Name: application of the intelligent high-throughput antimicrobial sensitivity testing/phage screening system and lar index of antimicrobial resistance
Uploaded: 2023-07-21T14:45:00
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यह काम राष्ट्रीय कुंजी अनुसंधान और विकास परियोजना (2019YFA0904003) द्वारा समर्थित था; शेडोंग प्रांत में आधुनिक कृषि औद्योगिक प्रणाली (एसडीएआईटी-011-09); अंतर्राष्ट्रीय सहयोग मंच अनुकूलन परियोजना (CXGC2023G15); कृषि विज्ञान अकादमी शेडोंग, चीन (CXGC2023G03) की कृषि विज्ञान और प्रौद्योगिकी नवाचार परियोजना के प्रमुख नवाचार कार्य।

इस अध्ययन में इस्तेमाल किए गए साल्मोनेला उपभेदों को पशु विज्ञान और पशु चिकित्सा संस्थान, शेडोंग एकेडमी ऑफ एग्रीकल्चरल साइंसेज, चीन की जैव सुरक्षा समिति से अनुमोदन प्राप्त करने के बाद चीन के शेडों?...

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	<li>Ramanan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+resistance-the+need+for+global+solutions.">Antimicrobial resistance-the need for global solutions.</a> The Lancet Infectious Diseases. 13 (12), 1057-1098 (2013).</li><li>Xiaonan, Z., Qing, Z., Thomas, S. P., Yuqing, L., Martha, R. J. 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S., L&#246;ffler, B., R&#246;del, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+antimicrobial+susceptibility+testing+in+blood+culture+diagnostics+performed+by+direct+inoculation+using+the+VITEK&#174;-2+and+BD+PhoenixTM+platforms.">Rapid antimicrobial susceptibility testing in blood culture diagnostics performed by direct inoculation using the VITEK&#174;-2 and BD PhoenixTM platforms.</a> European Journal of Clinical Microbiology &amp; Infectious Diseases. 38 (3), 471-478 (2019).</li><li>Dupuis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+Cobasbact+automated+antimicrobial+susceptibility+testing+system.">Evaluation of the Cobasbact automated antimicrobial susceptibility testing system.</a> European Journal of Clinical Microbiology &amp; Infectious Diseases. 4 (2), 119-122 (1985).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+system+of+bacterial+antimicrobial+resistance+detection+and+its+operation+method.">A system of bacterial antimicrobial resistance detection and its operation method.</a> China Patent. , (2019).</li><li>Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+throughput+test+plate+for+screening+bacteriophage+of+zoonotic+pathogens+and+its+application.">A high throughput test plate for screening bacteriophage of zoonotic pathogens and its application.</a> China Patent. , (2022).</li><li>Adams, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bacteriophages. , (1959).</li><li>Nair, A., Ghugare, G. 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P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Communicating+trends+in+resistance+using+a+drug+resistance+index.">Communicating trends in resistance using a drug resistance index.</a> BMJ Open. 1 (2), e000135 (2011).</li><li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+antibiotic+therapy+effectiveness+against+the+major+bacterial+pathogens+in+a+hospital+using+an+integrated+index.">Assessing antibiotic therapy effectiveness against the major bacterial pathogens in a hospital using an integrated index.</a> Future Microbiology. 12, 853-866 (2017).</li><li>Ciccolini, M., Spoorenberg, V., Geerlings, S. E., Prins, J. M., Grundmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+an+index-based+approach+to+assess+the+population-level+appropriateness+of+empirical+antibiotic+therapy.">Using an index-based approach to assess the population-level appropriateness of empirical antibiotic therapy.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 70 (1), 286-293 (2015).</li><li>Yanbo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preliminary+application+of+inoculation+system+for+high-throughput+drug+susceptibility+test.">Preliminary application of inoculation system for high-throughput drug susceptibility test.</a> China Poultry. 42 (6), 52-57 (2020).</li></ol>

अगर कमजोर पड़ने की विधि अच्छी तरह से स्थापित की गई है और व्यापक रूप से उपयोग की जाती है। उच्च-थ्रूपुट एएसटी प्रणाली का सिद्धांत आगर कमजोर पड़ने की विधि का था। प्रोटोकॉल के भीतर महत्वपूर्ण कदमों में से ए...

चूंकि रोगाणुरोधी एजेंटों का व्यापक रूप से जीवाणु संक्रामक रोगों को रोकने के लिए उपयोग किया जाता है, रोगाणुरोधी प्रतिरोध (एएमआर) एक वैश्विक सार्वजनिक स्वास्थ्य समस्याबन गया है। एएमआर का मुकाबला महामारी विज्ञान रोगजनकों के एएमआर की निगरानी और संवेदनशील रोगाणुरोधी एजेंटों और लिटिक बैक्टीरियोफेज2 के सहक्रियात्मक चिकित्सा का वर्तमान मुख्य मिशन है।
इन विट्रो रोगाणुरोधी संवेदनशीलता परीक्षण (एएसटी) चिकित्सा की निगरानी और एएमआर के स्तर का पता लगाने के लिए मुख्य आधार है। यह रोगाणुरोधी फार्माकोलॉजी का एक महत्वपूर्ण हिस्सा है और नैदानिक दवा के लिए महत्वपूर्ण आधार है। संयुक्त राज्य अमेरिका के नैदानिक और प्रयोगशाला मानक संस्थान (सीएलएसआई) और रोगाणुरोधी संवेदनशीलता परीक्षण पर यूरोपीय समिति (ईयूसीएएसटी) ने एएसटी के अंतर्राष्ट्रीय मानदंडों को तैयार और संशोधित किया है और संवेदनशील (एस), प्रतिरोधी (आर) या मध्यवर्ती (आई) 3 के रूप में एक निश्चित "जीव-रोगाणुरोधी एजेंट" संयोजन के एमआईसी को निर्धारित करने के लिए लगातार संशोधित और पूरक एएसटी विधियों और ब्रेकपॉइंट्स को संशोधित और संशोधित किया है। 4.
1980 के दशक से 1990 के दशक तक, स्वचालित माइक्रो शोरबा कमजोर पड़ने वाले उपकरणों को तेजी से विकसित किया गया और नैदानिक अभ्यास के लिए लागू किया गया, जिसमें अल्फ्रेड 60एएसटी, वीआईटीईके सिस्टम, फीनिक्सटीएम और कोबासबैक्ट 5,6,7 शामिल हैं। हालांकि, ये उपकरण महंगे थे, उच्च लागत वाले उपभोग्य सामग्रियों की आवश्यकता थी, और उनकी पहचान रेंज नैदानिक रोगी दवा 5,6,7 के लिए डिज़ाइन की गई थी। इन कारणों से, वे पशु चिकित्सा नैदानिक परीक्षा और अत्यधिक प्रतिरोधी उपभेदों की बड़ी मात्रा का पता लगाने के लिए उपयुक्त नहीं हैं। इस अध्ययन में, एक बुद्धिमान उच्च-थ्रूपुट एएसटी / फेज स्क्रीनिंग सिस्टम, जिसमें 96-डॉट मैट्रिक्स इनोक्यूलेटर (चित्रा 1), छवि अधिग्रहण कनवर्टर (चित्रा 2), और संबंधित सॉफ्टवेयर8 शामिल हैं, को एगर कमजोर पड़ने की विधि द्वारा एक समय में कई रोगाणुरोधी एजेंटों के खिलाफ बैक्टीरिया उपभेदों के एक बैच के लिए एएसटी का संचालन करने के लिए विकसित किया गया था। इसके अलावा, सिस्टम का उपयोग रोगाणुरोधी-प्रतिरोधी बैक्टीरिया9 के खिलाफ फेज के लाइसिस पैटर्न का पता लगाने और विश्लेषण करने के लिए भी किया गया था, और लिटिक फेज को फेज लाइब्रेरी से कुशलता पूर्वक चुना गया था। यह प्रणाली कुशल, सस्ती और संचालित करने में आसान पाई गई थी।
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64785/64785fig01.jpg"> चित्र 1: 96-डॉट मैट्रिक्स इनोक्यूलेटर का संरचनात्मक आरेख। 1: टीकाकरण पिन प्लेट; 2: मोबाइल वाहक; 3: बीज ब्लॉक; 4: इनक्यूबेटेड प्लेट; 5: आधार; 6: ऑपरेटिंग हैंडल; 7: पिन को सीमित करें। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64785/64785fig01large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64785/64785fig02.jpg"> चित्र 2: छवि अधिग्रहण कनवर्टर का संरचनात्मक आरेख। 1: शेल; 2: प्रदर्शन स्क्रीन; 3: छवि अधिग्रहण कक्ष; 4: डिटेक्शन बोर्ड बेस; 5: गोदाम के अंदर और बाहर डिटेक्शन बोर्ड; 6: नियंत्रण बोर्ड; 7: छवि अधिग्रहण रूपांतरण डिवाइस; 8: प्रकाश स्रोत; 9: छवि स्कैनर. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64785/64785fig02large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96 well&#160; culture plate</td>
			<td>Beijing lanjieke Technology Co., Ltd</td>
			<td>11510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-dot matrix AST image acquisition system</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>In-house software copyright</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-dot matrix inoculator&#160;</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Patented product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Qingdao hi tech Industrial Park Haibo Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>HB8274-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amikacin&#160;</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>A857053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amoxicillin</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>A822839</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>A830931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balance</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>BSA224S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated calculation software for Lar index of AMR</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>In-house software copyright</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacteria Salmonella strains</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Animal origin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacterial resistance Lar index certification management system V1.0</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>In-house software copyright</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ceftiofur</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>C873619</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ciprofloxacin</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>C824343</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clavulanic acid</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>C824181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clean worktable</td>
			<td>Suzhou purification equipment Co., Ltd</td>
			<td>SW-CJ-2D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colistin sulfate</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>C805491</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture plate</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Patented product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxycycline</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>D832390</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enrofloxacin</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>E809130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter 0.22 &#956;m</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGP033RB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Florfenicol</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>F809685</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>G810322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottle 50 mL</td>
			<td>Xuzhou Qianxing Glass Technology Co., Ltd</td>
			<td>QX-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-throughput resistance detection system V1.0</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>In-house software copyright</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image acquisition converter</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Patented product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meropenem</td>
			<td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd</td>
			<td>M861173</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mueller-Hinton agar</td>
			<td>Qingdao hi tech Industrial Park Haibo Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>HB6232</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 60 mm x 15 mm</td>
			<td>Qingdao Jindian biochemical equipment Co., Ltd</td>
			<td>16021-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 90 mm x 15 mm</td>
			<td>Qingdao Jindian biochemical equipment Co., Ltd</td>
			<td>16001-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salmonella phages</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker incubator</td>
			<td>Shanghai Minquan Instrument Co., Ltd</td>
			<td>MQD-S2R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Turbidimeter</td>
			<td>Shanghai XingBai Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>F-TC2015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Varms base type library system V1.0</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>In-house software copyright</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vertical high-pressure steam sterilizer</td>
			<td>Shanghai Shen&#39;an medical instrument factory</td>
			<td>LDZX-75L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary pathogen resistance testing management system</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>In-house software copyright</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary resistance cloud monitoring and phage control platform V1.0</td>
			<td>Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences</td>
			<td>In-house software copyright</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

application of the intelligent high-throughput antimicrobial sensitivity testing/phage screening system and lar index of antimicrobial resistance

प्रतिरोधी बैक्टीरिया के लिए रोगाणुरोधी संवेदनशीलता परीक्षण (एएसटी) और फेज उच्च-थ्रूपुट स्क्रीनिंग की दक्षता में सुधार करने और पहचान लागत को कम करने के लिए, एक बुद्धिमान उच्च-थ्रूपुट एएसटी / फेज स्क्रीनिंग सिस्टम, जिसमें 96-डॉट मैट्रिक्स इनोक्यूलेटर, इमेज अधिग्रहण कनवर्टर और संबंधित सॉफ्टवेयर शामिल हैं, को एएसटी मानदंडों और नैदानिक और प्रयोगशाला मानक संस्थान (सीएलएसआई) द्वारा तैयार प्रतिरोध के ब्रेकपॉइंट (आर) के अनुसार विकसित किया गया था। चीन के शेडोंग में पोल्ट्री से अलग किए गए 1,500 साल्मोनेला उपभेदों के न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता (एमआईसी) वितरण (आर / 8 से 8 आर तक) के एएसटी और आंकड़े 10 रोगाणुरोधी एजेंटों के खिलाफ बुद्धिमान उच्च-थ्रूपुट एएसटी / फेज स्क्रीनिंग सिस्टम द्वारा किए गए थे। लार इंडेक्स, जिसका अर्थ है "कम एंटीबिओसिस, कम प्रतिरोध और थोड़ा एंटीबिओसिस तक अवशिष्ट", प्रत्येक एमआईसी के भारित औसत की गणना करके और आर द्वारा विभाजित करके प्राप्त किया गया था। यह दृष्टिकोण अत्यधिक प्रतिरोधी उपभेदों के रोगाणुरोधी प्रतिरोध (एएमआर) डिग्री को चिह्नित करने के लिए प्रतिरोध की व्यापकता का उपयोग करने की तुलना में सटीकता में सुधार करता है। उच्च एएमआर के साथ साल्मोनेला के उपभेदों के लिए, लिटिक फेज को इस प्रणाली द्वारा फेज लाइब्रेरी से कुशलतापूर्वक जांच की गई थी, और लाइसिस स्पेक्ट्रम की गणना और विश्लेषण किया गया था। परिणाम बताते हैं कि बुद्धिमान उच्च-थ्रूपुट एएसटी / फेज स्क्रीनिंग सिस्टम संचालनयोग्य, सटीक, अत्यधिक कुशल, सस्ती और बनाए रखने में आसान था। शेडोंग पशु चिकित्सा रोगाणुरोधी प्रतिरोध निगरानी प्रणाली के साथ संयुक्त, प्रणाली एएमआर से संबंधित वैज्ञानिक अनुसंधान और नैदानिक पहचान के लिए उपयुक्त थी।

बुद्धिमान उच्च-थ्रूपुट एएसटी प्रणाली के प्रोटोकॉल का पालन करते हुए, इसके आवेदन को एक उदाहरण के रूप में चीन के शेडोंग में पोल्ट्री से साल्मोनेला द्वारा चित्रित किया गया था।
छवि अधिग्रहण ?...

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Application of the Intelligent High-Throughput Antimicrobial Sensitivity Testing/Phage Screening System and Lar Index of Antimicrobial Resistance

यहां हम बुद्धिमान उच्च-थ्रूपुट रोगाणुरोधी संवेदनशीलता परीक्षण / फेज स्क्रीनिंग सिस्टम के सिद्धांत, संरचना और निर्देश का परिचय देते हैं। इसका आवेदन एक उदाहरण के रूप में शेडोंग, चीन में पोल्ट्री से अलग साल्मोनेला का उपयोग करके चित्रित किया गया है। लार इंडेक्स की गणना की जाती है, और रोगाणुरोधी प्रतिरोध का मूल्यांकन करने में इसके महत्व पर व्यापक रूप से चर्चा की जाती है।

फेज स्क्रीनिंग सिस्टम और एंटीमाइक्रोबियल प्रतिरोध के लार इंडेक्स का अनुप्रयोग

To improve the efficiency of antimicrobial susceptibility testing (AST) and phage high-throughput screening for resistant bacteria and to reduce the ...

यह प्रोटोकॉल ईएसटी का पता लगाने और फेज आंकड़े दोनों के लिए एक बहुस्तरीय विधि प्रस्तुत करता है। इसने विभिन्न नियंत्रण प्रौद्योगिकी के ईएमआर स्तरों की तुलना करने के लिए बचत के लिए बड़े सूचकांक भी पेश किए। यह लागत प्रभावी तकनीक बुद्धिमान, उच्च-थ्रूपुट और बहुक्रियाशील है।इसने वीएएमएस की स्थापना को सक्षम किया है, एक पशु चिकित्सा निगरानी नेटवर्क जिसने 20,000 महामारी जीन और विश्लेषणात्मक फेज एकत्र किए हैं। इस विधि का उपयोग दवा, कृषि, पशु हृदय बैटरी और मत्स्य पालन में रोगजनक बैक्टीरिया की निगरानी और नियंत्रण के लिए भी किया जा सकता है। यह प्रोटोकॉल और इस कंपनी के पेपर को एक प्रदान किया जाना चाहिए।हम तकनीकी प्रशिक्षण गाइड के साथ। इसका पालन करने से किसी को भी कम समय में तकनीक में महारत हासिल करने में मदद मिलेगी। म्यूलर-हिंटन एगर प्लेटों पर गुणवत्ता नियंत्रण जीव ई.कोलाई और 93 परीक्षण साल्मोनेला उपभेदों को इंजेक्ट करके शुरू करें।इसके बाद, प्रत्येक स्ट्रेन के तैयार इनोकुलम को 10 बार पतला करें। नकारात्मक नियंत्रण के रूप में 96 वेल प्लेट के ए -1 कुएं में 200 माइक्रोलीटर बाँझ सामान्य खारा स्थानांतरित करें। फिर ई.कोलाई के दो निलंबन ों को क्रमशः सकारात्मक और गुणवत्ता नियंत्रण के रूप में ए -2 और ए -3 कुओं में डालें।शेष 93 कुओं में, पतला परीक्षण तनाव के 200 माइक्रोलीटर जोड़ें। रोगाणुरोधी आगर प्लेटों की तैयारी के लिए। सबसे पहले, एलएआर इंडेक्स के अनुसार, परीक्षण किए जा रहे विभिन्न जीवाणुरोधी एजेंटों के लिए एकाग्रता सीमा निर्धारित करें।सीएलएसआई मानक अगर कमजोर पड़ने की विधि का पालन करते हुए एंटीबायोटिक समाधान के लिए लॉग-टू डबलिंग डाइल्यूशन स्कीम करें। अब एक निष्फल कांच की बोतल में दो मिलीलीटर रोगाणुरोधी घोल जोड़ें जिसमें 18 मिलीलीटर पिघला हुआ मुलर-हिंटन एगर मीडिया हो। अच्छी तरह से मिश्रण करने के बाद, जैव सुरक्षा कैबिनेट के अंदर प्लेटों में डालें।कमरे के तापमान पर आगर को जमने दें। आगर की सतह को सुखाने की अनुमति देने के लिए प्लेटों के ढक्कन के नीचे एक अंतराल छोड़ना सुनिश्चित करें। इनक्यूबेटेड प्लेटों के नीचे एंटीमाइक्रोबियल एजेंटों के प्रकार और उनकी संबंधित सांद्रता को लेबल करें।प्रत्येक रोगाणुरोधी एजेंट के लिए कई इनक्यूबेटेड प्लेटों को लॉग टू डबलिंग डाइल्यूशन ऑर्डर में व्यवस्थित स्टैक में व्यवस्थित करें। अंत में, प्रत्येक एजेंट के लिए नियंत्रण के रूप में कार्य करने के लिए दो दवा-मुक्त एगर प्लेटें तैयार करें। जैव सुरक्षा कैबिनेट के भीतर 96 डॉट मैट्रिक्स इनोक्यूलेटर के समर्थन पर एक निष्फल टीकाकरण पिन प्लेट स्थापित करें।इसके बाद, तैयार बीज ब्लॉक को परीक्षण किए गए उपभेदों और मोबाइल वाहक पर एक एगर इनक्यूबेटेड प्लेट के साथ व्यवस्थित करें। मोबाइल वाहक को तब तक धक्का दें जब तक कि बीज ब्लॉक टीकाकरण पिन प्लेट से नीचे न हो। अब ऑपरेटिंग हैंडल दबाएं और टीकाकरण पिन प्लेट को नीचे करें, बीज ब्लॉक के 96 कुओं में इनोकुलम की ओर 96 पिन का मार्गदर्शन करें।ऑपरेटिंग हैंडल को नियंत्रित तरीके से छोड़ें और प्रत्येक इनोकुलम को अच्छी तरह से हिलाने और डुबोने के लिए टीकाकरण पिन प्लेट को स्वचालित रूप से रीसेट करें, ऑपरेटिंग हैंडल को दो से तीन बार धक्का दें। बाद में, वाहक प्लेट को स्थानांतरित करें और स्थिति दें ताकि इनक्यूबेशन प्लेट टीकाकरण पिन प्लेट के नीचे हो। ऑपरेटिंग हैंडल को दबाएं, टीकाकरण पिन प्लेट को कम करें और इनक्यूबेट प्लेट की सतह के साथ पूर्ण संपर्क सुनिश्चित करने के लिए इसे एक से दो सेकंड के लिए छोड़ दें।टीकाकरण के एक दौर को पूरा करने के लिए ऑपरेटिंग हैंडल जारी करें। इनक्यूबेट प्लेट को बदलें और एंटीमाइक्रोबियल एगर प्लेटों का बैच पूरा होने तक प्रक्रिया को दोहराएं। परीक्षण किए गए उपभेदों के एक अन्य समूह को टीका लगाने के लिए एक नए टीकाकरण पिन प्लेट और बीज ब्लॉक पर स्विच करें।टीका लगाए गए रोगाणुरोधी आगर प्लेटों को कमरे के तापमान पर तब तक इनक्यूबेट करें जब तक कि इनोकुलम स्पॉट से नमी पूरी तरह से आगर में अवशोषित न हो जाए। इनक्यूबेशन के बाद, प्लेटों को उल्टा करें और बेहिचक बैक्टीरिया को उपनिवेश बनाने की अनुमति देने के लिए इनक्यूबेशन जारी रखें। छवि अधिग्रहण और डेटा आंकड़े करने के लिए, प्रोग्राम लॉन्च करने के लिए 96 डॉट मैट्रिक्स एएसटी छवि अधिग्रहण प्रणाली पर क्लिक करके शुरू करें।कार्य पट्टी से, परीक्षण जानकारी का चयन करें. एक नया परीक्षण कार्य बनाने और आवश्यक विवरण भरने के लिए नया क्लिक करें। फिर नए बनाए गए कार्य का चयन करने के लिए फोटोग्राफ और परीक्षण आइटम के बाद डेटा संग्रह दबाएं।एंटीबायोटिक की प्रारंभिक एकाग्रता का चयन करने के लिए एंटीबायोटिक नाम और ढाल का चयन करने के लिए एंटीबायोटिक्स चुनें। अंत में, छवि अधिग्रहण कनवर्टर के साथ कनेक्शन स्थापित करने के लिए कनेक्ट पर क्लिक करें। इसके बाद, इनक्यूबेट प्लेटों को डिटेक्शन प्लेट बेस पर रखें और उन्हें छवि अधिग्रहण कनवर्टर में डालें।प्लेटों की छवियों को कैप्चर करने के लिए संग्रह पर क्लिक करें। एंटीबायोटिक्स दबाएं और प्लेटों के अगले सेट का चयन करें। शुरुआती ढाल की पहचान करने के लिए ढाल चुनें, फिर छवि संग्रह के अगले दौर में आगे बढ़ें।कॉलोनी गठन को निर्धारित करने और छवियों को न्यूनतम निरोधात्मक सांद्रता में परिवर्तित करने के लिए सबमिट पर क्लिक करके प्रक्रिया को अंतिम रूप दें, जो एमआईसी मान है। सभी एमआईसी परिणामों तक पहुंचने के लिए क्वेरी पर क्लिक करें। विभिन्न फेज का उत्पादन करने के लिए डबल लेयर एगर विधि का उपयोग करके शुरू करें।फेज को एक उपयुक्त समानांतर एकाग्रता में पतला करें और 96 अच्छी तरह से बीज ब्लॉक में फेज इनोकुलम के 200 माइक्रोलीटर जोड़ें। इसके बाद, प्रत्येक तनाव की जांच के लिए एक डबल लेयर इनक्यूबेट प्लेट तैयार करें। सूखने की अनुमति देने के लिए डबल लेयर्ड प्लेट के ढक्कन के नीचे एक अंतराल छोड़ दें।तैयार फेज बीज ब्लॉक और डबल लेयर प्लेट को 96 डॉट मैट्रिक्स इनोक्यूलेटर के मोबाइल वाहक पर रखें। सभी फेज इनोकुलर को अर्ध आगर सतह पर स्थानांतरित करें। प्लेटों को कमरे के तापमान पर रहने दें जब तक कि सभी इनोकुलर नमी को अर्ध आगार में अवशोषित नहीं किया जाता है।अब चार से छह घंटे के लिए परीक्षण किए गए उपभेदों के लिए प्लेटों को 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें। प्रत्येक डबल लेयर प्लेट के प्रयोगात्मक परिणाम की छवि प्राप्त करने और सहेजने के लिए छवि अधिग्रहण कनवर्टर का उपयोग करें। प्राप्त छवियों के आधार पर एक स्प्रेडशीट में विभिन्न स्पॉट आकृतियों की संख्या और आकृति विज्ञान रिकॉर्ड करें और विभिन्न प्रकार के फेज के संबंधित अनुपात की गणना करें।एम्पीसिलीन के साथ प्लेटों पर साल्मोनेला विकास के रूपात्मक अध्ययन से पता चला है कि ए -1 में नकारात्मक नियंत्रण ने कोई वृद्धि नहीं दिखाई। ए-4 में साल्मोनेला स्ट्रेन का एमआईसी 64 माइक्रोग्राम प्रति मिलीलीटर था, जबकि ए-5 का एमआईसी 16 माइक्रोग्राम प्रति मिलीलीटर था। एम्पीसिलीन, सिप्रोफ्लोक्सासिन और एमोक्सिसिलिन-क्लैवुलैनिक एसिड का प्रतिशत प्रतिरोध मान 50% से अधिक था, जबकि डॉक्सीसाइक्लिन, फ्लोरफेनिकोल, सेफोटैक्सिम और एनरोफ्लोक्सासिन 30% से 50% जेंटामाइसिन, एमिकासिन और मेरोपेनेम ने 30% से कम के प्रतिशत प्रतिरोध मूल्य दिखाए।डबल परत प्लेटों पर साल्मोनेला विकास के रूपात्मक विश्लेषण से पता चला है कि फेज के चार मुख्य स्पॉट आकृति विज्ञान देखे गए थे। गोल स्पष्ट लिटिक स्पॉट एक फेज से था जो प्लेट पर मेजबान को मज़बूती से मार सकता था, लेकिन जो उस मेजबान के खर्च पर सफलतापूर्वक दोहराया जा सकता है या नहीं। सजीले टुकड़े का संग्रह सच्चे सजीले टुकड़े द्वारा बनाया गया था।टर्बिड लिटिक स्पॉट एक फेज से उत्पन्न हुआ जो प्लेट पर मेजबान को मज़बूती से नहीं मारता था, और जो उस मेजबान के खर्च पर सफलतापूर्वक दोहराया जा सकता है या नहीं भी हो सकता है। कोई लिटिक स्पॉट गैर-लिटिक प्रकृति का संकेत नहीं देता है। यह तकनीक आसानी से एक बार में 96 एगर लेंस को कुशलता पूर्वक स्थानांतरित करती है और उपकरण स्वचालित रूप से छवियों को पहचानते हैं और फिर लाइन पासा की गणना करते हैं।इस तकनीक से फेज के अनुसंधान और औद्योगिकीकरण को बढ़ावा देने की उम्मीद है और फेज का आवेदन एएमआर की समस्या को कम करने और हल करने के अद्भुत तरीकों में से एक है।

Research

JoVE Journal

Environment

Determination of Microbial Extracellular Enzyme Activity in Waters, Soils, and Sediments using High Throughput Microplate Assays

उच्च Throughput Microplate assays का उपयोग जल, मिट्टी, और तलछट में माइक्रोबियल कोशिकी एंजाइम गतिविधि का निर्धारण

Much of the nutrient cycling and carbon  processing in natural environments occurs through the activity of extracellular  enzymes released by ...

High-throughput Fluorometric Measurement of Potential Soil Extracellular Enzyme Activities

संभावित मिट्टी कोशिकी एंजाइम गतिविधियों के उच्च throughput fluorometric मापन

Microbes in soils and other environments produce extracellular enzymes to depolymerize and hydrolyze organic macromolecules so that they can be ...

Optimized Negative Staining: a High-throughput Protocol for Examining Small and Asymmetric Protein Structure by Electron Microscopy

अनुकूलित नकारात्मक धुंधला: इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा लघु और असममित प्रोटीन संरचना की जांच के लिए एक उच्च throughput प्रोटोकॉल

Structural determination of proteins is rather challenging for proteins with molecular masses between 40 - 200 kDa. Considering that more than half of ...

Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

दो देखा मकड़ी घुन के अनुप्रयोग<em&gt; Tetranychus urticae</em&gt; संयंत्र कीट बातचीत पढ़ाई के लिए

The two-spotted spider mite, Tetranychus urticae, is a ubiquitous polyphagous arthropod herbivore that feeds on a remarkably broad array of species, with ...

Modifying the Bank Erosion Hazard Index (BEHI) Protocol for Rapid Assessment of Streambank Erosion in Northeastern Ohio

Modifying the Bank Erosion Hazard Index BEHI Protocol for Rapid Assessment of Streambank Erosion in Northeastern Ohio

पूर्वोत्तर ओहियो में Streambank कटाव की तेजी से मूल्यांकन के लिए बैंक कटाव खतरा सूचकांक (BEHI) प्रोटोकॉल में संशोधन करना

Understanding the source of pollution in a stream is vital to preserving, restoring, and maintaining the stream&#8217;s function and habitat it provides. ...

Semi-High Throughput Screening for Potential Drought-tolerance in Lettuce (Lactuca sativa) Germplasm Collections

Semi-High Throughput Screening for Potential Drought-tolerance in Lettuce Lactuca sativa Germplasm Collections

सलाद में संभावित सूखा-सहिष्णुता के लिए अर्द्ध उच्च throughput प्रदर्शन (<em&gt; Lactuca का पौधा</em&gt;) जर्मप्लाज्म संग्रह

This protocol describes a method by which a large collection of the leafy green vegetable lettuce (Lactuca sativa L.) germplasm was screened for likely ...

High-throughput Screening of Recalcitrance Variations in Lignocellulosic Biomass: Total Lignin, Lignin Monomers, and Enzymatic Sugar Release

कुल लिग्निन, लिग्निन monomers, और enzymatic चीनी जारी: lignocellulosic बायोमास में अवज्ञा बदलाव की उच्च throughput स्क्रीनिंग

The conversion of lignocellulosic biomass to fuels, chemicals, and other commodities has been explored as one possible pathway toward reductions in the ...

The Effect of the Application of Thyme Essential Oil on Microbial Load During Meat Drying

अजवायन के मांस सुखाने के दौरान माइक्रोबियल लोड पर आवश्यक तेल के आवेदन के प्रभाव

Meat is a high protein meal that is used in the preparation of jerky, a popular food snack, where preservation and safety are important. To assure food ...

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

संयंत्र संक्रमण परीक्षण: स्प्रे और संयंत्र रोगज़नक़ Magnaporthe Grisea के साथ घाव मध्यस्थता टीका

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current ...

High-throughput, Microscale Protocol for the Analysis of Processing Parameters and Nutritional Qualities in Maize (Zea mays L.)

High-throughput, Microscale Protocol for the Analysis of Processing Parameters and Nutritional Qualities in Maize Zea mays L.

उच्च प्रवाह, मक्का में प्रसंस्करण मापदंडों और पोषण के गुणों के विश्लेषण के लिए अतिसूक्ष्म प्रोटोकॉल (Zea mays एल.)

Maize is an important grain crop in the United States and worldwide. However, maize grain must be processed prior to human consumption. Furthermore, whole ...