Name: visualizing early infection sites of rice blast disease (magnaporthe oryzae) on barley (hordeum vulgare) using a basic microscope and a smartphone
Uploaded: 2023-03-17T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualizing Early Infection Sites of Rice Blast Disease Magnaporthe oryzae on Barley Hordeum vulgare Using a Basic Microscope and a Smartphone at JoVE.com

Forfatterne anerkjenner finansiering fra USDA-NIFA-prisen 2016-67013-24816.

1. Fremstilling av eksperimentelle materialer
<ol><li>Forbered havregrynagar (OMA) ved å blande havregryn til det er et fint pulver. Tilsett 25 g havregrynpulver og 15 g agar til 500 ml ddH2O, og autoklav på mediesyklus (alternativt kokes det i 20 minutter). Hell mediet i sterile 60 mm petriskåler. MERK: Andre medietyper som induserer sporulering, for eksempel V8-agar, er akseptable for denne protokollen.</li>
	<li>Plate M. oryzae filtrerer skjefter direkte på OMA-platene ved...

<ol>
	<li>Roy, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+report+of+barley+blast+caused+by+Magnaporthe+oryzae+pathotype+Triticum+(MoT)+in+Bangladesh.">First report of barley blast caused by Magnaporthe oryzae pathotype Triticum (MoT) in Bangladesh.</a> Journal of General Plant Pathology. 87 (3), 184-191 (2021).</li><li>Dean, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Top+10+fungal+pathogens+in+molecular+plant+pathology.">The Top 10 fungal pathogens in molecular plant pathology.</a> Molecular Plant Pathology. 13 (4), 414-430 (2012).</li><li>Dean, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genome+sequence+of+the+rice+blast+fungus+Magnaporthe+grisea.">The genome sequence of the rice blast fungus Magnaporthe grisea.</a> Nature. 434 (7036), 980-986 (2005).</li><li>Wilson, R. A., Talbot, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Under+pressure:+investigating+the+biology+of+plant+infection+by+Magnaporthe+oryzae.">Under pressure: investigating the biology of plant infection by Magnaporthe oryzae.</a> Nature Reviews. Microbiology. 7 (3), 185-195 (2009).</li><li>Giraldo, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+distinct+secretion+systems+facilitate+tissue+invasion+by+the+rice+blast+fungus+Magnaporthe+oryzae.">Two distinct secretion systems facilitate tissue invasion by the rice blast fungus Magnaporthe oryzae.</a> Nature Communications. 4, 1996 (2013).</li><li>Islam, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergence+of+wheat+blast+in+Bangladesh+was+caused+by+a+SouthAmerican+lineage+of+Magnaporthe+oryzae.">Emergence of wheat blast in Bangladesh was caused by a SouthAmerican lineage of Magnaporthe oryzae.</a> BMC Biology. 14 (1), 84 (2016).</li><li>Langridge, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Economic+and+Academic+Importance+of+Barley.">Economic and Academic Importance of Barley.</a> The Barley Genome. Compendium of Plant Genomes. , 1-10 (2018).</li><li>Heath, M. C., Valent, B., Howard, R. J., Chumley, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+of+two+strains+of+Magnaporthe+grisea+with+rice,+goosegrass,+and+weeping+lovegrass.">Interactions of two strains of Magnaporthe grisea with rice, goosegrass, and weeping lovegrass.</a> Canadian Journal of Botany. 68 (8), 1627-1637 (1990).</li><li>Gowda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+analysis+of+rice-blast+fungus+Magnaporthe+oryzae+field+isolates+from+southern+India.">Genome analysis of rice-blast fungus Magnaporthe oryzae field isolates from southern India.</a> Genomics Data. 5, 284-291 (2015).</li><li>Luginbuehl, L. H., El-Sharnouby, S., Wang, N., Hibberd, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+reporters+for+functional+analysis+in+rice+leaves.">Fluorescent reporters for functional analysis in rice leaves.</a> Plant Direct. 4 (2), 00188 (2020).</li><li>Fernandez, J., Wilson, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+no+feeding+frenzy?+Mechanisms+of+nutrient+acquisition+and+utilization+during+infection+by+the+rice+blast+fungus+Magnaporthe+oryzae.">Why no feeding frenzy? Mechanisms of nutrient acquisition and utilization during infection by the rice blast fungus Magnaporthe oryzae.</a> Molecular Plant-Microbe Interactions. 25 (10), 1286-1293 (2012).</li><li>Cooper, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+Genetic+Control+of+Reactive+Oxygen+Species+in+Magnaporthe+oryzae+(the+Rice+Blast+Fungus)+through+Development,+Screening,+and+Characterization+of+a+Random+Insert+Mutant+Library.">Identifying Genetic Control of Reactive Oxygen Species in Magnaporthe oryzae (the Rice Blast Fungus) through Development, Screening, and Characterization of a Random Insert Mutant Library.</a> University of Delaware. , (2022).</li><li>Zhang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=al.The+plant+infection+test:+Spray+and+wound-mediated+inoculation+with+the+plant+pathogen+Magnaporthe+grisea.">al.The plant infection test: Spray and wound-mediated inoculation with the plant pathogen Magnaporthe grisea.</a> Journal of Visualized Experiments. (138), e57675 (2018).</li><li>Koga, H., Dohi, K., Nakayachi, O., Mori, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+inoculation+method+of+Magnaporthe+grisea+for+cytological+observation+of+the+infection+process+using+intact+leaf+sheaths+of+rice+plants.">A novel inoculation method of Magnaporthe grisea for cytological observation of the infection process using intact leaf sheaths of rice plants.</a> Physiological and Molecular Plant Pathology. 64 (2), 67-72 (2004).</li><li>Hamer, J. E., Howard, R. J., Chumley, F. G., Valent, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mechanism+for+surface+attachment+in+spores+of+a+plant+pathogenic+fungus.">A mechanism for surface attachment in spores of a plant pathogenic fungus.</a> Science. 239 (4837), 288-290 (1988).</li><li>Khang, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.+of+Magnaporthe+oryzae+effectors+into+rice+cells+and+their+subsequent+cell-to-cell+movement.">et al. of Magnaporthe oryzae effectors into rice cells and their subsequent cell-to-cell movement.</a> The Plant Cell. 22 (4), 1388-1403 (2010).</li></ol>

Det er mange ofte brukte analyser tilgjengelig for å teste M. oryzae-stammer som gir et makroskopisk nivå visuelt av en kompatibel eller inkompatibel infeksjonsrespons, for eksempel spray- eller dråpeinokulasjoner, og bruk av vurderingssystemer for å kvantifisere lesjonsstørrelser13,14. En annen vanlig analyse for M. oryzae er å teste patogenes evne til å danne sin spesialiserte penetrasjonsstruktur, apppressorium15</sup...

Magnaporthe oryzae, risblåsoppen, infiserer et utvalg kornavlinger, inkludert bygg, hvete og ris1. Dette patogenet forårsaker ødeleggende sykdommer og utgjør en verdensomspennende trussel mot disse verdifulle avlingene, og forårsaker fullstendig avlingstap hvis det ikke kontrolleres. Mange laboratorier rundt om i verden fokuserer på risblastsykdom på grunn av sin globale trussel og dens egenskaper som en utmerket modell for plante-sopp-interaksjoner2. Det har blitt fullstendig sekvensert, og genetikken til dens infeksjonssyklus, spesielt de tidlige hendelsene, er etablert 3,4. Livssyklusen begynner med en spore som spirer på en bladoverflate, og danner den spesialiserte penetrasjonsstrukturen kalt appressorium. Appressorium trenger inn i bladvevet, og infeksjonen fortsetter med utviklingen av lesjoner som starter prosessen med sporulering og spredning av sykdom4. Forhindre noen av disse tidlige hendelsene ville drastisk hemme denne ødeleggende sykdommen. Følgelig har den nyeste forskningen på blastsykdom vært fokusert på de tidlige infeksjonstrinnene, fra de spirede konidiene som danner et appressorium til utviklingen av invasive hyfer og det biotrofiske grenseflatekomplekset (BIC)5.
Den enorme mengden forskning på blastsykdom har blitt utført i ris, selv om M. oryzae er et betydelig patogen for en rekke avlinger, og nyutviklede stammer dukker opp som en global trussel mot hvete6. Mens ris er en av de tre viktigste stiftavlingene som brukes til å mate befolkningen, sammen med hvete og mais, er bygg det fjerde kornkornet når det gjelder husdyrfoder og ølproduksjon7. Etter hvert som håndverksølindustrien vokser, øker også den økonomiske verdien av bygg. Det er klare fordeler ved å bruke M. oryzae og bygg som et patosystem for å studere blastsykdom. For det første er det stammer av M. oryzae som bare smitter bygg, samt stammer som kan infisere flere gressarter. For eksempel smitter 4091-5-8 primært bare bygg, mens Guy11 og 70-15 kan infisere både bygg og ris8. Disse stammene er genetisk like, og infeksjonsprosessen er sammenlignbar9. For det andre, under standard laboratorie- og drivhusforhold, er bygg lettere å dyrke, da det ikke har de kompliserte kravene til ris (kortfattet temperaturkontroll, høy luftfuktighet, spesifikke lysspektra). Det er også bildemessige utfordringer med ris på grunn av hydrofobisiteten til bladoverflaten, som bygg ikke viser10.
Denne protokollen presenterer en enkel metode for å isolere og effektivt utnytte byggbladskjede for mikroskopisk analyse av flere infeksjonsstadier, ved hjelp av vanlige laboratorieforsyninger og en smarttelefon for datainnsamling. Denne metoden for byggbladskjedeanalysen er tilpasningsdyktig for laboratorier over hele verden, da det krever minimale forsyninger, og gir likevel et klart bilde av den mikroskopiske interaksjonen mellom patogenet og de første cellene det infiserer. Mens patogenisitetsanalyser, for eksempel en spray eller dråpeinokulering, kan gi et makrosyn på patogenets evne til å danne lesjoner, tillater denne analysen forskeren å visualisere spesifikke trinn med tidlig infeksjon, fra pre-penetrasjonshendelser til kolonisering av epidermale celler. Videre kan forskere enkelt sammenligne infeksjon med villtype sopp til infeksjon med en mutant redusert i virulens.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A6283</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell phone&#160;</td>
			<td>Google&#160;</td>
			<td>Pixel 4A</td>
			<td>Any smartphone with a rear facing camera that can be mounted in an a holder will suffice.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell phone Microscope adapter</td>
			<td>Vankey</td>
			<td>B01788LT3S</td>
			<td>https://www.amazon.com/Vankey-Cellphone-Telescope-Binocular-Microscope/dp/B01788LT3S/ref=sr_1_2_sspa?keywords=vankey+cellphone+telescope+adapter+mount&#38;qid=1662568182&#38;sprefix= 
			vankey+%2Caps%2C63&#38;sr=8-2 
			-spons&#38;psc=1&#38;spLa=ZW5jcnlwd 
			GVkUXVhbGlmaWVyPUFKNklBR 
			jlCREJaMEcmZW5jcnlwdGVkSWQ 
			9QTA2MDMxNjhBRFYxQTMzNk9E 
			M0YmZW5jcnlwdGVkQWRJZD1BM 
			DQxMzAzOTMxNzI1TzE3M1ZGTEI 
			md2lkZ2V0TmFtZT1zcF9hdGYmY 
			WN0aW9uPWNsaWNrUmVkaXJlY3 
			QmZG9Ob3RMb2dDbGljaz10cnVl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G5516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>AmScope</td>
			<td>FM690TC</td>
			<td>40x&#8211;2500x Trinocular upright epi-fluorescence microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oatmeal old fashioned rolled oats</td>
			<td>Quaker</td>
			<td>N/A</td>
			<td>https://www.amazon.com/Quaker-Oats-Old-Fashioned-Pack/dp/B00IIVBNK4/ref=asc_df_B00IIVBNK4/?tag=hyprod-20&#38;linkCode=df0 
			&#38;hvadid=312253390021&#38;hvpos= 
			&#38;hvnetw=g&#38;hvrand=98212627704 
			6839544&#38;hvpone=&#38;hvptwo=&#38;hvq 
			mt=&#38;hvdev=c&#38;hvdvcmdl=&#38;hvlocint 
			=&#38;hvlocphy=9007494&#38;hvtargid 
			=pla-568492637928&#38;psc=1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProMix BX</td>
			<td>ProMix</td>
			<td>1038500RG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rectangular coverglass</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS2975245</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slides, microscope</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stage micrometer&#160;</td>
			<td>OMAX</td>
			<td>A36CALM7</td>
			<td>0.1 mm and 0.01 mm Microscope calibration slide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T6146</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing early infection sites of rice blast disease (magnaporthe oryzae) on barley (hordeum vulgare) using a basic microscope and a smartphone

Å forstå hvordan planter og patogener samhandler, og om samspillet kulminerer i forsvar eller sykdom, er nødvendig for å utvikle sterkere og mer bærekraftige strategier for plantes helse. Fremskritt i metoder som mer effektivt avbilder plantepatogenprøver under infeksjon og kolonisering, har gitt verktøy som risbladskjedeanalysen, som har vært nyttig for å overvåke infeksjon og tidlige koloniseringshendelser mellom ris og sopppatogenet, Magnaporthe oryzae. Dette hemi-biotrofiske patogenet forårsaker alvorlig sykdomstap i ris og relaterte monocoter, inkludert hirse, rug, bygg og mer nylig, hvete. Bladkappeanalysen, når den utføres riktig, gir en optisk klar planteseksjon, flere lag tykk, noe som gjør det mulig for forskere å utføre levende celleavbildning under patogenangrep eller generere faste prøver farget for spesifikke funksjoner. Detaljerte cellulære undersøkelser av bygg-M. oryzae-interaksjonen har ligget bak risvertens, til tross for den økende betydningen av dette kornet som matkilde for dyr og mennesker og som gjærede drikker. Rapportert her er utviklingen av en byggbladskjedeanalyse for intrikate studier av M. oryzae-interaksjoner i løpet av de første 48 timene etter inokulering. Bladkappeanalysen, uavhengig av hvilken art som studeres, er delikat; Forutsatt er en protokoll som dekker alt, fra byggvekstforhold og oppnåelse av en bladkappe, til inokulering, inkubasjon og avbildning av patogenet på planteblader. Denne protokollen kan optimaliseres for screening med høy gjennomstrømning ved hjelp av noe så enkelt som en smarttelefon for bildebehandling.

En skildring av den opprinnelige arbeidsflyten for denne teknikken er vist i figur 1. Slirene ble høstet fra 14 dager gamle mottakelige "Lacey" byggplanter (H. vulgare). Conidiene ble høstet fra 10 dager gamle sporulerende M. oryzae OMA-plater, med en conidial suspensjon fremstilt ved bruk av steril ddH2O for en endelig konsentrasjon på 5 x 104 sporer per ml. Inokulumsuspensjonen ble direkte påført bladkappene, som ble festet til sterile petriskla...

Watch this Scientific Journal Video about Visualizing Early Infection Sites of Rice Blast Disease Magnaporthe oryzae on Barley Hordeum vulgare Using a Basic Microscope and a Smartphone at JoVE.com

Visualizing Early Infection Sites of Rice Blast Disease Magnaporthe oryzae on Barley Hordeum vulgare Using a Basic Microscope and a Smartphone

Dette er en enkel protokoll for en byggbladskjedeanalyse ved bruk av minimale reagenser og vanlig laboratorieutstyr (inkludert en grunnleggende smarttelefon). Hensikten er å visualisere den tidlige infeksjonsprosessen av blastsykdom i laboratorier uten tilgang til avansert mikroskopiutstyr.

Visualisere tidlige infeksjonssteder av risblastsykdom (Magnaporthe oryzae) på bygg (Hordeum vulgare) ved hjelp av et grunnleggende mikroskop og en smarttelefon

Understanding how plants and pathogens interact, and whether that interaction culminates in defense or disease, is required to develop stronger and more ...

Vår protokoll er en forenklet metode som gjør det mulig for forskere å visualisere tidlige smittetrinn av villtype og genetiske soppmutanter uten bruk av dyrt utstyr. Den største fordelen med denne teknikken er bruken av grunnleggende laboratorieforsyninger for å svare på komplekse biologiske spørsmål og for rask screening av soppmutanter for videre analyse. En vanskelig del av denne teknikken er behandlingen av skjeden.Sliren er et tynt lag med celler som lett kan skades, så forsiktig håndtering er avgjørende for et vellykket eksperiment. For å begynne, velg byg vokst til andre bladtrinn. Og ved hjelp av steril saks, klipp byggplanten like over jordlinjen.Bruk tang og skalpell, kutt forsiktig skjeden til det første bladet som er åpent i lengderetningen. Og bruk tangen, fjern den fra bunnen av det andre bladet. Bruk en skalpell, kutt det meste av det første bladet vekk fra skjeden, og la bare 0,5 tommer av bladvevet for montering.Legg det første bladet flatt i en steril 60 millimeter petriskål som inneholder et vått papirhåndkle for å opprettholde fuktigheten inne i tallerkenen. Teip bladvevet til bunnen av petriskålen. Velg en ni til 12 dager gammel Magnaporthe oryzae kulturplate og tilsett 0,5 til to milliliter sterilt vann til den.Bruk en steril inokulasjonssløyfe, skrap forsiktig mycelien for å frigjøre de vedlagte konidierene. Pipetter forsiktig conidialsuspensjonen inn i et mikrosentrifugerør som inneholder et lite stykke osteklut for å filtrere ut store biter av mycel fra conidialsuspensjonen. Om nødvendig, fortynn sporekonsentrasjonen med sterilt vann til fem ganger 10 til fjerde sporer per milliliter, da for høy konsentrasjon gjør avbildning av individuelle infeksjonssteder utfordrende.Avhengig av kappestørrelsen, pipetter forsiktig 25 til 50 mikroliter av conidialsuspensjonen inne i den valsede bladkappen. Deretter fyller du fire eller fem 500 milliliter beger med dobbelt destillert vann og varme til damping. Hold lokket på petriskålen over et av de dampende begerglassene for å fange fuktighet inne i tallerkenen.Stable de infiserte bladkappeplatene og omgi dem med de resterende varme begerglassene, da det skaper et fuktig, fuktig miljø for sporene å spire. Beskytt dette oppsettet mot lys ved å dekke det med en ensfarget gummi- eller plastboks og la det være uforstyrret i 48 timer eller ønsket tidspunkt for avbildning. Forbered flekken ved å blande nyfortynnet 45% eddiksyre og 0,1% trypanblå.Aliquot en milliliter av fargestoffoppløsningen i mikrosentrifugerør. Bruk en skalpell, kutt forsiktig bladskjeden vekk fra båndet. Bruk tang, plasser kappen i mikrosentrifugerøret og sørg for at den er helt nedsenket i fargestoffløsningen.La rørene stå i to timer i en 40 graders varmeblokk eller vannbad for fargestoffet å trenge inn i bladet. Skyll deretter bladskjeden forsiktig tre ganger i 60% fersk glyserol for å fjerne det ekstra fargestoffet. Hold skjeden i glyserol til den er klar til å monteres på lysbilder.Plasser skjeden på et rent glassglass og tilsett noen dråper 60% glyserol. Bruk et dissekerende mikroskop og to par tang, rull forsiktig ut skjeden, og la det inokulerte senteret vende opp. Hold sliren åpen med tangen, plasser dekselet på toppen for å forhindre at sliren krøller seg og blokkerer infeksjonsstedet.Forsegle dekselet med neglelakk for langtidsoppbevaring eller kortvarig oppbevaring av tape. Observer lysbildene under et sammensatt lysmikroskop. Ta grunnleggende bilder med en smarttelefon ved å montere en mobiltelefonadapter på mikroskopet.For Android-enheter, juster kameraapplikasjonsinnstillingene for å blinke av, deaktiver toppskudd, deaktiver automatisk justering av lysstyrke og skygger, og sett bildeoppløsningen til full. Etter montering av mobiltelefonen, ta et bilde av et skalamikrometer med et ønsket mål for å skaffe dataene. Juster telefonens zoom til 2,5 x og hold den konsekvent for å opprettholde en konsekvent pikselstørrelse.Midten av skjeden huser den største konsentrasjonen av sporer og infiserende appressoria. Sikt derfor på ni til 12 bilder av hver kappe for å få signifikante tall for statistisk analyse. Infeksjonsstedene i sliren ble avbildet ved hjelp av en smarttelefon og smarttelefonmikroskopadapter etter farging med trypanblått.Varmen og eddiksyren i fargeprosedyren myker bladvevet forsiktig. Etterfargingsskyllene i 60% glyserol fjerner ikke bare overflødig flekk, men bidrar til å redusere lysspredningen forårsaket av bladet og forbedre bildekvaliteten. Avvik fra fargeprotokollen kan resultere i suboptimale resultater, som vist her.Bygg infisert med 4091 vill type produserte vellykket infiserte celler identifisert ved tilstedeværelse av infiserte hyfer inne i bladkappevevet. Ved mutert J99A-infeksjon ble det lagt merke til vellykket utvikling av appressoria og penetrasjonspinner, men ga ikke invasive hyfer. Timing er viktig for smittebaserte analyser.Riktig alderen planter og soppsporer er avgjørende for å lykkes. I denne studien så vi på tilstedeværelse eller fravær av infeksjonsstrukturene. Ytterligere eksperimenter kan svare på spørsmål angående fenotypen til infeksjonsstrukturen og den til de invaderende hyfer.Vår metodikk er ikke ny, men en forenklet, tilgjengelig versjon av et mer komplekst og kostbart eksperiment.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Visualizing Early Infection Sites of Rice Blast Disease (Magnaporthe oryzae) on Barley (Hordeum vulgare) Using a Basic Microscope and a Smartphone

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Forstå Tidlig organogenesis hjelp av en forenklet<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering Protocol i<em&gt; Xenopus</em

Organogenesis is the study of how organs are specified and then acquire their specific shape and functions during development.  The Xenopuslaevis embryo ...

Alginate Encapsulation of Pluripotent Stem Cells Using a Co-axial Nozzle

Alginat Innkapsling av Pluripotent stamceller ved hjelp av en Co-axial Nozzle

Pluripotent stem cells (PS cells) are the focus of intense research due to their role in regenerative medicine and drug screening.  However, the ...

Analysis of Zebrafish Kidney Development with Time-lapse Imaging Using a Dissecting Microscope Equipped for Optical Sectioning

Analyse av Sebrafisk Nyre Development med Time-lapse Imaging Ved hjelp av en dissekere mikroskop Utstyrt for Optical Seksjonering

In order to understand organogenesis, the spatial and temporal alterations that occur during development of tissues need to be recorded. The method ...

Isolation and Characterization of Primary Rat Valve Interstitial Cells: A New Model to Study Aortic Valve Calcification

Isolering og karakterisering av primære rotte ventil interstitielle cellene: en ny modell å studere Aortaklaff forkalkninger

Calcific aortic valve disease (CAVD) is characterized by the progressive thickening of the aortic valve leaflets. It is a condition frequently found in ...

Visualizing Multiciliated Cells in the Zebrafish Through a Combined Protocol of Whole Mount Fluorescent In Situ Hybridization and Immunofluorescence

Visualizing Multiciliated Cells in the Zebrafish Through a Combined Protocol of Whole Mount Fluorescent In Situ Hybridization and Immunofluorescence

Visualisere Multiciliated celler i sebrafisk gjennom kombinert protokollen hele Mount fluorescerende In Situ hybridisering og Immunofluorescence

In recent years, the zebrafish embryo has emerged as a popular model to study developmental biology due to traits such as ex utero embryo development and ...

Visualizing the Developing Brain in Living Zebrafish using Brainbow and Time-lapse Confocal Imaging

Visualisere den utviklende hjernen i levende sebrafisk ved hjelp av Brainbow og Time-lapse Confocal Imaging

Development of the vertebrate nervous system requires a precise coordination of complex cellular behaviors and interactions. The use of high resolution in ...

Confocal Microscope-Based Laser Ablation and Regeneration Assay in Zebrafish Interneuromast Cells

Konfokal mikroskopbasert laserablasjons- og regenereringsanalyse i sebrafisk interneuromastceller

Hair cells are mechanosensory cells that mediate the sense of hearing. These cells do not regenerate after damage in humans, but they are naturally ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

Utarbeidelse av små RNA biblioteker for sekvensering fra tidlig mus embryoer

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...

Isolation of Murine Spermatogenic Cells using a Violet-Excited Cell-Permeable DNA Binding Dye

Isolering av murine spermatogene celler ved hjelp av en violet-spent celle-gjennomtrengelig DNA bindende fargestoff

Isolation of meiotic spermatocytes is essential to investigate molecular mechanisms underlying meiosis and spermatogenesis. Although there are established ...

A Protocol for Immunohistochemistry and RNA In-situ Distribution within Early Drosophila Embryo

A Protocol for Immunohistochemistry and RNA In-situ Distribution within Early Drosophila Embryo

En protokoll for immunhiistokjemi og RNA in-situ distribusjon innen tidlig Drosophila embryo

Calcium induced calcium release signaling (CICR) plays a critical role in many biological processes. Every cellular activity from cell proliferation and ...