Name: exploring the two herb combination strategy to treat injured pc12 cells
Uploaded: 2022-11-18T14:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Exploring the Two Herb Combination Strategy to Treat Injured PC12 Cells at JoVE.com

Dit onderzoek werd gefinancierd door Key R &D-projecten van de Sichuan Provincial Department of science and technology (2020YFS0325).

1. Bereiding van reagens
<ol><li>Bereid het volledige medium door 90 ml DMEM-hoog suikermedium, 10 ml foetaal runderserum (FBS) en 1 ml penicilline-streptomycine-oplossing toe te voegen in een steriele kweekkolf van 125 ml. Meng het volledige medium en bewaar bij 4 °C onder gesloten omstandigheden.</li>
	<li>Bereid CoCl2-oplossing door 0,02 g CoCl2-poeder (nauwkeurig gewogen) toe te voegen in 10 ml DMEM-suikervrij medium (volledig opgelost) om een voorraadoplossing van 8,4 mM te ...

<ol>
	<li>Mendelevich, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+cerebral+ischemia,+and+dizziness.">Chronic cerebral ischemia, and dizziness.</a> Zhurnal Nevrologii i Psikhiatrii Imeni SS Korsakova. 122 (3), 22-26 (2022).</li><li>Gao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expert+consensus+on+the+diagnosis+and+treatment+of+chronic+cerebral+ischemia+with+integrated+traditional+Chinese+and+western+medicine.">Expert consensus on the diagnosis and treatment of chronic cerebral ischemia with integrated traditional Chinese and western medicine.</a> Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine. 38 (10), 1161-1167 (2018).</li><li>Luyu, S., Heng, L., Dengke, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+treatment+of+45+cases+of+cerebral+infarction+with+Astragalus+and+Dengzhan+Xixin+injection.">Combined treatment of 45 cases of cerebral infarction with Astragalus and Dengzhan Xixin injection.</a> Jilin Journal of Traditional Chinese Medicine. 27 (4), 23-24 (2007).</li><li>Bei, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+study+of+Dengzhanxixin+injection+combined+with+Astragalus+injection+in+the+treatment+of+acute+ischemic+stroke.">Clinical study of Dengzhanxixin injection combined with Astragalus injection in the treatment of acute ischemic stroke.</a> Journal of Basic Chinese Medicine. 21 (9), 1123-1127 (2015).</li><li>Tian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+ratio+of+Astragalus+injection+combined+with+Dengzhan+Xixin+injection+against+cerebral+ischemia-reperfusion+injury+in+rats+by+baseline+equal-ratio+increase-decrease+design+method.">Optimal ratio of Astragalus injection combined with Dengzhan Xixin injection against cerebral ischemia-reperfusion injury in rats by baseline equal-ratio increase-decrease design method.</a> China Pharmacy. 30 (14), 1885-1889 (2019).</li><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+and+mechanism+of+Astragalus+combined+with+Erigeron+breviscapusin+the+best+proportion+on+cerebral+ischemia+rats.">Protective effect and mechanism of Astragalus combined with Erigeron breviscapusin the best proportion on cerebral ischemia rats.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 35 (2), 104-108 (2019).</li><li>Yan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+the+oxidative+damage+of+PC12+cells+with+hypoxia+and+hypoglycemia+based+on+the+combination+of+Astragalus+and+Dengzhan+Asarum+based+on+the+Nrf2/HO-1+pathway.">Study on the oxidative damage of PC12 cells with hypoxia and hypoglycemia based on the combination of Astragalus and Dengzhan Asarum based on the Nrf2/HO-1 pathway.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 38 (2), 159-164 (2022).</li><li>. Chinese Pharmacopoeia, Dengzhan Asarum Granules. Volume I Available from: <a target="_blank" href="https://db.ouryao.com/yd2020/view.php?id=f27dcefa69">https://db.ouryao.com/yd2020/view.php?id=f27dcefa69</a> (2020)</li><li>. Chinese Pharmacopoeia, Astragalus granules. Volume I Available from: <a target="_blank" href="https://db.ouryao.com/yd2020/view.php?id=fbcd0a8bf8">https://db.ouryao.com/yd2020/view.php?id=fbcd0a8bf8</a> (2020)</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-linoleyltyrosine+protects+PC12+cells+against+oxidative+damage+via+autophagy:+Possible+involvement+of+CB1+receptor+regulation.">N-linoleyltyrosine protects PC12 cells against oxidative damage via autophagy: Possible involvement of CB1 receptor regulation.</a> International Journal of Molecular Medicine. 46 (5), 1827-1837 (2020).</li><li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gab1+regulates+SDF-1-induced+progression+via+inhibition+of+apoptosis+pathway+induced+by+PI3K/AKT/Bcl-2/BAX+pathway+in+human+chondrosarcoma.">Gab1 regulates SDF-1-induced progression via inhibition of apoptosis pathway induced by PI3K/AKT/Bcl-2/BAX pathway in human chondrosarcoma.</a> Tumor Biology. 37 (1), 1141-1149 (2016).</li><li>Meng, M., Zhang, L., Ai, D., Wu, H., Peng, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#946;-Asarone+ameliorates+&#946;-Amyloid-induced+neurotoxicity+in+PC12+cells+by+activating+P13K/Akt/Nrf2+signaling+pathway.">&#946;-Asarone ameliorates &#946;-Amyloid-induced neurotoxicity in PC12 cells by activating P13K/Akt/Nrf2 signaling pathway.</a> Frontiers in Pharmacology. 12, 659955 (2021).</li><li>Li, J., Chen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+treatment+of+chronic+cerebral+ischemia+with+traditional+Chinese+and+western+medicine.">Advances in the treatment of chronic cerebral ischemia with traditional Chinese and western medicine.</a> Xinjiang Journal of Traditional Chinese Medicine. 39 (3), 115-118 (2021).</li><li>Yu, M., Zhan, Q., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discussion+on+the+therapeutic+value+of+traditional+Chinese+medicine+on+cognitive+dysfunction+caused+by+chronic+cerebral+ischemia.">Discussion on the therapeutic value of traditional Chinese medicine on cognitive dysfunction caused by chronic cerebral ischemia.</a> Chinese Medicine Modern Distance Education of China. 11 (19), 155-157 (2013).</li><li>Wang, M., Liu, J., Yao, M., Ren, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+research+on+pharmacological+and+neuroprotective+effects+of+traditional+Chinese+medicine+after+cerebral+ischemia.">Advances in research on pharmacological and neuroprotective effects of traditional Chinese medicine after cerebral ischemia.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 45 (3), 513-517 (2020).</li><li>Wang, N., Sun, H., Ma, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+different+doses+of+astragalus+injection+on+neurological+rehabilitation+of+stroke+patients.">Effects of different doses of astragalus injection on neurological rehabilitation of stroke patients.</a> Chinese Journal of Clinical Rational Drug Use. 9 (13), 67-69 (2016).</li><li>Sun, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+astragalus+injection+on+apoptosis+after+cerebral+ischemia-reperfusion+in+rats.">Effects of astragalus injection on apoptosis after cerebral ischemia-reperfusion in rats.</a> Hebei Medicine. 22 (7), 1147-1149 (2016).</li><li>Yang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengzhan+Xixin+injection+derived+from+a+traditional+Chinese+herb+Erigeron+breviscapusameliorates+cerebral+ischemia/reperfusion+injury+in+rats+via+modulation+of+mitophagy+and+mitochondrial+apoptosis.">Dengzhan Xixin injection derived from a traditional Chinese herb Erigeron breviscapusameliorates cerebral ischemia/reperfusion injury in rats via modulation of mitophagy and mitochondrial apoptosis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 288, 114988 (2022).</li><li>Liao, Y., Ni, X., Zhan, C., Cai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+research+progress+of+Dengzhanhua+preparation+in+prevention+and+treatment+of+ischemic+stroke+and+transient+ischemic+attack.">Clinical research progress of Dengzhanhua preparation in prevention and treatment of ischemic stroke and transient ischemic attack.</a> Guangdong Medical Journal. 41 (9), 963-967 (2020).</li><li>Li, C., Li, J., Xu, G., Sun, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+chronic+ethanol+consumption+on+apoptosis+and+autophagy+following+transient+focal+cerebral+ischemia+in+male+mice.">Influence of chronic ethanol consumption on apoptosis and autophagy following transient focal cerebral ischemia in male mice.</a> Scientific Reports. 10 (1), 6164 (2020).</li><li>El Khashab, I. H., Abdelsalam, R. M., Elbrairy, A. I., Attia, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chrysin+attenuates+global+cerebral+ischemic+reperfusion+injury+via+suppression+of+oxidative+stress,+inflammation+and+apoptosis.">Chrysin attenuates global cerebral ischemic reperfusion injury via suppression of oxidative stress, inflammation and apoptosis.</a> Biomedicine Pharmacotherapy. 112, 108619 (2019).</li><li>Su, X., He, S., Chen, Z., Xie, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+breviscapine+aglycone+on+PI+3+K/Akt+conduction+pathway+in+neonatal+rats+with+hypoxic-ischemic+brain+injury.">Effect of breviscapine aglycone on PI 3 K/Akt conduction pathway in neonatal rats with hypoxic-ischemic brain injury.</a> Journal of Armed Police Logistics College (Medical Edition). 27 (2), 93-96 (2018).</li><li>Wang, X., Shi, C., Pan, H., Meng, X., Ji, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA-22+exerts+its+neuroprotective+and+angiogenic+functions+via+regulating+PI3K/Akt+signaling+pathway+in+cerebral+ischemia-reperfusion+rats).">MicroRNA-22 exerts its neuroprotective and angiogenic functions via regulating PI3K/Akt signaling pathway in cerebral ischemia-reperfusion rats).</a> Journal of Neural Transmission. 127 (1), 35-44 (2020).</li><li>Luca, M., Luca, A., Calandra, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+oxidative+damage+in+the+pathogenesis+and+progression+of+alzheimer's+disease+and+vascular+dementia.">The role of oxidative damage in the pathogenesis and progression of alzheimer's disease and vascular dementia.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2015, 504678 (2015).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lupeol+alleviates+cerebral+ischemia-reperfusion+injury+in+correlation+with+modulation+of+PI3K/Akt+pathway.">Lupeol alleviates cerebral ischemia-reperfusion injury in correlation with modulation of PI3K/Akt pathway.</a> Neuropsychiatric Disease and Treatment. 16 (8), 1381-1390 (2020).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effect+of+phosphocreatine+on+oxidative+stress+and+mitochondrial+dysfunction+induced+apoptosis+in+vitro+and+in+vivo:+Involvement+of+dual+PI3K/Akt+and+Nrf2/HO-1+pathways.">Neuroprotective effect of phosphocreatine on oxidative stress and mitochondrial dysfunction induced apoptosis in vitro and in vivo: Involvement of dual PI3K/Akt and Nrf2/HO-1 pathways.</a> Free Radical Biology and Medicine. 120, 228-238 (2018).</li><li>Mu&#241;oz-S&#225;nchez, J., Ch&#225;nez-C&#225;rdenas, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+cobalt+chloride+as+a+chemical+hypoxia+model.">The use of cobalt chloride as a chemical hypoxia model.</a> Journal of Applied Toxicology. 39 (4), 556-570 (2019).</li><li>Tang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salidroside+attenuates+CoCl2-simulated+hypoxia+injury+in+PC12+cells+partly+by+mitochondrial+protection.">Salidroside attenuates CoCl2-simulated hypoxia injury in PC12 cells partly by mitochondrial protection.</a> European Journal of Pharmacology. 912 (10), 174617 (2021).</li><li>Yin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+potency+of+Tofu+bio-processed+using+Actinomucor+elegans+against+hypoxic+injury+induced+by+cobalt+chloride+in+PC12+cells.">Neuroprotective potency of Tofu bio-processed using Actinomucor elegans against hypoxic injury induced by cobalt chloride in PC12 cells.</a> Molecules. 26 (10), 2983 (2021).</li></ol>

Er is nog steeds een gebrek aan ideale geneesmiddelen voor de behandeling van cerebrale ischemie in de moderne klinische praktijk2. Onder begeleiding van het aanvullen van qi en het activeren van de bloedcirculatiemethode zijn Ast, Eri en andere preparaten in combinatie gebruikt in de klinische praktijk van TCM en hebben goede uitgebreide voordelen bereikt 13,14,15. Een groot aantal studies hebben aangeto...

Chronische cerebrale ischemie, veroorzaakt door cerebrale hypoperfusie, is een veel voorkomende ziekte bij mensen van middelbare leeftijd en ouderen1. Als een langdurige occulte ischemieziekte, kan het leiden tot progressieve of aanhoudende neurologische disfunctie. De belangrijkste pathologische mechanismen omvatten celapoptose en oxidatieve schade, wat leidt tot progressieve of aanhoudende neurologische disfunctie; dit is de pathologische basis van de ziekte van Alzheimer, vasculaire dementie en andere ziekten en heeft ernstige gevolgen voor de kwaliteit van leven van patiënten. Er is echter nog steeds een gebrek aan ideale medicijnen in de moderne geneeskunde om chronische cerebrale ischemie te behandelen2. Tegelijkertijd is de combinatie van Astragalus mongholicus (Ast) en Erigeron breviscapus (Eri) op grote schaal gebruikt in de klinische praktijk van de traditionele Chinese geneeskunde (TCM)4. De combinatiestrategie is opmerkelijk verbeterd in het bevorderen van het herstel van de zenuwfunctie na cerebrale ischemie, wat beter is dan die van een enkel medicijn; er zijn echter grote verschillen in de doseringsverhouding in de combinatie van de twee geneesmiddelen4. De effectieve componenten en het werkingsmechanisme zijn niet goed gedefinieerd, wat het belangrijkste probleem is dat de klinische toepassing ervan beperkt.
Eerdere studies hebben het synergetische effect aangetoond van de combinatie van Ast-injectie en Eri-injectie bij de behandeling van cerebrale ischemie bij ratten. Het kan de expressie van p-Akt-eiwit upreguleren en de expressie van Bcl-2 associated death promoter (BAD) -eiwit 5,6 downreguleren, een van de B-lymfoblastoom 2 (Bcl-2) familie-eiwitten en heeft het effect van het bevorderen van apoptose. De materiële basis en het mechanisme van het synergetische effect zijn echter niet duidelijk. Verder is het letselmodel van PC12-cellen vastgesteld met CoCl2 gecombineerd glucosevrij medium en is de optimale componentencombinatie in Ast en Eri gescreend en gedefinieerd7.
In deze studie worden de effectieve doses Ast en Eri gescreend met behulp van het gewonde PC12-celmodel. De optimale combinatie van de twee geneesmiddelen wordt gescreend met behulp van dit model in combinatie met de homogene ontwerpmethode. Het celmodel wordt gebruikt om het verschil in de effecten en mechanismen van de voorbereidingscombinatie en de componentcombinatie in gewonde PC12-cellen verder te evalueren. Deze strategie is gericht op het onderzoeken van het beschermende effect en het regulerende mechanisme van de twee soorten combinaties op gewonde PC12-cellen via de PI3K / Akt / Nrf2-signaalroute om de beste combinatiemodus te bepalen. Deze studie biedt een referentie voor het optimaliseren van de beste toepassingsmodus van TCM.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1300 series class II biosafety cabinet</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Instruments Company</td>
			<td>1374</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide</td>
			<td>Guangzhou saiguo biotech Company</td>
			<td>1334GR001</td>
			<td>MTT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACEA NovoExpress&#160;1.4.0</td>
			<td>ACEA Biosciences, Inc</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Akt</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>10176-2-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical flow cytometry</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Instruments Company</td>
			<td>62-2-1810-1027-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Annexin V-FITC apoptosis detection kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>C1062L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Astragalus injection</td>
			<td>Heilongjiang Zhenbao Island Pharmaceutical Company</td>
			<td>A03190612144</td>
			<td>Ast injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Astragaloside A</td>
			<td>Chongqing Gao Ren Biotechnology Company</td>
			<td>84687-43-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bax</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>60267-1-Ig</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA protein quantification kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>P0012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bcl-2</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>26593-1-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide incubators</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Instruments Company</td>
			<td>0816-2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caspase-3</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>19677-1-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorogenic acid</td>
			<td>Chongqing Gao Ren Biotechnology Company</td>
			<td>327-97-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cobalt chloride hexahydrate</td>
			<td>Merck Biotechnology, Inc.</td>
			<td>7791-13-1</td>
			<td>CoCl2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Guangzhou saiguo biotech Company</td>
			<td>2020112701</td>
			<td>DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium hydrogen phosphate dodecahydrate</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Company</td>
			<td>2020090101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM high sugar medium</td>
			<td>Thermo scientific Hyclone</td>
			<td>2110050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM sugar free medium</td>
			<td>Beijing Solarbio life sciences Company</td>
			<td>2029548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ECL luminous fluid</td>
			<td>Lianshuo Biological Company</td>
			<td>WBKLS0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic balance</td>
			<td>Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>FA1204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoresis instrument</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories (Shanghai) Co., Ltd</td>
			<td>1658026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erigeron breviscapus capsule</td>
			<td>Yunnan Biogu Pharmaceutical Company</td>
			<td>Z53021671</td>
			<td>Eri capsule</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Four Seasons Institute of Biological Engineering</td>
			<td>20210402</td>
			<td>FBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent microscope</td>
			<td>Olympms Corporation</td>
			<td>IX71-F32PH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel imager</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories (Shanghai) Co., Ltd</td>
			<td>1708265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-mouse secondary antibody</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>SA00001-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit secondary antibody</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>SA00001- 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IBM SPSS Statistics version 26.0</td>
			<td>International Business Machines Corporation, USA</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ 1.8.0</td>
			<td>National Institutes of Health, USA</td>
			<td>-</td>
			<td>imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immunol&#160;fluorescence&#160;staining kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>P0196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Company</td>
			<td>2021070901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marker</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Instruments Company</td>
			<td>26616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate reader</td>
			<td>Perkin Elmer Corporate Management (Shanghai) Co.</td>
			<td>HH35L2018296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Motic Inverted microscope</td>
			<td>Nanda Scientific Instruments Co.</td>
			<td>AE2000LED</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Company</td>
			<td>2014081301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nonfat milk</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>P0216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nrf2</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>16396-1-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P-Akt</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>66444-1-Ig</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC12 cells</td>
			<td>Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>CBP60430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin solution</td>
			<td>Thermo scientific Hyclone</td>
			<td>SV30010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphatase protease inhibitor mixture</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>P1045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogen phosphate</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Company</td>
			<td>2015082901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reactive oxygen species assay kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>S0033S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RI-PA lysis solution</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>P0013B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scutellarin</td>
			<td>Chongqing Gao Ren Biotechnology Company</td>
			<td>27740-01-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS-PAGE sample loading buffer, 5x</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>P0015L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile filter tips (0.22 &#181;m)</td>
			<td>Merck Biotechnology, Inc.</td>
			<td>SLGP033RB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-base</td>
			<td>Guangzhou saiguo biotech Company</td>
			<td>1115GR500&#160;</td>
			<td>TBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Thermo scientific Hyclone</td>
			<td>J190013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Company</td>
			<td>2021051301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex oscillator</td>
			<td>OHAUS International Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>VXMNAL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-actin</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>66009-1-Ig</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

exploring the two herb combination strategy to treat injured pc12 cells

Met het oog op de voordelen van de combinatie van traditionele Chinese geneeskunde (TCM) bij de behandeling van cerebrale ischemie, bestudeerden we de verschillen in de werkzaamheid en het mechanisme tussen de bereidingscombinatie en de componentcombinatie om de twee kruidencombinatiestrategie te verkennen om gewonde PC12-cellen te behandelen. Kobaltchloride (CoCl2) in combinatie met een glucosevrij medium werd gebruikt om oxidatieve schade aan PC12-cellen te induceren. Vervolgens werd de optimale combinatie van Astragalus mongholicus (Ast) en Erigeron breviscapus (Eri) injectie geselecteerd en gecombineerd volgens uniforme ontwerpmethoden na screening van hun veilige en effectieve concentratie op PC12-cellen. Verder omvat de gescreende componentencombinatie 10 μM astragaloside A, 40 μM scutellarine en 75 μM chlorogeenzuur in twee kruiden. Vervolgens werden MTT, Annexin V-FITC/PI, immunofluorescentie en Western blot-analyse gebruikt om de werkzaamheid en het mechanisme van de preparaatcombinatie en de componentcombinatie op gewonde PC12-cellen te evalueren. De resultaten toonden aan dat de optimale voorbereidingscombinatie voor celpro-overleving Ast-injectie en Eri-capsule was met een concentratie van 6:1,8 (μM). De componentencombinatie (10 μM astragaloside A, 40 μM scutellarine en 75 μM chlorogeenzuur) was werkzamer dan de bereidingscombinatie. Beide combinaties verminderden opmerkelijk de apoptotische snelheid, de fluorescentie-intensiteit van caspase-3 en het intracellulaire reactieve zuurstofsoorten (ROS) -niveau; ondertussen verhoogden ze de expressieniveaus van p-Akt / Akt, Bcl-2 / Bax en Nrf2. Deze effecten waren duidelijker in de componentencombinatie. Kortom, beide combinaties kunnen de verwonding veroorzaakt door CoCl2 in combinatie met een glucosevrij medium op PC12-cellen remmen, waardoor de celoverleving wordt bevorderd. De efficiëntie van de componentcombinatie ten opzichte van de bereidingscombinatie kan echter te wijten zijn aan de sterkere regulatie van de PI3K / Akt / Nrf2-signaleringsroute gerelateerd aan oxidatieve stress en apoptose.

De screening van de optimale combinatie van Ast-injectie en Eri-capsule is weergegeven in figuur 1. De celoverlevingskans van Ast-injectie en Eri-capsule op de normale PC12-cellen is weergegeven in figuur 1A. De levensvatbaarheid van de cel was lager dan 95% met Ast-injectie bij concentraties hoger dan 12 μM (figuur 1A) en Eri-capsule bij concentraties hoger dan 5 μM (figuur 1A), wat aangeeft dat de ...

Watch this Scientific Journal Video about Exploring the Two Herb Combination Strategy to Treat Injured PC12 Cells at JoVE.com

Exploring the Two Herb Combination Strategy to Treat Injured PC12 Cells

Dit protocol biedt een combinatiestrategie van twee kruiden om gewonde PC12-cellen te behandelen. Het protocol biedt een referentie voor het optimaliseren van de beste toepassingsmodus van de traditionele Chinese geneeskunde (TCM).

Het verkennen van de combinatiestrategie voor twee kruiden om gewonde PC12-cellen te behandelen

In view of the advantages of the combination of traditional Chinese medicine (TCM) in the treatment of cerebral ischemia, we studied the differences in ...

Het protocol in deze studie biedt een combinatiestrategie van twee kruiden voor de behandeling van hypoxie-beschadigde PC12-cellen en een referentie voor het optimaliseren van de beste combinatiemodus van kruiden. Deze techniek kan een eenvoudige, betrouwbare en efficiënte in vitro experimentele methode bieden voor het screenen van de effectieve ingrediëntencombinatie van kruiden, tegen hypoxiale cellen. Deze strategie kan ook worden toegepast om de componentcombinaties te screenen tegen hypoxiale cellen van andere kruidenpreparatencombinaties en hun beschermende mechanisme te illustreren.Om te beginnen, subkweek de PC12-cellen om de twee tot drie dagen bij 37 graden Celsius in een incubator aangevuld met 5% koolstofdioxide om een passage van 4 tot 8 te krijgen voor alle volgende experimenten. Behandel 70 tot 80% confluente PC12-cellen met één milliliter van 0,25% trypsine en observeer de cellen onder een microscoop voor celloslating. Stop vervolgens de trypsinevertering door drie milliliter van het volledige medium toe te voegen.Draai de overgebrachte cellen in een centrifugebuis van 15 milliliter bij 840 x g gedurende vijf minuten. Nadat u het supernatant hebt weggegooid, resuspendeert u de celpellet met het volledige medium en brengt u de celsuspensie over naar een microcentrifugebuis van 1,5 milliliter. Als u de cellen wilt tellen, start u de flowcytometriesoftware en selecteert u het overeenkomstige verdunningsmultiple van de celoplossing in de telinstelling.Klik op Dichtheidsdiagram na het laden van het celmonster. Cirkel de celpopulatie weg van de x-as en y-as. Klik met de rechtermuisknop op de gegevenstabel onder de afbeelding en selecteer X, Y, Aantal en Abs.Tel om de resultaten van het tellen van cellen te krijgen onder de gegevenstabel van Abs.Count. Na het aanpassen van de celconcentratie ongeveer tot 1 keer 10 tot de 5e cellen per milliliter met het volledige medium, voegt u 100 microliter van de celsuspensie per put toe aan een 96-well plaat en incubeert u bij 37 graden Celsius en 5% koolstofdioxide gedurende 24 uur. Voeg de volgende dag aan de supernatant-afgedankte plaat 120 microliter van één milligram per milliliter MTT-oplossing toe in elke put en incubeer gedurende vier uur bij 37 graden Celsius.Voeg na incubatie, zodra het supernatant is weggegooid, 150 microliter DMSO toe aan elke put. Houd de plaat gedurende 10 minuten onder het schudden in een vortexoscillator met een snelheid van 240 keer per minuut. Meet vervolgens de absorptie op 490 nanometer in een microplaatlezer.Om de optimale combinatie van geneesmiddelen te screenen door middel van een homogene ontwerpmethode, kweekt u de cellen zoals eerder aangetoond en behandelt u de gewonde PC12-cellen met zes verschillende verhoudingsconcentraties van Astragalus-injectie en breviscapuscapuscapsule. Om het beschermende effect van twee optimale combinaties te evalueren, behandelt u de gewonde PC12-cellen met de twee soorten combinaties van geneesmiddelen. Incubeer de cellen gedurende 24 uur en bereken de levensvatbaarheid van de cel zoals eerder aangetoond.Zaai de PC12-cellen in een 12-well plaat en incubeer bij 37 graden Celsius gedurende 24 uur. Behandel de cellen na medicamenteuze behandeling met 250 microliter trypsine per put en centrifugeer de cellen bij 840 x g gedurende vijf minuten bij kamertemperatuur. Resuspendeer vervolgens de celpellet met 500 microliter van de bindingsbuffer.Voeg 5 microliter Annexin V-FITC toe, 10 microliter propidiumjodide in drievoud voor elke groep en incubeer de cellen in het donker gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur om te controleren op apoptose met behulp van flowcytometrie. Klik in de flowcytometersoftware op Automatische compensatie in het menu Start, selecteer FITC, PE, PerCP en APC in het kanaal Selecteren en selecteer Compensatie op hoogte. Klik vervolgens op OK in statistisch item:Mediaan.Klik op Density Map en omcirkel de effectieve celpopulatie met de eerder gedemonstreerde celtelmethode. Maak met FITC-fluorescentie als x-asparameter en andere fluorescentie als y-asparameter een dichtheidskaart. Klik op Compensatiematrix in het menu Start en Op Coëfficiënt in de overloopmatrix.Zaai de PC12-cellen op de coverslips die op een 24-well plaat goed in drievoud zijn geplaatst en incubeer gedurende 24 uur bij 37 graden Celsius. Spoel na medicamenteuze behandeling de coverslips twee keer met PBS gedurende vijf minuten elk, fixeer ze met 4% paraformaldehyde gedurende 15 minuten en permeabiliseer met 0,5% Triton X-100 gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur. Na het spoelen van de cellen, blokkeer ze met 10% geitenserum gedurende een uur bij kamertemperatuur.Voeg 200 microliter verdund primair antilichaam caspase-3 toe aan elke coverslip en incubeer 's nachts bij 4 graden Celsius. Was de volgende dag drie keer met TBST-buffer gedurende drie minuten elk en incubeer met 200 microliter secundair antilichaam gedurende één uur bij kamertemperatuur in het donker. Incubeer na incubatie de coverslips met 300 microliter van 0,5 microgram per milliliter DAPI gedurende 10 minuten en was de cellen drie keer met TBST gedurende elk vijf minuten.Leg de coverslipbeelden vast onder een fluorescentiemicroscoop en analyseer de fluorescentie-intensiteit statistisch met de beeldvormingssoftware. Was de met geneesmiddelen behandelde PC12-celdeksel drie keer met PBS gedurende drie minuten elk en incubeer met 400 microliter 10 micromolaire dichloor-dihydro-fluoresceïnediacetaat bij 37 graden Celsius gedurende 20 minuten. Was de cellen opnieuw met serumvrije DMEM tweemaal gedurende drie minuten elk.Voeg het fluorescentieblusmiddel toe en leg onmiddellijk de coverslipbeelden vast onder een fluorescentiemicroscoop om de relatieve fluorescentie-intensiteit te berekenen met de beeldvormingssoftware. Was de met geneesmiddelen behandelde PC12-cellen drie keer in een 6-wellsplaat met PBS gedurende vijf minuten elk en incubeer op ijs gedurende 30 minuten in de voorbereide lysisbuffer van 100 microliter per put. Na lysis centrifugeer je de cellen op 16.000 x g gedurende 20 minuten bij 4 graden Celsius om het supernatant te verzamelen.Na het detecteren van de eiwitconcentratie door Bradford-assay, voert u een 12% SDS-PAGE elektroforese uit met 25 microgram eiwit in elke baan en brengt u de gel over naar het PVDF-membraan. Blokkeer de membranen met 5% vetvrije melk gedurende 1,5 uur bij kamertemperatuur en incubeer met vijf milliliter van de overeenkomstige primaire antilichamen gedurende 24 uur bij 4 graden Celsius. Na incubatie en het wassen van het membraan met TBST drie keer gedurende 10 minuten elk, incubeer met vijf milliliter secundaire HRP-geconjugeerde antilichamen bij kamertemperatuur gedurende twee uur.Voeg ten slotte aan het TBST-gewassen membraan chemiluminescent HRP-substraat toe voor eiwitbanddetectie volgens de instructies van de fabrikant. Leg vervolgens de beelden vast met behulp van het chemiluminescentiebeeldvormingssysteem om de grijswaarden van de eiwitten te kwantificeren, met bèta-actine als interne controle. De levensvatbaarheid van de cellen op de normale PC12-cellen was lager dan 95% met Astragalus-injectie in concentraties groter dan 12 micromolair en groter dan 5 micromolair voor de breviscapuscapuscapsule.Astragalus-injectie zou de overlevingskans van de gewonde PC12-cellen kunnen verbeteren in het concentratiebereik van 6 tot 12 micromolair en breviscapuscapuscapsule op 2 tot 5 micromolair. Terwijl de medicijncombinatie in een verhouding van 6 tot 1,8 micromolair de hoogste levensvatbaarheid van cellen vertoonde. De levensvatbaarheid van de cel van de twee combinaties op de gewonde PC12-cellen werd aanzienlijk bevorderd en de componentcombinatie was superieur aan de voorbereidingscombinatie.De apoptosesnelheid toonde aan dat de percentages vroege, late en totale apoptotische cellen significant hoger waren in de modelgroep dan in de normale groep. Vergeleken met de modelgroep waren de percentages apoptotische cellen in elk stadium significant lager in de behandelingsgroep. De fluorescentie-intensiteit van caspase-3 was significant lager in elke behandelingsgroep in vergelijking met de modelgroep en was relatief lager in de componentcombinatiegroep.Relatieve expressie van de genen Akt, Bcl-2 en Bax onthulde dat de componentcombinatie superieur is aan de voorbereidingscombinatie bij het bevorderen van celoverleving, wat gerelateerd is aan het sterkere anti-apoptose-effect. De componentencombinatie vertoonde een beter anti-oxidatief schade-effect dan dat van de bereidingscombinatie en een significant hogere expressie van het Nrf2-eiwit. Deze methode kan worden gebruikt om de componentcombinatie te screenen en te evalueren met andere potentiële farmacologische activiteiten van de kruidencombinatie, zoals ontstekingsremmend, antibacterieel en meer.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

Een strategie om de Novo Mutaties Leg in voorkomende aandoeningen zoals autisme en schizofrenie

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Catheter Ablation in Combination With Left Atrial Appendage Closure for Atrial Fibrillation

Katheter Ablation in combinatie met het linker atrium aanhangsel Sluiting voor atriumfibrilleren

Atrial fibrillation (AF) is the most common sustained cardiac arrhythmia, affecting millions of individuals worldwide 1-3. The rapid, irregular, and ...

The Measurement and Treatment of Suppression in Amblyopia

De meting en behandeling van Onderdrukking in Amblyopie

Amblyopia, a developmental disorder of the visual cortex, is one of the leading causes of visual dysfunction in the working age population. Current ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Isolatie, karakterisering en vergelijkende differentiatie van humane Dental Pulp stamcellen uit permanente tanden met behulp van twee verschillende methoden

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Dual-phase Cone-beam Computed Tomography to See, Reach, and Treat Hepatocellular Carcinoma during Drug-eluting Beads Transarterial Chemo-embolization

The advent of cone-beam computed tomography (CBCT) in the angiography suite has been revolutionary in interventional radiology. CBCT offers 3 ...

Tumor Treating Field Therapy in Combination with Bevacizumab for the Treatment of Recurrent Glioblastoma

Tumor Behandeling Field Therapy in combinatie met bevacizumab voor de behandeling van terugkerende glioblastoma

A novel device that employs TTF therapy has recently been developed and is currently in use for the treatment of recurrent glioblastoma (rGBM). It was FDA ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Studeren alvleesklier- Stamcel Kenmerken voor het ontwikkelen van nieuwe behandelingsstrategieën

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Development of Recombinant Proteins to Treat Chronic Pain

Ontwikkeling van recombinante eiwitten voor de behandeling van chronische pijn

Chronic pain is difficult to treat and new approaches to resolve persistent pain are urgently needed. Anti-inflammatory cytokines are promising candidates ...

Three-Dimensional Collagen Matrix Scaffold Implantation as a Liver Regeneration Strategy

Driedimensionale collageenmatrixsteigerimplantatie als leverregeneratiestrategie

Liver diseases are the leading cause of death worldwide. Excessive alcohol consumption, a high-fat diet, and hepatitis C virus infection promote fibrosis, ...

Vessel-Sparing Microsurgical Longitudinal Intussusception Vasoepididymostomy to Treat Epididymal Obstructive Azoospermia

Vaatsparende microchirurgische longitudinale intussusceptie Vasoepididymostomie voor de behandeling van epididymale obstructieve azoöspermie

The epididymis is a common site of obstruction in obstructive azoospermia (OA). Vasoepididymostomy has become an important method for the treatment of ...