Name: exploring the two herb combination strategy to treat injured pc12 cells
Uploaded: 2022-11-18T14:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Exploring the Two Herb Combination Strategy to Treat Injured PC12 Cells at JoVE.com

Denne forskningen ble finansiert av viktige FoU-prosjekter fra Sichuan Provincial Department of Science and Technology (2020YFS0325).

1. Fremstilling av reagens
<ol><li>Forbered hele mediet ved å tilsette 90 ml DMEM høyt sukkermedium, 10 ml føtal bovint serum (FBS) og 1 ml penicillin-streptomycinoppløsning i en 125 ml steril kulturkolbe. Bland hele mediet, og oppbevar ved 4 °C under lukkede forhold.</li>
	<li>Klargjør CoCl 2-oppløsning ved å tilsette 0,02 g CoCl2 pulver (nøyaktig veid) i 10 ml DMEM sukkerfritt medium (oppløst fullstendig) for å oppnå en 8,4 ml stamløsning. Filtrer oppløsningen med ...

<ol>
	<li>Mendelevich, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+cerebral+ischemia,+and+dizziness.">Chronic cerebral ischemia, and dizziness.</a> Zhurnal Nevrologii i Psikhiatrii Imeni SS Korsakova. 122 (3), 22-26 (2022).</li><li>Gao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expert+consensus+on+the+diagnosis+and+treatment+of+chronic+cerebral+ischemia+with+integrated+traditional+Chinese+and+western+medicine.">Expert consensus on the diagnosis and treatment of chronic cerebral ischemia with integrated traditional Chinese and western medicine.</a> Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine. 38 (10), 1161-1167 (2018).</li><li>Luyu, S., Heng, L., Dengke, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+treatment+of+45+cases+of+cerebral+infarction+with+Astragalus+and+Dengzhan+Xixin+injection.">Combined treatment of 45 cases of cerebral infarction with Astragalus and Dengzhan Xixin injection.</a> Jilin Journal of Traditional Chinese Medicine. 27 (4), 23-24 (2007).</li><li>Bei, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+study+of+Dengzhanxixin+injection+combined+with+Astragalus+injection+in+the+treatment+of+acute+ischemic+stroke.">Clinical study of Dengzhanxixin injection combined with Astragalus injection in the treatment of acute ischemic stroke.</a> Journal of Basic Chinese Medicine. 21 (9), 1123-1127 (2015).</li><li>Tian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+ratio+of+Astragalus+injection+combined+with+Dengzhan+Xixin+injection+against+cerebral+ischemia-reperfusion+injury+in+rats+by+baseline+equal-ratio+increase-decrease+design+method.">Optimal ratio of Astragalus injection combined with Dengzhan Xixin injection against cerebral ischemia-reperfusion injury in rats by baseline equal-ratio increase-decrease design method.</a> China Pharmacy. 30 (14), 1885-1889 (2019).</li><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+and+mechanism+of+Astragalus+combined+with+Erigeron+breviscapusin+the+best+proportion+on+cerebral+ischemia+rats.">Protective effect and mechanism of Astragalus combined with Erigeron breviscapusin the best proportion on cerebral ischemia rats.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 35 (2), 104-108 (2019).</li><li>Yan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+the+oxidative+damage+of+PC12+cells+with+hypoxia+and+hypoglycemia+based+on+the+combination+of+Astragalus+and+Dengzhan+Asarum+based+on+the+Nrf2/HO-1+pathway.">Study on the oxidative damage of PC12 cells with hypoxia and hypoglycemia based on the combination of Astragalus and Dengzhan Asarum based on the Nrf2/HO-1 pathway.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 38 (2), 159-164 (2022).</li><li>. Chinese Pharmacopoeia, Dengzhan Asarum Granules. Volume I Available from: <a target="_blank" href="https://db.ouryao.com/yd2020/view.php?id=f27dcefa69">https://db.ouryao.com/yd2020/view.php?id=f27dcefa69</a> (2020)</li><li>. Chinese Pharmacopoeia, Astragalus granules. Volume I Available from: <a target="_blank" href="https://db.ouryao.com/yd2020/view.php?id=fbcd0a8bf8">https://db.ouryao.com/yd2020/view.php?id=fbcd0a8bf8</a> (2020)</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-linoleyltyrosine+protects+PC12+cells+against+oxidative+damage+via+autophagy:+Possible+involvement+of+CB1+receptor+regulation.">N-linoleyltyrosine protects PC12 cells against oxidative damage via autophagy: Possible involvement of CB1 receptor regulation.</a> International Journal of Molecular Medicine. 46 (5), 1827-1837 (2020).</li><li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gab1+regulates+SDF-1-induced+progression+via+inhibition+of+apoptosis+pathway+induced+by+PI3K/AKT/Bcl-2/BAX+pathway+in+human+chondrosarcoma.">Gab1 regulates SDF-1-induced progression via inhibition of apoptosis pathway induced by PI3K/AKT/Bcl-2/BAX pathway in human chondrosarcoma.</a> Tumor Biology. 37 (1), 1141-1149 (2016).</li><li>Meng, M., Zhang, L., Ai, D., Wu, H., Peng, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#946;-Asarone+ameliorates+&#946;-Amyloid-induced+neurotoxicity+in+PC12+cells+by+activating+P13K/Akt/Nrf2+signaling+pathway.">&#946;-Asarone ameliorates &#946;-Amyloid-induced neurotoxicity in PC12 cells by activating P13K/Akt/Nrf2 signaling pathway.</a> Frontiers in Pharmacology. 12, 659955 (2021).</li><li>Li, J., Chen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+treatment+of+chronic+cerebral+ischemia+with+traditional+Chinese+and+western+medicine.">Advances in the treatment of chronic cerebral ischemia with traditional Chinese and western medicine.</a> Xinjiang Journal of Traditional Chinese Medicine. 39 (3), 115-118 (2021).</li><li>Yu, M., Zhan, Q., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discussion+on+the+therapeutic+value+of+traditional+Chinese+medicine+on+cognitive+dysfunction+caused+by+chronic+cerebral+ischemia.">Discussion on the therapeutic value of traditional Chinese medicine on cognitive dysfunction caused by chronic cerebral ischemia.</a> Chinese Medicine Modern Distance Education of China. 11 (19), 155-157 (2013).</li><li>Wang, M., Liu, J., Yao, M., Ren, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+research+on+pharmacological+and+neuroprotective+effects+of+traditional+Chinese+medicine+after+cerebral+ischemia.">Advances in research on pharmacological and neuroprotective effects of traditional Chinese medicine after cerebral ischemia.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 45 (3), 513-517 (2020).</li><li>Wang, N., Sun, H., Ma, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+different+doses+of+astragalus+injection+on+neurological+rehabilitation+of+stroke+patients.">Effects of different doses of astragalus injection on neurological rehabilitation of stroke patients.</a> Chinese Journal of Clinical Rational Drug Use. 9 (13), 67-69 (2016).</li><li>Sun, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+astragalus+injection+on+apoptosis+after+cerebral+ischemia-reperfusion+in+rats.">Effects of astragalus injection on apoptosis after cerebral ischemia-reperfusion in rats.</a> Hebei Medicine. 22 (7), 1147-1149 (2016).</li><li>Yang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengzhan+Xixin+injection+derived+from+a+traditional+Chinese+herb+Erigeron+breviscapusameliorates+cerebral+ischemia/reperfusion+injury+in+rats+via+modulation+of+mitophagy+and+mitochondrial+apoptosis.">Dengzhan Xixin injection derived from a traditional Chinese herb Erigeron breviscapusameliorates cerebral ischemia/reperfusion injury in rats via modulation of mitophagy and mitochondrial apoptosis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 288, 114988 (2022).</li><li>Liao, Y., Ni, X., Zhan, C., Cai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+research+progress+of+Dengzhanhua+preparation+in+prevention+and+treatment+of+ischemic+stroke+and+transient+ischemic+attack.">Clinical research progress of Dengzhanhua preparation in prevention and treatment of ischemic stroke and transient ischemic attack.</a> Guangdong Medical Journal. 41 (9), 963-967 (2020).</li><li>Li, C., Li, J., Xu, G., Sun, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+chronic+ethanol+consumption+on+apoptosis+and+autophagy+following+transient+focal+cerebral+ischemia+in+male+mice.">Influence of chronic ethanol consumption on apoptosis and autophagy following transient focal cerebral ischemia in male mice.</a> Scientific Reports. 10 (1), 6164 (2020).</li><li>El Khashab, I. H., Abdelsalam, R. M., Elbrairy, A. I., Attia, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chrysin+attenuates+global+cerebral+ischemic+reperfusion+injury+via+suppression+of+oxidative+stress,+inflammation+and+apoptosis.">Chrysin attenuates global cerebral ischemic reperfusion injury via suppression of oxidative stress, inflammation and apoptosis.</a> Biomedicine Pharmacotherapy. 112, 108619 (2019).</li><li>Su, X., He, S., Chen, Z., Xie, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+breviscapine+aglycone+on+PI+3+K/Akt+conduction+pathway+in+neonatal+rats+with+hypoxic-ischemic+brain+injury.">Effect of breviscapine aglycone on PI 3 K/Akt conduction pathway in neonatal rats with hypoxic-ischemic brain injury.</a> Journal of Armed Police Logistics College (Medical Edition). 27 (2), 93-96 (2018).</li><li>Wang, X., Shi, C., Pan, H., Meng, X., Ji, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA-22+exerts+its+neuroprotective+and+angiogenic+functions+via+regulating+PI3K/Akt+signaling+pathway+in+cerebral+ischemia-reperfusion+rats).">MicroRNA-22 exerts its neuroprotective and angiogenic functions via regulating PI3K/Akt signaling pathway in cerebral ischemia-reperfusion rats).</a> Journal of Neural Transmission. 127 (1), 35-44 (2020).</li><li>Luca, M., Luca, A., Calandra, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+oxidative+damage+in+the+pathogenesis+and+progression+of+alzheimer's+disease+and+vascular+dementia.">The role of oxidative damage in the pathogenesis and progression of alzheimer's disease and vascular dementia.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2015, 504678 (2015).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lupeol+alleviates+cerebral+ischemia-reperfusion+injury+in+correlation+with+modulation+of+PI3K/Akt+pathway.">Lupeol alleviates cerebral ischemia-reperfusion injury in correlation with modulation of PI3K/Akt pathway.</a> Neuropsychiatric Disease and Treatment. 16 (8), 1381-1390 (2020).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effect+of+phosphocreatine+on+oxidative+stress+and+mitochondrial+dysfunction+induced+apoptosis+in+vitro+and+in+vivo:+Involvement+of+dual+PI3K/Akt+and+Nrf2/HO-1+pathways.">Neuroprotective effect of phosphocreatine on oxidative stress and mitochondrial dysfunction induced apoptosis in vitro and in vivo: Involvement of dual PI3K/Akt and Nrf2/HO-1 pathways.</a> Free Radical Biology and Medicine. 120, 228-238 (2018).</li><li>Mu&#241;oz-S&#225;nchez, J., Ch&#225;nez-C&#225;rdenas, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+cobalt+chloride+as+a+chemical+hypoxia+model.">The use of cobalt chloride as a chemical hypoxia model.</a> Journal of Applied Toxicology. 39 (4), 556-570 (2019).</li><li>Tang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salidroside+attenuates+CoCl2-simulated+hypoxia+injury+in+PC12+cells+partly+by+mitochondrial+protection.">Salidroside attenuates CoCl2-simulated hypoxia injury in PC12 cells partly by mitochondrial protection.</a> European Journal of Pharmacology. 912 (10), 174617 (2021).</li><li>Yin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+potency+of+Tofu+bio-processed+using+Actinomucor+elegans+against+hypoxic+injury+induced+by+cobalt+chloride+in+PC12+cells.">Neuroprotective potency of Tofu bio-processed using Actinomucor elegans against hypoxic injury induced by cobalt chloride in PC12 cells.</a> Molecules. 26 (10), 2983 (2021).</li></ol>

Det er fortsatt mangel på ideelle stoffer for behandling av cerebral iskemi i moderne klinisk praksis2. Under veiledning av supplere qi og aktivere blodsirkulasjonsmetoden, har Ast, Eri og andre preparater blitt brukt i kombinasjon i klinisk praksis av TCM og har oppnådd gode omfattende fordeler13,14,15. Et stort antall studier har vist at Ast kan forbedre permeabiliteten til blod-hjernebarrieren, øke ...

Kronisk cerebral iskemi, forårsaket av cerebral hypoperfusjon, er en vanlig sykdom hos middelaldrende og eldre mennesker1. Som en langvarig okkult iskemi sykdom, kan det føre til progressiv eller vedvarende nevrologisk dysfunksjon. De viktigste patologiske mekanismene inkluderer celleapoptose og oksidativ skade, noe som fører til progressiv eller vedvarende nevrologisk dysfunksjon; Dette er det patologiske grunnlaget for Alzheimers sykdom, vaskulær demens og andre sykdommer, og påvirker pasientens livskvalitet alvorlig. Imidlertid er det fortsatt mangel på ideelle stoffer i moderne medisin for å behandle kronisk cerebral iskemi2. Samtidig har kombinasjonen av Astragalus mongholicus (Ast) og Erigeron breviscapus (Eri ) blitt mye brukt i klinisk praksis av tradisjonell kinesisk medisin (TCM)4. Kombinasjonsstrategien har bemerkelsesverdig forbedret seg for å fremme utvinning av nervefunksjon etter cerebral iskemi, noe som er bedre enn for et enkelt stoff; Det er imidlertid store forskjeller i doseringsforholdet i kombinasjonen av de to legemidlene4. De effektive komponentene og virkningsmekanismen er ikke godt definert, noe som er nøkkelproblemet som begrenser den kliniske anvendelsen.
Tidligere studier har vist den synergistiske effekten av preparatkombinasjonen av Ast injeksjon og Eri injeksjon ved behandling av cerebral iskemi hos rotter. Det kan oppregulere uttrykket av p-Akt-protein og nedregulere uttrykket av Bcl-2-assosiert dødspromotor (BAD) protein5,6, som er et av B-lymfoblastom 2 (Bcl-2) familieproteinene og har effekten av å fremme apoptose. Det materielle grunnlaget og mekanismen for dens synergistiske effekt er imidlertid ikke klart. Videre ble skademodellen for PC12-celler etablert med CoCl2 kombinert glukosefritt medium, og den optimale komponentkombinasjonen i Ast og Eri er screenet og definert7.
I denne studien screenes de effektive dosene av Ast og Eri ved hjelp av den skadede PC12-cellemodellen. Den optimale kombinasjonen av de to legemidlene screenes ved hjelp av denne modellen kombinert med den homogene designmetoden. Cellemodellen brukes til å evaluere forskjellen i effektene og mekanismene til preparatkombinasjonen og komponentkombinasjonen i skadede PC12-celler. Denne strategien tar sikte på å utforske den beskyttende effekten og reguleringsmekanismen til de to typer kombinasjoner på skadede PC12-celler gjennom PI3K / Akt / Nrf2-signalveien for å bestemme den beste kombinasjonsmodusen. Denne studien gir en referanse for å optimalisere den beste applikasjonsmodusen til TCM.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1300 series class II biosafety cabinet</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Instruments Company</td>
			<td>1374</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide</td>
			<td>Guangzhou saiguo biotech Company</td>
			<td>1334GR001</td>
			<td>MTT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACEA NovoExpress&#160;1.4.0</td>
			<td>ACEA Biosciences, Inc</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Akt</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>10176-2-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical flow cytometry</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Instruments Company</td>
			<td>62-2-1810-1027-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Annexin V-FITC apoptosis detection kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>C1062L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Astragalus injection</td>
			<td>Heilongjiang Zhenbao Island Pharmaceutical Company</td>
			<td>A03190612144</td>
			<td>Ast injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Astragaloside A</td>
			<td>Chongqing Gao Ren Biotechnology Company</td>
			<td>84687-43-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bax</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>60267-1-Ig</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA protein quantification kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>P0012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bcl-2</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>26593-1-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide incubators</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Instruments Company</td>
			<td>0816-2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caspase-3</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>19677-1-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorogenic acid</td>
			<td>Chongqing Gao Ren Biotechnology Company</td>
			<td>327-97-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cobalt chloride hexahydrate</td>
			<td>Merck Biotechnology, Inc.</td>
			<td>7791-13-1</td>
			<td>CoCl2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Guangzhou saiguo biotech Company</td>
			<td>2020112701</td>
			<td>DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium hydrogen phosphate dodecahydrate</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Company</td>
			<td>2020090101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM high sugar medium</td>
			<td>Thermo scientific Hyclone</td>
			<td>2110050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM sugar free medium</td>
			<td>Beijing Solarbio life sciences Company</td>
			<td>2029548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ECL luminous fluid</td>
			<td>Lianshuo Biological Company</td>
			<td>WBKLS0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic balance</td>
			<td>Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>FA1204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoresis instrument</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories (Shanghai) Co., Ltd</td>
			<td>1658026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erigeron breviscapus capsule</td>
			<td>Yunnan Biogu Pharmaceutical Company</td>
			<td>Z53021671</td>
			<td>Eri capsule</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Four Seasons Institute of Biological Engineering</td>
			<td>20210402</td>
			<td>FBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent microscope</td>
			<td>Olympms Corporation</td>
			<td>IX71-F32PH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel imager</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories (Shanghai) Co., Ltd</td>
			<td>1708265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-mouse secondary antibody</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>SA00001-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit secondary antibody</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>SA00001- 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IBM SPSS Statistics version 26.0</td>
			<td>International Business Machines Corporation, USA</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ 1.8.0</td>
			<td>National Institutes of Health, USA</td>
			<td>-</td>
			<td>imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immunol&#160;fluorescence&#160;staining kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>P0196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Company</td>
			<td>2021070901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marker</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Instruments Company</td>
			<td>26616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate reader</td>
			<td>Perkin Elmer Corporate Management (Shanghai) Co.</td>
			<td>HH35L2018296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Motic Inverted microscope</td>
			<td>Nanda Scientific Instruments Co.</td>
			<td>AE2000LED</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Company</td>
			<td>2014081301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nonfat milk</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>P0216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nrf2</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>16396-1-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P-Akt</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>66444-1-Ig</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC12 cells</td>
			<td>Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>CBP60430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin solution</td>
			<td>Thermo scientific Hyclone</td>
			<td>SV30010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphatase protease inhibitor mixture</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>P1045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogen phosphate</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Company</td>
			<td>2015082901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reactive oxygen species assay kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>S0033S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RI-PA lysis solution</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>P0013B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scutellarin</td>
			<td>Chongqing Gao Ren Biotechnology Company</td>
			<td>27740-01-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS-PAGE sample loading buffer, 5x</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>P0015L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile filter tips (0.22 &#181;m)</td>
			<td>Merck Biotechnology, Inc.</td>
			<td>SLGP033RB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-base</td>
			<td>Guangzhou saiguo biotech Company</td>
			<td>1115GR500&#160;</td>
			<td>TBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Thermo scientific Hyclone</td>
			<td>J190013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Company</td>
			<td>2021051301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex oscillator</td>
			<td>OHAUS International Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>VXMNAL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-actin</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>66009-1-Ig</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

exploring the two herb combination strategy to treat injured pc12 cells

I lys av fordelene ved kombinasjonen av tradisjonell kinesisk medisin (TCM) i behandlingen av cerebral iskemi, studerte vi forskjellene i effekt og mekanisme mellom preparatkombinasjonen og komponentkombinasjonen for å utforske de to urtekombinasjonsstrategiene for å behandle skadede PC12-celler. Koboltklorid (CoCl2) kombinert med et glukosefritt medium ble brukt for å indusere oksidativ skade på PC12-celler. Deretter ble den optimale kombinasjonen av Astragalus mongholicus (Ast) og Erigeron breviscapus (Eri ) injeksjon valgt og kombinert etter ensartede designmetoder etter screening av sikker og effektiv konsentrasjon på PC12-celler. Videre består komponentkombinasjonen av 10 μM astragaloside A, 40 μM scutellarin og 75 μM klorogen syre i to urter. Deretter ble MTT, Annexin V-FITC / PI, immunfluorescens og Western blot-analyse brukt til å evaluere effekten og mekanismen til preparatkombinasjonen og komponentkombinasjonen på skadede PC12-celler. Resultatene viste at den optimale kombinasjonen for celleoverlevelse var ASAT-injeksjon og Eri-kapsel med en konsentrasjon på 6:1,8 (μM). Komponentkombinasjonen (10 μM astragaloside A, 40 μM scutellarin og 75 μM klorogen syre) var mer effektiv enn preparatkombinasjonen. Begge kombinasjonene reduserte bemerkelsesverdig apoptotisk hastighet, fluorescensintensiteten til caspase-3 og intracellulære reaktive oksygenarter (ROS) nivå; I mellomtiden oppregulerte de uttrykksnivåene til p-Akt/Akt, Bcl-2/Bax og Nrf2. Disse effektene var tydeligere i komponentkombinasjonen. Avslutningsvis kan begge kombinasjonene hemme skaden forårsaket av CoCl2 kombinert med et glukosefritt medium på PC12-celler, og dermed fremme celleoverlevelse. Imidlertid kan effektiviteten til komponentkombinasjonen over preparatkombinasjonen skyldes dens sterkere regulering av PI3K / Akt / Nrf2-signalveien relatert til oksidativt stress og apoptose.

Screening av optimal kombinasjon av Ast injeksjon og Eri kapsel er vist i figur 1. Celleoverlevelsen av Ast-injeksjon og Eri-kapsel på de normale PC12-cellene er vist i figur 1A. Cellens levedyktighet var lavere enn 95 % med ASAT-injeksjon ved konsentrasjoner større enn 12 μM (figur 1A) og Eri-kapsel ved konsentrasjoner større enn 5 μM (figur 1A), noe som indikerer at maksimal ikke-toksisk konsentrasjon var henholdsvis <strong...

Watch this Scientific Journal Video about Exploring the Two Herb Combination Strategy to Treat Injured PC12 Cells at JoVE.com

Exploring the Two Herb Combination Strategy to Treat Injured PC12 Cells

Denne protokollen gir en kombinasjonsstrategi av to urter for å behandle skadede PC12-celler. Protokollen gir en referanse for å optimalisere den beste applikasjonsmodusen for tradisjonell kinesisk medisin (TCM).

Utforske de to urt kombinasjonsstrategi for å behandle skadede PC12 celler

In view of the advantages of the combination of traditional Chinese medicine (TCM) in the treatment of cerebral ischemia, we studied the differences in ...

Protokollen i denne studien gir en kombinasjonsstrategi av to urter for behandling av hypoksiskadede PC12-celler, og en referanse for optimalisering av den beste kombinasjonsmodusen av urter. Denne teknikken kan gi en enkel, pålitelig og effektiv in vitro eksperimentell metode for screening av effektiv ingredienskombinasjon fra urter, mot hypoksiale celler. Denne strategien kan også brukes til å skjerme komponentkombinasjonene mot hypoksiale celler fra andre urtepreparatkombinasjoner, og illustrere deres beskyttelsesmekanisme.For å begynne, sub-kultur PC12-cellene hver to til tre dager ved 37 grader Celsius i en inkubator supplert med 5% karbondioksid for å få en passasje på 4 til 8 for alle påfølgende eksperimenter. Behandle 70 til 80% konfluente PC12-celler med en milliliter 0,25% trypsin, og observer cellene under et mikroskop for celleløsrivelse. Deretter stopper trypsinfordøyelsen ved å tilsette tre milliliter av hele mediet.Spinn ned de overførte cellene i et 15 milliliter sentrifugerør ved 840 x g i fem minutter. Etter å ha kastet supernatanten, resuspenderer cellepelleten med hele mediet og overfører cellesuspensjonen til et 1,5 milliliter mikrosentrifugerør. For å telle cellene, start flowcytometri-programvaren og velg det tilsvarende fortynningsmultiplumet av celleløsningen i telleinnstillingen.Klikk på Tetthetsdiagram etter at du har lastet inn celleprøven. Sirkle rundt cellepopulasjonen bort fra x-aksen og y-aksen. Høyreklikk datatabellen under figuren, og velg X, Y, Antall og Abs.Tell for å få celletellingsresultatene under datatabellen i Abs.Count. Etter å ha justert cellekonsentrasjonen omtrent 1 ganger 10 til 5 celler per milliliter med det komplette medium, tilsett 100 mikroliter av cellesuspensjonen per brønn til en 96-brønnplate og inkuber ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid i 24 timer. Neste dag, til supernatant-kassert plate tilsett 120 mikroliter av en milligram per milliliter MTT-løsning i hver brønn, og inkuber i fire timer ved 37 grader Celsius.Etter inkubering, når supernatanten er kassert, tilsett 150 mikroliter DMSO til hver brønn. Hold platen under risting i en virveloscillator i 10 minutter med en hastighet på 240 ganger per minutt. Mål deretter absorbansen ved 490 nanometer i en mikroplateleser.For å screene den optimale kombinasjonen av legemidler ved homogen designmetode, dyrk cellene som demonstrert tidligere og behandle de skadede PC12-cellene med seks forskjellige proporsjonskonsentrasjoner av Astragalus-injeksjon og breviscapuskapsel. For å evaluere den beskyttende effekten av to optimale kombinasjoner, behandle de skadede PC12-cellene med de to typer kombinasjoner av legemidler. Inkuber cellene i 24 timer og beregne cellens levedyktighet som vist tidligere.Frø PC12-cellene i en 12-brønnsplate og inkuber ved 37 grader Celsius i 24 timer. Etter medikamentell behandling, behandle cellene med 250 mikroliter trypsin per brønn og sentrifuger cellene ved 840 x g i fem minutter ved romtemperatur. Deretter resuspenderes cellepelleten med 500 mikroliter av bindingsbufferen.Tilsett 5 mikroliter Annexin V-FITC, 10 mikroliter propidiumjodid i triplikater for hver gruppe, og inkuber cellene i mørket i 15 minutter ved romtemperatur for å sjekke om apoptose ved hjelp av flowcytometri. I flowcytometer-programvaren klikker du på Automatisk kompensasjon i Start-menyen, velger FITC, PE, PerCP og APC i Select-kanalen, og velger Kompensasjon i høyden. Klikk deretter OK i Statistisk element: Median.Klikk Tetthetskart og sett ring rundt den effektive cellepopulasjonen med celletellingsmetoden som ble demonstrert tidligere. Med FITC-fluorescens som x-akseparameter og annen fluorescens som y-akseparameter, lag et tetthetskart. Klikk på Kompensasjonsmatrise i Start-menyen og Koeffisient i overløpsmatrisen.Seed PC12-cellene til dekslene plassert på en 24-brønns platebrønn i triplikater, og inkuber ved 37 grader Celsius i 24 timer. Etter medikamentell behandling, skyll dekslene to ganger med PBS i fem minutter hver, fest dem med 4% paraformaldehyd i 15 minutter, og permeabiliser med 0,5% Triton X-100 i 20 minutter ved romtemperatur. Etter å ha skyllet cellene, blokker dem med 10% geitserum i en time ved romtemperatur.Tilsett 200 mikroliter fortynnet primært antistoff caspase-3 til hver coverslip og inkubere over natten ved 4 grader Celsius. Neste dag, vask tre ganger med TBST-buffer i tre minutter hver, og inkuber med 200 mikroliter sekundært antistoff i en time ved romtemperatur i mørket. Etter inkubering, inkuber dekslene med 300 mikroliter 0,5 mikrogram per milliliter DAPI i 10 minutter, og vask cellene tre ganger med TBST i fem minutter hver.Ta coverslip-bildene under et fluorescensmikroskop og analyser fluorescensintensiteten statistisk med bildebehandlingsprogramvaren. Vask den legemiddelbehandlede PC12-celledekselet tre ganger med PBS i tre minutter hver og inkuber med 400 mikroliter 10 mikromolar diklordihydrofluoresceindiacetat ved 37 grader Celsius i 20 minutter. Vask cellene igjen med serumfri DMEM to ganger i tre minutter hver.Legg til fluorescens-slukkemiddelet og umiddelbart ta coverslip-bildene under et fluorescensmikroskop for å beregne den relative fluorescensintensiteten med bildebehandlingsprogramvaren. Vask de medikamentbehandlede PC12-cellene i en 6-brønnsplate tre ganger med PBS i fem minutter hver, og inkuber på is i 30 minutter i den forberedte lysisbufferen på 100 mikroliter per brønn. Etter lysis, sentrifuge cellene ved 16.000 x g i 20 minutter ved 4 grader Celsius for å samle supernatanten.Etter å ha oppdaget proteinkonsentrasjonen ved Bradford-analysen, kjør en 12% SDS-PAGE elektroforese med 25 mikrogram protein i hver bane og overfør gelen til PVDF-membranen. Blokker membranene med 5% fettfri melk i 1,5 timer ved romtemperatur, og inkuber med fem milliliter av de tilsvarende primære antistoffene i 24 timer ved 4 grader Celsius. Etter inkubering og vasking av membranen med TBST tre ganger i 10 minutter hver, inkuberes med fem milliliter sekundære HRP-konjugerte antistoffer ved romtemperatur i to timer.Til slutt, til TBST-vasket membran, tilsett kjemiluminescerende HRP-substrat for proteinbånddeteksjon i henhold til produsentens instruksjoner. Ta deretter bildene ved hjelp av kjemiluminescensavbildningssystemet for å kvantifisere de grå verdiene til proteinene, med beta-aktin som en internkontroll. Cellens levedyktighet på de normale PC12-cellene var lavere enn 95 % med Astragalus-injeksjon i konsentrasjoner større enn 12 mikromolar, og større enn 5 mikromolar for breviscapuskapselen.Astragalusinjeksjon kan forbedre overlevelsesraten til de skadede PC12-cellene i konsentrasjonsområdet 6 til 12 mikromolar, og breviscapus kapsel ved 2 til 5 mikromolar. Mens stoffkombinasjonen i forholdet 6 til 1, 8 mikromolar viste den høyeste cellelevedyktigheten. Cellenes levedyktighet av de to kombinasjonene på de skadede PC12-cellene ble signifikant fremmet, og komponentkombinasjonen var overlegen preparatkombinasjonen.Apoptoseraten viste at prosentandelen av tidlige, sene og totale apoptotiske celler var signifikant høyere i modellgruppen enn i normalgruppen. Sammenlignet med modellgruppen var prosentandelen av apoptotiske celler i hvert stadium signifikant lavere i behandlingsgruppen. Fluorescensintensiteten av caspase-3 var signifikant lavere i hver behandlingsgruppe sammenlignet med modellgruppen, og var relativt lavere i komponentkombinasjonsgruppen.Relativ ekspresjon av genene Akt, Bcl-2 og Bax viste at komponentkombinasjonen er overlegen preparatkombinasjonen for å fremme celleoverlevelse, noe som er relatert til den sterkere anti-apoptoseeffekten. Komponentkombinasjonen viste en bedre antioksidativ skadeeffekt enn preparatkombinasjonen, og signifikant høyere ekspresjon av Nrf2-proteinet. Denne metoden kan brukes til å screene og evaluere komponentkombinasjonen med andre potensielle farmakologiske aktiviteter fra urtekombinasjonen, for eksempel antiinflammatorisk, antibakteriell og mer.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Catheter Ablation in Combination With Left Atrial Appendage Closure for Atrial Fibrillation

Kateterablasjon i kombinasjon med venstre atrie vedheng Closure for atrieflimmer

Atrial fibrillation (AF) is the most common sustained cardiac arrhythmia, affecting millions of individuals worldwide 1-3. The rapid, irregular, and ...

The Measurement and Treatment of Suppression in Amblyopia

Den Måling og behandling av undertrykkelse i Amblyopi

Amblyopia, a developmental disorder of the visual cortex, is one of the leading causes of visual dysfunction in the working age population. Current ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Isolasjon, karakterisering og Comparative Differensiering av Human tannpulpa stamceller hentet fra permanente tenner ved hjelp av to ulike metoder

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Dual-phase Cone-beam Computed Tomography to See, Reach, and Treat Hepatocellular Carcinoma during Drug-eluting Beads Transarterial Chemo-embolization

Dual-fase Cone-beam CT for å se, Reach, og behandle leverkreft i løpet av Drug avgivende Perler Transarterial Chemo-embolisering

The advent of cone-beam computed tomography (CBCT) in the angiography suite has been revolutionary in interventional radiology. CBCT offers 3 ...

Tumor Treating Field Therapy in Combination with Bevacizumab for the Treatment of Recurrent Glioblastoma

Tumor Behandling Feltterapi i kombinasjon med Bevacizumab for behandling av tilbakevendende Glioblastoma

A novel device that employs TTF therapy has recently been developed and is currently in use for the treatment of recurrent glioblastoma (rGBM). It was FDA ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Studerer Bukspyttkjertelkreft Stem Cell Kjennetegn for å utvikle nye behandlingsstrategier

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Development of Recombinant Proteins to Treat Chronic Pain

Utviklingen av rekombinante proteinene til å behandle kroniske smerter

Chronic pain is difficult to treat and new approaches to resolve persistent pain are urgently needed. Anti-inflammatory cytokines are promising candidates ...

Three-Dimensional Collagen Matrix Scaffold Implantation as a Liver Regeneration Strategy

Tredimensjonal kollagen matrise stillas implantasjon som en lever regenerering strategi

Liver diseases are the leading cause of death worldwide. Excessive alcohol consumption, a high-fat diet, and hepatitis C virus infection promote fibrosis, ...

Vessel-Sparing Microsurgical Longitudinal Intussusception Vasoepididymostomy to Treat Epididymal Obstructive Azoospermia

Fartøysparende mikrokirurgisk langsgående intussusception vasoepididydymy for å behandle epididymal obstruktiv azoospermia

The epididymis is a common site of obstruction in obstructive azoospermia (OA). Vasoepididymostomy has become an important method for the treatment of ...