Name: real-time detection of reactive oxygen species production in immune response in rice with a chemiluminescence assay
Uploaded: 2022-11-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-Time Detection of Reactive Oxygen Species Production in Immune Response in Rice with a Chemiluminescence Assay at JoVE.com

Bu çalışma, Şangay Doğa Bilimleri Vakfı (Hibe Numarası: 21ZR1429300 / BS1500016), Şangay Jiao Tong Üniversitesi (Agri-X programı, Hibe Numarası: AF1500088/002), Şangay İşbirlikçi Tarım Tohumları İnovasyon Merkezi (Hibe Numarası: ZXWH2150201/001) tarafından Jiangbo Fan'a ve Shanghai Jiao Tong Üniversitesi Tıp-Mühendislik İşbirliği Projesi (hibe numarası: 21X010301734) tarafından Can Li'ye verilen hibelerle desteklenmiştir.

NOT: Protokol farklı bitki dokularına uygulanabilir. Bu protokolde PAMP inisitümü üzerine ROS tespiti için pirinç kılıfı ve yaprak diskleri kullanılmıştır. Farklılıklar esas olarak örnekleme yönteminden kaynaklandığından, aşağıda yalnızca ortak prosedürler açıklanmış ve gerektiğinde belirli adımlardan bahsedilmiştir.
1. Bitki kültürü
<ol><li>Kabuğu çıkarılmış pirinç tohumlarını 1 dakika boyunca% 70 etanol, daha sonra 1 saat boyunc...

<ol>
	<li>Gechev, T. S., Van Breusegem, F., Stone, J. M., Denev, I., Laloi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+as+signals+that+modulate+plant+stress+responses+and+programmed+cell+death.">Reactive oxygen species as signals that modulate plant stress responses and programmed cell death.</a> Bioessays. 28 (11), 1091-1101 (2006).</li><li>Mittler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ROS+are+good.">ROS are good.</a> Trends in Plant Science. 22 (1), 11-19 (2017).</li><li>Gilroy, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ROS,+calcium,+and+electric+signals:+key+mediators+of+rapid+systemic+signaling+in+plants.">ROS, calcium, and electric signals: key mediators of rapid systemic signaling in plants.</a> Plant Physiology. 171 (3), 1606-1615 (2016).</li><li>Mittler, R., Vanderauwera, S., Gollery, M., Van Breusegem, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+gene+network+of+plants.">Reactive oxygen gene network of plants.</a> Trends in Plant Science. 9 (10), 490-498 (2004).</li><li>Marino, D., Dunand, C., Puppo, A., Pauly, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+burst+of+plant+NADPH+oxidases.">A burst of plant NADPH oxidases.</a> Trends in Plant Science. 17 (1), 9-15 (2012).</li><li>Mittler, R., Zandalinas, S. I., Fichman, Y., Van Breusegem, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+signalling+in+plant+stress+responses.">Reactive oxygen species signalling in plant stress responses.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 23 (10), 663-679 (2022).</li><li>Suzuki, N., Koussevitzky, S., Mittler, R., Miller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ROS+and+redox+signalling+in+the+response+of+plants+to+abiotic+stress.">ROS and redox signalling in the response of plants to abiotic stress.</a> Plant, Cell &amp; Environment. 35 (2), 259-270 (2012).</li><li>Suzuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+burst+oxidases:+the+engines+of+ROS+signaling.">Respiratory burst oxidases: the engines of ROS signaling.</a> Current Opinion in Plant Biology. 14 (6), 691-699 (2011).</li><li>Kadota, Y., Shirasu, K., Zipfel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+NADPH+oxidase+RBOHD+during+plant+immunity.">Regulation of the NADPH oxidase RBOHD during plant immunity.</a> Plant and Cell Physiology. 56 (8), 1472-1480 (2015).</li><li>Segonzac, C., Zipfel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+plant+pattern-recognition+receptors+by+bacteria.">Activation of plant pattern-recognition receptors by bacteria.</a> Current Opinion in Microbiology. 14 (1), 54-61 (2011).</li><li>Roda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+chemical+luminescence-based+biosensors:+A+critical+review.">Progress in chemical luminescence-based biosensors: A critical review.</a> Biosensors and Bioelectronics. 76, 164-179 (2016).</li><li>Hong, D., Joung, H. -. A., Lee, D. Y., Kim, S., Kim, M. -. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attomolar+detection+of+cytokines+using+a+chemiluminescence+immunoassay+based+on+an+antibody-arrayed+CMOS+image+sensor.">Attomolar detection of cytokines using a chemiluminescence immunoassay based on an antibody-arrayed CMOS image sensor.</a> Sensors and Actuators B: Chemical. 221, 1248-1255 (2015).</li><li>Nishinaka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.+new+sensitive+chemiluminescence+probe,+L-012,+for+measuring+the+production+of+superoxide+anion+by+cells.">et al. new sensitive chemiluminescence probe, L-012, for measuring the production of superoxide anion by cells.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 193 (2), 554-559 (1993).</li><li>Grundy, J., Stoker, C., Carre, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+regulation+of+abiotic+stress+tolerance+in+plants.">Circadian regulation of abiotic stress tolerance in plants.</a> Frontiers in Plant Science. 6, 648 (2015).</li></ol>

Bu çalışmanın amacı, pirinç dokularında PAMP'a yanıt olarak erken ROS üretimini ölçmek için oldukça etkili bir yöntem oluşturmaktır. Bu yöntem, işlenmiş pirinç dokularından üretilen apoplast ROS'un gerçek zamanlı olarak belirlenmesi için standartlaştırılmış bir prosedür sağlar. Bu yöntem kullanımda basit, düşük maliyetli, bileşimde berrak ve ticari kitlerden bağımsızdır. Bu yöntemi kullanarak, araştırmacılar bitkiler biyotik veya abiyotik streslere maruz kaldıklarında apopl...

Reaktif oksijen türleri (ROS), süperoksit anyon radikalleri (O2-) ve türevleri, hidroksil radikalleri (OH-), hidrojen peroksit ve plastitlerde ve kloroplastlarda, mitokondrilerde, peroksizomlarda ve diğer hücre altı konumlarda sürekli olarak üretilen singlet oksijen veya oksidasyon-indirgeme reaksiyonlarının ürünleri dahil olmak üzere bir dizi kimyasal olarak aktif oksijen türevini içerir1 . ROS birçok biyolojik süreçte önemli rol oynar ve tüm bitkiler için gereklidir 2,3,4. ROS fonksiyonlarının geniş spektrumu, büyüme ve gelişmenin düzenlenmesinden abiyotik ve biyotik streslerin algılanmasına kadar değişir 5,6,7,8.
Bitki bağışıklık sisteminde, bitki hücresi plazma zarı-lokalize reseptörler-sözde örüntü tanıma reseptörleri (PRR'ler) - patojen kaynaklı kimyasalları-patojenle ilişkili moleküler paternleri (PAMP'ler) algılar. Bu tanıma, kalsiyum akışı, ROS patlaması ve MAPK kaskadı dahil olmak üzere bir dizi hızlı bağışıklık tepkisini tetikler; Bu nedenle, bu bağışıklık katmanı PAMP ile tetiklenen bağışıklık (PTI) olarak adlandırılır. ROS patlaması, PTI ileilgili çalışmalara yaygın olarak uygulanan 9,10 numaralı ayırt edici bir PTI yanıtıdır. PAMP'ler tarafından tetiklenen ROS üretimi, süperoksit dismutaz 8 tarafından kendiliğinden hidrojen peroksite (H2 O2) dönüştürülen süperoksit (O2-) üretmek için elektronları sitozolik NADPH veya NADH'den hücre dışı oksijene aktaran plazma zarında yerleşik NADPH oksidaz veya solunum patlaması oksidaz homolog(RBOH) ailesi proteinlerine atfedilir . PAMP tarafından tetiklenen ROS patlaması oldukça hızlıdır, PAMP tedavisinden sadece birkaç dakika sonra ortaya çıkar ve ~ 10-12 dakikada zirveye ulaşır. ROS moleküllerinin büyük çoğunluğu, bir kemilüminesans testi ile kolayca ve istikrarlı bir şekilde tespit edilebilen hidrojen peroksit (H2O2) içerir.
Kemilüminesansta, kemilüminesans reaktifi, uyarılmış durum ara ürünlerini üretmek için bir katalizörün etkisi altında aktif oksijenle reaksiyona girer. Daha sonra, üründeki elektronlar ışınımsal olmayan geçiş yoluyla zemin durumuna geri döner ve fotonlar yayar. Yaygın kemilüminesans reaktifleri luminol ve L-012'yi içerir ve luminol uygulamaya 11,12,13 hakimdir. Bununla birlikte, daha fazla araştırmacı ROS üretimini tespit etmek için L-012'yi seçmektedir, çünkü L-012, luminol'e kıyasla nötr veya nötr pH koşullarına yakın koşullar altında çok daha yüksek bir ışık emisyon verimliliğine sahiptir.
Bu yazıda, pirinç (Oryza sativa) doku-yaprak diskleri ve kılıfında PAMP'lerin ortaya çıkarılmasından sonra ROS üretiminin gerçek zamanlı tespiti için L-012'ye dayanan optimize edilmiş bir kemilüminesans yöntemi açıklanmaktadır. Burada sağlanan yöntem basit, kararlı ve standartlaştırılmıştır ve farklı deneysel ihtiyaçları karşılamak için oldukça uyarlanabilir. Bu yöntemle elde edilen veriler, sıkı bir şekilde kontrol edilen koşullar altında yüksek oranda tekrarlanabilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well microtiter plate</td>
			<td>WHB</td>
			<td>WHB-96-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Innochem</td>
			<td>A43543</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>flg22</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>p20973</td>
			<td>PAMP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gen5</td>
			<td>BioTek</td>
			<td></td>
			<td>software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-012</td>
			<td>FUJIFILM</td>
			<td>120-04891</td>
			<td>8-amino-5-chloro-7-phenyl-2,3-dihydropyrido [3,4-d] pyridazine-1,4-dione, CAS #:143556-24-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Synergy 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MS Medium</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>M8521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCLO</td>
			<td>Aladdin</td>
			<td>S101636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peroxidase from horseradish (HRP)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P8375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phytagel</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P8169</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sampler</td>
			<td>Miltex&#160;</td>
			<td>15110-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A502792</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A610195</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time detection of reactive oxygen species production in immune response in rice with a chemiluminescence assay

Reaktif oksijen türleri (ROS), abiyotik ve biyotik streslerin algılanması da dahil olmak üzere çeşitli biyolojik süreçlerde hayati roller oynamaktadır. Patojen enfeksiyonu veya patojenle ilişkili kimyasallarla (patojenle ilişkili moleküler desenler [PAMP'ler]) meydan okuması üzerine, bir ROS patlaması da dahil olmak üzere bir dizi bağışıklık tepkisi, PAMP ile tetiklenen bağışıklık (PTI) olarak adlandırılan bitkilerde hızla indüklenir. Bir ROS patlaması, bir grup plazma zarı lokalize NADPH oksidaz-RBOH ailesi proteinleri tarafından katalize edilen ayırt edici bir PTI yanıtıdır. ROS'un büyük çoğunluğu, luminol bazlı bir kemilüminesans yöntemiyle kolayca ve istikrarlı bir şekilde tespit edilebilen hidrojen peroksit (H2O2) içerir. Kemilüminesans, luminolün veya türevinin (L-012 gibi), bir katalizörün etkisi altında ROS ile bir redoks reaksiyonuna maruz kaldığı foton üreten bir reaksiyondur. Bu makalede, pirinç dokularında PAMP inisitümü üzerine apoplast ROS üretimini gerçek zamanlı olarak tespit etmek için optimize edilmiş bir L-012 tabanlı kemilüminesans yöntemi açıklanmaktadır. Yöntem kolay, istikrarlı, standartlaştırılmış ve sıkı bir şekilde kontrol edilen koşullar altında yüksek oranda tekrarlanabilir.

Burada, flg22 işlemi ile üretilen ROS'u belirlemek için pirinç malzemesini örnek olarak alıyoruz. Uyarılmadan sonra ROS oluşumu geçicidir. Pirinçte, ROS üretimindeki artış ilk olarak 1-2 dakika içinde tespit edilmiş, 10-12 dakikada zirveye ulaşmış ve ~ 30-35 dakika içinde taban çizgisine geri dönmüştür (Şekil 3). PAMP'ın elicitation çözeltisinde bulunmadığı ve belirgin bir ROS indüksiyonu ile sonuçlanmadığı kontrol testi ile karşılaştırıldığında, s...

Watch this Scientific Journal Video about Real-Time Detection of Reactive Oxygen Species Production in Immune Response in Rice with a Chemiluminescence Assay at JoVE.com

Real-Time Detection of Reactive Oxygen Species Production in Immune Response in Rice with a Chemiluminescence Assay

Burada, patojenle ilişkili moleküler paternle tetiklenen immün yanıtta pirinç dokularında apoplastik reaktif oksijen türlerinin (ROS) üretiminin gerçek zamanlı tespiti için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem basit, standartlaştırılmış ve kontrollü koşullar altında yüksek oranda tekrarlanabilir sonuçlar üretir.

Kemilüminesans Testi ile Pirinçte İmmün Yanıtta Reaktif Oksijen Türleri Üretiminin Gerçek Zamanlı Tespiti

Reactive oxygen species (ROS) play vital roles in a variety of biological processes, including the sensing of abiotic and biotic stresses. Upon pathogen ...

Bu protokol, pirinç dokularında PAMP uyarılması üzerine ROS üretimini gerçek zamanlı olarak tespit etmek için optimize edilmiş bir L-012 tabanlı kemilüminesans yöntemini açıklamaktadır. Bu yöntem kolay, standartlaştırılmış ve sıkı bir şekilde kontrol edilen koşullar altında yüksek oranda tekrarlanabilir. Bu prosedürü gösteren, laboratuvarımdan bir doktora öğrencisi olan On Ying olacak.Başlamak için, kabuğu çıkarılmış pirinç tohumlarını bir dakika boyunca% 70 etanol, daha sonra bir saat boyunca% 40 sodyum hipoklorit ile sterilize edin. Artık kloru gidermek için tohumları steril suyla beş kez durulayın. Pirinç kılıfı yönteminde, tohumları steril cam kapta doğrudan Murashige ve Skoog veya MS ortamı ile kaplayın.Tohumları yaprak diski yönteminde kaplamak için, onları beş ila yedi gün boyunca MS plakalarına yapıştırın ve daha sonra büyüme matrisine veya toprağa nakledin. Fideleri 12 saat ışıklı, 12 saat karanlık fotoğraf periyoduna sahip bir büyüme odasında büyütün. 10 günlük pirinç fidelerinden kılıfı, ROS tahlilinden bir gün önce ön işlem için keskin bir tıraş bıçağı veya cerrahi bıçakla üç milimetrelik parçalara ayırın.Beş kılıf segmentini, 10 ila 12 saat boyunca 100 mikrolitre çift damıtılmış su içeren 96 kuyucuklu bir mikrotitrek plakanın ayrı bir kuyucuğuna yerleştirin. Yaprak disklerini dört ila altı haftalık pirinç bitkilerinden bir pistonla biyopsi zımba kullanarak kesin. Veri varyasyonunu azaltmak için yaprak disklerini her zaman ana yeke makinesinin ikinci yaprağının orta üçte birinden kesin.Daha sonra, bir yaprak diskini, ön işlem için 10 ila 12 saat boyunca 100 mikrolitre çift damıtılmış su içeren 96 kuyucuklu bir mikrotitrek plakanın ayrı bir kuyucuğuna yerleştirin. Yaprak tarafı ile ilişkili varyasyonları önlemek için tüm yaprak disklerini su ön arıtımı için bir mikrotiter plakasının kuyularında yüzer ve yukarı bakacak şekilde tutun. 9.4 mililitre 50 mikromolar Tris Hcl, 400 mikrolitre L012 çözeltisi, 100 mikrolitre at turpu peroksidaz ve 100 mikrolitre Flg22'yi birleştirerek ekstraksiyon çözeltisi hazırlayın.Kuyucuklara 200 mikrolitre çıkarma çözeltisi ekleyin. Yazılımı başlatın ve yeni bir protokol oluşturmak veya mevcut bir protokolü kullanmak için deneyler düğmesine tıklayın. Plakayı ayarlamak için açılır penceredeki prosedürü tıklayın ve izlenecek plakadan kuyucukları seçin.Kinetik başlat'ı tıklatın ve deneysel gereksinimlere bağlı olarak çalışma zamanını 30 dakika veya daha uzun bir süreye ayarlayın. Okumaları mümkün olduğunca sık elde etmek için minimum aralığı seçin. Entegrasyon süresi için, sinyal yoğunluğuna bağlı olarak bir saniye veya daha uzun bir süre seçin.Ayarları onaylamak için doğrula'ya, ardından Tamam'a tıklayın, ardından açılır pencerede yeni plakayı algıla'ya tıklayın ve yazılımın yükleme plakası iletişim kutusunu sormasını bekleyin. Çift damıtılmış suyu, önceden işlenmiş dokuları içeren kuyucuklardan dikkatlice çıkarın, herhangi bir doku hasarını veya kurumasını önleyin. Dokuları içeren kuyucuklara 200 mikrolitre uyarma çözeltisi eklemek için çok kanallı bir pipet kullanın.Test edilecek plakayı taşıyıcıya yerleştirin ve algılamaya başlayın. Flg22 ile ROS'u indüklemek için yaprak diskler ve üç milimetre uzunluğunda kılıflar kullanıldı. ROS üretimi 35 dakika boyunca izlenir.Çubuklar, beş teknik tekrardan hesaplanan standart sapmaların araçlarını gösterir. Pirinçte, ROS üretimindeki artış ilk olarak bir ila iki dakika içinde tespit edildi, 10 ila 12 dakikada zirveye ulaştı ve yaklaşık 30 ila 35 dakika içinde taban çizgisine geri döndü. Toplam ROS miktarı eğriden hesaplandı.ROS değerlerinin toplam miktarını elde etmek için, oluşturulan toplam miktarı hesaplamak üzere formül toplamı uygulanarak birleştirilebilen her zaman aralığında oluşturulan ROS'u hesaplamak üzere formülü ilgili veri kümelerine uygulayın. Bir yaprak diskin tek bir deliği veya iki yarısı, 10 ila 12 saat boyunca 100 mikrolitre çift damıtılmış su ile önceden işlenmiş 96 kuyucuklu bir mikrotitrek plakanın kuyucuklarına yerleştirildi ve daha sonra ROS indüksiyonu için Flg22 ile muamele edildi. İki yarım disk örneğinden elde edilen okuma değerleri, tüm yaprak diskinden çok daha yüksektir.Ortalama olarak, iki yarım disk örneğinden elde edilen toplam değerler, numunelerin alanıyla değil, kenar uzunluğuyla orantılı olan tüm yaprak diskinden neredeyse 1,6 katıdır. Bu sonuç, ROS'un esas olarak yara bölgesindeki hücrelerde üretildiğini desteklemektedir. Bu prosedürü denerken, dokularla nazikçe çalışın ve bir veri varyasyonunun kaynağı olabilecek ekstra kesikler yapmayın.Bu yöntem, bitki dokularındaki diğer ROS üreten fizyolojik işlemlere uygulanabilir.

Research

JoVE Journal

Biology

Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila

Proboscis Extension Response PER Assay in Drosophila

Drosophila burnumun Eklenti Tepkisi (PER) Testi

Proboscis extension response (PER) is a taste behavior assay that has been used in flies as well as in honeybees.
On the surface of the fly's mouth ...

Detecting, Visualizing and Quantitating the Generation of Reactive Oxygen Species in an Amoeba Model System

Tespit, görselleştirme ve bir amip Model Sistemde reaktif oksijen türlerinin Üretimi nicelleştirilmesini

Reactive oxygen species (ROS) comprise a range of reactive and short-lived, oxygen-containing molecules, which are dynamically interconverted or ...

Real-time Imaging of Single Engineered RNA Transcripts in Living Cells Using Ratiometric Bimolecular Beacons

Oranlı metrik Bimoleküler Fenerleri kullanma Yaşam Hücrelerde Tek Engineered RNA Transkriptlerinin Gerçek zamanlı Görüntüleme

The growing realization that both the temporal and spatial regulation of gene expression can have important consequences on cell function has led to the ...

Enhanced Northern Blot Detection of Small RNA Species in Drosophila Melanogaster

Enhanced Northern Blot Detection of Small RNA Species in Drosophila Melanogaster

Küçük RNA Türlerin Northern Blot Algılama geliştirilmiş<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The last decades have witnessed the explosion of scientific interest around gene expression control mechanisms at the RNA level. This branch of molecular ...

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

Hydra Glutatyon kaynaklı Besleme Tepki Ölçüm

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...

Development of a Quantitative Recombinase Polymerase Amplification Assay with an Internal Positive Control

İç Pozitif Kontrol ile Kantitatif Recombinase Polimeraz Amplifikasyon Testi Geliştirme

It was recently demonstrated that recombinase polymerase amplification (RPA), an isothermal amplification platform for pathogen detection, may be used to ...

qPCRTag Analysis - A High Throughput, Real Time PCR Assay for Sc2.0 Genotyping

qPCRTag Analizi - A Yüksek Verimli, Sc2.0 Genotiplendirme için Real Time PCR Testi

The Synthetic Yeast Genome Project (Sc2.0) aims to build 16 designer yeast chromosomes and combine them into a single yeast cell. To date one synthetic ...

Stimulation of Stem Cell Niches and Tissue Regeneration in Mouse Skin by Switchable Protoporphyrin IX-Dependent Photogeneration of Reactive Oxygen Species In Situ

Fare Derisinde Kök Hücre Nişlerinin Uyarılması ve Doku Rejenerasyonu, Değiştirilebilir Protoporfirin IX'a Bağlı Reaktif Oksijen Türlerinin Fotojenerasyonu ile Yerinde

Here, we describe a protocol to induce switchable in vivo photogeneration of endogenous reactive oxygen species (ROS) in mouse skin. This transient ...

Real-Time Monitoring of Aurora kinase A Activation using Conformational FRET Biosensors in Live Cells

Aurora kinazının Gerçek Zamanlı İzlenmesi Canlı Hücrelerde Konformasyonsal FRET Biyosensörleri Kullanılarak Aktivasyon

Epithelial cancers are often hallmarked by the overexpression of the Ser/Thr kinase Aurora A/AURKA. AURKA is a multifunctional protein that activates upon ...