutico de la CRV es más sus...

La dismenorrea primaria (EP) es la afección más prevalente en ginecología clínica. Se caracteriza por dolor de espalda, hinchazón, dolor abdominal o molestias antes o durante la menstruación sin patología pélvica en el aparato reproductor1. Un informe sobre su prevalencia mostró que el 85,7% de los estudiantes sufren de DP2. Los anticonceptivos orales de dosis bajas son la terapia estándar, pero sus efectos secundarios adversos, como la trombosis venosa profunda, han llamado cada vez más la atención3. La prevalencia de trombosis venosa profunda entre las usuarias de anticonceptivos orales es de >1 por cada 1.000 mujeres, y el riesgo es mayor durante los primeros 6-12 meses y en usuarias mayores de 40 años4.
Utilizado durante mucho tiempo en la medicina tradicional china (MTC), el rizoma Cyperi (CR) se deriva del rizoma seco del Cyperus rotundus L. de la familia Cyperaceae. La RC regula los trastornos menstruales y alivia la depresión y el dolor5. La RC es ampliamente utilizada en ginecología y es considerada una medicina general para tratar las enfermedades de la mujer6. La RC procesada con vinagre (CRV) se usa típicamente clínicamente. En comparación con la RC, la VCR muestra una mejor regulación de la menstruación y el alivio del dolor. Estudios modernos han demostrado que la RC inhibe la ciclooxigenasa-2 (COX-2) y la posterior síntesis de prostaglandinas (PGs), logrando así un efecto antiinflamatorio. Mientras tanto, la RC exhibe un efecto analgésico sin efectos secundarios7, haciendo de la RC una buena opción para los pacientes con dismenorrea. Sin embargo, el mecanismo subyacente a la regulación de la menstruación y la provisión de alivio del dolor por CRV no está claro. La investigación de la RC se ha centrado principalmente en los cambios en sus componentes químicos activos y actividades farmacológicas, como sus efectos antiinflamatorios, antidepresivos y analgésicos 8,9,10,11,12.
Aunque los ingredientes de la MTC son complejos, son absorbidos por la sangre y deben alcanzar una concentración sanguínea específica para ser efectivos13. El alcance de la detección de los ingredientes activos de la MTC se puede reducir utilizando la estrategia de determinación de constituyentes en la sangre. La ceguera puede evitarse en el estudio de los componentes químicos in vitro, y la unilateralidad puede evitarse en el estudio de los constituyentes individuales14. Al comparar las composiciones de RC y CRV en la sangre, los cambios en los ingredientes activos de la RC procesada se pueden detectar de manera efectiva y rápida. La eficacia del fármaco es el proceso por el cual un fármaco influye en el cuerpo. Los cambios en los componentes del fármaco debido a la respuesta metabólica del cuerpo, que pueden estar relacionados con el mecanismo de acción del fármaco, se pueden determinar con metabonómica. La metabonómica tiene como objetivo medir las respuestas metabólicas globales y dinámicas, lo que es consistente con la determinación de la eficacia general de la medicina tradicional china15. Además, los metabolitos son el producto final de la expresión génica, que está más estrechamente relacionada con los fenotipos16. Por lo tanto, la metabonómica puede ser adecuada para explorar las diferencias en las vías metabólicas entre la RC y la VRC en el tratamiento de la EP. La cromatografía líquida y la espectrometría de masas en tándem de alta resolución (LC-MS/MS) basada en la metabolómica no dirigida se caracteriza por un alto rendimiento, alta sensibilidad y alta resolución y se puede utilizar para medir muchos componentes moleculares pequeños diferentes17,18 . Este método puede determinar simultáneamente los metabolitos endógenos y los componentes exógenos absorbidos en la sangre. La metabonómica ha sido ampliamente utilizada en estudios sobre MTC19, toxicología de drogas20, manejo de la salud 21, deportes22, alimentos23 y otros campos.
En este estudio, las diferencias en los componentes exógenos absorbidos en la sangre y los metabolitos endógenos se midieron entre ratas modelo de dismenorrea tratadas con RC y tratadas con CRV utilizando metabolómica no dirigida basada en LC-MS / MS para revelar los mecanismos de los efectos analgésicos de CRV.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetonitrile&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA</td>
			<td>197164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BECKMAN COULTER Microfuge 20</td>
			<td>Beckman&#160;Coulter, Inc.</td>
			<td>MRZ15K047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Estradiol benzoate</td>
			<td>Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd</td>
			<td>C10042616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>formic acid</td>
			<td>Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA</td>
			<td>177799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC 30A system</td>
			<td>Shimadzu, Kyoto, Japan</td>
			<td>228-45162-46</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olive oil</td>
			<td>Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>H25A11P111909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxytocin synthetic</td>
			<td>Zhejiang peptide biology Co., Ltd&#160;</td>
			<td>2019092001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat PGF2&#945; ELISA kit</td>
			<td>Shanghai lmai Bioengineering Co., Ltd</td>
			<td>202101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat PGFE2 ELISA kit</td>
			<td>Shanghai lmai Bioengineering Co., Ltd</td>
			<td>EDL202006217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPF Sprague-Dawley rats</td>
			<td>Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd</td>
			<td>Certificate number SCXK (Hunan) 2019-0004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tecan Infinite 200 PRO&#160;&#160;</td>
			<td>Tecan Austria GmbH, Austria</td>
			<td>1510002987</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triple TOF 4600 system</td>
			<td>SCIEX, Framingham, MA, USA</td>
			<td>BK20641402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>water</td>
			<td>Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA</td>
			<td>152720</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of raw and processed cyperi rhizoma samples using liquid chromatography-tandem mass spectrometry in rats with primary dysmenorrhea

El rizoma Cyperi (CR) es ampliamente utilizado en ginecología y es una medicina general para tratar enfermedades de las mujeres en China. Dado que el efecto analgésico de la RC se mejora después del procesamiento con vinagre, la RC procesada con vinagre (CRV) generalmente se usa clínicamente. Sin embargo, el mecanismo por el cual el efecto analgésico se ve reforzado por el procesamiento del vinagre no está claro. En este estudio, se utilizó la técnica de cromatografía líquida de ultra alta presión espectrometría de masas en tándem (UPLC-MS / MS) para examinar los cambios en los niveles sanguíneos de los constituyentes exógenos y metabolitos entre ratas tratadas con CR y tratadas con CRV con dismenorrea. Los resultados revelaron diferentes niveles de 15 componentes y dos metabolitos en la sangre de estas ratas. Entre ellos, los niveles de (-)-mirtenol y ácido [(1R,2S,3R,4R)-3-hidroxi-1,4,7,7-tetrametilbiciclo[2.2.1]hept-2-il]acético en el grupo de VCR fueron considerablemente más altos que en el grupo de RC. CRV redujo el nivel de prostanoides de la serie 2 y leucotrienos de la serie 4 con actividades proinflamatorias, de agregación plaquetaria y vasoconstricción y proporcionó efectos analgésicos al modular el metabolismo del ácido araquidónico y el ácido linoleico y la biosíntesis de ácidos grasos insaturados. Este estudio reveló que el procesamiento del vinagre mejora el efecto analgésico de la RC y contribuye a nuestra comprensión del mecanismo de acción de la RCV.

Análisis del experimento del modelo de dismenorrea No hubo respuesta de retorcimiento dentro de los 30 minutos en el grupo de control porque estas ratas no fueron inyectadas intraperitonealmente con oxitocina y benzoato de estradiol para causar dolor. Las ratas en los grupos modelo, CR y CRV mostraron reacciones de retorcimiento sustanciales después de la inyección de oxitocina. Estos resultados demuestran la eficacia de la combinación de benzoato de estradiol y oxitocina para inducir dismenorrea....

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Analysis of Raw and Processed Cyperi Rhizoma Samples Using Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry in Rats with Primary Dysmenorrhea

Aquí, se presenta un análisis comparativo de muestras crudas y procesadas de rizoma de Cyperi (CR) utilizando cromatografía líquida de ultra alto rendimiento-espectrometría de masas en tándem de alta resolución (UPLC-MS / MS) en ratas con dismenorrea primaria. Los cambios en los niveles sanguíneos de los metabolitos y los componentes de la muestra se examinaron entre ratas tratadas con RC y RC procesadas con vinagre (CRV).

Análisis de muestras crudas y procesadas de rizoma de Cyperi utilizando cromatografía líquida-espectrometría de masas en tándem en ratas con dismenorrea primaria

Cyperi rhizoma (CR) is widely used in gynecology and is a general medicine for treating women's diseases in China. Since the analgesic effect of CR is ...

La metabonómica mide las respuestas metabólicas generales y dinámicas y es consistente con la determinación de la eficacia general de la medicina tradicional china. Los cambios en los componentes del fármaco debido a la respuesta metabólica del cuerpo se pueden determinar con la metabonómica. El alcance de la detección de los ingredientes activos de la MTC se puede reducir mediante la utilización de esta técnica.La unilateralidad puede evitarse estudiando los componentes individuales. Este método puede ser simultáneo, determinar los metabolitos endógenos y los componentes exógenos absorbidos en la sangre. La metabonómica ha sido ampliamente utilizada en estudios sobre MTC, toxicología de medicamentos, gestión de la salud, deportes, alimentos y otros campos.Para comenzar, determine el extracto requerido de rizoma Cyperi, o CR, o rizoma Cyperi procesado con vinagre, o CRV, para tratar a un grupo de seis ratas Sprague Dawley durante tres días. Calcule el volumen de RC o CRV que se aplicará por rata utilizando esta ecuación. Para procesar el CRV, mezcle bien 100 gramos de CR y 20 gramos de vinagre, que tiene más de 5.5 gramos de ácido acético por cada 100 mililitros, e incube durante 12 horas.Después de la incubación, saltee la mezcla en una sartén de hierro durante 10 minutos a 110 a 120 grados centígrados. Luego, retire la mezcla y deje que se enfríe a temperatura ambiente. Para preparar el extracto de CR, remoje el CR durante dos horas con agua pura 10 veces la cantidad de CR tomada, asegurándose de que los materiales medicinales estén por debajo del nivel líquido.Luego, lleve la mezcla de agua y medicina a hervir a fuego alto y manténgala hirviendo a fuego lento durante 20 minutos. Luego, filtre el contenido a través de un paño de filtro de malla 100 y recoja el filtrado. Luego, concentre el filtrado recolectado en un extracto con un evaporador rotativo a un gramo por mililitro.Para preparar el extracto de CRV, realice los pasos de remojo, ebullición y concentración como se demostró para la extracción de CR. Para probar los extractos CR y CRV, pipetear 500 microlitros del extracto a 500 microlitros de metanol en tubos de microcentrífuga de 1,5 mililitros y mezclar durante 30 segundos. Centrifugar las muestras durante 15 minutos a 16, 500 g a cuatro grados centígrados.Luego, retire el sobrenadante y transfiéralo al vial de muestra para su análisis. Después de probar las muestras, realice el análisis de componentes principales, o PCA, y el modelado utilizando el software de análisis. Importe los datos estandarizados de los metabolitos al software y, a continuación, utilice Autofit para crear el modelo de análisis.Finalmente, use los puntajes para obtener el diagrama de dispersión de puntaje de la PCA. Para realizar el análisis discriminante mínimo cuadrado parcial ortogonal, u OPLS-DA, importe los datos estandarizados sobre los metabolitos y los grupos CR y CRV en el software. A continuación, importe los datos de CR y CRV en sus respectivos grupos creados.A continuación, utilice Autofit para crear el modelo de análisis y utilice la puntuación para obtener la gráfica de dispersión de puntuación de OPLS-DA. Finalmente, use VIP para obtener la significación variable en la proyección o el valor VIP en el OPLS-DA. Para identificar los metabolitos potencialmente diferenciales, elimine los metabolitos con valores VIP mayores que uno.Luego, use el software estadístico para calcular el valor P de los metabolitos seleccionados por la prueba T del estudiante. A continuación, para identificar los metabolitos diferenciales, utilice los metabolitos anotados y seleccione los metabolitos diferenciales para que coincidan en la base de datos KEGG. Muestre los cambios en los metabolitos diferenciales en los grupos CR y CRV dibujando un mapa de calor.Para examinar las posibles vías metabólicas, vaya a la base de datos de MetaboAnalyst. Utilice el análisis de vías para cargar los diferentes metabolitos para obtener las posibles vías metabólicas. Sube los diferentes metabolitos a la base de datos KEGG para analizar las posibles vías metabólicas.El experimento modelo de dismenorrea analizado mostró diferencias significativas en los niveles de prostaglandinas. Las ratas en los grupos modelo CR y CRV mostraron reacciones de retorcimiento sustanciales después de la inyección de oxitocina. Los resultados del análisis de PCA demostraron que los grupos de CR y CRV en comparación con los grupos modelo se separaron significativamente en los modos de iones positivos y negativos.El OPLS-DA se utilizó para detectar diferencias metabólicas, y los resultados del diagrama de dispersión demostraron que los grupos CR y CRV estaban separados. Se realizaron análisis estadísticos univariados para identificar variaciones metabólicas. Se muestra un diagrama de volcán, en el que cada punto corresponde a un metabolito diferente.Se observaron cambios significativos en 63 metabolitos en el modo positivo y 30 en el modo negativo. Los metabolitos diferenciales se determinaron utilizando las bases de datos KEGG y HDMB, y se enumeraron los compuestos emparejados con precisión. Se calcularon y agruparon los valores cuantitativos de los metabolitos diferenciales entre los grupos RC y CRV.Los parches de color indican cómo se expresa cada metabolito en relación con los demás. En comparación con el grupo CR, los niveles de cuatro metabolitos diferenciales en el grupo CRV aumentaron, mientras que 11 metabolitos disminuyeron en el modo de iones positivos. En el caso del modo de iones negativos, cuatro metabolitos diferenciales aumentaron y siete metabolitos disminuyeron.Los resultados del análisis de la vía KEGG mostraron que los metabolitos diferenciales se asociaron con nueve vías en los modos positivo y negativo. Cuantos más metabolitos diferenciales, mejores serán los resultados, por lo que se pueden vincular suficientes vías metabólicas y las vías metabólicas clave examinadas serán más precisas.

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