Name: agrobacterium tumefaciens-mediated genetic transformation of narrowleaf plantain
Uploaded: 2023-03-17T12:40:00
Duration: 7 min 50 s
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	<li>Koornneef, M., Meinke, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+Arabidopsis+as+a+model+plant.">The development of Arabidopsis as a model plant.</a> The Plant Journal. 61 (6), 909-921 (2010).</li><li>Bragg, J. N., Anderton, A., Nieu, R., Vogel, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brachypodium+distachyon.">Brachypodium distachyon.</a> Agrobacterium Protocols. , 17-33 (2015).</li><li>Chang, C., Bowman, J. L., Meyerowitz, E. 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K., Rajam, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+and+reliable+plant+regeneration+and+Agrobacterium-mediated+genetic+transformation+in+soybean+(Glycine+max+L).">Improved and reliable plant regeneration and Agrobacterium-mediated genetic transformation in soybean (Glycine max L).</a> Journal of Crop Science and Biotechnology. , 1-10 (2022).</li><li>Bakhsh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+efficient,+reproducible+and+stable+Agrobacterium-mediated+genetic+transformation+of+five+potato+cultivars.">Development of efficient, reproducible and stable Agrobacterium-mediated genetic transformation of five potato cultivars.</a> Food Technology and Biotechnology. 58 (1), 57-63 (2020).</li><li>Bates, R., Craze, M., Wallington, E. 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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+phenotypic+and+genotypic+variations+of+Plantago+ciliata+in+Ha'il+region,+Saudi+Arabia.">Assessing the phenotypic and genotypic variations of Plantago ciliata in Ha'il region, Saudi Arabia.</a> Entomology and Applied Science Letters. (1), 14-22 (2021).</li><li>Coleman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plantago+Lanceolata.">Plantago Lanceolata.</a> Botanical Bulletin. 1 (11), 45 (1876).</li><li>Huang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+transcriptomic+profiling+of+Plantago+major+provides+insights+for+the+involvement+of+vasculature+in+phosphate+deficiency+responses.">Tissue-specific transcriptomic profiling of Plantago major provides insights for the involvement of vasculature in phosphate deficiency responses.</a> Molecular Genetics and Genomics. 294 (1), 159-175 (2019).</li><li>Penczykowski, R. M., Sieg, R. 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A collection of expressed sequence tags from vascular tissue and a simple and efficient transformation method.</a> Plant Physiology. 142 (4), 1427-1441 (2006).</li><li>Bergero, R., Levsen, N., Wolff, K., Charlesworth, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arms+races+with+mitochondrial+genome+soft+sweeps+in+a+gynodioecious+plant,+Plantago+lanceolata.">Arms races with mitochondrial genome soft sweeps in a gynodioecious plant, Plantago lanceolata.</a> Molecular Ecology. 28 (11), 2772-2785 (2019).</li><li>Aalto, E. A., Koelewijn, H. P., Savolainen, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoplasmic+male+sterility+contributes+to+hybrid+incompatibility+between+subspecies+of+Arabidopsis+lyrata.">Cytoplasmic male sterility contributes to hybrid incompatibility between subspecies of Arabidopsis lyrata.</a> G3: Genes, Genomes, Genetics. 3 (10), 1727-1740 (2013).</li><li>Bloch, K. D., Grossmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digestion+of+DNA+with+restriction+endonucleases.">Digestion of DNA with restriction endonucleases.</a> Current Protocols in Molecular Biology. 3 (1), (1995).</li><li>Du, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prokaryotic+expression,+purification,+physicochemical+properties+and+antifungal+activity+analysis+of+phloem+protein+PP2-A1+from+cucumber.">Prokaryotic expression, purification, physicochemical properties and antifungal activity analysis of phloem protein PP2-A1 from cucumber.</a> International Journal of Biological Macromolecules. 194, 395-401 (2022).</li><li>Deshmukh, S. 2. 2., Kulkarni, R., Bose, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transformation+and+protein+expression.">Transformation and protein expression.</a> Textbook on Cloning, Expression and Purification of Recombinant Proteins. , 83-114 (2022).</li><li>Bergkessel, M., Guthrie, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colony+PCR.">Colony PCR.</a> Methods in Enzymology. 529, 299-309 (2013).</li><li>Broehan, G., Kroeger, T., Lorenzen, M., Merzendorfer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+analysis+of+the+ATP-binding+cassette+(ABC)+transporter+gene+family+of+Tribolium+castaneum.">Functional analysis of the ATP-binding cassette (ABC) transporter gene family of Tribolium castaneum.</a> BMC Genomics. 14, 6 (2013).</li><li>Dong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+transformation+of+fluorescent+proteins+into+Nosema+bombycis+by+electroporation.">Stable transformation of fluorescent proteins into Nosema bombycis by electroporation.</a> Parasites &amp; Vectors. 15 (1), 141 (2022).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+Agrobacterium-mediated+transformation+in+soybean.">Optimization of Agrobacterium-mediated transformation in soybean.</a> Frontiers in Plant Science. 8, 246 (2017).</li><li>Manimaran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+of+early+and+young+callus+tissues+of+indica+rice+BPT+5204+enhances+regeneration+and+transformation+efficiency.">Infection of early and young callus tissues of indica rice BPT 5204 enhances regeneration and transformation efficiency.</a> Rice Science. 20 (6), 415-426 (2013).</li><li>Wang, J., Nie, J., Pattanaik, S., Yuan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+Agrobacterium-mediated+transformation+of+Artemisia+annua+L.+using+young+inflorescence.">Efficient Agrobacterium-mediated transformation of Artemisia annua L. using young inflorescence.</a> In Vitro Cellular &amp; Developmental Biology-Plant. 52 (2), 204-211 (2016).</li><li>Niazian, M., Belzile, F., Torkamaneh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR/Cas9+in+planta+hairy+root+transformation:+a+powerful+platform+for+functional+analysis+of+root+traits+in+soybean.">CRISPR/Cas9 in planta hairy root transformation: a powerful platform for functional analysis of root traits in soybean.</a> Plants. 11 (8), 1044 (2022).</li><li>Geng, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+root+transformation+system+for+CRISPR/Cas9-based+analyses+of+shoot-root+communication+in+cucurbit+crops.">An efficient root transformation system for CRISPR/Cas9-based analyses of shoot-root communication in cucurbit crops.</a> Horticulture Research. 9, (2022).</li><li>Xiao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+Agrobacterium-mediated+genetic+transformation+using+cotyledons,+hypocotyls+and+roots+of+'Duli'(Pyrus+betulifolia+Bunge).">Efficient Agrobacterium-mediated genetic transformation using cotyledons, hypocotyls and roots of 'Duli'(Pyrus betulifolia Bunge).</a> Scientia Horticulturae. 296, 110906 (2022).</li></ol>

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।

जीनस प्लांटागो में पौधों के लिए एक परिवर्तन प्रोटोकॉल की कमी इन पौधों के उपयोग को मॉडल के रूप में सीमित करती है, खासकर जब शोधकर्ता जीन कार्यों की खोज में रुचि रखते हैं। लांसोलाटा को आनुवंशिक परिवर्तन प्रोटोकॉल विकसित करने के लिए चुना गया था क्योंकि यह अपने जीनस16 का सबसे अधिक अध्ययन किया जाने वाला पौधा है। जो प्रोटोकॉल विकसित किया गया है, उसका उपयोग संवहनी जीव विज्ञान, पारिस्थितिकी, पौधे-कीट इंटरैक्शन और अजैविक तनाव शरीर विज्ञान से संबंधित अध्ययनों को आगे बढ़ाने के लिए एक उपकरण के रूप में किया जाएगा।
प्रस्तुत प्रोटोकॉल स्पष्ट रूप से उन चरणों को रेखांकित करता है जो उपयोगकर्ता को ट्रांसजेनिक पौधों को प्राप्त करने की अनुमति देते हैं। एक ऊतक संस्कृति वातावरण में पनपने के लिए पी लांसोलाटा की क्षमता के अलावा, कई कारकों ने हमारी परिवर्तन विधि की सफलता में योगदान दिया। सबसे पहले, परिवर्तन के लिए उच्च गुणवत्ता वाले, बाँझ पौधे की जड़ ऊतक का उपयोग करने का महत्व देखा गया था। जड़ों में उच्चतम परिवर्तन दर थी जब उन्हें 3-4 सप्ताह पुराने पौधों से लिया गया था, और हरे या हल्के सफेद दिखाई दिए थे। बैक्टीरिया या फंगल संदूषण की किसी भी मात्रा के साथ बक्से से ली गई जड़ें अक्सर दूषित शूटिंग संस्कृतियों के परिणामस्वरूप होती हैं, और भूरे रंग की दिखाई देने वाली पुरानी जड़ें सफल परिवर्तन का परिणाम नहीं देती हैं। जड़ ऊतक वर्तमान विधि का उपयोग करके परिवर्तन के लिए सबसे कुशल ऊतक प्रकार था, क्योंकि पत्ती और पेटियोल ऊतक शूट विकसित करने में असफल रहे थे।
एक और महत्वपूर्ण अवलोकन यह था कि परिवर्तन के लिए जड़ ऊतक एकत्र करने का इष्टतम तरीका बाँझ पानी में ताजा कटी हुई जड़ सामग्री रखना था। इस कदम ने प्रभावी रूप से जड़ सामग्री को हाइड्रेटेड रहने की अनुमति दी, जबकि शेष ऊतक एकत्र किया गया था, क्योंकि जड़ें अपने विकास कंटेनरों से हटाए जाने पर जल्दी से सूख जाती हैं। इस कदम ने परिवर्तन की सफलता दर को बढ़ाने में भी मदद की, क्योंकि इसने एक समय में बैक्टीरिया में अधिक जड़ों को इनक्यूबेट करने की अनुमति दी।
इस प्रोटोकॉल को उस समय को कम करके संशोधित किया जा सकता है जो जड़ ऊतक सह-संस्कृति मीडिया में 2 दिनों तक सेते हैं। यह देखा गया कि 2 या 3 दिन की इनक्यूबेशन अवधि संक्रमण की अनुमति देने के लिए पर्याप्त है जिसके परिणामस्वरूप शूट आद्याक्षर होते हैं। हालांकि, लंबे समय तक इनक्यूबेशन समय की सिफारिश नहीं की जाती है, क्योंकि यह देखा गया था कि मीडिया में एंटीबायोटिक अवरोधक की अनुपस्थिति के परिणामस्वरूप अक्सर ए ट्यूमेफेसियन्स अतिवृद्धि होती है , जो उभरते ऊतक को मार सकती है।
इस अध्ययन की एक सीमा तुलना के लिए पी. लांसोलाटा परिवर्तन में ए. टुमेफेसियन्स के अन्य तरीकों या प्रजातियों के प्रदर्शन पर उपलब्ध आंकड़ों की कमी है। हमारी जानकारी के लिए, यह प्रोटोकॉल नया है। प्रारंभिक परीक्षणों के दौरान, ए. टुमेफेसिएन्स जीवी 3101 के साथ एक उच्च परिवर्तन दक्षता का उल्लेख किया गया था, और हमने अन्य उपभेदों के साथ प्रयोग करने के बजाय इस तनाव का उपयोग करके तकनीक को परिष्कृत करने पर ध्यान केंद्रित किया। पौधे परिवर्तन के लिए 20% की हमारी परिवर्तन दक्षता अपेक्षाकृत अधिक है- कई पारंपरिक तरीके किसी भी चीज़ को सफल मानते हैं >1% सफल 26,27,28। हालांकि, ए. टुमेफेसिएन्स के एक अन्य तनाव का उपयोग करना, जैसे कि ए राइजोजेन्स, जो कई प्रजातियों 29,30,31 में जड़ परिवर्तन में इसके उपयोग के लिए जाना जाता है, के परिणामस्वरूप और भी अधिक सफलता दर हो सकती है। पी लांसोलाटा में बढ़ी हुई परिवर्तन दक्षता को बढ़ावा देने के लिए अन्य उपभेदों का उपयोग करने के प्रभाव का आकलन करने के लिए आगे के प्रयोग की आवश्यकता होगी।
लांसोलाटा के सफल परिवर्तन से अध्ययन के कई क्षेत्रों को लाभ होगा। उच्च परिवर्तन दक्षता, और ऊतक संवर्धन मीडिया में पौधे की तेजी से वृद्धि, पी लांसोलाटा को जीन फ़ंक्शन अध्ययन15 के लिए एक व्यवहार्य उम्मीदवार बनाती है।

पौधों के जीव विज्ञान के कई पहलुओं की जांच के लिए मॉडल प्रजातियों का उपयोग करने की अवधारणा एराबिडोप्सिस थैलियाना1 के व्यापक उपयोग के साथ उभरी। एराबिडोप्सिस को शुरू में चुना गया था क्योंकि यह कई अन्य फूलों के पौधों के साथ विशेषताओं को साझा करता है और इसमें कई लक्षण होते हैं जो प्रयोगशाला वातावरण में अध्ययन करना सुविधाजनक बनाते हैं, जैसे कि छोटा होना और छोटी पीढ़ी का चक्र होना। एक विषय के रूप में इसके साथ प्रकाशित शोध पत्रों की बड़ी मात्रा, इसके छोटे जीनोम आकार और आनुवंशिक परिवर्तनमें आसानी के साथ, इसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले प्रयोगात्मक जीव के रूप में बने रहने में सक्षम बनाती है। हालांकि, एराबिडोप्सिस को विभिन्न विशेषताओं या अद्वितीयलक्षणों वाली प्रजातियों के लिए एक मॉडल के रूप में सीमित किया जा सकता है। इसने नए मॉडल सिस्टम के विकास को प्रेरित किया है, जैसे कि मक्का (ज़िया मेस), मोनोकोट4 में विकासात्मक आनुवंशिकी के लिए एक महत्वपूर्ण पौधा, और टमाटर (सोलनम लाइकोपर्सिकम), जो विकासवादी अध्ययन, फल विकास और उत्पादन के लिए एक महत्वपूर्ण मॉडल है, और सब्जीफसलों के लिए एक अच्छा प्रतिनिधित्व है। आनुवंशिक परिवर्तन के लिए एक विधि एक पौधे की प्रजातियों के लिए एक मॉडल जीव के रूप में सेवा करने के लिए एक शर्त है। एक एग्रोबैक्टीरियम ट्यूमेफेसियंस-मध्यस्थता परिवर्तन पौधे जीव विज्ञान में एक विश्वसनीय उपकरण है; इसका उपयोग कुछ मॉडल प्रजातियों और प्रमुख फसलों को बदलने के लिए किया गया है, जिसमें तंबाकू (निकोटियाना टैबाकम) 6, चावल (ओरीज़ा सैटिवा) 7, कपास (गोसिपियम हिरसुटम) 8, सोयाबीन (ग्लाइसिन मैक्स)9, आलू (सोलनम ट्यूबरोसम) 10, और कैनोला (ब्रासिका नेपस)11 शामिल हैं। पौधों की प्रजातियां अत्यधिक परिवर्तनशील होती हैं कि वे ए. टुमेफेसिएन्स संक्रमण का कितनी सफलतापूर्वक जवाब देते हैं, और परिवर्तन प्रोटोकॉल को अक्सर प्रत्येक प्रजाति 6,12 के लिए व्यक्तिगत रूप से तैयार करने की आवश्यकता होती है।
जीनस प्लांटागो में कुल 256 पौधों की प्रजातियां शामिल हैं, जो दुनिया भर में व्यापक रूप से वितरितहैं। इस जीनस की प्रजातियों में अक्सर अनूठी विशेषताएं होती हैं जो उन्हें आनुवंशिकी, पारिस्थितिकी, तनाव शरीर विज्ञान, माध्यमिक मेटाबोलाइट्स, औषधीय रसायन विज्ञान, पौधे-माइक्रोब इंटरैक्शन, पौधे के विकास और विकास के अध्ययन के लिए मॉडल प्रजातियों के रूप में वांछनीय बनाती हैं। प्लांटागो लांसोलाटा, जिसे नैरोलीफ या रिबवर्ट प्लांटेन भी कहा जाता है, 19वीं शताब्दी के बाद से रुचि का एक लोकप्रिय पौधा रहा है, जब इसका उपयोग पहली बार पुरुष बाँझपन14 की घटना का वर्णन करने के लिए किया गया था। इसके जीनस के अन्य पौधों की तरह, इसका उपयोग विभिन्न अनुसंधान क्षेत्रों में अध्ययन में किया गया है। हाल ही में, इसे संवहनी जीव विज्ञान के लिए एक मॉडल के रूप में प्रस्तावित किया गया है, क्योंकि इसके संवहनी ऊतक को आसानी से एकत्र किया जा सकताहै। लांसोलाटा जीनस प्लांटागो में सबसे अधिक अध्ययन की जाने वाली प्रजाति है; 2021 के एक लेख में बताया गया है कि उस समय16 > इस प्रजाति सहित या उससे संबंधित > 1,400 प्रकाशन थे, और 9 दिसंबर 2022 को किए गए PubMed खोज के अनुसार, 2022 की शुरुआत से अतिरिक्त 102 लेख प्रकाशित किए गए हैं। जीनस में अगला सबसे अधिक अध्ययन किया गया पौधा, पी मेजर, एक ही तारीख पर समान मानदंडों का उपयोग करके खोजे जाने पर केवल 414 लेखों का विषय है।
लांसोलाटा में अनुसंधान रुचि के बावजूद, अध्ययन, विशेष रूप से जीन फ़ंक्शन लक्षण वर्णन पर, अक्सर प्रजातियों के लिए आनुवंशिक हेरफेर टूलकिट की कमी से सीमित होते हैं। पोमेरिनिग एट अल ने पुष्प डिप तकनीक17 का उपयोग करके पी मेजर के लिए एक परिवर्तन प्रोटोकॉल विकसित करने के प्रयास किए। हालांकि, इस प्रजाति18,19 की नर बाँझपन विशेषता के कारण इस विधि को पी लांसोलाटा पर लागू नहीं किया जा सकता है। हमारे ज्ञान के लिए, पी लांसोलाटा के परिवर्तन के लिए कोई मौजूदा प्रोटोकॉल नहीं है।
यह अध्ययन पी. लांसोल्टा के ए. टुमेफेसिएन्स-मध्यस्थता परिवर्तन के लिए एक सरल प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है। जड़ ऊतकों को लक्षित करके, पूरी तरह से विकसित ट्रांसजेनिक पौधों को परिवर्तन के 3 महीने के भीतर उत्पन्न किया जा सकता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>14 mL Round Bottom TubeA4A2:A34</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>150268</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-Naphthylacetic acid</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>N-780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3M Micropore Surgical Paper Tape</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>19-027761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Centrifuge Tubes</td>
			<td>Research Products International Corp.</td>
			<td>163227LC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>600 Watt High Pressure Sodium Lights</td>
			<td>Plantmax</td>
			<td>PX-LU600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-Benzylaminopurine (6-BAP)</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>B-110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminum Foil&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>01-213-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Agar&#160;</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>214010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Binary Plasmid pBI101</td>
			<td>Clontech, USA&#160;</td>
			<td>632522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cool White Grow Light Sylvania LLC</td>
			<td>Home Depot</td>
			<td>315952205</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-biotin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>BP232-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ddH2O</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DH5a E. coli&#160;</td>
			<td>Invitrogen, USA&#160;</td>
			<td>18258012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Petri Dishes, Sterile 150 x 16 mm</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Petri Dishes, Sterile 95 x 15 mm</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>FB0875714G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Scissors</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>38DI12044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 200 Proof</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>2705</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Folic Acid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2519-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>38DI18031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelrite</td>
			<td>Research Products International Corp.</td>
			<td>G35020-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>17904</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>241261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubated Tabletop Orbital Shaker</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>SHKE420HP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Indole-3-Acetic Acid (IAA)</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>I-110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Indole-3-Butyric Acid (IBA)</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>I-180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin Monosulfate</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>K-120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Macrocentrifuge&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>75007210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magenta Boxes</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>50255176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Pipet Tips 1000 &#181;L</td>
			<td>Corning</td>
			<td>4140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Pipet Tips 200 &#181;L</td>
			<td>Corning</td>
			<td>4138</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Pipette Tips 10 &#181;L</td>
			<td>Corning</td>
			<td>4135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>75002410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipettor 0.5-10 &#181;L</td>
			<td>Corning</td>
			<td>4071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipettor 100-1000 &#181;L</td>
			<td>Corning</td>
			<td>4075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipettor 20-200 &#181;L</td>
			<td>Corning</td>
			<td>4074</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipettor 2-20 &#181;L</td>
			<td>Corning</td>
			<td>4072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murashige &#38; Skooge Basal Medium with Vitamins</td>
			<td>PhytoTech</td>
			<td>M519</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murashige &#38; Skooge Basal Salt Mixture</td>
			<td>PhytoTech</td>
			<td>M524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>myo-Inositol</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>I-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N0761-100g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm (paraffin film)&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>S37440</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Hydroxide (KOH)</td>
			<td>Research Products International Corp.</td>
			<td>P44000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridoxine HCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6280-10g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade Handle</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>38DI36419</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blades</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>3802181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride, Crystal (NaCl)</td>
			<td>Mallinckrodt Chemicals</td>
			<td>7581-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide (NaOH)</td>
			<td>Research Products International Corp.</td>
			<td>S24000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hypochlorite</td>
			<td>Walmart</td>
			<td>23263068401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soil- Bark Mix</td>
			<td>Berger, USA</td>
			<td>BM7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Square Pots (3.5 inches squared)</td>
			<td>Greenhouse Megastore</td>
			<td>CN-TRK-1835</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Research Products International Corp.</td>
			<td>S24060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermocycler</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A24811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiamine HCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4625-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Timentin Ticarcillin/Clavulanate (15/1) (Timentin)</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>T-104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trans-Zeatin Riboside (ZR)</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>Z-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>211705</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wild Type Plantago lanceolata seeds</td>
			<td>Outsidepride Seed Source, OR, USA</td>
			<td>F1296</td>
			<td>Outsidepride.com</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract Granulated</td>
			<td>Research Products International Corp.</td>
			<td>Y20025-1000&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

agrobacterium tumefaciens-mediated genetic transformation of narrowleaf plantain

जीनस प्लांटागो में प्रजातियों में कई अद्वितीय लक्षण हैं जिनके कारण उन्हें अध्ययन के विभिन्न क्षेत्रों में मॉडल पौधों के रूप में अनुकूलित किया गया है। हालांकि, आनुवंशिक हेरफेर प्रणाली की कमी जीन फ़ंक्शन की गहन जांच को रोकती है, एक मॉडल के रूप में इस जीनस की बहुमुखी प्रतिभा को सीमित करती है। यहां, प्लांटागो लांसोलाटा के लिए एक परिवर्तन प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया गया है, जो सबसे अधिक अध्ययन की जाने वाली प्लांटागो प्रजातियां हैं। एग्रोबैक्टीरियम ट्यूमेफेसियन्स-मध्यस्थता परिवर्तन का उपयोग करते हुए, सड़न से विकसित पी. लांसोलाटा पौधों की 3 सप्ताह पुरानी जड़ों को बैक्टीरिया से संक्रमित किया गया, 2-3 दिनों के लिए इनक्यूबेट किया गया, और फिर उचित एंटीबायोटिक चयन के साथ शूट प्रेरण माध्यम में स्थानांतरित कर दिया गया। शूट आमतौर पर 1 महीने के बाद माध्यम से उभरे, और अंकुरों को रूट इंडक्शन माध्यम में स्थानांतरित करने के 1-4 सप्ताह बाद जड़ें विकसित हुईं। पौधों को तब मिट्टी के वातावरण में अनुकूलित किया गया था और β-ग्लुकुरोनिडेस (जीयूएस) रिपोर्टर परख का उपयोग करके ट्रांसजीन की उपस्थिति के लिए परीक्षण किया गया था। वर्तमान विधि की परिवर्तन दक्षता ~ 20% है, जिसमें प्रति 10 जड़ ऊतकों में दो ट्रांसजेनिक पौधे उभर रहे हैं। नैरोलीफ प्लांटेन के लिए एक परिवर्तन प्रोटोकॉल स्थापित करने से विभिन्न क्षेत्रों में इस पौधे को एक नई मॉडल प्रजाति के रूप में अपनाने की सुविधा मिलेगी।

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Agrobacterium tumefaciens-Mediated Genetic Transformation of Narrowleaf Plantain

अध्ययन के विभिन्न क्षेत्रों में एक मॉडल प्रजाति के रूप में इसके बहुमुखी अनुप्रयोग के कारण, नैरोलीफ प्लांटेन (प्लांटागो लांसोल्टा) में आनुवंशिक परिवर्तन टूलकिट की आवश्यकता है। यहां, एग्रोबैक्टीरियम ट्यूमेफेसिएन्स-मध्यस्थता परिवर्तन का उपयोग करके, एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया जाता है जिसके परिणामस्वरूप 20% की परिवर्तन दक्षता के साथ स्थिर ट्रांसजेनिक लाइनें होती हैं।

एग्रोबैक्टीरियम ट्यूमेफेसिएन्स-नैरोलीफ प्लांटेन का आनुवंशिक परिवर्तन

Species in the genus Plantago have several unique traits that have led to them being adapted as model plants in various fields of study. However, the lack ...

प्लांटागो प्रजातियों का उपयोग पौधे संवहनी जीव विज्ञान और तनाव शरीर विज्ञान के लिए मॉडल पौधों के रूप में किया जा सकता है। एक परिवर्तन प्रोटोकॉल की स्थापना जीन और उनके संबंधित फेनोटाइप के बीच संबंधों का पता लगाने के लिए इन पौधों पर गहन अध्ययन को सक्षम बनाती है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह उच्च दक्षता के साथ संकीर्ण पत्ती प्लांटेन को बदलने के लिए खाद्य पदार्थों का उपयोग खोज के रूप में करता है।शुरू करने के लिए, व्यावसायिक रूप से उपलब्ध जंगली प्रकार के प्लांटागो लांसोलाटा बीजों को वांछित पौधों की संख्या के आधार पर 5 मिलीलीटर सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में 5 मिलीलीटर निशान तक रखें। बीज को 60 सेकंड के लिए 75% इथेनॉल में डुबोएं। इथेनॉल को त्यागने के बाद, बीज को ताजा तैयार 20% सोडियम हाइपोक्लोराइट में 40 मिनट के लिए धीरे से ट्यूब को मोड़कर डुबोएं।लैमिनेट प्रवाह हुड के नीचे, सोडियम हाइपोक्लोराइट घोल को छोड़ दें, फिर आसुत पानी से बीज को पांच बार धोएं। अंतिम कुल्ला के बाद बीज में पानी की एक छोटी मात्रा जोड़ें, क्योंकि इससे प्लेटों पर पौधों के आंदोलन में सहायता मिल सकती है। बाँझ बल का उपयोग करके, बीज को ठोस एमएस माध्यम के साथ एक पूर्व-तैयार पेट्री डिश पर स्थानांतरित करें, बीज को प्लेट की सतह पर समान रूप से फैलाकर, प्रत्येक बीज के बीच लगभग 1 सेंटीमीटर ताकि अंकुरित रोपाई की भीड़भाड़ को रोका जा सके।संदूषण को रोकने के लिए पैराफिन फिल्म की दो परतों के साथ प्लेट को सील करें और कमरे के तापमान पर एक शांत सफेद विकास प्रकाश के तहत इनक्यूबेट करें। एक बार अंकुर अंकुरित हो जाने के बाद और स्थानांतरित करने के लिए पर्याप्त बड़े होते हैं, आमतौर पर अंकुरण के दो या तीन दिनों के बाद, बाँझ बल का उपयोग करें और रोपाई को 50 से 100 मिलीलीटर एमएस मीडियम वाले बाँझ बक्से में स्थानांतरित करें। सर्जिकल टेप के साथ बक्से को सील करें, और पौधों को लगभग तीन से चार सप्ताह तक शांत सफेद विकास प्रकाश के तहत बढ़ने दें।स्ट्रीक एग्रोबैक्टीरियम ट्यूमेफेसियंस जिसमें उपयुक्त चयन एजेंट के साथ तैयार ठोस एलबी प्लेट पर वांछित प्लास्मिड होता है। पैराफिन सील प्लेट को 28 डिग्री सेल्सियस पर 48 घंटे तक के लिए इनक्यूबेट करें, या जब तक कि बैक्टीरिया चुनने के लिए पर्याप्त बड़ा न हो जाए। इनक्यूबेशन के बाद, परिवर्तन से दो दिन पहले पिपेट टिप का उपयोग करके एक बैक्टीरिया कॉलोनी चुनें, और इसे उपयुक्त चयन एजेंट के साथ छह मिलीलीटर तरल एलबी युक्त 15 मिलीलीटर गोल तल ट्यूब में टीका लगाएं।रात भर 28 डिग्री सेल्सियस टेबलटॉप शेकर में 200 आरपीएम पर हिलाएं, जब तक कि ओडी 600 0.6 से 0.7 तक नहीं पहुंच जाता। एक बार जब बैक्टीरिया आवश्यक ओडी तक पहुंच जाता है, तो चयन एजेंट के साथ 100 मिलीलीटर एलबी युक्त बाँझ फ्लास्क में बैक्टीरिया संस्कृति के 200 माइक्रोलीटर स्थानांतरित करें। रात भर 28 डिग्री सेल्सियस पर 200 आरपीएम पर हिलाएं।फिर बैक्टीरिया को 50 मिलीलीटर बाँझ सेंट्रीफ्यूज ट्यूबों में स्थानांतरित करें, और बैक्टीरिया को इकट्ठा करने के लिए कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए 2,200 जी पर सेंट्रीफ्यूज करें। सतह पर तैरने वाले को त्याग दें और पाइपिंग द्वारा कमरे के तापमान पर ताजा तैयार निलंबन समाधान या एसएस के पांच मिलीलीटर में जीवाणु गोली को फिर से निलंबित करें। फिर 50 मिलीलीटर निशान तक अधिक एसएस जोड़ें और कई बार मिश्रण करने के लिए इनवर्ट करें।एक बार जब पौधे परिवर्तन के लिए आदर्श चरण तक पहुंच जाते हैं, तो लगभग तीन सप्ताह में, पौधे से जड़ों को अलग करने और पत्ती और स्टेम सामग्री को त्यागने के लिए बाँझ बल और कैंची का उपयोग करें। काटने के तुरंत बाद, जड़ के टुकड़ों को हाइड्रेटेड रखने के लिए बल का उपयोग करके बाँझ पानी वाले बक्से में स्थानांतरित करें। इसके बाद, एसएस निलंबित एग्रोबैक्टीरियम ट्यूमेफेसियंस बैक्टीरियल कल्चर को बाँझ 150 बाय 15 मिलीमीटर डिस्पोजेबल पेट्री व्यंजनों में डालें।कटी हुई जड़ों को जीवाणु संस्कृति में स्थानांतरित करें और कम से कम 20 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें। इनक्यूबेशन दौरान, जड़ों को पार्श्व जड़ों से अलग करने वाले एक सेंटीमीटर टुकड़ों में जड़ों को काटने के लिए एक तेज ब्लेड के साथ बाँझ स्केलपेल का उपयोग करें। फिर जड़ों की सतह पर पतले उथले कट बनाएं ताकि बैक्टीरिया पौधे को संक्रमित कर सकें।इनक्यूबेशन के बाद, अतिरिक्त बैक्टीरिया को हटाने के लिए जड़ के टुकड़ों को बाँझ पेपर तौलिए में स्थानांतरित करें। फिर जड़ों के आकार के आधार पर प्रति प्लेट लगभग 10 से 20 जड़ें ठोस सह-संस्कृति मीडिया वाले तैयार पेट्री व्यंजनों में सूखे जड़ों को स्थानांतरित करें। प्लेटों को पारदर्शी प्लास्टिक फिल्म की दो परतों के साथ सील करें और फिर एल्यूमीनियम पन्नी के साथ तीन दिनों के लिए कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट करें।तीन दिनों के इनक्यूबेशन के बाद। सह-संस्कृति मीडिया में, रूट टुकड़ों को ठोस शूट इंडक्शन मीडिया या सिम के साथ तैयार पेट्री व्यंजनों में 500 मिलीग्राम प्रति लीटर टेमेटिन और उचित एंटीबायोटिक चयन के साथ स्थानांतरित करें। पारदर्शी प्लास्टिक फिल्म सील प्लेटों को एक महीने के लिए या जब तक शूट उभरना शुरू न हो जाए, तब तक ग्रो लाइट के तहत इनक्यूबेट करें।एक बार प्लांटलेट 1.5 से 2.0 सेंटीमीटर लंबे हो जाते हैं। उन्हें तैयार बाँझ बक्से में स्थानांतरित करें। ठोस रूट प्रेरण मीडिया के साथ।जड़ों के बनने तक पौधों को कई हफ्तों तक एक बढ़ते प्रकाश के तहत उगाएं। आमतौर पर, एक सप्ताह के बाद, जब जड़ प्रणाली आमतौर पर विकास के एक महीने बाद स्थानांतरित करने के लिए पर्याप्त बड़ी हो जाती है, तो पौधे को लें और जड़ों से चिपकने वाले किसी भी माध्यम को हटाने के लिए धीरे से जड़ों को पानी से धोएं। फिर पौधों को 3.5 इंच वर्गाकार बर्तनों में स्थानांतरित करें, जिसमें पहले से गीली ऑल-पर्पस मिट्टी बीएम सात पौधों को प्लास्टिक पॉटिंग कवर के साथ कवर करें और फिर एक स्पष्ट प्लास्टिक बैग के साथ यह सुनिश्चित करें कि पौधे आर्द्र वातावरण में रहें।इस विधि का परीक्षण जड़ पत्ती और छोटे पुराने ऊतक पर किया गया था। प्रारंभिक प्रयोग में, हालांकि सभी ऊतक प्रकारों में संवेदनाहीन को प्रेरित किया जा सकता है, केवल जड़ ऊतक ने सिम में एक महीने के बाद शूट आद्याक्षर का उत्पादन किया, पत्ती और पेडल भूरे रंग के हो गए और मर गए। रूपांतरित ऊतक से उभरने वाले शूट आद्याक्षरों की प्रगति पहले दिन से देखी गई थी।जड़ों को सिम पर रखा गया था जब शूट रूट होने के लिए तैयार थे। एक सप्ताह के बाद, जड़ ऊतक ने शूट इनिशियल्स की शुरुआत में एक संवेदनाहीनता का गठन किया, जिसे देखा जा सकता है। दो और तीन सप्ताह के दौरान शूट उभरते रहे और चार सप्ताह के बाद, शूट रूट इंडक्शन माध्यम में स्थानांतरित होने के लिए तैयार थे।दंडात्मक ट्रांसजेनिक पौधों की पहचान बीटा ग्लूकुरोनिडेस जीयूएस हिस्टोकेमिकल परख का उपयोग करके की गई थी, जिसमें एक बार शूट लगभग 0.5 सेंटीमीटर लंबा होने के बाद ली गई पत्ती खंडों का उपयोग किया गया था। खाली वैक्टर के साथ परिवर्तन में जंगली प्रकार कोई धुंधला पैटर्न नहीं दिखाते हैं। जीयूएस जीन की अनुपस्थिति के कारण, बीटा ग्लूकुरोनिडेज़ जीयूएस जीन के साथ परिवर्तन ने नसों में एक स्पष्ट नीला धुंधला पैटर्न दिखाया, जो पुष्टि करता है कि पौधे ट्रांसजेनिक जड़ें हैं, जिन्हें हमेशा हाइड्रेटेड रखा जाना चाहिए ताकि प्रक्रिया के दौरान सूखने से रोका जा सके।

Research

JoVE Journal

Biology

Agrobacterium tumefaciens-Mediated Genetic Transformation of Narrowleaf Plantain

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

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प्रारंभिक चिकी भ्रूण पूर्व vivo (नई संस्कृति) की संस्कृति के लिए विधि

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

प्रारंभिक चिकी भ्रूण के स्वस्थानी संकरण में डबल पूरा पर्वत

Agrobacterium-Mediated Virus-Induced Gene Silencing Assay In Cotton

Agrobacterium की मध्यस्थता वायरस प्रेरित कपास जीन का मुंह बंद परख

Cotton (Gossypium hirsutum) is one of the most important crops worldwide. Considerable efforts have been made on molecular breeding of new varieties.  The ...

Optimization and Utilization of Agrobacterium-mediated Transient Protein Production in Nicotiana

Optimization and Utilization of Agrobacterium-mediated Transient Protein Production in Nicotiana

अनुकूलन और की उपयोगिता<em&gt; Agrobacterium</emमें&gt; मध्यस्थता क्षणिक प्रोटीन उत्पादन<em&gt; निकोटियाना</em

Agrobacterium-mediated transient protein production in plants is a promising approach to produce vaccine antigens and therapeutic proteins within a short ...

DNA Electroporation, Isolation and Imaging of Myofibers

डीएनए इलेक्ट्रोपोरेशन, Myofibers के अलगाव और इमेजिंग

Mature muscle has a unique structure that is amenable to live cell imaging. Herein, we describe the experimental protocol for expressing fluorescently ...

Agrobacterium-Mediated Immature Embryo Transformation of Recalcitrant Maize Inbred Lines Using Morphogenic Genes

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एग्रोबैक्टीरियम-मध्यस्थ मक्का इंनस्ल लाइनों के एग्रोबैक्टीरियम -मध्यस्थता अपरिपक्व भ्रूण परिवर्तन मॉर्फोजेनिक जीन का उपयोग कर

Demonstrated here is a detailed protocol for Agrobacterium-mediated genetic transformation of maize inbred lines using morphogenic genes Baby boom (Bbm) ...

Preparing and Injecting Embryos of Culex Mosquitoes to Generate Null Mutations using CRISPR/Cas9

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CRISPR/Cas9 का उपयोग करके नल उत्परिवर्तन उत्पन्न करने के लिए क्यूलेक्स मच्छरों के भ्रूण तैयार करना और इंजेक्शन लगाना

Culex mosquitoes are the major vectors of several diseases that negatively impact human and animal health including West Nile virus and diseases caused by ...

Agrobacterium-Mediated Genetic Transformation, Transgenic Production, and Its Application for the Study of Male Reproductive Development in Rice

Agrobacterium-Mediated Genetic Transformation, Transgenic Production, and Its Application for the Study of Male Reproductive Development in Rice

एग्रोबैक्टीरियम-मध्यस्थता आनुवंशिक परिवर्तन, ट्रांसजेनिक उत्पादन, और चावल में पुरुष प्रजनन विकास के अध्ययन के लिए इसका आवेदन

Male sterility is an important agronomic trait for hybrid seed production that is usually characterized by functional defects in male reproductive ...

One-Step Hairy Root Transformation Method for Advancing Root-Related Biology

An Efficient and Reproducible Method for Producing Composite Plants by Agrobacterium rhizogenes-Based Hairy Root Transformation

Streamlining Composite Plant Production via Agrobacterium rhizogenes-Mediated Hairy Root Transformation (Video) | JoVE

एग्रोबैक्टीरियम राइजोजेनेस-आधारित बालों की जड़ परिवर्तन द्वारा मिश्रित पौधों के उत्पादन के लिए एक कुशल और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य विधि

Producing composite plants with transgenic roots and nontransgenic stems and buds using Agrobacterium rhizogenes-mediated hairy root transformation is a ...

Production of Composite Plants by Agrobacterium rhizogenes-Based Hairy Root Transformation

Production of Composite Plants by Agrobacterium rhizogenes-Based Hairy Root Transformation (Video) | JoVE 

एग्रोबैक्टीरियम राइजोजेनेस-आधारित बालों की जड़ परिवर्तन द्वारा मिश्रित पौधों का उत्पादन