Name: real-time detection of reactive oxygen species production in immune response in rice with a chemiluminescence assay
Uploaded: 2022-11-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-Time Detection of Reactive Oxygen Species Production in Immune Response in Rice with a Chemiluminescence Assay at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מקרן שנחאי למדעי הטבע (מספר מענק: 21ZR1429300/BS1500016), אוניברסיטת שנגחאי ג'יאו טונג (תוכנית Agri-X, מספר מענק: AF1500088/002), מרכז החדשנות השיתופית של שנחאי של זרעים חקלאיים (מספר מענק: ZXWH2150201/001) לג'יאנגבו פאן, ועל ידי פרויקט שיתוף הפעולה הרפואי-הנדסי של אוניברסיטת ג'יאו טונג בשנגחאי (מספר מענק: 21X010301734) לקאן לי.

הערה: הפרוטוקול חל על רקמות צמחים שונות. נדן אורז ודיסקיות עלים שימשו בפרוטוקול זה לזיהוי ROS עם אליציטוט PAMP. מכיוון שהבדלים נובעים בעיקר משיטת הדגימה, רק ההליכים הנפוצים מתוארים להלן, כאשר שלבים ספציפיים מוזכרים במידת הצורך.
1. תרבות צמחים
<ol><li>לעקר את זרעי האורז dehus...

<ol>
	<li>Gechev, T. S., Van Breusegem, F., Stone, J. M., Denev, I., Laloi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+as+signals+that+modulate+plant+stress+responses+and+programmed+cell+death.">Reactive oxygen species as signals that modulate plant stress responses and programmed cell death.</a> Bioessays. 28 (11), 1091-1101 (2006).</li><li>Mittler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ROS+are+good.">ROS are good.</a> Trends in Plant Science. 22 (1), 11-19 (2017).</li><li>Gilroy, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ROS,+calcium,+and+electric+signals:+key+mediators+of+rapid+systemic+signaling+in+plants.">ROS, calcium, and electric signals: key mediators of rapid systemic signaling in plants.</a> Plant Physiology. 171 (3), 1606-1615 (2016).</li><li>Mittler, R., Vanderauwera, S., Gollery, M., Van Breusegem, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+gene+network+of+plants.">Reactive oxygen gene network of plants.</a> Trends in Plant Science. 9 (10), 490-498 (2004).</li><li>Marino, D., Dunand, C., Puppo, A., Pauly, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+burst+of+plant+NADPH+oxidases.">A burst of plant NADPH oxidases.</a> Trends in Plant Science. 17 (1), 9-15 (2012).</li><li>Mittler, R., Zandalinas, S. I., Fichman, Y., Van Breusegem, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+signalling+in+plant+stress+responses.">Reactive oxygen species signalling in plant stress responses.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 23 (10), 663-679 (2022).</li><li>Suzuki, N., Koussevitzky, S., Mittler, R., Miller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ROS+and+redox+signalling+in+the+response+of+plants+to+abiotic+stress.">ROS and redox signalling in the response of plants to abiotic stress.</a> Plant, Cell &amp; Environment. 35 (2), 259-270 (2012).</li><li>Suzuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+burst+oxidases:+the+engines+of+ROS+signaling.">Respiratory burst oxidases: the engines of ROS signaling.</a> Current Opinion in Plant Biology. 14 (6), 691-699 (2011).</li><li>Kadota, Y., Shirasu, K., Zipfel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+NADPH+oxidase+RBOHD+during+plant+immunity.">Regulation of the NADPH oxidase RBOHD during plant immunity.</a> Plant and Cell Physiology. 56 (8), 1472-1480 (2015).</li><li>Segonzac, C., Zipfel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+plant+pattern-recognition+receptors+by+bacteria.">Activation of plant pattern-recognition receptors by bacteria.</a> Current Opinion in Microbiology. 14 (1), 54-61 (2011).</li><li>Roda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+chemical+luminescence-based+biosensors:+A+critical+review.">Progress in chemical luminescence-based biosensors: A critical review.</a> Biosensors and Bioelectronics. 76, 164-179 (2016).</li><li>Hong, D., Joung, H. -. A., Lee, D. Y., Kim, S., Kim, M. -. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attomolar+detection+of+cytokines+using+a+chemiluminescence+immunoassay+based+on+an+antibody-arrayed+CMOS+image+sensor.">Attomolar detection of cytokines using a chemiluminescence immunoassay based on an antibody-arrayed CMOS image sensor.</a> Sensors and Actuators B: Chemical. 221, 1248-1255 (2015).</li><li>Nishinaka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.+new+sensitive+chemiluminescence+probe,+L-012,+for+measuring+the+production+of+superoxide+anion+by+cells.">et al. new sensitive chemiluminescence probe, L-012, for measuring the production of superoxide anion by cells.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 193 (2), 554-559 (1993).</li><li>Grundy, J., Stoker, C., Carre, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+regulation+of+abiotic+stress+tolerance+in+plants.">Circadian regulation of abiotic stress tolerance in plants.</a> Frontiers in Plant Science. 6, 648 (2015).</li></ol>

מטרת מחקר זה הייתה לבסס שיטה יעילה ביותר לכימות ייצור מוקדם של ROS בתגובה ל-PAMP ברקמות אורז. שיטה זו מספקת הליך סטנדרטי לקביעה בזמן אמת של אפופלסט ROS המיוצר מרקמות אורז מטופלות. שיטה זו פשוטה בתפעול, נמוכה בעלות, ברורה בהרכב, ובלתי תלויה בערכות מסחריות. באמצעות שיטה זו, חוקרים יכולים לחקור את ה?...

מיני חמצן תגובתי (ROS) כוללים סדרה של נגזרות חמצן פעילות מבחינה כימית, כולל רדיקלים של אניון סופראוקסיד (O2-) ונגזרותיו, רדיקלים הידרוקסילים (OH-), מי חמצן, ותוצרים של חמצן סינגלט או תגובות חיזור חמצון, המיוצרים באופן קבוע בפלסטידים ובכלורופלסטים, מיטוכונדריה, פרוקסיזומים ומקומות תת-תאיים אחרים1 . ROS ממלא תפקידים חשובים בתהליכים ביולוגיים רבים והם חיוניים לכל הצמחים 2,3,4. הספקטרום הרחב של תפקודי ROS משתנה מוויסות גדילה והתפתחות ועד לתפיסה של עקה אביוטית וביוטית 5,6,7,8.
במערכת החיסון של הצמח, קולטנים מקומיים של קרום הפלזמה של תאי הצמח - מה שמכונה קולטני זיהוי תבניות (PRR) - תופסים כימיקלים שמקורם בפתוגן - תבניות מולקולריות הקשורות לפתוגנים (PAMPs). זיהוי זה מעורר סדרה של תגובות חיסוניות מהירות, כולל זרם סידן, התפרצות ROS ומפל MAPK; לכן, שכבת חסינות זו נקראת PAMP-triggered immunity (PTI). התפרצות ROS היא תגובת PTI בולטת, שקביעתה מיושמת באופן נרחב במחקרים הקשורים ל- PTI 9,10. ייצור ROS המופעל על ידי PAMPs מיוחס לחלבונים ממשפחת NADPH oxidase (הומולוג של קרום הפלזמה), או RBOH (Respiratory burst oxidase homolog), אשר מעבירים אלקטרונים מ-NADPH ציטוסולי או NADH לחמצן חוץ-תאי כדי לייצר סופראוקסיד (O 2-) אשר מומר באופן ספונטני למי חמצן (H 2 O 2) על ידי סופראוקסיד דיסמוטאז8 . פרץ ROS המופעל על ידי PAMP הוא מהיר למדי, מופיע רק כמה דקות לאחר טיפול PAMP ומגיע לשיא של ~ 10-12 דקות. הרוב המכריע של מולקולות ROS מכילות מי חמצן (H 2 O2), אשר ניתן לזהות בקלות ובהתמדה באמצעות בדיקת כימילומינסנציה.
בכימילומינסנציה, מגיב הכימילומינסנציה מגיב עם חמצן פעיל, תחת פעולה של זרז, כדי לייצר את מתווכי המצב הנרגש. לאחר מכן, האלקטרונים במכפלה חוזרים למצב הקרקע באמצעות מעבר לא קרינתי ופולטים פוטונים. ריאגנטים כימילומינסנטיים נפוצים כוללים luminol ו- L-012, כאשר luminol שולט ביישום11,12,13. עם זאת, חוקרים נוספים בוחרים ב- L-012 כדי לזהות ייצור ROS, מכיוון של- L-012 יש יעילות פליטת אור גבוהה בהרבה בתנאי pH ניטרליים או כמעט ניטרליים בהשוואה ללומינול.
מאמר זה מתאר שיטת כימילומינסנציה אופטימלית, המבוססת על L-012, לזיהוי בזמן אמת של ייצור ROS לאחר חיסול PAMPs בדיסקים ובמעטפת של רקמות-עלי אורז (Oryza sativa). השיטה המסופקת כאן היא פשוטה, יציבה וסטנדרטית, והיא ניתנת להתאמה גבוהה כדי לענות על צרכים ניסיוניים שונים. הנתונים המתקבלים בשיטה זו ניתנים לשחזור גבוה בתנאים מבוקרים היטב.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well microtiter plate</td>
			<td>WHB</td>
			<td>WHB-96-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Innochem</td>
			<td>A43543</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>flg22</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>p20973</td>
			<td>PAMP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gen5</td>
			<td>BioTek</td>
			<td></td>
			<td>software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-012</td>
			<td>FUJIFILM</td>
			<td>120-04891</td>
			<td>8-amino-5-chloro-7-phenyl-2,3-dihydropyrido [3,4-d] pyridazine-1,4-dione, CAS #:143556-24-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Synergy 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MS Medium</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>M8521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCLO</td>
			<td>Aladdin</td>
			<td>S101636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peroxidase from horseradish (HRP)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P8375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phytagel</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P8169</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sampler</td>
			<td>Miltex&#160;</td>
			<td>15110-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A502792</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A610195</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time detection of reactive oxygen species production in immune response in rice with a chemiluminescence assay

מיני חמצן תגובתי (ROS) ממלאים תפקידים חיוניים במגוון תהליכים ביולוגיים, כולל חישה של עקה אביוטית וביוטית. עם זיהום פתוגן או אתגר עם כימיקלים הקשורים לפתוגן (דפוסים מולקולריים הקשורים לפתוגנים [PAMPs]), מערך של תגובות חיסוניות, כולל התפרצות ROS, מושרות במהירות בצמחים, אשר נקרא PAMP-triggered immunity (PTI). התפרצות ROS היא תגובת PTI בולטת, אשר מזרזת על ידי קבוצה של NADPH oxidases מקומי של קרום פלזמה - חלבונים ממשפחת RBOH. הרוב המכריע של ROS מורכב מי חמצן (H 2 O2), אשר ניתןלזהות בקלות ובהתמדה על ידי שיטת chemiluminescence מבוסס luminol. כימילומינסנציה היא תגובה המייצרת פוטונים שבה לומינול, או הנגזרת שלו (כגון L-012), עובר תגובת חמצון-חיזור עם ROS תחת פעולה של זרז. מאמר זה מתאר שיטה כימילומינסנציה אופטימלית מבוססת L-012 לזיהוי ייצור אפופלסט ROS בזמן אמת עם אליציטוט PAMP ברקמות אורז. השיטה קלה, יציבה, סטנדרטית וניתנת לשחזור בתנאים מבוקרים היטב.

כאן, אנו לוקחים חומר אורז כדוגמה כדי לקבוע את ROS המיוצר עם טיפול flg22. הדור של ROS לאחר אליציטוט הוא חולף. באורז, העלייה בייצור ROS זוהתה לראשונה תוך 1-2 דקות, הגיעה לשיא של 10-12 דקות, וחזרה לקו הבסיס תוך ~30-35 דקות (איור 3). בהשוואה למבחן הביקורת, שבו PAMP נעדר בתמיסת האליסיטציה וכתוצאה מכ?...

Watch this Scientific Journal Video about Real-Time Detection of Reactive Oxygen Species Production in Immune Response in Rice with a Chemiluminescence Assay at JoVE.com

Real-Time Detection of Reactive Oxygen Species Production in Immune Response in Rice with a Chemiluminescence Assay

במאמר זה אנו מתארים שיטה לזיהוי בזמן אמת של ייצור מיני חמצן תגובתי אפופלסטי (ROS) ברקמות אורז בתגובה חיסונית מולקולרית המופעלת על ידי תבניות מולקולריות הקשורות לפתוגן. שיטה זו פשוטה, סטנדרטית ומייצרת תוצאות הניתנות לשחזור בתנאים מבוקרים.

זיהוי בזמן אמת של ייצור מיני חמצן תגובתי בתגובה חיסונית באורז עם בדיקת כימילומינסנציה

Reactive oxygen species (ROS) play vital roles in a variety of biological processes, including the sensing of abiotic and biotic stresses. Upon pathogen ...

פרוטוקול זה מתאר שיטה כימילומינסנציה אופטימלית מבוססת L-012 לזיהוי ייצור ROS בזמן אמת עם אליציטוט PAMP ברקמות אורז. שיטה זו קלה, סטנדרטית וניתנת לשחזור בתנאים מבוקרים היטב. מי שתדגים את ההליך הזה תהיה און יינג, דוקטורנטית מהמעבדה שלי.כדי להתחיל, לעקר את זרעי אורז dehusked עם 70% אתנול במשך דקה אחת, ולאחר מכן עם 40% hypochlorite נתרן במשך שעה אחת. שטפו את הזרעים חמש פעמים במים סטריליים כדי להסיר שאריות כלור. בשיטת נדן האורז, ישירות צלחת את הזרעים בכלי זכוכית סטרילי עם Murashige ו Skoog או MS בינוני.כדי לצלחת את הזרעים בשיטת דיסק העלים, צלחת אותם על לוחות MS במשך חמישה עד שבעה ימים ולאחר מכן להשתיל אותם על מטריצת הצמיחה או הקרקע. לגדל את השתילים בחדר צמיחה עם 12 שעות אור ו 12 שעות צילום כהה. חותכים את הנדן משתילי אורז בני 10 ימים לשלושה מקטעים מילימטריים עם סכין גילוח חד או להב כירורגי לטיפול מקדים יום לפני בדיקת ROS.מניחים חמישה קטעי נדן בבאר בודדת של צלחת מיקרוטיטר 96 באר המכילה 100 מיקרוליטר מים מזוקקים כפול למשך 10 עד 12 שעות. חותכים את דיסקיות העלים מצמחי אורז בני ארבעה עד שישה שבועות באמצעות ניקוב ביופסיה עם בוכנה. חתכו תמיד את דיסקיות העלים מהשליש האמצעי של העלה השני של העלה הראשי כדי להפחית את השונות בנתונים.לאחר מכן, הניחו דיסק עלה אחד בבאר בודדת של צלחת מיקרוטיטר 96 באר המכילה 100 מיקרוליטר מים מזוקקים כפול למשך 10 עד 12 שעות לטיפול מקדים. שמור את כל דיסקיות העלים צפות ופונות כלפי מעלה בבארות של צלחת מיקרוטיטר לטיפול מקדים במים כדי למנוע שינויים הקשורים לצד העלה. הכן תמיסת אליסיטציה על ידי שילוב של 9.4 מיליליטר של 50 מיקרומולר Tris Hcl, 400 מיקרוליטר של תמיסת L012, 100 מיקרוליטר של פרוקסידז צנון סוס ו -100 מיקרוליטר של Flg22.הוסף 200 מיקרוליטר של פתרון אליסיטציה לבארות. הפעל את התוכנה ולחץ על כפתור הניסויים כדי ליצור פרוטוקול חדש או להשתמש בפרוטוקול קיים. לחץ על הליך בחלון הקופץ כדי להגדיר את הצלחת ובחר את הבארות מהצלחת שיש לפקח עליה.לחץ על התחל קינטי והגדר את זמן הריצה ל- 30 דקות או יותר, בהתאם לדרישות הניסוי. בחר מרווח זמן מינימלי כדי לקבל את הקריאות בתדירות גבוהה ככל האפשר. ועבור זמן אינטגרציה, בחר שנייה אחת או יותר בהתאם לעוצמת האות.לחץ על אימות, ואחריו בסדר כדי לאשר את ההגדרות, ואז לחץ על זהה את הצלחת החדשה בחלון הקופץ והמתן עד שהתוכנה תבקש את תיבת הדו-שיח של צלחת הטעינה. הסר בזהירות את המים המזוקקים הכפולים מהבארות המכילות את הרקמות שטופלו מראש, תוך הימנעות מכל נזק לרקמות או התייבשות. השתמש פיפטה רב ערוצית כדי להוסיף 200 מיקרוליטר של פתרון אליסיטציה לבארות המכילות את הרקמות.הניחו את הצלחת לבדיקה על המנשא והתחילו בזיהוי. כדי לגרום ל-ROS על ידי Flg22, נעשה שימוש בדיסקי עלים ובנדנים באורך שלושה מילימטר. דור ROS מנוטר במשך 35 דקות.העמודות מציינות את אמצעי סטיות התקן המחושבות מחמש חזרות טכניות. באורז, העלייה בייצור ROS זוהתה לראשונה תוך דקה או שתיים, הגיעה לשיא תוך 10 עד 12 דקות וחזרה לקו הבסיס תוך 30 עד 35 דקות. הסכום הכולל של ROS חושב מהעקומה.כדי להשיג את הסכום הכולל של ערכי ROS, החל את הנוסחה על ערכות הנתונים המתאימות כדי לחשב את ה- ROS שנוצר בכל מרווח זמן, שניתן לשלב על-ידי החלת סכום הנוסחה לחישוב הסכום הכולל שנוצר. חור בודד או שני חצאים של דיסקית עלה הוכנסו לבארות של צלחת מיקרוטיטר באר 96 שטופלה ב-100 מיקרוליטר מים מזוקקים כפול במשך 10 עד 12 שעות ולאחר מכן טופלה ב-Flg22 להשראת ROS. ערכי הקריאה משני חצאי הדיסק גבוהים בהרבה מאלה של דיסק העלה כולו.בממוצע, הערכים הכוללים של שני חצאי דגימות הדיסק הם כמעט פי 1.6 מאשר מכל דיסק הדף, שהוא פרופורציונלי לאורך הקצה, לא לאזור הדגימות. תוצאה זו תומכת בכך ש-ROS נוצרים בעיקר בתאים באתר הפצע. כאשר מנסים לבצע הליך זה, יש לנתח עם הרקמות בעדינות ולא לבצע חתכים מיותרים שעלולים להוות מקור לשינויים בנתונים.שיטה זו יכולה להיות מיושמת על כל תהליכים פיזיולוגיים אחרים המייצרים ROS ברקמות הצמח.

Research

JoVE Journal

Biology

Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila

Proboscis Extension Response PER Assay in Drosophila

תגובת חוטם הרחבה (PER) Assay ב תסיסנית

Proboscis extension response (PER) is a taste behavior assay that has been used in flies as well as in honeybees.
On the surface of the fly's mouth ...

Detecting, Visualizing and Quantitating the Generation of Reactive Oxygen Species in an Amoeba Model System

איתור, חזותי וquantitating הדור של מינים חמצן תגובתי במערכת מודל אמבה

Reactive oxygen species (ROS) comprise a range of reactive and short-lived, oxygen-containing molecules, which are dynamically interconverted or ...

Real-time Imaging of Single Engineered RNA Transcripts in Living Cells Using Ratiometric Bimolecular Beacons

הדמיה בזמן אמת של יחיד תכנון הנדסי RNA תמלילים בתאים חיים באמצעות משואות bimolecular רציומטרי

The growing realization that both the temporal and spatial regulation of gene expression can have important consequences on cell function has led to the ...

Enhanced Northern Blot Detection of Small RNA Species in Drosophila Melanogaster

Enhanced Northern Blot Detection of Small RNA Species in Drosophila Melanogaster

Enhanced צפון כתם איתור של RNA קטן מינים ב<em&gt; תסיסנית</em

The last decades have witnessed the explosion of scientific interest around gene expression control mechanisms at the RNA level. This branch of molecular ...

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

מדידת תגובת האכלה מושרה גלוטתיון בהידרה

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...

Development of a Quantitative Recombinase Polymerase Amplification Assay with an Internal Positive Control

פיתוח של כמותי recombinase פולימראז ההגברה Assay עם בקרה פנימית חיובית

It was recently demonstrated that recombinase polymerase amplification (RPA), an isothermal amplification platform for pathogen detection, may be used to ...

qPCRTag Analysis - A High Throughput, Real Time PCR Assay for Sc2.0 Genotyping

qPCRTag ניתוח - תפוקה גבוהה, בזמן אמת PCR Assay עבור Genotyping Sc2.0

The Synthetic Yeast Genome Project (Sc2.0) aims to build 16 designer yeast chromosomes and combine them into a single yeast cell. To date one synthetic ...

Stimulation of Stem Cell Niches and Tissue Regeneration in Mouse Skin by Switchable Protoporphyrin IX-Dependent Photogeneration of Reactive Oxygen Species In Situ

גירוי נישות תאי גזע והתחדשות רקמות בעור עכבר על ידי פוטוגנרציה תלוית פרוטופורפירין IX ניתנת להחלפה של מיני חמצן תגובתי באתרם

Here, we describe a protocol to induce switchable in vivo photogeneration of endogenous reactive oxygen species (ROS) in mouse skin. This transient ...

Real-Time Monitoring of Aurora kinase A Activation using Conformational FRET Biosensors in Live Cells

ניטור בזמן אמת של אורורה קינאז הפעלה באמצעות Biosensors FRET קונפורמציה בתאים חיים

Epithelial cancers are often hallmarked by the overexpression of the Ser/Thr kinase Aurora A/AURKA. AURKA is a multifunctional protein that activates upon ...