Name: application of the intelligent high-throughput antimicrobial sensitivity testing/phage screening system and lar index of antimicrobial resistance
Uploaded: 2023-07-21T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Application of the Intelligent High-Throughput Antimicrobial Sensitivity Testing/Phage Screening System and Lar Index of Antimicrobial Resistance at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من قبل المشروع الوطني للبحث والتطوير الرئيسي (2019YFA0904003) ؛ النظام الصناعي الزراعي الحديث في مقاطعة شاندونغ (SDAIT-011-09) ؛ مشروع تحسين منصة التعاون الدولي (CXGC2023G15)؛ مهام الابتكار الرئيسية لمشروع ابتكار العلوم والتكنولوجيا الزراعية التابع لأكاديمية العلوم الزراعية شاندونغ ، الصين (CXGC2023G03).

تم جمع سلالات السالمونيلا المستخدمة في هذه الدراسة من الدواجن في شاندونغ ، الصين ، بعد الحصول على موافقة من لجنة السلامة الحيوية التابعة لمعهد علوم والطب البيطري ، أكاديمية شاندونغ للعلوم الزراعية ، الصين.
1. تطبيق نظام AST الذكي عالي الإنتاجية8
<ol...

<ol>
	<li>Ramanan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+resistance-the+need+for+global+solutions.">Antimicrobial resistance-the need for global solutions.</a> The Lancet Infectious Diseases. 13 (12), 1057-1098 (2013).</li><li>Xiaonan, Z., Qing, Z., Thomas, S. P., Yuqing, L., Martha, R. J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=inPhocus:+Perspectives+of+the+application+of+bacteriophages+in+poultry+and+aquaculture+industries+based+on+Varms+in+China.">inPhocus: Perspectives of the application of bacteriophages in poultry and aquaculture industries based on Varms in China.</a> PHAGE: Therapy, Applications, and Research. 2 (2), 69-74 (2021).</li><li>CLSI. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests. CLSI document M100. , (2022).</li><li>Yuqing, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Antimicrobial Sensitivity Testing Standard of EUCAST. , (2017).</li><li>Barnini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+rapid+method+for+direct+antimicrobial+susceptibility+testing+of+bacteria+from+positive+blood+cultures.">A new rapid method for direct antimicrobial susceptibility testing of bacteria from positive blood cultures.</a> BMC Microbiology. 16 (1), 185-192 (2016).</li><li>H&#246;ring, S., Massarani, A. S., L&#246;ffler, B., R&#246;del, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+antimicrobial+susceptibility+testing+in+blood+culture+diagnostics+performed+by+direct+inoculation+using+the+VITEK&#174;-2+and+BD+PhoenixTM+platforms.">Rapid antimicrobial susceptibility testing in blood culture diagnostics performed by direct inoculation using the VITEK&#174;-2 and BD PhoenixTM platforms.</a> European Journal of Clinical Microbiology &amp; Infectious Diseases. 38 (3), 471-478 (2019).</li><li>Dupuis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+Cobasbact+automated+antimicrobial+susceptibility+testing+system.">Evaluation of the Cobasbact automated antimicrobial susceptibility testing system.</a> European Journal of Clinical Microbiology &amp; Infectious Diseases. 4 (2), 119-122 (1985).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+system+of+bacterial+antimicrobial+resistance+detection+and+its+operation+method.">A system of bacterial antimicrobial resistance detection and its operation method.</a> China Patent. , (2019).</li><li>Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+throughput+test+plate+for+screening+bacteriophage+of+zoonotic+pathogens+and+its+application.">A high throughput test plate for screening bacteriophage of zoonotic pathogens and its application.</a> China Patent. , (2022).</li><li>Adams, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bacteriophages. , (1959).</li><li>Nair, A., Ghugare, G. S., Khairnar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+appraisal+of+bacteriophage+isolation+techniques+from+environment.">An appraisal of bacteriophage isolation techniques from environment.</a> Microbial Ecology. 83 (3), 519-535 (2022).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Shandong veterinary antibiotic resistance system. , (2023).</li><li>Ming, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+results+of+96-dot+agar+dilution+method+and+broth+microdilution+method.">Comparison of the results of 96-dot agar dilution method and broth microdilution method.</a> Chinese Journal of Antibiotics. 43 (6), 729-733 (2018).</li><li>Laxminarayan, R., Klugman, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Communicating+trends+in+resistance+using+a+drug+resistance+index.">Communicating trends in resistance using a drug resistance index.</a> BMJ Open. 1 (2), e000135 (2011).</li><li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+antibiotic+therapy+effectiveness+against+the+major+bacterial+pathogens+in+a+hospital+using+an+integrated+index.">Assessing antibiotic therapy effectiveness against the major bacterial pathogens in a hospital using an integrated index.</a> Future Microbiology. 12, 853-866 (2017).</li><li>Ciccolini, M., Spoorenberg, V., Geerlings, S. E., Prins, J. M., Grundmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+an+index-based+approach+to+assess+the+population-level+appropriateness+of+empirical+antibiotic+therapy.">Using an index-based approach to assess the population-level appropriateness of empirical antibiotic therapy.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 70 (1), 286-293 (2015).</li><li>Yanbo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preliminary+application+of+inoculation+system+for+high-throughput+drug+susceptibility+test.">Preliminary application of inoculation system for high-throughput drug susceptibility test.</a> China Poultry. 42 (6), 52-57 (2020).</li></ol>

تم تأسيس طريقة تخفيف الآجار واستخدامها على نطاق واسع. كان مبدأ نظام AST عالي الإنتاجية هو مبدأ طريقة تخفيف أجار. كانت إحدى الخطوات الحاسمة في البروتوكول هي النقل الدقيق عالي الإنتاجية ل 96 لقاحا في وقت واحد ، والذي تم إجراؤه عدة مرات متتالية. لإكمال هذه الخطوة الحاسمة ، كانت دبابيس ملقح المصف...

نظرا لاستخدام العوامل المضادة للميكروبات على نطاق واسع للوقاية من الأمراض المعدية البكتيرية ، أصبحت مقاومة مضادات الميكروبات (AMR) مشكلة صحية عامة عالمية1. مكافحة مقاومة مضادات الميكروبات هي المهمة الرئيسية الحالية لرصد مقاومة مضادات الميكروبات لمسببات الأمراض الوبائية والعلاج التآزري للعوامل الحساسة المضادة للميكروبات والبكتيريا المحللة2.
اختبار حساسية مضادات الميكروبات في المختبر (AST) هو الدعامة الأساسية لرصد العلاج والكشف عن مستوى مقاومة مضادات الميكروبات. إنه جزء مهم من علم الأدوية المضادة للميكروبات والأساس الحاسم للطب السريري. قام معهد المعايير السريرية والمخبرية (CLSI) التابع للولايات المتحدة واللجنة الأوروبية لاختبار الحساسية لمضادات الميكروبات (EUCAST) بصياغة وتنقيح المعايير الدولية ل AST وتعديل واستكمال طرق AST ونقاط التوقف باستمرار لتحديد MIC لمزيج معين من "العامل المضاد للميكروبات" باعتباره حساسا (S) أو مقاوما (R) أو وسيطا (I) 3 ، 4.
من ثمانينيات القرن العشرين إلى تسعينيات القرن العشرين ، تم تطوير أدوات التخفيف الدقيقة الأوتوماتيكية بسرعة وتطبيقها على الممارسة السريرية ، مع أمثلة تشمل Alfred 60AST و VITEK System و PHOENIXTM و Cobasbact5،6،7. ومع ذلك ، كانت هذه الأدوات باهظة الثمن ، وتتطلب مواد استهلاكية عالية التكلفة ، وتم تصميم نطاقات الكشف الخاصة بها لأدوية المرضى السريرية5،6،7. لهذه الأسباب ، فهي ليست مناسبة للفحص السريري البيطري والكشف عن كميات كبيرة من السلالات شديدة المقاومة. في هذه الدراسة ، تم تطوير نظام فحص AST / phage ذكي عالي الإنتاجية ، بما في ذلك ملقح مصفوفة 96 نقطة (الشكل 1) ، ومحول الحصول على الصور (الشكل 2) ، والبرنامجالمقابل 8 ، لإجراء AST لمجموعة من سلالات البكتيريا ضد عوامل متعددة مضادة للميكروبات في وقت واحد بواسطة طريقة تخفيف أجار. علاوة على ذلك ، تم استخدام النظام أيضا للكشف عن أنماط تحلل العاثيات وتحليلها ضد البكتيريا المقاومة لمضادات الميكروبات9 ، وتم اختيار العاثيات المحللة بكفاءة من مكتبة العاثيات. تم العثور على هذا النظام ليكون فعالا وبأسعار معقولة وسهل التشغيل.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64785/64785fig01.jpg"> الشكل 1: مخطط إنشائي لملقح المصفوفة المكون من 96 نقطة. 1: لوحة دبوس التلقيح. 2: الناقل المحمول. 3: كتلة البذور. 4: لوحة حضن. 5: قاعدة. 6: مقبض التشغيل. 7: دبوس الحد. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64785/64785fig01large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64785/64785fig02.jpg"> الشكل 2: مخطط هيكلي لمحول الحصول على الصور. 1: قذيفة. 2: شاشة عرض. 3: غرفة الحصول على الصور. 4: قاعدة لوحة الكشف. 5: لوحة الكشف داخل وخارج المستودع. 6: لوحة التحكم. 7: جهاز تحويل الحصول على الصور. 8: مصدر الضوء. 9: ماسح الصور. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64785/64785fig02large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96 well&#160; culture plate</td>
			<td>Beijing lanjieke Technology Co., Ltd</td>
			<td>11510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-dot matrix AST image acquisition system</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>In-house software copyright</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-dot matrix inoculator&#160;</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Patented product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Qingdao hi tech Industrial Park Haibo Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>HB8274-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amikacin&#160;</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>A857053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amoxicillin</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>A822839</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>A830931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balance</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>BSA224S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated calculation software for Lar index of AMR</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>In-house software copyright</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacteria Salmonella strains</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Animal origin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacterial resistance Lar index certification management system V1.0</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>In-house software copyright</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ceftiofur</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>C873619</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ciprofloxacin</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>C824343</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clavulanic acid</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>C824181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clean worktable</td>
			<td>Suzhou purification equipment Co., Ltd</td>
			<td>SW-CJ-2D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colistin sulfate</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>C805491</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture plate</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Patented product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxycycline</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>D832390</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enrofloxacin</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>E809130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter 0.22 &#956;m</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGP033RB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Florfenicol</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>F809685</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>G810322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottle 50 mL</td>
			<td>Xuzhou Qianxing Glass Technology Co., Ltd</td>
			<td>QX-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-throughput resistance detection system V1.0</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>In-house software copyright</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image acquisition converter</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Patented product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meropenem</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>M861173</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mueller-Hinton agar</td>
			<td>Qingdao hi tech Industrial Park Haibo Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>HB6232</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 60 mm x 15 mm</td>
			<td>Qingdao Jindian biochemical equipment Co., Ltd</td>
			<td>16021-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 90 mm x 15 mm</td>
			<td>Qingdao Jindian biochemical equipment Co., Ltd</td>
			<td>16001-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salmonella phages</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker incubator</td>
			<td>Shanghai Minquan Instrument Co., Ltd</td>
			<td>MQD-S2R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Turbidimeter</td>
			<td>Shanghai XingBai Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>F-TC2015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Varms base type library system V1.0</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>In-house software copyright</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vertical high-pressure steam sterilizer</td>
			<td>Shanghai Shen&#39;an medical instrument factory</td>
			<td>LDZX-75L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary pathogen resistance testing management system</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>In-house software copyright</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary resistance cloud monitoring and phage control platform V1.0</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>In-house software copyright</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

application of the intelligent high-throughput antimicrobial sensitivity testing/phage screening system and lar index of antimicrobial resistance

لتحسين كفاءة اختبار الحساسية لمضادات الميكروبات (AST) وفحص العاثيات عالية الإنتاجية للبكتيريا المقاومة وتقليل تكلفة الكشف ، تم تطوير نظام ذكي عالي الإنتاجية لفحص AST / phage ، بما في ذلك ملقح مصفوفة 96 نقطة ، ومحول الحصول على الصور ، والبرامج المقابلة ، وفقا لمعايير AST ونقاط توقف المقاومة (R) التي صاغها معهد المعايير السريرية والمخبرية (CLSI). تم إجراء AST وإحصائيات توزيعات الحد الأدنى للتركيز المثبط (MIC) (من R / 8 إلى 8R) ل 1500 سلالة من السالمونيلا المعزولة من الدواجن في شاندونغ ، الصين ، ضد 10 عوامل مضادة للميكروبات بواسطة نظام فحص AST / phage الذكي عالي الإنتاجية. تم الحصول على مؤشر لار ، الذي يعني "مضادات حيوية أقل ، ومقاومة أقل وبقايا حتى القليل من المضادات الحيوية" ، عن طريق حساب المتوسط المرجح لكل MIC والقسمة على R. يحسن هذا النهج الدقة مقارنة باستخدام انتشار المقاومة لتوصيف درجة مقاومة مضادات الميكروبات (AMR) للسلالات عالية المقاومة. بالنسبة لسلالات السالمونيلا ذات مقاومة مضادات الميكروبات العالية ، تم فحص العاثيات المحللة بكفاءة من مكتبة العاثيات بواسطة هذا النظام ، وتم حساب طيف التحلل وتحليله. أظهرت النتائج أن نظام فحص AST / phage الذكي عالي الإنتاجية كان قابلا للتشغيل ودقيقا وعالي الكفاءة وغير مكلف وسهل الصيانة. وإلى جانب نظام شاندونغ لرصد مقاومة مضادات الميكروبات البيطرية، كان النظام مناسبا للبحث العلمي والكشف السريري المتعلق بمقاومة مضادات الميكروبات.

باتباع بروتوكول نظام AST الذكي عالي الإنتاجية ، تم توضيح تطبيقه بواسطة السالمونيلا من الدواجن في شاندونغ ، الصين ، كمثال.
يوضح الشكل 3 نمو سلالات السالمونيلا على ألواح الآجار مع الأمبيسلين (R من 32 ميكروغرام / مل) بتركيزات من 2 إلى 256 ميكروغرام / مل يحدده...

Watch this Scientific Journal Video about Application of the Intelligent High-Throughput Antimicrobial Sensitivity Testing/Phage Screening System and Lar Index of Antimicrobial Resistance at JoVE.com

Application of the Intelligent High-Throughput Antimicrobial Sensitivity Testing/Phage Screening System and Lar Index of Antimicrobial Resistance

نقدم هنا مبدأ وهيكل وتعليمات نظام اختبار حساسية مضادات الميكروبات / فحص العاثيات الذكي عالي الإنتاجية. يتضح تطبيقه باستخدام السالمونيلا المعزولة من الدواجن في شاندونغ ، الصين ، كمثال. يتم حساب مؤشر لار ، وتناقش أهميته في تقييم مقاومة مضادات الميكروبات بشكل شامل.

تطبيق نظام اختبار حساسية مضادات الميكروبات / فحص العاثيات الذكي عالي الإنتاجية ومؤشر لار لمقاومة مضادات الميكروبات

To improve the efficiency of antimicrobial susceptibility testing (AST) and phage high-throughput screening for resistant bacteria and to reduce the ...

يقدم هذا البروتوكول طريقة متعددة المستويات ، لكل من اكتشاف EST ورقم العاثيات. كما قدم مؤشرا كبيرا للحفظ لمقارنة مستويات EMR لتكنولوجيا التحكم المختلفة. هذه التقنية الفعالة من حيث التكلفة ذكية وعالية الإنتاجية ومتعددة الوظائف.وقد مكنت من إنشاء VAMS وهي شبكة مراقبة بيطرية جمعت 20،000 جين وبائي وعاثيات تحليلية. يمكن أيضا استخدام هذه الطريقة لمراقبة البكتيريا المسببة للأمراض ومكافحتها في الطب والزراعة وبطارية قلب الحيوان ومصايد الأسماك. يجب أن ينص هذا البروتوكول وورقة الشركة هذه على أن يكون.نحن مع دليل التدريب الفني. اتباع ذلك من شأنه أن يساعد أي شخص على إتقان هذه التقنية في فترة قصيرة. ابدأ باحتضان كائن مراقبة الجودة E.coli و 93 سلالة اختبار السالمونيلا على ألواح أجار مولر-هينتون.بعد ذلك ، قم بتخفيف اللقاح المحضر لكل سلالة 10 مرات. نقل 200 ميكرولتر من المياه المالحة العادية المعقمة إلى بئر A-1 من صفيحة بئر 96 كعنصر تحكم سلبي. ثم ماصة تعليقين من E.coli في آبار A-2 و A-3 كضوابط إيجابية وجودة على التوالي.إلى الآبار ال 93 المتبقية ، أضف 200 ميكرولتر من سلالة الاختبار المخففة. لإعداد لوحات أجار المضادة للميكروبات. أولا ، قم بتعيين نطاقات التركيز للعوامل المضادة للبكتيريا المختلفة التي يتم اختبارها ، وفقا لمؤشر LAR.قم بإجراء مخطط تخفيف مضاعف لوغاريتم لوغاريتم لوتن لمحلول المضادات الحيوية باتباع طريقة تخفيف أجار القياسية CLSI. أضف الآن ملليلتر من المحلول المضاد للميكروبات إلى زجاجة زجاجية معقمة تحتوي على 18 ملليلتر من وسائط أجار مولر-هينتون المنصهرة. بعد الخلط جيدا ، صب في لوحات داخل خزانة السلامة الحيوية.اسمح للأجار بالتصلب في درجة حرارة الغرفة. تأكد من ترك فجوة تحت غطاء الألواح للسماح بتجفيف سطح أجار. قم بتسمية أنواع العوامل المضادة للميكروبات وتركيزات كل منها على الجانب السفلي من الألواح المحتضنة.رتب الألواح المحتضنة المتعددة لكل عامل مضاد للميكروبات في كومة مرتبة بترتيب تخفيف مضاعف. أخيرا ، قم بإعداد لوحين أجار خاليين من المخدرات ليكونا بمثابة عناصر تحكم لكل عامل. قم بتركيب لوحة دبوس تلقيح معقمة على دعم ملقح مصفوفة نقطية 96 داخل خزانة أمان حيوي.بعد ذلك ، قم بترتيب كتلة البذور المحضرة مع سلالات مختبرة ولوحة محتضنة أجار على الناقل المحمول. ادفع الناقل المحمول حتى تصبح كتلة البذور أسفل لوحة دبوس التلقيح. الآن اضغط على مقبض التشغيل وقم بخفض لوحة دبوس التلقيح ، وتوجيه 96 دبابيس نحو اللقاح في 96 بئرا من كتلة البذور.حرر مقبض التشغيل بطريقة خاضعة للرقابة وأعد ضبط لوحة دبوس التلقيح تلقائيا لتحريك كل بئر لقاح وغمسه ، وادفع مقبض التشغيل مرتين إلى ثلاث مرات. بعد ذلك ، قم بنقل اللوحة الحاملة ووضعها بحيث تكون لوحة الحضانة تحت لوحة دبوس التلقيح. اضغط لأسفل على مقبض التشغيل ، واخفض لوحة دبوس التلقيح واتركها لمدة ثانية إلى ثانيتين لضمان التلامس الكامل مع سطح اللوحة المحتضنة.حرر مقبض التشغيل لإكمال جولة واحدة من التلقيح. استبدل اللوحة المحتضنة وكرر العملية حتى تكتمل مجموعة ألواح أجار المضادة للميكروبات. قم بالتبديل إلى لوحة دبوس تلقيح جديدة وكتلة بذور لتلقيح مجموعة أخرى من السلالات المختبرة.احتضان ألواح أجار المضادة للميكروبات الملقحة في درجة حرارة الغرفة حتى يتم امتصاص الرطوبة من بقع اللقاح بالكامل في الآجار. بعد الحضانة ، اقلب الألواح واستمر في الحضانة للسماح للبكتيريا غير المقيدة بتكوين مستعمرات. لإجراء الحصول على الصور وإحصاءات البيانات ، ابدأ بالنقر فوق نظام الحصول على الصور AST 96 نقطة لتشغيل البرنامج.من شريط المهام، حدد معلومات الاختبار. انقر فوق جديد لإنشاء مهمة اختبار جديدة واملأ التفاصيل المطلوبة. ثم اضغط على جمع البيانات متبوعا بالصورة وعنصر الاختبار لتحديد المهمة التي تم إنشاؤها حديثا.اختر المضادات الحيوية لتحديد اسم المضاد الحيوي والتدرج لتحديد التركيز الأولي للمضاد الحيوي. أخيرا ، انقر فوق اتصال لإنشاء اتصال بمحول الحصول على الصور. بعد ذلك ، ضع الألواح المحتضنة على قاعدة لوحة الكشف وأدخلها في محول الحصول على الصور.انقر فوق المجموعة لالتقاط صور للوحات. اضغط على المضادات الحيوية وحدد المجموعة التالية من اللوحات. اختر التدرج لتحديد تدرج البداية، ثم انتقل إلى الجولة التالية من مجموعة الصور.قم بإنهاء الإجراء بالنقر فوق إرسال لتحديد تكوين المستعمرة وتحويل الصور إلى الحد الأدنى من التركيزات المثبطة ، أي قيم MIC. انقر فوق استعلام للوصول إلى جميع نتائج MIC. ابدأ باستخدام طريقة أجار الطبقة المزدوجة لإنتاج عاثيات مختلفة.تمييع العاثيات إلى تركيز مواز مناسب وإضافة 200 ميكرولتر من لقاح العاثية في كتلة البذور 96 بئر. بعد ذلك ، قم بإعداد صفيحة محتضنة مزدوجة الطبقة لكل سلالة لفحصها. اترك فجوة تحت غطاء اللوحة ذات الطبقات المزدوجة للسماح بالتجفيف.ضع كتلة بذور العاثية المحضرة ولوحة الطبقة المزدوجة على الناقل المتحرك للقاح 96 نقطي. نقل كل لقاح العاثيات إلى سطح شبه أجار. دع الألواح تبقى في درجة حرارة الغرفة حتى يتم امتصاص كل الرطوبة العينية في شبه أجار.الآن احتضان الألواح عند 37 درجة مئوية للسلالات المختبرة لمدة أربع إلى ست ساعات. استخدم محول الحصول على الصور للحصول على صورة النتيجة التجريبية لكل لوحة مزدوجة الطبقة وحفظها. سجل عدد وأشكال الأشكال الموضعية المختلفة في جدول بيانات بناء على الصور التي تم الحصول عليها واحسب النسب الخاصة بالأنواع المختلفة من العاثيات.أظهرت الدراسة المورفولوجية لنمو السالمونيلا على ألواح الأمبيسلين أن السيطرة السلبية في A-1 لم تظهر أي نمو. كان MIC لسلالة السالمونيلا في A-4 64 ميكروغرام لكل ملليلتر ، في حين أن A-5 كان 16 ميكروغرام لكل ملليلتر. كانت قيم المقاومة المئوية للأمبيسيلين والسيبروفلوكساسين وحمض الأموكسيسيلين كلافولانيك أعلى من 50٪ بينما كانت قيم الدوكسيسيكلين والفلورفينيكول والسيفوتاكسيم والإنروفلوكساسين 30٪ إلى 50٪أظهر الجنتاميسين والأميكاسين والميروبينيم قيم مقاومة مئوية أقل من 30٪ مؤجلة مؤشرات LAR للسيبروفلوكساسين وحمض أموكسيسيلين كلافولانيك بشكل ملحوظ.أظهرت التحليلات المورفولوجية لنمو السالمونيلا على ألواح الطبقة المزدوجة أنه لوحظت أربعة مورفولوجيا موضعية رئيسية للعاثيات. كانت البقعة المستديرة الواضحة من عاثية يمكن أن تقتل المضيف بشكل موثوق على اللوحة ، ولكنها قد تتكاثر أو لا تتكرر بنجاح على حساب هذا المضيف. تم تشكيل مجموعة اللوحات بواسطة لوحات حقيقية.نتجت البقعة العكرة عن عاثية لم تقتل المضيف على اللوحة بشكل موثوق ، والتي قد تتكاثر أو لا تتكاثر بنجاح على حساب هذا المضيف. تشير البقعة اللانهائية إلى الطبيعة غير اللايتيكية. تنقل هذه التقنية بسهولة عدسة 96 أجار بكفاءة في وقت واحد وتتعرف الأدوات تلقائيا على الصور ثم تحسب النرد الخطي.من المتوقع أن تعزز هذه التكنولوجيا البحث وتصنيع العاثيات وتطبيق العاثيات هي واحدة من الطرق المدهشة لتقليل وحل مشكلة مقاومة مضادات الميكروبات.

Research

JoVE Journal

Environment

Determination of Microbial Extracellular Enzyme Activity in Waters, Soils, and Sediments using High Throughput Microplate Assays

تقرير من خارج الخلية الميكروبية نشاط انزيم في المياه، والتربة، والرواسب باستخدام إنتاجية عالية صفيحة ميكروسكوبية فحوصات

Much of the nutrient cycling and carbon  processing in natural environments occurs through the activity of extracellular  enzymes released by ...

High-throughput Fluorometric Measurement of Potential Soil Extracellular Enzyme Activities

الإنتاجية العالية فلوروميتريك قياس التربة المحتملة خارج الخلية أنزيم الأنشطة

Microbes in soils and other environments produce extracellular enzymes to depolymerize and hydrolyze organic macromolecules so that they can be ...

Optimized Negative Staining: a High-throughput Protocol for Examining Small and Asymmetric Protein Structure by Electron Microscopy

الأمثل تلطيخ سلبي: بروتوكول عالية الإنتاجية للدراسة صغيرة وغير المتناظر هيكل البروتين بواسطة المجهر الإلكتروني

Structural determination of proteins is rather challenging for proteins with molecular masses between 40 - 200 kDa. Considering that more than half of ...

Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

تطبيق رصدت اثنين من العنكبوت سوس<em&gt; الخاشية urticae</em&gt; للدراسات التفاعل النبات من الآفات

The two-spotted spider mite, Tetranychus urticae, is a ubiquitous polyphagous arthropod herbivore that feeds on a remarkably broad array of species, with ...

Modifying the Bank Erosion Hazard Index (BEHI) Protocol for Rapid Assessment of Streambank Erosion in Northeastern Ohio

Modifying the Bank Erosion Hazard Index BEHI Protocol for Rapid Assessment of Streambank Erosion in Northeastern Ohio

تعديل مؤشر (الباهي) بروتوكول البنك تآكل المخاطر للتقييم السريع للStreambank تآكل في شمال شرق أوهايو

Understanding the source of pollution in a stream is vital to preserving, restoring, and maintaining the stream&#8217;s function and habitat it provides. ...

Semi-High Throughput Screening for Potential Drought-tolerance in Lettuce (Lactuca sativa) Germplasm Collections

Semi-High Throughput Screening for Potential Drought-tolerance in Lettuce Lactuca sativa Germplasm Collections

شبه عالية الإنتاجية لفحص إمكانية الجفاف التسامح في الخس (<em&gt; خس ساتيفا</em&gt;) مجموعات الأصول الوراثية

This protocol describes a method by which a large collection of the leafy green vegetable lettuce (Lactuca sativa L.) germplasm was screened for likely ...

High-throughput Screening of Recalcitrance Variations in Lignocellulosic Biomass: Total Lignin, Lignin Monomers, and Enzymatic Sugar Release

الإنتاجية العالية فحص الاختلافات الإستعصاء في Lignocellulosic الكتلة الحيوية: إجمالي اللجنين، اللجنين مونمرات، والأنزيمية السكر الإصدار

The conversion of lignocellulosic biomass to fuels, chemicals, and other commodities has been explored as one possible pathway toward reductions in the ...

The Effect of the Application of Thyme Essential Oil on Microbial Load During Meat Drying

أثر تطبيق النفط الزعتر على الحمولة الميكروبية أثناء تجفيف اللحوم

Meat is a high protein meal that is used in the preparation of jerky, a popular food snack, where preservation and safety are important. To assure food ...

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

اختبار الإصابة بالنبات: الرش والجرح بوساطة التلقيح بمسببات الأمراض النباتية رمادية ماجنابورثي

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current ...

High-throughput, Microscale Protocol for the Analysis of Processing Parameters and Nutritional Qualities in Maize (Zea mays L.)

High-throughput, Microscale Protocol for the Analysis of Processing Parameters and Nutritional Qualities in Maize Zea mays L.

الفائق، بروتوكول Microscale لتحليل المعالجة البارامترات والصفات الغذائية في الذرة (ميس زيا ل.)

Maize is an important grain crop in the United States and worldwide. However, maize grain must be processed prior to human consumption. Furthermore, whole ...