Name: exploring the two herb combination strategy to treat injured pc12 cells
Uploaded: 2022-11-18T14:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Exploring the Two Herb Combination Strategy to Treat Injured PC12 Cells at JoVE.com

Это исследование финансировалось ключевыми научно-исследовательскими проектами Департамента науки и техники провинции Сычуань (2020YFS0325).

1. Приготовление реагента
<ol><li>Приготовьте полную среду, добавив 90 мл среды с высоким содержанием сахара DMEM, 10 мл фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 1 мл раствора пенициллина-стрептомицина в 125 мл стерильной культуральной колбы. Перемешайте полную среду и храните при температуре 4...

<ol>
	<li>Mendelevich, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+cerebral+ischemia,+and+dizziness.">Chronic cerebral ischemia, and dizziness.</a> Zhurnal Nevrologii i Psikhiatrii Imeni SS Korsakova. 122 (3), 22-26 (2022).</li><li>Gao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expert+consensus+on+the+diagnosis+and+treatment+of+chronic+cerebral+ischemia+with+integrated+traditional+Chinese+and+western+medicine.">Expert consensus on the diagnosis and treatment of chronic cerebral ischemia with integrated traditional Chinese and western medicine.</a> Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine. 38 (10), 1161-1167 (2018).</li><li>Luyu, S., Heng, L., Dengke, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+treatment+of+45+cases+of+cerebral+infarction+with+Astragalus+and+Dengzhan+Xixin+injection.">Combined treatment of 45 cases of cerebral infarction with Astragalus and Dengzhan Xixin injection.</a> Jilin Journal of Traditional Chinese Medicine. 27 (4), 23-24 (2007).</li><li>Bei, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+study+of+Dengzhanxixin+injection+combined+with+Astragalus+injection+in+the+treatment+of+acute+ischemic+stroke.">Clinical study of Dengzhanxixin injection combined with Astragalus injection in the treatment of acute ischemic stroke.</a> Journal of Basic Chinese Medicine. 21 (9), 1123-1127 (2015).</li><li>Tian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+ratio+of+Astragalus+injection+combined+with+Dengzhan+Xixin+injection+against+cerebral+ischemia-reperfusion+injury+in+rats+by+baseline+equal-ratio+increase-decrease+design+method.">Optimal ratio of Astragalus injection combined with Dengzhan Xixin injection against cerebral ischemia-reperfusion injury in rats by baseline equal-ratio increase-decrease design method.</a> China Pharmacy. 30 (14), 1885-1889 (2019).</li><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+and+mechanism+of+Astragalus+combined+with+Erigeron+breviscapusin+the+best+proportion+on+cerebral+ischemia+rats.">Protective effect and mechanism of Astragalus combined with Erigeron breviscapusin the best proportion on cerebral ischemia rats.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 35 (2), 104-108 (2019).</li><li>Yan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+the+oxidative+damage+of+PC12+cells+with+hypoxia+and+hypoglycemia+based+on+the+combination+of+Astragalus+and+Dengzhan+Asarum+based+on+the+Nrf2/HO-1+pathway.">Study on the oxidative damage of PC12 cells with hypoxia and hypoglycemia based on the combination of Astragalus and Dengzhan Asarum based on the Nrf2/HO-1 pathway.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 38 (2), 159-164 (2022).</li><li>. Chinese Pharmacopoeia, Dengzhan Asarum Granules. Volume I Available from: <a target="_blank" href="https://db.ouryao.com/yd2020/view.php?id=f27dcefa69">https://db.ouryao.com/yd2020/view.php?id=f27dcefa69</a> (2020)</li><li>. Chinese Pharmacopoeia, Astragalus granules. Volume I Available from: <a target="_blank" href="https://db.ouryao.com/yd2020/view.php?id=fbcd0a8bf8">https://db.ouryao.com/yd2020/view.php?id=fbcd0a8bf8</a> (2020)</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-linoleyltyrosine+protects+PC12+cells+against+oxidative+damage+via+autophagy:+Possible+involvement+of+CB1+receptor+regulation.">N-linoleyltyrosine protects PC12 cells against oxidative damage via autophagy: Possible involvement of CB1 receptor regulation.</a> International Journal of Molecular Medicine. 46 (5), 1827-1837 (2020).</li><li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gab1+regulates+SDF-1-induced+progression+via+inhibition+of+apoptosis+pathway+induced+by+PI3K/AKT/Bcl-2/BAX+pathway+in+human+chondrosarcoma.">Gab1 regulates SDF-1-induced progression via inhibition of apoptosis pathway induced by PI3K/AKT/Bcl-2/BAX pathway in human chondrosarcoma.</a> Tumor Biology. 37 (1), 1141-1149 (2016).</li><li>Meng, M., Zhang, L., Ai, D., Wu, H., Peng, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#946;-Asarone+ameliorates+&#946;-Amyloid-induced+neurotoxicity+in+PC12+cells+by+activating+P13K/Akt/Nrf2+signaling+pathway.">&#946;-Asarone ameliorates &#946;-Amyloid-induced neurotoxicity in PC12 cells by activating P13K/Akt/Nrf2 signaling pathway.</a> Frontiers in Pharmacology. 12, 659955 (2021).</li><li>Li, J., Chen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+treatment+of+chronic+cerebral+ischemia+with+traditional+Chinese+and+western+medicine.">Advances in the treatment of chronic cerebral ischemia with traditional Chinese and western medicine.</a> Xinjiang Journal of Traditional Chinese Medicine. 39 (3), 115-118 (2021).</li><li>Yu, M., Zhan, Q., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discussion+on+the+therapeutic+value+of+traditional+Chinese+medicine+on+cognitive+dysfunction+caused+by+chronic+cerebral+ischemia.">Discussion on the therapeutic value of traditional Chinese medicine on cognitive dysfunction caused by chronic cerebral ischemia.</a> Chinese Medicine Modern Distance Education of China. 11 (19), 155-157 (2013).</li><li>Wang, M., Liu, J., Yao, M., Ren, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+research+on+pharmacological+and+neuroprotective+effects+of+traditional+Chinese+medicine+after+cerebral+ischemia.">Advances in research on pharmacological and neuroprotective effects of traditional Chinese medicine after cerebral ischemia.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 45 (3), 513-517 (2020).</li><li>Wang, N., Sun, H., Ma, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+different+doses+of+astragalus+injection+on+neurological+rehabilitation+of+stroke+patients.">Effects of different doses of astragalus injection on neurological rehabilitation of stroke patients.</a> Chinese Journal of Clinical Rational Drug Use. 9 (13), 67-69 (2016).</li><li>Sun, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+astragalus+injection+on+apoptosis+after+cerebral+ischemia-reperfusion+in+rats.">Effects of astragalus injection on apoptosis after cerebral ischemia-reperfusion in rats.</a> Hebei Medicine. 22 (7), 1147-1149 (2016).</li><li>Yang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengzhan+Xixin+injection+derived+from+a+traditional+Chinese+herb+Erigeron+breviscapusameliorates+cerebral+ischemia/reperfusion+injury+in+rats+via+modulation+of+mitophagy+and+mitochondrial+apoptosis.">Dengzhan Xixin injection derived from a traditional Chinese herb Erigeron breviscapusameliorates cerebral ischemia/reperfusion injury in rats via modulation of mitophagy and mitochondrial apoptosis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 288, 114988 (2022).</li><li>Liao, Y., Ni, X., Zhan, C., Cai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+research+progress+of+Dengzhanhua+preparation+in+prevention+and+treatment+of+ischemic+stroke+and+transient+ischemic+attack.">Clinical research progress of Dengzhanhua preparation in prevention and treatment of ischemic stroke and transient ischemic attack.</a> Guangdong Medical Journal. 41 (9), 963-967 (2020).</li><li>Li, C., Li, J., Xu, G., Sun, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+chronic+ethanol+consumption+on+apoptosis+and+autophagy+following+transient+focal+cerebral+ischemia+in+male+mice.">Influence of chronic ethanol consumption on apoptosis and autophagy following transient focal cerebral ischemia in male mice.</a> Scientific Reports. 10 (1), 6164 (2020).</li><li>El Khashab, I. H., Abdelsalam, R. M., Elbrairy, A. I., Attia, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chrysin+attenuates+global+cerebral+ischemic+reperfusion+injury+via+suppression+of+oxidative+stress,+inflammation+and+apoptosis.">Chrysin attenuates global cerebral ischemic reperfusion injury via suppression of oxidative stress, inflammation and apoptosis.</a> Biomedicine Pharmacotherapy. 112, 108619 (2019).</li><li>Su, X., He, S., Chen, Z., Xie, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+breviscapine+aglycone+on+PI+3+K/Akt+conduction+pathway+in+neonatal+rats+with+hypoxic-ischemic+brain+injury.">Effect of breviscapine aglycone on PI 3 K/Akt conduction pathway in neonatal rats with hypoxic-ischemic brain injury.</a> Journal of Armed Police Logistics College (Medical Edition). 27 (2), 93-96 (2018).</li><li>Wang, X., Shi, C., Pan, H., Meng, X., Ji, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA-22+exerts+its+neuroprotective+and+angiogenic+functions+via+regulating+PI3K/Akt+signaling+pathway+in+cerebral+ischemia-reperfusion+rats).">MicroRNA-22 exerts its neuroprotective and angiogenic functions via regulating PI3K/Akt signaling pathway in cerebral ischemia-reperfusion rats).</a> Journal of Neural Transmission. 127 (1), 35-44 (2020).</li><li>Luca, M., Luca, A., Calandra, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+oxidative+damage+in+the+pathogenesis+and+progression+of+alzheimer's+disease+and+vascular+dementia.">The role of oxidative damage in the pathogenesis and progression of alzheimer's disease and vascular dementia.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2015, 504678 (2015).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lupeol+alleviates+cerebral+ischemia-reperfusion+injury+in+correlation+with+modulation+of+PI3K/Akt+pathway.">Lupeol alleviates cerebral ischemia-reperfusion injury in correlation with modulation of PI3K/Akt pathway.</a> Neuropsychiatric Disease and Treatment. 16 (8), 1381-1390 (2020).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effect+of+phosphocreatine+on+oxidative+stress+and+mitochondrial+dysfunction+induced+apoptosis+in+vitro+and+in+vivo:+Involvement+of+dual+PI3K/Akt+and+Nrf2/HO-1+pathways.">Neuroprotective effect of phosphocreatine on oxidative stress and mitochondrial dysfunction induced apoptosis in vitro and in vivo: Involvement of dual PI3K/Akt and Nrf2/HO-1 pathways.</a> Free Radical Biology and Medicine. 120, 228-238 (2018).</li><li>Mu&#241;oz-S&#225;nchez, J., Ch&#225;nez-C&#225;rdenas, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+cobalt+chloride+as+a+chemical+hypoxia+model.">The use of cobalt chloride as a chemical hypoxia model.</a> Journal of Applied Toxicology. 39 (4), 556-570 (2019).</li><li>Tang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salidroside+attenuates+CoCl2-simulated+hypoxia+injury+in+PC12+cells+partly+by+mitochondrial+protection.">Salidroside attenuates CoCl2-simulated hypoxia injury in PC12 cells partly by mitochondrial protection.</a> European Journal of Pharmacology. 912 (10), 174617 (2021).</li><li>Yin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+potency+of+Tofu+bio-processed+using+Actinomucor+elegans+against+hypoxic+injury+induced+by+cobalt+chloride+in+PC12+cells.">Neuroprotective potency of Tofu bio-processed using Actinomucor elegans against hypoxic injury induced by cobalt chloride in PC12 cells.</a> Molecules. 26 (10), 2983 (2021).</li></ol>

До сих пор не хватает идеальных препаратов для лечения ишемии головного мозга в современной клинической практике2. Под руководством дополнения ци и активации метода кровообращения АСТ, Эри и другие препараты были использованы в комбинации в клинической практике ТКМ и дос?...

Хроническая церебральная ишемия, вызванная церебральной гипоперфузией, является распространенным заболеванием у людей среднего и пожилого возраста1. Как долгосрочная оккультная болезнь ишемии, она может привести к прогрессирующей или стойкой неврологической дисфункции. К основным патологическим механизмам относятся клеточный апоптоз и окислительное повреждение, приводящее к прогрессирующей или стойкой неврологической дисфункции; это патологическая основа болезни Альцгеймера, сосудистой деменции и других заболеваний, и серьезно влияет на качество жизни пациентов. Однако в современной медицине до сих пор не хватает идеальных препаратов для лечения хронической ишемииголовного мозга 2. В то же время комбинация Astragalus mongholicus (Ast) и Erigeron breviscapus (Eri) широко используется в клинической практике традиционной китайской медицины (TCM)4. Комбинированная стратегия значительно улучшилась в содействии восстановлению нервной функции после ишемии головного мозга, что лучше, чем у одного препарата; однако существуют большие различия в соотношении доз в комбинации двух препаратов4. Эффективные компоненты и механизм действия четко не определены, что является ключевым вопросом, ограничивающим его клиническое применение.
Предыдущие исследования продемонстрировали синергетический эффект комбинации препарата Ast injection и Eri injection при лечении ишемии головного мозга у крыс. Он может повышать экспрессию белка p-Akt и понижать экспрессию Bcl-2 ассоциированного промотора смерти (BAD) белка 5,6, который является одним из белков семейства B-лимфобластомы 2 (Bcl-2) и оказывает влияние на стимулирование апоптоза. Однако материальная основа и механизм его синергетического эффекта не ясны. Кроме того, модель повреждения клеток PC12 была установлена с комбинированной средой без глюкозы CoCl2, а оптимальная комбинация компонентов в Ast и Eri была проверена и определена7.
В этом исследовании эффективные дозы Ast и Eri проверяются с использованием поврежденной модели клеток PC12. Оптимальная комбинация двух препаратов проверяется с использованием этой модели в сочетании с методом однородного проектирования. Клеточная модель используется для дальнейшей оценки разницы в эффектах и механизмах комбинации препарата и комбинации компонентов в поврежденных клетках PC12. Эта стратегия направлена на изучение защитного эффекта и регуляторного механизма двух типов комбинаций на поврежденных клетках PC12 через сигнальный путь PI3K / Akt / Nrf2 для определения наилучшего комбинированного режима. Это исследование является справочным материалом для оптимизации наилучшего режима применения ТКМ.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1300 series class II biosafety cabinet</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Instruments Company</td>
			<td>1374</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide</td>
			<td>Guangzhou saiguo biotech Company</td>
			<td>1334GR001</td>
			<td>MTT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACEA NovoExpress&#160;1.4.0</td>
			<td>ACEA Biosciences, Inc</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Akt</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>10176-2-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical flow cytometry</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Instruments Company</td>
			<td>62-2-1810-1027-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Annexin V-FITC apoptosis detection kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>C1062L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Astragalus injection</td>
			<td>Heilongjiang Zhenbao Island Pharmaceutical Company</td>
			<td>A03190612144</td>
			<td>Ast injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Astragaloside A</td>
			<td>Chongqing Gao Ren Biotechnology Company</td>
			<td>84687-43-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bax</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>60267-1-Ig</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA protein quantification kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>P0012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bcl-2</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>26593-1-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide incubators</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Instruments Company</td>
			<td>0816-2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caspase-3</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>19677-1-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorogenic acid</td>
			<td>Chongqing Gao Ren Biotechnology Company</td>
			<td>327-97-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cobalt chloride hexahydrate</td>
			<td>Merck Biotechnology, Inc.</td>
			<td>7791-13-1</td>
			<td>CoCl2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Guangzhou saiguo biotech Company</td>
			<td>2020112701</td>
			<td>DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium hydrogen phosphate dodecahydrate</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Company</td>
			<td>2020090101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM high sugar medium</td>
			<td>Thermo scientific Hyclone</td>
			<td>2110050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM sugar free medium</td>
			<td>Beijing Solarbio life sciences Company</td>
			<td>2029548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ECL luminous fluid</td>
			<td>Lianshuo Biological Company</td>
			<td>WBKLS0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic balance</td>
			<td>Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>FA1204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoresis instrument</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories (Shanghai) Co., Ltd</td>
			<td>1658026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erigeron breviscapus capsule</td>
			<td>Yunnan Biogu Pharmaceutical Company</td>
			<td>Z53021671</td>
			<td>Eri capsule</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Four Seasons Institute of Biological Engineering</td>
			<td>20210402</td>
			<td>FBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent microscope</td>
			<td>Olympms Corporation</td>
			<td>IX71-F32PH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel imager</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories (Shanghai) Co., Ltd</td>
			<td>1708265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-mouse secondary antibody</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>SA00001-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit secondary antibody</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>SA00001- 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IBM SPSS Statistics version 26.0</td>
			<td>International Business Machines Corporation, USA</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ 1.8.0</td>
			<td>National Institutes of Health, USA</td>
			<td>-</td>
			<td>imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immunol&#160;fluorescence&#160;staining kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>P0196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Company</td>
			<td>2021070901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marker</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Instruments Company</td>
			<td>26616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate reader</td>
			<td>Perkin Elmer Corporate Management (Shanghai) Co.</td>
			<td>HH35L2018296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Motic Inverted microscope</td>
			<td>Nanda Scientific Instruments Co.</td>
			<td>AE2000LED</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Company</td>
			<td>2014081301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nonfat milk</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>P0216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nrf2</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>16396-1-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P-Akt</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>66444-1-Ig</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC12 cells</td>
			<td>Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>CBP60430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin solution</td>
			<td>Thermo scientific Hyclone</td>
			<td>SV30010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphatase protease inhibitor mixture</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>P1045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogen phosphate</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Company</td>
			<td>2015082901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reactive oxygen species assay kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>S0033S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RI-PA lysis solution</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>P0013B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scutellarin</td>
			<td>Chongqing Gao Ren Biotechnology Company</td>
			<td>27740-01-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS-PAGE sample loading buffer, 5x</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Company</td>
			<td>P0015L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile filter tips (0.22 &#181;m)</td>
			<td>Merck Biotechnology, Inc.</td>
			<td>SLGP033RB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-base</td>
			<td>Guangzhou saiguo biotech Company</td>
			<td>1115GR500&#160;</td>
			<td>TBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Thermo scientific Hyclone</td>
			<td>J190013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Company</td>
			<td>2021051301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex oscillator</td>
			<td>OHAUS International Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>VXMNAL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-actin</td>
			<td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td>
			<td>66009-1-Ig</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

exploring the two herb combination strategy to treat injured pc12 cells

Учитывая преимущества комбинации традиционной китайской медицины (ТКМ) в лечении ишемии головного мозга, мы изучили различия в эффективности и механизме между комбинацией препарата и комбинацией компонентов, чтобы изучить стратегию комбинации двух трав для лечения поврежденных клеток PC12. Хлорид кобальта (CoCl2) в сочетании с безглюсодержащей средой использовали для индуцирования окислительного повреждения клеток PC12. Затем оптимальная комбинация инъекций Astragalus mongholicus (Ast) и Erigeron breviscapus (Eri) была выбрана и объединена в соответствии с методами унифицированного проектирования после скрининга их безопасной и эффективной концентрации на клетках PC12. Кроме того, проверенная комбинация компонентов содержит 10 мкМ астрагалозида А, 40 мкМ скутелларина и 75 мкМ хлорогеновой кислоты в двух травах. Затем MTT, Annexin V-FITC/PI, иммунофлуоресцентный и вестерн-блот-анализ использовались для оценки эффективности и механизма комбинации препарата и комбинации компонентов на поврежденных клетках PC12. Результаты показали, что оптимальной комбинацией препаратов для клеточной про-выживаемости была инъекция Ast и капсула Eri с концентрацией 6:1,8 (мкМ). Комбинация компонентов (10 мкМ астрагалозида А, 40 мкМ скутелларина и 75 мкМ хлорогеновой кислоты) была более эффективной, чем комбинация препарата. Обе комбинации заметно снижают апоптотическую скорость, интенсивность флуоресценции каспазы-3 и уровень внутриклеточных активных форм кислорода (АФК); между тем, они повысили уровни экспрессии p-Akt/Akt, Bcl-2/Bax и Nrf2. Эти эффекты были более очевидны в комбинации компонентов. В заключение, обе комбинации могут ингибировать повреждение, вызванное CoCl2 в сочетании с безглюсодержащей средой на клетках PC12, тем самым способствуя выживанию клеток. Однако эффективность комбинации компонентов по сравнению с комбинацией препарата может быть обусловлена его более сильной регуляцией сигнального пути PI3K/Akt/Nrf2, связанного с окислительным стрессом и апоптозом.

Скрининг оптимальной комбинации инъекций Ast и капсулы Eri показан на рисунке 1. Выживаемость клеток при инъекции Ast и капсуле Eri на нормальных клетках PC12 показана на рисунке 1A. Жизнеспособность клеток была ниже 95% при инъекции Ast при концентрациях более 12 мк...

Watch this Scientific Journal Video about Exploring the Two Herb Combination Strategy to Treat Injured PC12 Cells at JoVE.com

Exploring the Two Herb Combination Strategy to Treat Injured PC12 Cells

Этот протокол обеспечивает комбинированную стратегию двух трав для лечения поврежденных клеток PC12. Протокол предоставляет справочник для оптимизации наилучшего режима применения традиционной китайской медицины (ТКМ).

Изучение стратегии комбинации двух трав для лечения поврежденных клеток PC12

In view of the advantages of the combination of traditional Chinese medicine (TCM) in the treatment of cerebral ischemia, we studied the differences in ...

Протокол в этом исследовании обеспечивает комбинированную стратегию двух трав для лечения поврежденных гипоксией клеток PC12 и ссылку для оптимизации наилучшего комбинированного режима трав. Этот метод может обеспечить простой, надежный и эффективный экспериментальный метод in vitro для скрининга эффективной комбинации ингредиентов из трав против гипоксиальных клеток. Эта стратегия также может быть применена для скрининга комбинаций компонентов против гипоксиальных клеток из других комбинаций препаратов трав и иллюстрации их защитного механизма.Для начала субкультурировать клетки PC12 каждые два-три дня при 37 градусах Цельсия в инкубаторе, дополненном 5% углекислым газом, чтобы получить проход от 4 до 8 для всех последующих экспериментов. Обработайте от 70 до 80% сливающихся клеток PC12 одним миллилитром 0,25% трипсина и наблюдайте за клетками под микроскопом для отслоения клеток. Затем остановите переваривание трипсина, добавив три миллилитра полной среды.Раскрутите перенесенные ячейки в 15-миллилитровой центрифужной трубке при 840 х г в течение пяти минут. После выброса супернатанта повторно суспендируют ячейку гранулы с полной средой и перенесут клеточную суспензию в 1,5-миллилитровую микроцентрифужную трубку. Чтобы подсчитать клетки, запустите программное обеспечение проточной цитометрии и выберите соответствующее разбавление, кратное клеточному раствору, в настройках подсчета.Щелкните диаграмму плотности после загрузки образца ячейки. Обведите популяцию ячеек в стороне от осей X и Y. Щелкните правой кнопкой мыши таблицу данных под рисунком и выберите X, Y, Count и Abs.Count, чтобы получить результаты подсчета ячеек в таблице данных Abs.Count. После регулировки концентрации в клетках приблизительно до 1 раза 10 до 5-й ячейки на миллилитр с полной средой добавляют 100 микролитров клеточной суспензии на лунку к 96-луночной пластине и инкубируют при 37 градусах Цельсия и 5% углекислого газа в течение 24 часов. На следующий день к выбрасываемой супернатантной пластине добавляют 120 микролитров по одному миллиграмму на миллилитр раствора МТТ в каждую лунку, и насиживают в течение четырех часов при 37 градусах Цельсия.После инкубации, как только супернатант будет выброшен, добавьте 150 микролитров ДМСО в каждую лунку. Держите пластину при встряхивании в вихревом осцилляторе в течение 10 минут со скоростью 240 раз в минуту. Затем измерьте поглощение на 490 нанометров в микропластинчатом считывателе.Чтобы провести скрининг оптимальной комбинации препаратов методом гомогенной конструкции, культивируйте клетки, как было продемонстрировано ранее, и обработайте поврежденные клетки PC12 шестью различными пропорциями концентраций инъекции астрагала и капсулы бревискапа. Чтобы оценить защитный эффект двух оптимальных комбинаций, обработайте поврежденные клетки PC12 двумя типами комбинаций препаратов. Инкубируйте клетки в течение 24 часов и рассчитайте жизнеспособность клеток, как было продемонстрировано ранее.Посейте клетки PC12 в 12-луночную пластину и инкубируйте при 37 градусах Цельсия в течение 24 часов. После медикаментозного лечения обработайте клетки 250 микролитрами трипсина на лунку и центрифугируйте клетки при 840 х г в течение пяти минут при комнатной температуре. Затем повторно суспендируют ячейку гранулы с 500 микролитрами связывающего буфера.Добавьте 5 микролитров Annexin V-FITC, 10 микролитров йодида пропидия в трипликатах для каждой группы и инкубируйте клетки в темноте в течение 15 минут при комнатной температуре, чтобы проверить наличие апоптоза с помощью проточной цитометрии. В программном обеспечении проточного цитометра щелкните Автоматическая компенсация в меню Пуск, выберите FITC, PE, PerCP и APC в канале Выбора и выберите Компенсация на высоте. Затем нажмите кнопку ОК в поле Статистический элемент:Медиана.Щелкните Карта плотности и обведите эффективную популяцию клеток с помощью метода подсчета клеток, продемонстрированного ранее. С флуоресценцией FITC в качестве параметра оси X и другой флуоресценцией в качестве параметра оси Y создайте карту плотности. Нажмите «Матрица компенсаций» в меню «Пуск» и «Коэффициент» в матрице переполнения.Засейте клетки PC12 в крышки, помещенные на 24-луночную пластину в трех экземплярах, и инкубируйте при 37 градусах Цельсия в течение 24 часов. После медикаментозной обработки дважды промойте крышки PBS в течение пяти минут каждый, зафиксируйте их 4% параформальдегидом в течение 15 минут и пронизывайте 0,5% Triton X-100 в течение 20 минут при комнатной температуре. После промывания клеток заблокируйте их 10% козьей сывороткой на один час при комнатной температуре.Добавьте 200 микролитров разбавленного первичного антитела каспазы-3 к каждому покровному листу и инкубируйте в течение ночи при 4 градусах Цельсия. На следующий день промыть три раза буфером TBST в течение трех минут каждый и инкубировать с 200 микролитрами вторичных антител в течение одного часа при комнатной температуре в темноте. После инкубации инкубируют покровные листы с 300 микролитрами по 0,5 мкг на миллилитр DAPI в течение 10 минут и трижды промывают клетки TBST в течение пяти минут каждая.Захватите снимки под флуоресцентным микроскопом и статистически проанализируйте интенсивность флуоресценции с помощью программного обеспечения для визуализации. Промыть обработанный препаратом клеточный покров PC12 три раза PBS в течение трех минут каждый и инкубировать с 400 микролитрами 10 микромолярного дихлор-дигидро-флуоресцеинового диацетата при 37 градусах Цельсия в течение 20 минут. Снова промыть клетки dmem без сыворотки дважды в течение трех минут каждая.Добавьте флуоресцентный закалочный агент и немедленно захватите снимки крышки под флуоресцентным микроскопом, чтобы рассчитать относительную интенсивность флуоресценции с помощью программного обеспечения для визуализации. Промыть обработанные препаратом клетки PC12 в 6-луночной пластине три раза с PBS в течение пяти минут каждая и инкубировать на льду в течение 30 минут в подготовленном буфере лизиса по 100 микролитров на лунку. После лизиса центрифугируют клетки при 16 000 х г в течение 20 минут при 4 градусах Цельсия, чтобы собрать супернатант.После обнаружения концентрации белка с помощью анализа Брэдфорда запустите 12%-ный электрофорез SDS-PAGE с 25 микрограммами белка в каждой полосе и перенесите гель на мембрану PVDF. Блокируют мембраны 5% обезжиренным молоком в течение 1,5 часов при комнатной температуре и инкубируют с пятью миллилитрами соответствующих первичных антител в течение 24 часов при 4 градусах Цельсия. После инкубации и промывки мембраны TBST три раза по 10 минут каждый инкубируют с пятью миллилитрами вторичных HRP-конъюгированных антител при комнатной температуре в течение двух часов.Наконец, к мембране, промытой TBST, добавьте хемилюминесцентный субстрат HRP для обнаружения белковых полос в соответствии с инструкцией производителя. Затем захватите изображения, используя систему визуализации хемилюминесценции для количественной оценки серых значений белков, с бета-актином в качестве внутреннего контроля. Жизнеспособность клеток на нормальных клетках PC12 была ниже 95% при инъекции астрагала при концентрациях более 12 микромоляров и более 5 микромоляров для капсулы бревискапа.Инъекция астрагала может улучшить выживаемость поврежденных клеток PC12 в диапазоне концентраций от 6 до 12 микромоляров, а капсулы breviscapus - от 2 до 5 микромоляров. Тогда как комбинация препарата в соотношении 6 к 1,8 микромолярам проявляла наивысшую жизнеспособность клеток. Жизнеспособность клеток двух комбинаций на поврежденных клетках PC12 значительно повысилась, а комбинация компонентов превосходила комбинацию препаратов.Частота апоптоза показала, что процент ранних, поздних и общих апоптотических клеток был значительно выше в модельной группе, чем в нормальной группе. По сравнению с модельной группой, процент апоптотических клеток на каждой стадии был значительно ниже в группе лечения. Интенсивность флуоресценции каспазы-3 была значительно ниже в каждой группе лечения по сравнению с модельной группой и была относительно ниже в группе комбинации компонентов.Относительная экспрессия генов Akt, Bcl-2 и Bax показала, что комбинация компонентов превосходит комбинацию препаратов в содействии выживанию клеток, что связано с более сильным антиапоптозным эффектом. Комбинация компонентов продемонстрировала лучший антиоксидантный эффект повреждения, чем у комбинации препаратов, и значительно более высокую экспрессию белка Nrf2. Этот метод может быть использован для скрининга и оценки комбинации компонентов с другими потенциальными фармакологическими активностями из комбинации трав, такими как противовоспалительные, антибактериальные и другие.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

Стратегии для определения де Ново Мутации в общих расстройств, таких как аутизм и шизофрения

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Catheter Ablation in Combination With Left Atrial Appendage Closure for Atrial Fibrillation

Катетерной аблации в комбинации с левого предсердия Закрытие придатком фибрилляции предсердий

Atrial fibrillation (AF) is the most common sustained cardiac arrhythmia, affecting millions of individuals worldwide 1-3. The rapid, irregular, and ...

The Measurement and Treatment of Suppression in Amblyopia

Измерение и лечение в борьбе с амблиопией

Amblyopia, a developmental disorder of the visual cortex, is one of the leading causes of visual dysfunction in the working age population. Current ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Выделение, характеристика и сравнительный Дифференциация по правам зубных стволовых клеток, полученных из целлюлозы постоянных зубов с помощью двух различных методов

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Dual-phase Cone-beam Computed Tomography to See, Reach, and Treat Hepatocellular Carcinoma during Drug-eluting Beads Transarterial Chemo-embolization

The advent of cone-beam computed tomography (CBCT) in the angiography suite has been revolutionary in interventional radiology. CBCT offers 3 ...

Tumor Treating Field Therapy in Combination with Bevacizumab for the Treatment of Recurrent Glioblastoma

Опухоль Лечение полевой терапии в комбинации с бевацизумаба для лечения рецидивирующего глиобластомы

A novel device that employs TTF therapy has recently been developed and is currently in use for the treatment of recurrent glioblastoma (rGBM). It was FDA ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Изучение рака поджелудочной железы стволовых клеток Характеристики для разработки новых стратегий лечения

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Development of Recombinant Proteins to Treat Chronic Pain

Разработка рекомбинантных белков для лечения хронической боли

Chronic pain is difficult to treat and new approaches to resolve persistent pain are urgently needed. Anti-inflammatory cytokines are promising candidates ...

Three-Dimensional Collagen Matrix Scaffold Implantation as a Liver Regeneration Strategy

Трехмерная коллагеновая матрица каркаса имплантация как стратегия регенерации печени

Liver diseases are the leading cause of death worldwide. Excessive alcohol consumption, a high-fat diet, and hepatitis C virus infection promote fibrosis, ...

Vessel-Sparing Microsurgical Longitudinal Intussusception Vasoepididymostomy to Treat Epididymal Obstructive Azoospermia

Сосудосберегающая микрохирургическая продольная инвагинация кишечника Вазоэпидидимостомия для лечения эпидидимально-обструктивной азооспермии

The epididymis is a common site of obstruction in obstructive azoospermia (OA). Vasoepididymostomy has become an important method for the treatment of ...