Name: real-time detection of reactive oxygen species production in immune response in rice with a chemiluminescence assay
Uploaded: 2022-11-25T15:00:00
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Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse der Shanghai Natural Science Foundation (Fördernummer: 21ZR1429300/BS1500016), der Shanghai Jiao Tong University (Agri-X-Programm, Fördernummer: AF1500088/002), des Shanghai Collaborative Innovation Center of Agri-Seeds (Fördernummer: ZXWH2150201/001) an Jiangbo Fan und durch das Medical-Engineering Collaboration Project der Shanghai Jiao Tong University (Fördernummer: 21X010301734) an Can Li unterstützt.

HINWEIS: Das Protokoll gilt für verschiedene Pflanzengewebe. Reisscheide und Blattscheiben wurden in diesem Protokoll für die ROS-Detektion bei PAMP-Erhebung verwendet. Da sich Unterschiede hauptsächlich aus der Probenahmemethode ergeben, werden im Folgenden nur die üblichen Verfahren beschrieben, wobei gegebenenfalls spezifische Schritte erwähnt werden.
1. Pflanzenkultur
<ol><li>Sterilisieren Sie die entspelzten Reissamen mit 70% Ethanol für 1 min, dann mit 40% Natriu...

<ol>
	<li>Gechev, T. S., Van Breusegem, F., Stone, J. M., Denev, I., Laloi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+as+signals+that+modulate+plant+stress+responses+and+programmed+cell+death.">Reactive oxygen species as signals that modulate plant stress responses and programmed cell death.</a> Bioessays. 28 (11), 1091-1101 (2006).</li><li>Mittler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ROS+are+good.">ROS are good.</a> Trends in Plant Science. 22 (1), 11-19 (2017).</li><li>Gilroy, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ROS,+calcium,+and+electric+signals:+key+mediators+of+rapid+systemic+signaling+in+plants.">ROS, calcium, and electric signals: key mediators of rapid systemic signaling in plants.</a> Plant Physiology. 171 (3), 1606-1615 (2016).</li><li>Mittler, R., Vanderauwera, S., Gollery, M., Van Breusegem, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+gene+network+of+plants.">Reactive oxygen gene network of plants.</a> Trends in Plant Science. 9 (10), 490-498 (2004).</li><li>Marino, D., Dunand, C., Puppo, A., Pauly, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+burst+of+plant+NADPH+oxidases.">A burst of plant NADPH oxidases.</a> Trends in Plant Science. 17 (1), 9-15 (2012).</li><li>Mittler, R., Zandalinas, S. I., Fichman, Y., Van Breusegem, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+signalling+in+plant+stress+responses.">Reactive oxygen species signalling in plant stress responses.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 23 (10), 663-679 (2022).</li><li>Suzuki, N., Koussevitzky, S., Mittler, R., Miller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ROS+and+redox+signalling+in+the+response+of+plants+to+abiotic+stress.">ROS and redox signalling in the response of plants to abiotic stress.</a> Plant, Cell &amp; Environment. 35 (2), 259-270 (2012).</li><li>Suzuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+burst+oxidases:+the+engines+of+ROS+signaling.">Respiratory burst oxidases: the engines of ROS signaling.</a> Current Opinion in Plant Biology. 14 (6), 691-699 (2011).</li><li>Kadota, Y., Shirasu, K., Zipfel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+NADPH+oxidase+RBOHD+during+plant+immunity.">Regulation of the NADPH oxidase RBOHD during plant immunity.</a> Plant and Cell Physiology. 56 (8), 1472-1480 (2015).</li><li>Segonzac, C., Zipfel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+plant+pattern-recognition+receptors+by+bacteria.">Activation of plant pattern-recognition receptors by bacteria.</a> Current Opinion in Microbiology. 14 (1), 54-61 (2011).</li><li>Roda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+chemical+luminescence-based+biosensors:+A+critical+review.">Progress in chemical luminescence-based biosensors: A critical review.</a> Biosensors and Bioelectronics. 76, 164-179 (2016).</li><li>Hong, D., Joung, H. -. A., Lee, D. Y., Kim, S., Kim, M. -. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attomolar+detection+of+cytokines+using+a+chemiluminescence+immunoassay+based+on+an+antibody-arrayed+CMOS+image+sensor.">Attomolar detection of cytokines using a chemiluminescence immunoassay based on an antibody-arrayed CMOS image sensor.</a> Sensors and Actuators B: Chemical. 221, 1248-1255 (2015).</li><li>Nishinaka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.+new+sensitive+chemiluminescence+probe,+L-012,+for+measuring+the+production+of+superoxide+anion+by+cells.">et al. new sensitive chemiluminescence probe, L-012, for measuring the production of superoxide anion by cells.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 193 (2), 554-559 (1993).</li><li>Grundy, J., Stoker, C., Carre, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+regulation+of+abiotic+stress+tolerance+in+plants.">Circadian regulation of abiotic stress tolerance in plants.</a> Frontiers in Plant Science. 6, 648 (2015).</li></ol>

Ziel dieser Studie war es, eine hocheffiziente Methode zur Quantifizierung der frühen ROS-Produktion als Reaktion auf PAMP in Reisgeweben zu etablieren. Diese Methode bietet ein standardisiertes Verfahren zur Echtzeitbestimmung von Apoplasten-ROS, die aus behandeltem Reisgewebe hergestellt werden. Diese Methode ist einfach in der Bedienung, kostengünstig, klar in der Zusammensetzung und unabhängig von kommerziellen Kits. Mit dieser Methode können Forscher die Echtzeitproduktion von Apoplast-ROS untersuchen, wenn Pfla...

Reaktive Sauerstoffspezies (ROS) umfassen eine Reihe von chemisch aktiven Sauerstoffderivaten, einschließlich Superoxidanionenradikalen (O2-) und ihren Derivaten, Hydroxylradikalen (OH-), Wasserstoffperoxid und Produkten von Singulettsauerstoff oder Oxidations-Reduktions-Reaktionen, die ständig in Plastiden und Chloroplasten, Mitochondrien, Peroxisomen und anderen subzellulären Stellen produziert werden1 . ROS spielen eine wichtige Rolle in vielen biologischen Prozessen und sind für alle Pflanzen essentiell 2,3,4. Das breite Spektrum der ROS-Funktionen reicht von der Regulation von Wachstum und Entwicklung bis hin zur Wahrnehmung von abiotischen und biotischen Belastungen 5,6,7,8.
Im pflanzlichen Immunsystem nehmen die Plasmamembran-lokalisierten Rezeptoren der Pflanzenzellen – sogenannte Mustererkennungsrezeptoren (PRRs) – von Krankheitserregern abgeleitete Chemikalien-Erreger-assoziierte molekulare Muster (PAMPs) wahr. Diese Erkennung löst eine Reihe schneller Immunreaktionen aus, darunter Kalziumeinstrom, ROS-Burst und MAPK-Kaskade; Daher wird diese Immunitätsschicht als PAMP-getriggerte Immunität (PTI) bezeichnet. ROS-Burst ist eine charakteristische PTI-Reaktion, deren Bestimmung in PTI-bezogenen Studien weit verbreitet ist 9,10. Die durch PAMPs ausgelöste ROS-Produktion wird auf Plasmamembran-residente NADPH-Oxidase oder Proteine der Respiratory Burst Oxidase Homolog (RBOH)-Familie zurückgeführt, die Elektronen von zytosolischem NADPH oder NADH auf extrazellulären Sauerstoff übertragen, um Superoxid (O 2-) zu produzieren, das durch Superoxiddismutasespontan in Wasserstoffperoxid (H 2 O 2) umgewandelt wird 8 . Der PAMP-getriggerte ROS-Burst ist ziemlich schnell, tritt nur wenige Minuten nach der PAMP-Behandlung auf und erreicht seinen Höhepunkt bei ~10-12 min. Die überwiegende Mehrheit der ROS-Moleküle besteht aus Wasserstoffperoxid (H2 O2), das mit einem Chemilumineszenz-Assay leicht und stabil nachgewiesen werden kann.
Bei der Chemilumineszenz reagiert das Chemilumineszenz-Reagenz unter Einwirkung eines Katalysators mit aktivem Sauerstoff, um die Zwischenprodukte im angeregten Zustand zu erzeugen. Dann kehren die Elektronen im Produkt durch einen strahlungsfreien Übergang in den Grundzustand zurück und emittieren Photonen. Übliche Chemilumineszenz-Reagenzien umfassen Luminol und L-012, wobei Luminol die Anwendung dominiert11,12,13. Immer mehr Forscher entscheiden sich jedoch für L-012, um die ROS-Produktion nachzuweisen, da L-012 im Vergleich zu Luminol eine viel höhere Lichtemissionseffizienz unter neutralen oder nahezu neutralen pH-Bedingungen aufweist.
Diese Arbeit beschreibt eine optimierte Chemilumineszenzmethode, basierend auf L-012, für die Echtzeit-Detektion der ROS-Produktion nach der Induktion von PAMPs in Reisgewebe (Oryza sativa), Blattscheiben und Scheiden. Die hier bereitgestellte Methode ist einfach, stabil und standardisiert und kann in hohem Maße an unterschiedliche experimentelle Anforderungen angepasst werden. Die mit dieser Methode gewonnenen Daten sind unter fest kontrollierten Bedingungen sehr gut reproduzierbar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well microtiter plate</td>
			<td>WHB</td>
			<td>WHB-96-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Innochem</td>
			<td>A43543</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>flg22</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>p20973</td>
			<td>PAMP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gen5</td>
			<td>BioTek</td>
			<td></td>
			<td>software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-012</td>
			<td>FUJIFILM</td>
			<td>120-04891</td>
			<td>8-amino-5-chloro-7-phenyl-2,3-dihydropyrido [3,4-d] pyridazine-1,4-dione, CAS #:143556-24-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Synergy 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MS Medium</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>M8521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCLO</td>
			<td>Aladdin</td>
			<td>S101636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peroxidase from horseradish (HRP)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P8375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phytagel</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P8169</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sampler</td>
			<td>Miltex&#160;</td>
			<td>15110-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A502792</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A610195</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time detection of reactive oxygen species production in immune response in rice with a chemiluminescence assay

Reaktive Sauerstoffspezies (ROS) spielen eine wichtige Rolle in einer Vielzahl von biologischen Prozessen, einschließlich der Wahrnehmung von abiotischen und biotischen Belastungen. Bei einer Infektion mit Krankheitserregern oder einer Herausforderung mit pathogen-assoziierten Chemikalien (Pathogen-assoziierte molekulare Muster [PAMPs]) wird in Pflanzen schnell eine Reihe von Immunantworten, einschließlich eines ROS-Bursts, induziert, was als PAMP-ausgelöste Immunität (PTI) bezeichnet wird. Ein ROS-Burst ist eine charakteristische PTI-Reaktion, die durch eine Gruppe von Plasmamembran-lokalisierten NADPH-Oxidasen - den Proteinen der RBOH-Familie - katalysiert wird. Die überwiegende Mehrheit der ROS besteht aus Wasserstoffperoxid (H2 O2), das durch eine Luminol-basierte Chemilumineszenzmethode leicht und stetig nachgewiesen werden kann. Chemilumineszenz ist eine photonenproduzierende Reaktion, bei der Luminol oder sein Derivat (wie L-012) unter Einwirkung eines Katalysators eine Redoxreaktion mit ROS durchläuft. In diesem Artikel wird eine optimierte L-012-basierte Chemilumineszenzmethode beschrieben, um die Produktion von Apoplast-ROS in Echtzeit bei PAMP-Auslösung in Reisgeweben zu erkennen. Die Methode ist einfach, stabil, standardisiert und unter fest kontrollierten Bedingungen hochgradig reproduzierbar.

Hier nehmen wir Reismaterial als Beispiel, um die ROS zu bestimmen, die mit der flg22-Behandlung produziert werden. Die Erzeugung von ROS nach der Erhebung ist vorübergehend. Bei Reis wurde der Anstieg der ROS-Produktion erstmals in 1-2 Minuten festgestellt, erreichte seinen Höhepunkt bei 10-12 Minuten und kehrte in ~30-35 Minuten zum Ausgangswert zurück (Abbildung 3). Im Vergleich zum Kontrolltest, bei dem PAMP in der Auslöselösung fehlte, was zu keiner offensichtlichen ROS-Induktion f...

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Real-Time Detection of Reactive Oxygen Species Production in Immune Response in Rice with a Chemiluminescence Assay

Hier beschreiben wir eine Methode zur Echtzeit-Detektion der Produktion von apoplastischen reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) in Reisgeweben in einer pathogen-assoziierten molekularmuster-ausgelösten Immunantwort. Diese Methode ist einfach, standardisiert und erzeugt unter kontrollierten Bedingungen hochreproduzierbare Ergebnisse.

Echtzeit-Detektion der Produktion reaktiver Sauerstoffspezies bei der Immunantwort in Reis mit einem Chemilumineszenz-Assay

Reactive oxygen species (ROS) play vital roles in a variety of biological processes, including the sensing of abiotic and biotic stresses. Upon pathogen ...

Dieses Protokoll beschreibt eine optimierte L-012-basierte Chemilumineszenzmethode zum Nachweis der ROS-Produktion in Echtzeit bei PAMP-Auslösung in Reisgeweben. Diese Methode ist einfach, standardisiert und unter fest kontrollierten Bedingungen hochgradig reproduzierbar. Dieses Verfahren wird von On Ying, einer Doktorandin aus meinem Labor, demonstriert.Sterilisieren Sie zunächst die entspelzten Reissamen eine Minute lang mit 70% Ethanol und dann eine Stunde lang mit 40% Natriumhypochlorit. Spülen Sie die Samen fünfmal mit sterilem Wasser ab, um das restliche Chlor zu entfernen. Bei der Reisscheidenmethode werden die Samen direkt in das sterile Glasgefäß mit Murashige und Skoog oder MS-Medium gefüllt.Um die Samen in der Blattscheibenmethode zu plattieren, plattieren Sie sie fünf bis sieben Tage lang auf MS-Platten und verpflanzen Sie sie dann in die Wachstumsmatrix oder den Boden. Züchten Sie die Sämlinge in einem Wachstumsraum mit einer Fotoperiode von 12 Stunden Licht und 12 Stunden Dunkelheit. Schneiden Sie die Hülle von 10 Tage alten Reissämlingen einen Tag vor dem ROS-Test mit einer scharfen Rasierklinge oder einer chirurgischen Klinge zur Vorbehandlung in drei Millimeter große Segmente.Legen Sie fünf Mantelsegmente für 10 bis 12 Stunden in eine einzelne Vertiefung einer 96-Well-Mikrotiterplatte, die 100 Mikroliter doppelt destilliertes Wasser enthält. Schneiden Sie die Blattscheiben von vier bis sechs Wochen alten Reispflanzen mit einem Biopsiestempel mit einem Kolben ab. Schneiden Sie die Blattscheiben immer aus dem mittleren Drittel des zweiten Flügels der Hauptdeichsel ab, um die Datenvariation zu reduzieren.Als nächstes legen Sie eine Blattscheibe für 10 bis 12 Stunden zur Vorbehandlung in eine einzelne Vertiefung einer 96-Well-Mikrotiterplatte, die 100 Mikroliter doppelt destilliertes Wasser enthält. Halten Sie alle Blattscheiben schwimmend und nach oben gerichtet in den Vertiefungen einer Mikrotiterplatte zur Wasservorbehandlung, um blattseitige Variationen zu vermeiden. Bereiten Sie die Auslöselösung vor, indem Sie 9,4 Milliliter 50 mikromolare Tris Hcl, 400 Mikroliter L012-Lösung, 100 Mikroliter Meerrettichperoxidase und 100 Mikroliter Flg22 kombinieren.Geben Sie 200 Mikroliter Auslöselösung in die Vertiefungen. Starten Sie die Software und klicken Sie auf die Schaltfläche Experimente, um ein neues Protokoll zu erstellen oder ein vorhandenes Protokoll zu verwenden. Klicken Sie im Popup-Fenster auf Prozedur, um die Platte einzurichten, und wählen Sie die zu überwachenden Vertiefungen aus der Platte aus.Klicken Sie auf Start kinetic und stellen Sie die Laufzeit auf 30 Minuten oder länger ein, abhängig von den experimentellen Anforderungen. Wählen Sie das minimale Intervall, um die Messwerte so oft wie möglich zu erhalten. Wählen Sie für die Integrationszeit je nach Signalintensität eine Sekunde oder länger.Klicken Sie auf Validieren, gefolgt von Okay, um die Einstellungen zu bestätigen, klicken Sie dann im Popup auf Neue Platte erkennen und warten Sie, bis die Software das Dialogfeld für die Ladeplatte auffordert. Entfernen Sie vorsichtig das doppelt destillierte Wasser aus den Vertiefungen, die das vorbehandelte Gewebe enthalten, und vermeiden Sie Gewebeschäden oder Austrocknung. Verwenden Sie eine Mehrkanalpipette, um 200 Mikroliter der Auslöselösung in die Vertiefungen zu geben, die das Gewebe enthalten.Legen Sie die zu testende Platte auf den Träger und beginnen Sie mit der Erkennung. Um ROS durch Flg22 zu induzieren, wurden Blattscheiben und drei Millimeter lange Hüllen verwendet. Die ROS-Erzeugung wird 35 Minuten lang überwacht.Die Balken zeigen die Mittelwerte der Standardabweichungen an, die aus fünf technischen Wiederholungen berechnet werden. Bei Reis wurde der Anstieg der ROS-Produktion erstmals in ein bis zwei Minuten festgestellt, erreichte seinen Höhepunkt nach 10 bis 12 Minuten und kehrte in etwa 30 bis 35 Minuten zum Ausgangswert zurück. Die Gesamtmenge der ROS wurde aus der Kurve berechnet.Um die Gesamtmenge der ROS-Werte zu erhalten, wenden Sie die Formel auf die entsprechenden Datensätze an, um den ROS zu berechnen, der in jedem Zeitintervall generiert wird, der kombiniert werden kann, indem die Formelsumme angewendet wird, um den generierten Gesamtbetrag zu berechnen. Ein einzelnes Loch oder zwei Hälften einer Blattscheibe wurden in die Vertiefungen einer 96-Well-Mikrotiterplatte gegeben, die 10 bis 12 Stunden lang mit 100 Mikrolitern doppelt destilliertem Wasser vorbehandelt und dann mit Flg22 für die ROS-Induktion behandelt wurde. Die Messwerte der beiden Halbscheibenproben sind viel höher als die der gesamten Blattscheibe.Im Durchschnitt sind die Gesamtwerte der beiden Halbscheibenproben fast 1,6-mal so hoch wie die der gesamten Blattscheibe, was proportional zur Kantenlänge und nicht zur Fläche der Proben ist. Dieses Ergebnis spricht dafür, dass ROS hauptsächlich in Zellen an der Wundstelle erzeugt werden. Wenn Sie mit diesem Verfahren versuchen, arbeiten Sie vorsichtig mit Geweben und machen Sie keine zusätzlichen Ausschnitte, die eine Quelle für eine Datenvariation sein könnten.Diese Methode kann auf alle anderen ROS-produzierenden physiologischen Prozesse in Pflanzengeweben angewendet werden.

Research

JoVE Journal

Biology

Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila

Proboscis Extension Response PER Assay in Drosophila

Proboscis Erweiterung Response (PER) Assay in Drosophila

Proboscis extension response (PER) is a taste behavior assay that has been used in flies as well as in honeybees.
On the surface of the fly's mouth ...

Forschung

Biologie

Detecting, Visualizing and Quantitating the Generation of Reactive Oxygen Species in an Amoeba Model System

Erfassen, Visualisieren und Quantifizierung der Generierung von reaktiven Sauerstoffspezies in einem Modellsystem Amoeba

Reactive oxygen species (ROS) comprise a range of reactive and short-lived, oxygen-containing molecules, which are dynamically interconverted or ...

Real-time Imaging of Single Engineered RNA Transcripts in Living Cells Using Ratiometric Bimolecular Beacons

Echtzeit-Bildgebung von Einzel Engineered RNA-Transkripte in lebenden Zellen Mit Ratiometrische Bimolekulare Beacons

The growing realization that both the temporal and spatial regulation of gene expression can have important consequences on cell function has led to the ...

Enhanced Northern Blot Detection of Small RNA Species in Drosophila Melanogaster

Enhanced Northern Blot Detection of Small RNA Species in Drosophila Melanogaster

Verbesserte Northern Blot Detektion von kleinen RNA-Spezies in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The last decades have witnessed the explosion of scientific interest around gene expression control mechanisms at the RNA level. This branch of molecular ...

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

Mess Glutathion-induzierte Fütterung Antwort in Hydra

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...

Development of a Quantitative Recombinase Polymerase Amplification Assay with an Internal Positive Control

Entwicklung eines Quantitative Rekombinase Polymerase Amplification Assay mit einem internen positiven Kontrolle

It was recently demonstrated that recombinase polymerase amplification (RPA), an isothermal amplification platform for pathogen detection, may be used to ...

qPCRTag Analysis - A High Throughput, Real Time PCR Assay for Sc2.0 Genotyping

qPCRTag Analyse - ein hoher Durchsatz, Echtzeit-PCR-Assay für Sc2.0 Genotyping

The Synthetic Yeast Genome Project (Sc2.0) aims to build 16 designer yeast chromosomes and combine them into a single yeast cell. To date one synthetic ...

Stimulation of Stem Cell Niches and Tissue Regeneration in Mouse Skin by Switchable Protoporphyrin IX-Dependent Photogeneration of Reactive Oxygen Species In Situ

Stimulation von Stammzellnischen und Geweberegeneration in der Haut von Mäusen durch schaltbare Protoporphyrin IX-abhängige Photogeneration reaktiver Sauerstoffspezies in situ

Here, we describe a protocol to induce switchable in vivo photogeneration of endogenous reactive oxygen species (ROS) in mouse skin. This transient ...

Real-Time Monitoring of Aurora kinase A Activation using Conformational FRET Biosensors in Live Cells

Echtzeitüberwachung der Aktivierung der Aurora-Kinase A mit konformationellen FRET-Biosensoren in lebenden Zellen

Epithelial cancers are often hallmarked by the overexpression of the Ser/Thr kinase Aurora A/AURKA. AURKA is a multifunctional protein that activates upon ...