Name: testing the in vitro and in vivo efficiency of mrna-lipid nanoparticles formulated by microfluidic mixing
Uploaded: 2023-01-20T13:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Testing the In Vitro and In Vivo Efficiency of mRNA-Lipid Nanoparticles Formulated by Microfluidic Mixing at JoVE.com

تعترف M.J.M. بالدعم المقدم من جائزة المبتكر الجديد لمدير المعاهد الوطنية الأمريكية للصحة (NIH) (DP2 TR002776) ، وجائزة Burroughs Wellcome Fund Career في الواجهة العلمية (CASI) ، وجائزة CAREER لمؤسسة العلوم الوطنية الأمريكية (CBET-2145491) ، وتمويل إضافي من المعاهد الوطنية للصحة (NCI R01 CA241661 و NCI R37 CA244911 و NIDDK R01 DK123049).

ملاحظة: حافظ دائما على ظروف خالية من RNase عند صياغة mRNA-LNPs عن طريق مسح الأسطح والمعدات بمطهر سطحي ل RNases و DNA. استخدم فقط النصائح والكواشف الخالية من RNase.
تم تنفيذ جميع الإجراءات الحيوانية وفقا للمبادئ التوجيهية لرعاية واستخدام المختبر في جامعة بنسلفانيا وبروتوكول معتمد من قبل ا...

<ol>
	<li>Cheng, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+organ+targeting+(SORT)+nanoparticles+for+tissue-specific+mRNA+delivery+and+CRISPR-Cas+gene+editing.">Selective organ targeting (SORT) nanoparticles for tissue-specific mRNA delivery and CRISPR-Cas gene editing.</a> Nature Nanotechnology. 15 (4), 313-320 (2020).</li><li>Wood, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+approves+patisiran+to+treat+hereditary+transthyretin+amyloidosis.">FDA approves patisiran to treat hereditary transthyretin amyloidosis.</a> Nature Reviews Neurology. 14 (9), 509 (2018).</li><li>Zhang, X., Goel, V., Robbie, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetics+of+patisiran,+the+first+approved+RNA+interference+therapy+in+patients+With+hereditary+transthyretin-mediated+amyloidosis.">Pharmacokinetics of patisiran, the first approved RNA interference therapy in patients With hereditary transthyretin-mediated amyloidosis.</a> Journal of Clinical Pharmacology. 60 (5), 573-585 (2019).</li><li>Shepherd, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scalable+mRNA+and+siRNA+lipid+nanoparticle+production+using+a+parallelized+microfluidic+device.">Scalable mRNA and siRNA lipid nanoparticle production using a parallelized microfluidic device.</a> Nano Letters. 21 (13), 5671-5680 (2021).</li><li>Barbier, A. J., Jiang, A. Y., Zhang, P., Wooster, R., Anderson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+progress+of+mRNA+vaccines+and+immunotherapies.">The clinical progress of mRNA vaccines and immunotherapies.</a> Nature Biotechnology. 40 (6), 840-854 (2022).</li><li>Mukalel, A. J., Riley, R. S., Zhang, R., Mitchell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticles+for+nucleic+acid+delivery:+Applications+in+cancer+immunotherapy.">Nanoparticles for nucleic acid delivery: Applications in cancer immunotherapy.</a> Cancer Letters. 458, 102-112 (2019).</li><li>Akhtar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+delivery+of+siRNA+and+antisense+oligonucleotides.">Oral delivery of siRNA and antisense oligonucleotides.</a> Journal of Drug Targeting. 17 (7), 491-495 (2009).</li><li>Guimaraes, P. P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ionizable+lipid+nanoparticles+encapsulating+barcoded+mRNA+for+accelerated+in+vivo+delivery+screening.">Ionizable lipid nanoparticles encapsulating barcoded mRNA for accelerated in vivo delivery screening.</a> Journal of Controlled Release. 316, 404-417 (2019).</li><li>Qiu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+nanoparticle-mediated+codelivery+of+Cas9+mRNA+and+single-guide+RNA+achieves+liver-specific+in+vivo+genome+editing+of+Angptl3.">Lipid nanoparticle-mediated codelivery of Cas9 mRNA and single-guide RNA achieves liver-specific in vivo genome editing of Angptl3.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 118 (10), 2020401118 (2021).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helper+lipid+structure+influences+protein+adsorption+and+delivery+of+lipid+nanoparticles+to+spleen+and+liver.">Helper lipid structure influences protein adsorption and delivery of lipid nanoparticles to spleen and liver.</a> Biomaterials Science. 9 (4), 1449-1463 (2021).</li><li>El-Mayta, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+nanoparticle+platform+for+accelerated+in+vivo+oral+delivery+screening+of+nucleic+acids.">A nanoparticle platform for accelerated in vivo oral delivery screening of nucleic acids.</a> Advanced Therapeutics. 4 (1), 2000111 (2021).</li><li>Patel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naturally-occurring+cholesterol+analogues+in+lipid+nanoparticles+induce+polymorphic+shape+and+enhance+intracellular+delivery+of+mRNA.">Naturally-occurring cholesterol analogues in lipid nanoparticles induce polymorphic shape and enhance intracellular delivery of mRNA.</a> Nature Communications. 11, 983 (2020).</li><li>Kulkarni, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+of+lipid+nanoparticles+for+in+vitro+and+in+vivo+delivery+of+plasmid+DNA.">Design of lipid nanoparticles for in vitro and in vivo delivery of plasmid DNA.</a> Nanomedicine: Nanotechnology, Biology, and Medicine. 13 (4), 1377-1387 (2017).</li><li>Cheng, X., Lee, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+helper+lipids+in+lipid+nanoparticles+(LNPs)+designed+for+oligonucleotide+delivery.">The role of helper lipids in lipid nanoparticles (LNPs) designed for oligonucleotide delivery.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 99, 129-137 (2016).</li><li>Varkouhi, A. K., Scholte, M., Storm, G., Haisma, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endosomal+escape+pathways+for+delivery+of+biologicals.">Endosomal escape pathways for delivery of biologicals.</a> Journal of Controlled Release. 151 (3), 220-228 (2011).</li><li>Granot, Y., Peer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivering+the+right+message:+Challenges+and+opportunities+in+lipid+nanoparticles-mediated+modified+mRNA+therapeutics-An+innate+immune+system+standpoint.">Delivering the right message: Challenges and opportunities in lipid nanoparticles-mediated modified mRNA therapeutics-An innate immune system standpoint.</a> Seminars in Immunology. 34, 68-77 (2017).</li><li>Gan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticles+containing+constrained+phospholipids+deliver+mRNA+to+liver+immune+cells+in+vivo+without+targeting+ligands.">Nanoparticles containing constrained phospholipids deliver mRNA to liver immune cells in vivo without targeting ligands.</a> Bioengineering and Translational Medicine. 5 (3), 10161 (2020).</li><li>Patel, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydroxycholesterol+substitution+in+ionizable+lipid+nanoparticles+for+mRNA+delivery+to+T+cells.">Hydroxycholesterol substitution in ionizable lipid nanoparticles for mRNA delivery to T cells.</a> Journal of Controlled Release. 347, 521-532 (2022).</li><li>Robinson, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+nanoparticle-delivered+chemically+modified+mRNA+restores+chloride+secretion+in+cystic+fibrosis.">Lipid nanoparticle-delivered chemically modified mRNA restores chloride secretion in cystic fibrosis.</a> Molecular Therapy. 26 (8), 2034-2046 (2018).</li><li>Love, K. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid-like+materials+for+low-dose,+in+vivo+gene+silencing.">Lipid-like materials for low-dose, in vivo gene silencing.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (5), 1864-1869 (2010).</li><li>Kauffman, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+lipid+nanoparticle+formulations+for+mRNA+delivery+in+vivo+with+fractional+factorial+and+definitive+screening+designs.">Optimization of lipid nanoparticle formulations for mRNA delivery in vivo with fractional factorial and definitive screening designs.</a> Nano Letters. 15 (11), 7300-7306 (2015).</li><li>Billingsley, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ionizable+lipid+nanoparticle-mediated+mRNA+delivery+for+human+CAR+T+cell+engineering.">Ionizable lipid nanoparticle-mediated mRNA delivery for human CAR T cell engineering.</a> Nano Letters. 20 (3), 1578-1589 (2020).</li><li>Ramaswamy, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+delivery+of+factor+IX+messenger+RNA+for+protein+replacement+therapy.">Systemic delivery of factor IX messenger RNA for protein replacement therapy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (10), 1941-1950 (2017).</li><li>Leung, A. K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+nanoparticles+containing+siRNA+synthesized+by+microfluidic+mixing+exhibit+an+electron-dense+nanostructured+core.">Lipid nanoparticles containing siRNA synthesized by microfluidic mixing exhibit an electron-dense nanostructured core.</a> Journal of Physical Chemistry C. 116 (34), 18440-18450 (2012).</li><li>Billingsley, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthogonal+design+of+experiments+for+optimization+of+lipid+nanoparticles+for+mRNA+engineering+of+CAR+T+cells.">Orthogonal design of experiments for optimization of lipid nanoparticles for mRNA engineering of CAR T cells.</a> Nano Letters. 22 (1), 533-542 (2022).</li><li>Khalil, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcutaneous+administration+of+D-luciferin+is+an+effective+alternative+to+intraperitoneal+injection+in+bioluminescence+imaging+of+xenograft+tumors+in+nude+mice.">Subcutaneous administration of D-luciferin is an effective alternative to intraperitoneal injection in bioluminescence imaging of xenograft tumors in nude mice.</a> ISRN Molecular Imaging. 2013, 689279 (2013).</li><li>Qin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RGD+peptide-based+lipids+for+targeted+mRNA+delivery+and+gene+editing+applications.">RGD peptide-based lipids for targeted mRNA delivery and gene editing applications.</a> RSC Advances. 12 (39), 25397-25404 (2022).</li><li>Pardi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+kinetics+of+nucleoside-modified+mRNA+delivered+in+lipid+nanoparticles+to+mice+by+various+routes.">Expression kinetics of nucleoside-modified mRNA delivered in lipid nanoparticles to mice by various routes.</a> Journal of Controlled Release. 217, 345-351 (2015).</li><li>Finn, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+administration+of+CRISPR/Cas9+lipid+nanoparticles+achieves+robust+and+persistent+in+vivo+genome+editing.">A single administration of CRISPR/Cas9 lipid nanoparticles achieves robust and persistent in vivo genome editing.</a> Cell Reports. 22 (9), 2227-2235 (2018).</li><li>Truong, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+nanoparticle-targeted+mRNA+therapy+as+a+treatment+for+the+inherited+metabolic+liver+disorder+arginase+deficiency.">Lipid nanoparticle-targeted mRNA therapy as a treatment for the inherited metabolic liver disorder arginase deficiency.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (42), 21150-21159 (2019).</li><li>Cheng, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendrimer-based+lipid+nanoparticles+deliver+therapeutic+FAH+mRNA+to+normalize+liver+function+and+extend+survival+in+a+mouse+model+of+hepatorenal+tyrosinemia+type+I.">Dendrimer-based lipid nanoparticles deliver therapeutic FAH mRNA to normalize liver function and extend survival in a mouse model of hepatorenal tyrosinemia type I.</a> Advanced Materials. 30 (52), 1805308 (2018).</li><li>Sedic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+evaluation+of+lipid+nanoparticle-formulated+modified+mRNA+in+the+Sprague-Dawley+rat+and+cynomolgus+monkey.">Safety evaluation of lipid nanoparticle-formulated modified mRNA in the Sprague-Dawley rat and cynomolgus monkey.</a> Veterinary Pathology. 55 (2), 341-354 (2018).</li><li>Veiga, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+specific+delivery+of+modified+mRNA+expressing+therapeutic+proteins+to+leukocytes.">Cell specific delivery of modified mRNA expressing therapeutic proteins to leukocytes.</a> Nature Communications. 9 (1), 4493 (2018).</li><li>Pattipeiluhu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anionic+lipid+nanoparticles+preferentially+deliver+mRNA+to+the+hepatic+reticuloendothelial+system.">Anionic lipid nanoparticles preferentially deliver mRNA to the hepatic reticuloendothelial system.</a> Advanced Materials. 34 (16), 2201095 (2022).</li><li>Rosenblum, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR-Cas9+genome+editing+using+targeted+lipid+nanoparticles+for+cancer+therapy.">CRISPR-Cas9 genome editing using targeted lipid nanoparticles for cancer therapy.</a> Science Advances. 6 (47), (2020).</li><li>Fenton, O. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioinspired+alkenyl+amino+alcohol+ionizable+lipid+materials+for+highly+potent+in+vivo+mRNA+delivery.">Bioinspired alkenyl amino alcohol ionizable lipid materials for highly potent in vivo mRNA delivery.</a> Advanced Materials. 28 (15), 2939-2943 (2016).</li><li>Kauffman, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+lipid+nanoparticle+formulations+for+mRNA+delivery+in+vivo+with+fractional+factorial+and+definitive+screening+designs.">Optimization of lipid nanoparticle formulations for mRNA delivery in vivo with fractional factorial and definitive screening designs.</a> Nano Letters. 15 (11), 7300-7306 (2015).</li><li>Tomb&#225;cz, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+CD4++T+cell+targeting+and+genetic+recombination+using+engineered+CD4++cell-homing+mRNA-LNPs.">Highly efficient CD4+ T cell targeting and genetic recombination using engineered CD4+ cell-homing mRNA-LNPs.</a> Molecular Therapy. 29 (11), 3293-3304 (2021).</li><li>Kim, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+lipid+nanoparticles+for+enhanced+intracellular+delivery+of+mRNA+through+inhalation.">Engineering lipid nanoparticles for enhanced intracellular delivery of mRNA through inhalation.</a> Nano. 9 (9), 14792-14806 (2022).</li><li>Bevers, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mRNA-LNP+vaccines+tuned+for+systemic+immunization+induce+strong+antitumor+immunity+by+engaging+splenic+immune+cells.">mRNA-LNP vaccines tuned for systemic immunization induce strong antitumor immunity by engaging splenic immune cells.</a> Molecular Therapy. 30 (9), 3078-3094 (2022).</li></ol>

باستخدام سير العمل هذا ، يمكن صياغة مجموعة متنوعة من mRNA-LNPs واختبارها من حيث كفاءتها في المختبر وفي الجسم الحي. يمكن تبديل الدهون والسواغات المؤينة ودمجها بنسب مولية مختلفة ونسب مختلفة من الدهون المؤينة إلى mRNA لإنتاج mRNA-LNPs بخصائص فيزيائية كيميائية مختلفة22. هنا ، قمنا...

أظهرت الجسيمات النانوية الدهنية (LNPs) وعدا كبيرا في السنوات الأخيرة في مجال العلاج الجيني غير الفيروسي. في عام 2018 ، وافقت إدارة الغذاء والدواء الأمريكية (FDA) على أول علاج على الإطلاق لتداخل الحمض النووي الريبي (RNAi) ، Onpattro by Alnylam ، لعلاج الداء النشواني الوراثي transthyretin1،2،3،4. كانت هذه خطوة مهمة إلى الأمام للجسيمات النانوية الدهنية والعلاجات القائمة على الحمض النووي الريبي. في الآونة الأخيرة ، حصلت Moderna و Pfizer / BioNTech على موافقات إدارة الغذاء والدواء الأمريكية على لقاحات mRNA-LNP ضد SARS-CoV-2 4,5. في كل من علاجات الحمض النووي القائمة على LNP ، يعمل LNP على حماية حمولته من التدهور بواسطة النيوكليازات وتسهيل التوصيل القوي داخل الخلايا 6,7. بينما شهدت LNPs نجاحا في علاجات RNAi وتطبيقات اللقاح ، تم أيضا استكشاف mRNA-LNPs لاستخدامها في العلاجات البديلة للبروتين8 وكذلك للتوصيل المشترك ل Cas9 mRNA وتوجيه الحمض النووي الريبي لتسليم نظام CRISPR-Cas9 لتحرير الجينات9. ومع ذلك ، لا توجد تركيبة واحدة محددة مناسبة تماما لجميع التطبيقات ، ويمكن أن تؤثر التغييرات الطفيفة في معلمات صياغة LNP بشكل كبير على الفاعلية والتوزيع الحيوي في الجسم الحي8،10،11. وبالتالي ، يجب تطوير وتقييم mRNA-LNPs الفردية لتحديد الصيغة المثلى لكل علاج قائم على LNP.
عادة ما يتم صياغة LNPs بأربعة مكونات دهنية: الدهون المؤينة ، والفوسفوليبيد ، والكوليسترول ، ومترافق البولي إيثيلين جلايكول (PEG) (PEG) المرتبط بالدهون (Lipid-PEG) 11،12،13. يعتمد التوصيل القوي داخل الخلايا الذي تسهله LNPs ، جزئيا ، على مكون الدهون المؤين12. هذا المكون محايد عند درجة الحموضة الفسيولوجية ولكنه يصبح مشحونا إيجابيا في البيئة الحمضية للإندوسوم11. يعتقد أن هذا التغيير في الشحنة الأيونية هو مساهم رئيسي في الهروب الداخلي12،14،15. بالإضافة إلى الدهون المؤينة ، يعمل مكون الفوسفوليبيد (الدهون المساعدة) على تحسين تغليف الشحنة ويساعد في الهروب الداخلي ، ويوفر الكوليسترول الاستقرار ويعزز اندماج الغشاء ، ويقلل الدهون-PEG من تراكم LNP و opsonization في الدورةالدموية 10،11،14،16. لصياغة LNP ، يتم دمج مكونات الدهون هذه في طور عضوي ، عادة الإيثانول ، ويتم خلطها مع مرحلة مائية تحتوي على شحنة الحمض النووي. عملية صياغة LNP متعددة الاستخدامات للغاية من حيث أنها تسمح باستبدال المكونات المختلفة بسهولة ودمجها بنسب مولية مختلفة من أجل صياغة العديد من تركيبات LNP مع العديد من الخصائص الفيزيائية والكيميائية10,17. ومع ذلك ، عند استكشاف هذا التنوع الكبير من LNPs ، من الأهمية بمكان تقييم كل صيغة باستخدام إجراء موحد لقياس الاختلافات في التوصيف والأداء بدقة.
هنا ، يتم تحديد سير العمل الكامل لصياغة mRNA-LNPs وتقييم أدائها في الخلايا.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.1 M Hydrochloric Acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7647-01-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#956;m Syringe Filters</td>
			<td>Genesee</td>
			<td>25-243</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL BD Slip Tip Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[methoxy(polyethylene glycol)-2000] (ammonium salt) (C14-PEG2000)</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>880150P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (DOPE)</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>850725P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL Eppendorf Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL Conical Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-70C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 proof Ethanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>2716</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23G Needles</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-6C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 mL BD Disposable Syringes with Luer-Lok tips</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-823-435</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 mL Dialysis Cassettes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A52976</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 Well Black Wall Black Bottom Plate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>07-000-135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 Well White/Clear Bottom Plate, TC Surface</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>165306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Acetate, 1 Kilogram</td>
			<td>Research Products International</td>
			<td>&#160;631-61-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Citrate dibasic</td>
			<td>SIgma</td>
			<td>3012-65-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Luer-Lok Syringe sterile, single use, 5 mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C12-200 Ionizable Lipid</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>36699</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 Mice</td>
			<td>Jackson Laboratory</td>
			<td>000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>57-88-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CleanCap FLuc mRNA (5moU)</td>
			<td>TriLink Biotechnologies</td>
			<td>L-7202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable cuvettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14955129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin, Potassium Salt</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>L2916</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>11965-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Exel Insulin Syringes - 0.5 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1484132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35-010-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hep G2 [HEPG2]</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HB-8065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyPure Molecular Biology Grade Water</td>
			<td>Cytiva</td>
			<td>SH30538.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infinite 200 PRO Plate Reader</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large Kimwipes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-666-11D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luciferase Assay Kit</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E4550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoAssemblr Ignite Cartridges - Classic - 100 Pack</td>
			<td>Precision Nanosystems</td>
			<td>NIN0065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoAssemblr Ignite Instrument</td>
			<td>Precision Nanosystems</td>
			<td>NIN0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS - Phosphate-Buffered Saline (10x) pH 7.4, RNase-free</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>AM9624</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QB Citrate Buffer, (Citrate 100 mM) pH 3.0</td>
			<td>Teknova</td>
			<td>Q2442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quant-it RiboGreen RNA Assay Kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>R11490</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reporter Lysis 5x Buffer</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E3971</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNase Away Surface Decontaminant</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>7000TS1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7601-54-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TNS reagent (6-(p-Toluidino)-2-naphthalenesulfonic acid sodium salt)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T9792</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9036-19-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zetasizer</td>
			<td>Malvern Panalytical</td>
			<td>NanoZS</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

testing the in vitro and in vivo efficiency of mrna-lipid nanoparticles formulated by microfluidic mixing

جذبت الجسيمات النانوية الدهنية (LNPs) اهتماما واسع النطاق مؤخرا مع التطوير الناجح للقاحات COVID-19 mRNA بواسطة Moderna و Pfizer / BioNTech. أثبتت هذه اللقاحات فعالية علاجات mRNA-LNP وفتحت الباب أمام التطبيقات السريرية المستقبلية. في أنظمة mRNA-LNP ، تعمل LNPs كمنصات توصيل تحمي شحنة mRNA من التدهور بواسطة النيوكليازات وتتوسط في توصيلها داخل الخلايا. تتكون LNPs عادة من أربعة مكونات: الدهون المؤينة ، والفوسفوليبيد ، والكوليسترول ، واقتران البولي إيثيلين جلايكول (PEG) المرتبط بالدهون (lipid-PEG). هنا ، يتم صياغة LNPs التي تغلف mRNA بتشفير لوسيفيراز اليراع عن طريق خلط الموائع الدقيقة للمرحلة العضوية التي تحتوي على مكونات الدهون LNP والمرحلة المائية التي تحتوي على mRNA. ثم يتم اختبار mRNA-LNPs في المختبر لتقييم كفاءة نقلها في خلايا HepG2 باستخدام مقايسة قائمة على لوحة التوهج الحيوي. بالإضافة إلى ذلك ، يتم تقييم mRNA-LNPs في الجسم الحي في الفئران C57BL / 6 بعد الحقن في الوريد عبر الوريد الجانبي الذيل. يتم إجراء تصوير التلألؤ الحيوي لكامل الجسم باستخدام نظام التصوير في الجسم الحي . تم عرض النتائج التمثيلية لخصائص mRNA-LNP ، وكفاءة نقلها في خلايا HepG2 ، والتدفق الكلي للإنارة في الفئران C57BL / 6.

تمت صياغة mRNA-LNPs باستخدام أداة الموائع الدقيقة التي تمتلك متوسط قطر هيدروديناميكي يبلغ 76.16 نانومتر ومؤشر تشتت متعدد يبلغ 0.098. تم العثور على pKa من mRNA-LNPs ليكون 5.75 عن طريق إجراء مقايسة TNS18. تم حساب كفاءة التغليف لهذه mRNA-LNPs لتكون 92.3٪ باستخدام مقايسة التألق المعدلة والم...

Watch this Scientific Journal Video about Testing the In Vitro and In Vivo Efficiency of mRNA-Lipid Nanoparticles Formulated by Microfluidic Mixing at JoVE.com

Testing the In Vitro and In Vivo Efficiency of mRNA-Lipid Nanoparticles Formulated by Microfluidic Mixing

هنا ، يتم تقديم بروتوكول لصياغة الجسيمات النانوية الدهنية (LNPs) التي تغلف mRNA الذي يشفر لوسيفيراز اليراعات. تم اختبار هذه LNPs لفعاليتها في المختبر في خلايا HepG2 وفي الجسم الحي في الفئران C57BL / 6.

اختبار الكفاءة في المختبر وفي الجسم الحي للجسيمات النانوية mRNA-Lipid التي تمت صياغتها عن طريق خلط الموائع الدقيقة

Lipid nanoparticles (LNPs) have attracted widespread attention recently with the successful development of the COVID-19 mRNA vaccines by Moderna and ...

يمكن استخدام هذا البروتوكول لصياغة جسيمات نانوية دهنية متسقة تغلف MRA. يمكن ضبط معلمات الصياغة ويمكن تقييم الجسيمات النانوية الدهنية المختلفة من حيث قوتها وتوزيعها الحيوي. يمكن استخدام بروتوكول موحد لصياغة الجسيمات النانوية الدهنية والاختبار في المختبر وفي الجسم الحي لصياغة جسيمات نانوية دهنية متسقة يمكن مقارنتها مع بعضها البعض.هناك الكثير من التفاصيل الصغيرة التي يجب وضعها في الاعتبار عند صياغة وتقييم فعالية الجسيمات النانوية ، ولكن ما هي التفاصيل التي تم حسابها؟ لا ينبغي أن يكون إعداد الصيغة صعبا. ابدأ بملء دورق نظيف سعة أربعة لترات ب 200 إلى 300 ملليلتر من 10X PBS الطازج ، وتخفيفه إلى 1X بماء فائق النقاء.تأكد من أن الحجم النهائي ل PBS يتراوح بين 2 و 3 لترات. ضع أشرطة غسيل الكلى ذات السعة المناسبة للجسيمات النانوية الدهنية ، أو تركيبة LNP ، في دورق الحقل. قم بتخفيف عشرة أضعاف لمخزون احتياطي حمض الستريك 100 مللي مولار باستخدام ماء عالي النقاء لإنشاء مخزن مؤقت من حمض الستريك 10 مللي مولار لتخفيف mRNA.بعد ذلك ، اصنع C 12 200 من الدهون المؤينة ، والدهون المساعدة ، والكوليسترول والدهون المثبتة في PEG أو حلول مخزون PEG الدهنية عن طريق إذابة كل دهون في إيثانول بنسبة 100٪. تأكد من إذابة محاليل المخزون بالكامل عن طريق تسخينها وخلطها عند 37 درجة مئوية. اجمع الأحجام المحسوبة لمكونات الليبيدات المختلفة في أنبوب مخروطي.قم بتخفيف الدهون باستخدام 100٪ إيثانول إلى الحجم النهائي ل V ، والذي يمثل 25٪ من الحجم النهائي ل LNP. احسب كمية mRNA المطلوبة للتكوين بناء على نسبة وزن الدهون المؤينة إلى mRNA والحجم الكلي ل mRNA-LNP. بعد ذلك ، قم بإذابة اليراع لوسيفيراز الذي يشفر mRNA على الجليد.ثم قم بتخفيف mRNA إلى الحجم النهائي ثلاث مرات المرحلة العضوية باستخدام المخزن المؤقت لحمض الستريك 10 مللي مولار. رش مسح مهمة دقيق بتطهير سطح للحمض النووي الريبي والحمض النووي ، وامسح الجزء الداخلي من أداة الموائع الدقيقة جيدا. بعد ذلك ، افتح خرطوشة ميكروفلويديك جديدة وأدخلها مع توجيه قنوات المدخل لأسفل وبعيدا.رتب أنبوبين مخروطيين معقمين سعة 15 ملليلتر على الحامل مع إزالة الأغطية. بمجرد الانتهاء من ذلك ، املأ حقنة سعة خمسة ملليلتر بمحلول mRNA الذي يحتوي على mRNA المخفف في محلول حمض الستريك 10 مليمولار. ثم املأ حقنة ثلاثة ملليلتر بمحلول دهني يحتوي على الدهون المخففة في الإيثانول بنسبة 100٪.تأكد من إزالة أي هواء من المحاقن. ثم بدون الإبرة ، أدخل المحقنة سعة خمسة ملليلتر التي تحتوي على محلول mRNA في المدخل الأيسر للخرطوشة ، وأدخل المحقنة الثلاثة ملليلتر التي تحتوي على محلول الدهون في المدخل الأيمن للخرطوشة. قم بتشغيل أداة الموائع الدقيقة وحدد التشغيل السريع.بعد اختيار أنواع المحاقن الصحيحة للمحاقن الخمسة والثلاثة ملليلتر التي تم إدخالها ، أدخل معلمات صياغة LNP بنسبة ثلاثة إلى واحد من معدل التدفق المائي إلى العضوي ، قبل الضغط على زر البدء لصياغة mRNA-LNPs. قم بتحميل mRNA-LNPs التي تم جمعها في الأنبوب المخروطي الأيمن في أشرطة غسيل الكلى التي تم ترطيبها مسبقا باستخدام حقنة دون ثقب أو لمس غشاء الكاسيت ، ضع أشرطة غسيل الكلى التي تحتوي على mRNA-LNPs مرة أخرى في الدورق الذي يحتوي على PBS واتركها لغسيل الكلى لمدة ساعتين على الأقل. بعد غسيل الكلى ، أحضر أشرطة غسيل الكلى التي تحتوي على mRNA-LNPs في خزانة معقمة للسلامة البيولوجية وقم بإزالة mRNA-LNPs باستخدام حقنة بإبرة.قم بتصفية mRNA-LNPs المعقمة باستخدام مرشح حقنة 0.22 ميكرومتر وجمعها في أنبوب مخروطي معقم. ثم ضع 65 ميكرولترا من محلول mRNA-LNP في أنبوب دقيق سعة 1.5 ملليلتر للتوصيف. لوحة 5،000 خلية HepG2 في جدار أبيض ، قاع شفاف ، صفيحة 96 بئر في 100 ميكرولتر من وسط زراعة الخلايا الكامل واحتضان الخلايا طوال الليل في حاضنة خاضعة للرقابة عند 37 درجة مئوية تحتوي على 5٪ ثاني أكسيد الكربون.قبل معالجة الخلايا باستخدام mRNA-LNPs ، قم بإزالة الوسط الكامل من الآبار. بعد ذلك ، عالج الخلايا إما ب 100 ميكرولتر من mRNA-LNPs المخففة في وسط زراعة الخلايا الكامل بالجرعات المطلوبة ، أو 100 ميكرولتر من الوسط الكامل قبل الحضانة لمدة 24 ساعة. بعد الحضانة ، قم بإزالة وسط زراعة الخلايا من لوحة 96 بئرا ، أضف 20 ميكرولترا من محلول التحلل إلى كل بئر متبوعا ب 100 ميكرولتر من كواشف فحص لوسيفيراز.احم اللوحة من الضوء وضع اللوحة في قارئ لوحة لقياس إشارة التوهج الحيوي. تمييع محلول mRNA-LNP باستخدام برنامج تلفزيوني معقم بحيث يوجد ميكروغرام من إجمالي mRNA في 100 ميكرولتر من حجم حقن الوريد الذيل. املأ حقنة أنسولين قياس 29 إما ب 100 ميكرولتر من mRNA-LNP أو 100 ميكرولتر من PBS وقم بإزالة أي فقاعات من المحقنة.أدخل الإبرة بحيث يكون الشطبة متجهة لأعلى في وريد الذيل الجانبي للفأر وقم ببطء بحقن 100 ميكرولتر من mRNA-LNP أو PBS. بعد ست ساعات من الحقن ، قم بإعداد محلول مخزون 15 ملليغرام لكل ملليلتر من ملح البوتاسيوم D-Luciferin في برنامج تلفزيوني معقم. في برنامج التصوير لنظام التصوير في الجسم الحي ، أو IVIS ، حدد المربع بجوار التلألؤ قبل الضغط على تهيئة لإعداد الجهاز للحصول على البيانات.بعد ذلك ، قم بإعطاء 200 ميكرولتر من D-Luciferin داخل الصفاق للفئران المعالجة سابقا وانتظر لمدة 10 دقائق بينما تستقر إشارة luciferase قبل تخدير الفئران. انقل الفئران المخدرة إلى مخاريط الأنف داخل نظام التصوير في الجسم الحي ، وتأكد من أنها على ظهورها مع كشف بطونها ، قبل إغلاق باب الغرفة. في برنامج التصوير ، تأكد من تحديد مجال الرؤية الصحيح واضبط وقت التعرض على تلقائي ، انقر فوق زر الاكتساب في البرنامج للحصول على صور التلألؤ الحيوي.تم تحديد كفاءة التغليف ل mRNA-LNPs بنسبة 92.3٪ باستخدام مقايسة التألق المعدلة والمعادلة الموضحة هنا. لوحظ زيادة التلألؤ الحيوي عند علاج 5،000 خلية HepG2 بجرعات متزايدة من mRNA-LNP. تم اكتشاف تعبير لوسيفيراز بسهولة عند أقل جرعة لهذه الدراسة تبلغ خمسة نانوجرام لكل بئر.لوحظت إشارة تلألؤ حيوي قوية في الجزء العلوي من بطن الفئران المعالجة ب LNPs المصاغة. تم رسم مناطق الاهتمام حول إشارات الكبد لحساب التدفق الكلي للإنارة. كان إجمالي تدفق الإنارة حوالي خمسة في 10 إلى 9.حافظ دائما على نسبة الدهون المؤينة إلى وزن الحمض النووي عند صياغة LNPs. يجب أن يحتوي كل حجم من الطور العضوي على دهون مؤينة تقابل mRNA في ثلاثة مجلدات من الطور المائي.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Testing the In Vitro and In Vivo Efficiency of mRNA-Lipid Nanoparticles Formulated by Microfluidic Mixing

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

الفيروسية النانوية ل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; التصوير ورم

The use of nanomaterials has the potential to revolutionize materials science and medicine. Currently, a number of different nanoparticles are being ...

Determination of the Transport Rate of Xenobiotics and Nanomaterials Across the Placenta using the ex vivo Human Placental Perfusion Model

Determination of the Transport Rate of Xenobiotics and Nanomaterials Across the Placenta using the ex vivo Human Placental Perfusion Model

تحديد معدل النقل من الاكسيوبيوتك والمواد النانوية عبر المشيمة باستخدام<em&gt; خارج الحي</em&gt; الإنسان المشيمة الإرواء الموديل

Decades ago the human placenta was thought to be an impenetrable barrier between mother and unborn child. However, the discovery of thalidomide-induced ...

Quantification of Global Diastolic Function by Kinematic Modeling-based Analysis of Transmitral Flow via the Parametrized Diastolic Filling Formalism

الكمي لالعالمي الانبساطي وظيفة عن طريق تحليل يستند النمذجة-الحركية من Transmitral التدفق عبر الشكلية ملء Parametrized الانبساطي

Quantitative cardiac function assessment remains a challenge for physiologists and clinicians.&#160;Although historically invasive methods have comprised ...

Analyzing Mixing Inhomogeneity in a Microfluidic Device by Microscale Schlieren Technique

تحليل خلط التجانس في جهاز ميكروفلويديك التي كتبها الميكروسكيل انعراجي تقنية

In this paper, we introduce the use of microscale schlieren technique to measure mixing inhomogeneity in a microfluidic device. The microscale schlieren ...

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

العين تهيج اختبار (EIT) لتحديد مخاطر العين مهيج للمواد الكيميائية باستخدام يعيد الإنسان القرنية مثل الظهارية (RHCE) الأنسجة نموذج

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

Layer-by-layer Collagen Deposition in Microfluidic Devices for Microtissue Stabilization

طبقة تلو طبقة الكولاجين ترسب في أجهزة ميكروفلويديك لMicrotissue لتحقيق الاستقرار

Although microfluidics provides exquisite control of the cellular microenvironment, culturing cells within microfluidic devices can be challenging. 3D ...

Production of Metal Nanoparticles by Pulsed Laser-ablation in Liquids: A Tool for Studying the Antibacterial Properties of Nanoparticles

إنتاج الجسيمات النانوية المعدنية عن طريق نابض بالليزر في الاجتثاث في السوائل: أداة لدراسة خصائص مضادة للجراثيم من الجسيمات النانوية

The emergence of multidrug-resistant bacteria is a global clinical concern leading some to speculate about our return to a "pre-antibiotics" era of ...

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

ل<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج الثقافة الجهاز من الفئران فقرات القرص

Intervertebral disc (IVD) degeneration is a significant contributor to low back pain. The IVD is a fibrocartilaginous joint that serves to transmit and ...

Microfluidic Bioprinting for Engineering Vascularized Tissues and Organoids

فاسكولاريزيد بيوبرينتينج موائع جزيئية لهندسة الأنسجة وأورجانويدس

Engineering vascularized tissue constructs and organoids has been historically challenging. Here we describe a novel method based on microfluidic ...

Rigid Embedding of Fixed and Stained, Whole, Millimeter-Scale Specimens for Section-free 3D Histology by Micro-Computed Tomography

جامدة التضمين من الثابتة والملون، إجمالاً، مقياس الملليمتر العينات 3D خالية من قسم علم الأنسجة بالتصوير المقطعي الصغيرة المحسوبة

For over a hundred years, the histological study of tissues has been the gold standard for medical diagnosis because histology allows all cell types in ...