Name: investigating the protective effects of platycodin d on non-alcoholic fatty liver disease in a palmitic acid-induced in vitro model
Uploaded: 2022-12-02T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model at JoVE.com

עבודה זו נתמכת על ידי מענקים מהוועדה למדע וטכנולוגיה של צ'ונגצ'ינג (cstc2020jxjl-jbky10002, jbky20200026, cstc2021jscx-dxwtBX0013 ו- jbky20210029) והקרן למדע פוסט-דוקטורט בסין (מס '2021MD703919).

תאי AML-12 (קו תאי הפטוציטים רגיל של עכבר) משמשים למחקרים מבוססי תאים. התאים מתקבלים ממקור מסחרי (ראה טבלת חומרים).
1. טיפול מקדים בתאי AML-12 כדי למדל NAFLD במבחנה
<ol><li>שמור על התאים במדיה רגילה של תרבית תאים (DMEM בתוספת Ham's F12 [1:1] המכילים 0.005 מ"ג/מ"ל אינסולין, 5 נ"ג/?...

מחקרים הדגישו את העובדה כי NAFLD היא תסמונת קליניתפתולוגית, החל כבד שומני NASH, שיכול להתקדם שחמת הכבד וסרטן הכבד51. תזונה עתירת שומן ואורח חיים לא פעיל הם גורמי סיכון אופייניים ל-NAFLD. הן טיפולים שאינם תרופתיים והן טיפולים תרופתיים לטיפול ב- NAFLD נחקרו51,52,53<sup class="xref"...

Platycodon grandiflorus (PG), שהוא השורש המיובש של Platycodon grandiflorus (Jacq.) A.DC., משמש ברפואה סינית מסורתית (TCM). הוא מיוצר בעיקר באזורים הצפון-מזרחיים, הצפוניים, המזרחיים, המרכזיים והדרום-מערביים של סין1. רכיבי PG כוללים ספונינים טריטרפנואידים, רב-סוכרים, פלבנואידים, פוליפנולים, פוליאתילן גליקול, שמנים נדיפים ומינרלים2. ל-PG יש היסטוריה ארוכה של שימוש כמזון וכצמחי מרפא באסיה. באופן מסורתי, צמח זה שימש לייצור תרופות נגד מחלות ריאה. פרמקולוגיה מודרנית מספקת גם ראיות ליעילות של PG לטיפול במחלות אחרות. מחקרים הראו כי ל-PG יש השפעה טיפולית על מגוון מודלים של פגיעה בכבד הנגרמת על ידי תרופות. תוספי תזונה של תמציות PG או platycodin יכולים להקל על השמנת יתר עתירת שומן הנגרמת על ידי דיאטה ומחלות מטבוליות הקשורות אליה 3,4,5. פוליסכרידים מ-PG יכולים לשמש לטיפול בפגיעה חריפה בכבד הנגרמת על ידי LPS/D-GalN בעכברים6. יתר על כן, ספונינים משורשי PG משפרים סטיאטוהפטיטיס לא אלכוהולית הנגרמת על ידי דיאטה עתירת שומן (NASH)7. יתר על כן, platycodin D (PD), אחד המרכיבים הטיפוליים החשובים ביותר של PG, יכול לשפר ביטוי קולטן ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה וספיגת ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה בתאי קרצינומה הפטוצלולרית אנושית (HepG2)8. יתר על כן, פרקינסון יכול גם לגרום לאפופטוזיס ולעכב הידבקות, נדידה ופלישה בתאי HepG2 9,10. לפיכך, במחקר זה, תאי הפטומה AML-12 של עכברים משמשים לבניית מודל במבחנה וכדי להמשיך לחקור את ההשפעות הפרמקולוגיות ואת המנגנונים הבסיסיים של PD במודל זה.
המונח מחלת כבד שומני לא אלכוהולי (NAFLD) מתייחס לקבוצה של מחלות כבד הכוללת סטאטוזיס פשוט, NASH, שחמת הכבד וקרצינומה הפטוצלולרית11. למרות שהפתוגנזה של NAFLD אינה מובנת לחלוטין, מהתיאוריה הקלאסית של "שתי מכות" ועד לתיאוריית "ריבוי המכות" הנוכחית, עמידות לאינסולין נחשבת מרכזית בפתוגנזה של NAFLD12,13,14. מחקרים הראו כי עמידות לאינסולין בהפטוציטים עלולה להוביל לעלייה בחומצות שומן חופשיות, היוצרות טריגליצרידים המופקדים בכבד וגורמים לכבד להיות שומני15,16. הצטברות שומן עלולה להוביל לרעילות ליפוטוקסית, תפקוד לקוי של המיטוכונדריה כתוצאה מעקה חמצונית, עקה אנדופלסמית ברשתית ושחרור ציטוקינים דלקתיים, וכתוצאה מכך פתוגנזה והתקדמות של NAFLD17,18. בנוסף, אוטופגיה גם ממלאת תפקיד בפתוגנזה של NAFLD, שכן היא מעורבת בוויסות רגישות לאינסולין תאי, מטבוליזם שומנים בתאים, פגיעה בהפטוציטים וחסינות מולדת 19,20,21.
מגוון מודלים של בעלי חיים ומודלים תאיים הוקמו כדי לספק בסיס לחקר הפתוגנזה והמטרות הטיפוליות האפשריות של NAFLD22,23. עם זאת, מודלים של בעלי חיים בודדים אינם יכולים לחקות באופן מלא את כל התהליכים הפתולוגיים של NAFLD24. הבדלים אינדיבידואליים בין בעלי חיים מובילים לתכונות פתולוגיות שונות. שימוש בקווי תאי כבד או בהפטוציטים ראשוניים במחקרי מבחנה של NAFLD מבטיח עקביות מרבית בתנאי הניסוי. חוסר ויסות מטבוליזם של שומנים בכבד יכול להוביל לרמות גבוהות יותר של הצטברות טיפות שומנים בכבד ב- NAFLD25. חומצות שומן חופשיות כגון חומצה אולאית ושמן דקלים שימשו במודל in vitro כדי לחקות NAFLD הנגרמת על ידי דיאטה עתירת שומן26,27. קו תאי הפטובלסטומה האנושי HepG2 משמש לעתים קרובות לבניית מודלים של NAFLD במבחנה, אבל, בתור קו תאי גידול, חילוף החומרים של תאי HepG2 שונה באופן משמעותי מזה של תאי כבד בתנאים פיזיולוגיים רגילים28. לכן, שימוש בהפטוציטים ראשוניים או בהפטוציטים ראשוניים של עכברים לבניית מודל NAFLD במבחנה לבדיקת תרופות הוא יתרון גדול יותר מאשר שימוש בקווי תאים סרטניים. בהשוואה לבחינה סינרגטית של השפעות תרופתיות ומטרות טיפוליות הן במודלים של בעלי חיים והן במודלים של הפטוציטים במבחנה, נראה כי לשימוש בהפטוציטים של עכברים לבניית מודל NAFLD במבחנה יש פוטנציאל יישום טוב יותר.
חומצות שומן חופשיות הנכנסות לכבד מחומצנות כדי לייצר אנרגיה או מאוחסנות כטריגליצרידים. באופן משמעותי, חומצות שומן חופשיות יש lipotoxicity מסוים עלול לגרום תפקוד לקוי של התאים אפופטוזיס12. חומצה פלמיטית (PA) היא חומצת השומן הרוויה הנפוצה ביותר בפלזמה האנושית29. כאשר תאים ברקמה שאינה שומן נחשפים לריכוזים גבוהים של PA במשך זמן רב, הדבר ממריץ את הייצור של מיני חמצן תגובתי (ROS) וגורם לעקה חמצונית, הצטברות שומנים ואפילו אפופטוזיס30. לכן, חוקרים רבים משתמשים ב-PA כגורם מעורר תאי כבד לייצר ROS, ובכך בונים את מודל מחלת הכבד השומני במבחנה ומעריכים את ההשפעות המגינות של חומרים פעילים מסוימים על תאים31,32,33,34. מחקר זה מציג פרוטוקול לחקירת ההשפעות המגינות של פרקינסון על מודל תאי של NAFLD המושרה על ידי הרשות הפלסטינית.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5% BSA Blocking Buffer</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>SW3015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AML12 (alpha mouse liver 12) cell line</td>
			<td>Procell Life Science&#38;Technology Co., Ltd, China</td>
			<td>AML12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beyo ECL&#160;Plus</td>
			<td>Beyotime, Shanghai, China</td>
			<td>P0018S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-safety cabinet</td>
			<td>Esco Micro Pte Ltd, Singapore</td>
			<td>AC2-5S1 A2&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cellSens</td>
			<td>Olympus, Tokyo, Japan</td>
			<td>1.8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture CO2 Incubator</td>
			<td>Esco Micro Pte Ltd, Singapore</td>
			<td>CCL-170B-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone</td>
			<td>Beyotime, Shanghai, China</td>
			<td>ST125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>D8371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Hyclone,&#160;Logan,&#160;UT,&#160;USA</td>
			<td>SH30023.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum</td>
			<td>Hyclone, Tauranga, New Zealand</td>
			<td>SH30406.05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphpad software</td>
			<td>GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA</td>
			<td>8.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP Goat Anti-Mouse IgG (H+L)</td>
			<td>ABclonal, Wuhan, China</td>
			<td>AS003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophobic PVDF Transfer Membrane</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>IPFL00010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin, Transferrin, Selenium Solution, 100&#215;</td>
			<td>Beyotime, Shanghai, China</td>
			<td>C0341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MAP LC3&#946; Antibody</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd</td>
			<td>SC-376404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit with JC-1</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>M8650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus Inverted Microscope IX53</td>
			<td>Olympus, Tokyo, Japan</td>
			<td>IX53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palmitic Acid</td>
			<td>Sigma, Germany</td>
			<td>P0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin Solution (100x)</td>
			<td>Hyclone,&#160;Logan,&#160;UT,&#160;USA</td>
			<td>SV30010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylmethanesulfonyl&#160;fluoride</td>
			<td>Beyotime, Shanghai, China</td>
			<td>ST506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Solution</td>
			<td>Hyclone,&#160;Logan,&#160;UT,&#160;USA</td>
			<td>BL302A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platycodin D</td>
			<td>Chengdu Must Bio-Technology Co., Ltd, China</td>
			<td>CSA: 58479-68-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease inhibitor cocktail for general use, 100x</td>
			<td>Beyotime, Shanghai, China</td>
			<td>P1005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein Marker</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>PR1910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reactive Oxygen Species Assay Kit</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>CA1410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RIPA&#160;Lysis&#160;Buffer</td>
			<td>Beyotime, Shanghai, China</td>
			<td>P0013E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS-PAGE Gel Quick Preparation Kit</td>
			<td>Beyotime, Shanghai, China</td>
			<td>P0012AC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS-PAGE Sample Loading Buffer, 5x</td>
			<td>Beyotime, Shanghai, China</td>
			<td>P0015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sigma Centrifuge</td>
			<td>Sigma, Germany</td>
			<td>3K15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SQSTM1/p62 Antibody</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd</td>
			<td>SC-28359</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tecan Infinite 200 PRO&#160;&#160;</td>
			<td>Tecan Austria GmbH, Austria</td>
			<td>1510002987</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WB Transfer Buffer,10x</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>D1060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Actin Mouse mAb</td>
			<td>ABclonal, Wuhan, China</td>
			<td>AC004</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

investigating the protective effects of platycodin d on non-alcoholic fatty liver disease in a palmitic acid-induced in vitro model

ההופעה של מחלת כבד שומני לא אלכוהולי (NAFLD) עולה בקצב מדאיג ברחבי העולם. Platycodon grandiflorum נמצא בשימוש נרחב כתרופה אתנו-רפואית מסורתית לטיפול במחלות שונות והוא מזון פונקציונלי טיפוסי שניתן לשלב בתזונה היומיומית. מחקרים הראו כי platycodin D (PD), אחד המרכיבים הפעילים העיקריים של Platycodon grandiflorum, יש זמינות ביולוגית גבוהה וממתן באופן משמעותי את ההתקדמות של NAFLD, אבל המנגנון הבסיסי של זה עדיין לא ברור. מחקר זה נועד לחקור את ההשפעה הטיפולית של פרקינסון נגד NAFLD במבחנה. תאי AML-12 טופלו בחומצה פלמיטית (PA) של 300 מיקרומטר במשך 24 שעות כדי למדל NAFLD במבחנה. לאחר מכן, התאים טופלו בפרקינסון או שלא קיבלו טיפול בפרקינסון במשך 24 שעות. רמות מיני החמצן הריאקטיבי (ROS) נותחו באמצעות צביעה של 2′,7′-dichloro-dihydro-fluorescein diacetate (DCFH-DA), ופוטנציאל הממברנה המיטוכונדריאלית נקבע על ידי שיטת הצביעה JC-1. יתר על כן, רמות ביטוי החלבונים של LC3-II/LC3-I ו- p62/SQSTM1 בליזטים של התא נותחו על ידי כתם מערבי. נמצא כי PD מפחית באופן משמעותי את רמות הפוטנציאל של ROS וקרום המיטוכונדריה בקבוצה שטופלה ב-PA בהשוואה לקבוצת הביקורת. בינתיים, PD העלה את רמות LC3-II/LC3-I והוריד את רמות p62/SQSTM1 בקבוצה שטופלה ב-PA בהשוואה לקבוצת הביקורת. התוצאות הצביעו על כך שמחלת פרקינסון שיפרה את NAFLD במבחנה על-ידי הפחתת עקה חמצונית וגירוי אוטופגיה. מודל זה במבחנה הוא כלי שימושי לחקר התפקיד של PD ב- NAFLD.

ROS תוך-תאי בתאים תאי AML-12 הושרו עם PA של 300 מיקרומטר למשך 24 שעות, ומודל תאי NAFLD הוקם. לאחר מכן, התאים טופלו במחלת פרקינסון במשך 24 שעות. התאים סומנו בבדיקה פלואורסצנטית DCFH-DA, וייצור ROS נצפה תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. התוצאות של צביעת DCFH-DA של ROS תוך-תאי בתאים מוצגות באיור 1...

Watch this Scientific Journal Video about Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model at JoVE.com

Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model

פרוטוקול זה חוקר את ההשפעות המגינות של platycodin D על מחלת כבד שומני לא אלכוהולי במודל המושרה על ידי חומצה פלמיטית במבחנה .

חקירת ההשפעות המגינות של Platycodin D על מחלת כבד שומני שאינה אלכוהולית במודל מבחנה המושרה על ידי חומצה פלמיטית

The occurrence of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) has been increasing at an alarming rate worldwide. Platycodon grandiflorum is widely used as a ...

שיטה זו מדגימה את השימוש בתאי AML-12 אשר יאפשרו בניית מודל וחקירת ההשפעות המגינות של platycodin D על NAFLD. הסתמכות יתר על שימוש במודלים של בעלי חיים מגדילה את נטל פיתוח התרופות הטיפוליות. שימוש במודלים תאיים בשלב המוקדם של פיתוח תרופות NAFLD הוא מעשי יותר וחסכוני יותר.מודל TCM זה עשוי לסייע בשיפור ההבנה של התפקוד הביולוגי של platycodin D ולסייע בחקר השימוש ב-TCM אחרים לטיפול ב-NAFLD. התחל על ידי זריעת מיליליטר אחד של תאי AML-12 לכל באר בלוחות 12 באר. לאחר מכן חלקו את צלחת 12 הבארות לארבע קבוצות טיפול שונות ותייגו אותן כקבוצת ביקורת, טופלה במחלת פרקינסון, טופלה ברשות הפלסטינית והקבוצה שטופלה ב-PA בתוספת פרקינסון.הוסף מיליליטר אחד של מצע תרבית התאים הרגיל לכל באר לקבוצת הביקורת ולקבוצה שטופלה בפרקינסון. הוסף מיליליטר אחד של מצע תרבית התאים הרגיל בתוספת חומצה פלמיטית מיקרומולרית 300 לקבוצה שטופלה ברשות הפלסטינית וב- PA בתוספת PD שטופלה. לאחר 24 שעות של דגירה, להסיר את המדיום התרבית של התאים ולאחר מכן לשטוף את התאים עם מיליליטר אחד של מדיה ללא סרום פעמיים.לאחר מכן, הוסף מיליליטר אחד של מדיה רגילה של תרבית תאים בתוספת רכב לקבוצת הביקורת ומיליליטר אחד של מדיה רגילה של תרבית תאים בתוספת פלטיקודין D מיקרומולרי אחד לקבוצה שטופלה בפרקינסון. הוסף מיליליטר אחד של מדיה רגילה של תרבית תאים בתוספת חומצה פלמיטית מיקרומולרית 300 מיקרומולרית לקבוצה שטופלה ברשות הפלסטינית ומיליליטר אחד של מדיה רגילה של תרבית תאים בתוספת חומצה פלמיטית מיקרומולרית 300 מיקרומולרית ופלטיקודין D מיקרומולרי אחד לקבוצה שטופלה ב- PA בתוספת PD. לאחר טיפול בתאים במשך 24 שעות, לשטוף את התאים עם מיליליטר אחד של 1X PBS לכל באר שלוש פעמים.ואז להכתים את התאים עם 100 מיקרוליטר של 10 מיקרומולרי DCFH-DA לכל באר. לדגור על התאים בחושך במשך 30 דקות. לאחר הדגירה, לשטוף את התאים עם 1X PBS שלוש פעמים ולהוסיף מיליליטר אחד של 1X PBS לכל באר.הניחו את לוח 12 הבארות על במת המיקרוסקופ והשתמשו במטרה של פי 20 כדי לבחון את המורפולוגיה של התאים בהגדלה של פי 200. כדי למדוד את פוטנציאל הממברנה המיטוכונדריאלית, שטפו את התאים המטופלים שהוכנו קודם לכן עם מיליליטר אחד של 1X PBS לכל באר שלוש פעמים. לאחר מכן להכתים את התאים עם 100 מיקרוליטר של חמישה מיקרוגרם למיליליטר JC-1 פתרון עבודה לדגור את התאים במשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס בחושך.לאחר מכן שטפו את התאים עם 1X PBS שלוש פעמים והוסיפו מיליליטר אחד של 1X PBS לכל באר. הניחו את לוח 12 הבארות על במת המיקרוסקופ והשתמשו במטרה של פי 20 כדי לבחון את המורפולוגיה של התאים בהגדלה של פי 200. לפרק את התאים המטופלים ולאסוף את התא lysate לתוך צינורות microcentrifuge 1.5 מיליליטר.צנטריפוגה את הצינורות ב 12, 000 G במשך 20 דקות בארבע מעלות צלזיוס. לאחר מכן הוסף מאגר טעינת דגימות של 5X SDS-PAGE לסופרנאטנט ליזט התא ביחס נפח של אחד עד ארבעה. לאחר מכן, הכניסו את הג'ל המוכן 12%SDS-PAGE עם 12 בארות למיכל האלקטרופורזה והוסיפו 1X SDS מעלה חיץ דגימה מהולל במים טהורים במיוחד למגבלת הגובה המומלצת.לאחר אלקטרופורזה SDS-PAGE, בצע את העברת האלקטרו של החלבונים לקרום PVDF של 0.45 מיקרון. לדגור על הממברנה בחמישה מיליליטר של הנוגדנים הראשוניים המדוללים בחיץ חוסם. השתמש בנוגדנים ספציפיים עבור LC-III, p62 ובטא-אקטין .דוגרים לילה בארבע מעלות צלזיוס. לאחר מכן לדגור על קרום PVDF עם נוגדן משני LGG HRP נגד עכבר ארנב מדולל אחד עד 10, 000 בחיץ חוסם. לדגור על הממברנה בטמפרטורת החדר מוגן מפני אור במשך שעתיים.לאחר הדגירה, מניחים את קרום PVDF על ניילון נצמד. מוסיפים כמות מתאימה של פתרון עבודה ECL ודגרים במשך שתי דקות. לאחר מכן הסר את פתרון העבודה ECL וחשף את קרום PVDF במערכת ההדמיה לפיתוח תמונה.צביעת DCFH-DA הראתה כי פלטיקודין D יכול להפחית באופן משמעותי את רמת ה-ROS התוך-תאי בתאי ALM-12, מה שמצביע על כך שטיפול זה יכול להפחית את העקה החמצונית התאית. יתר על כן, הפלואורסצנטיות הירוקה המייצגת מונומרים JC-1 או מיטוכונדריה דה-פולריים הייתה גבוהה יותר בתאים שטופלו בחומצה פלמיטית מאשר בתאים שלא טופלו, בעוד שהפלואורסצנטיות האדומה שייצגה את דימרים JC-1 או מיטוכונדריה מקוטבת הייתה נמוכה יותר בתאים שטופלו בחומצה פלמיטית מאשר בתאים שלא טופלו, מה שמצביע על דפולריזציה MMP הנגרמת על ידי חומצה פלמיטית. בנוסף, בהשוואה לקבוצת המודל, היחס בין מונומרים JC-1 לדימרים ירד בקבוצת הטיפול בפלטיקודין D, מה שמצביע על כך שהוא יכול לשפר את MMP המושרה על ידי חומצה פלמיטית.רמות ביטוי החלבונים של חלבונים הקשורים לאוטופגיה LC-III ו-p62 נחקרו על ידי Western Blotting. היחס בין LC-32 ל-LC-31 ירד משמעותית ורמת ביטוי החלבון של p62 עלתה לאחר הטיפול בחומצה פלמיטית. מצד שני, platycodin D הפחית באופן משמעותי את רמת ביטוי החלבון של p62 והגדיל את היחס של LC-32 ל LC-31, מה שמצביע על שחזור השטף האוטופגי המושרה על ידי חומצה פלמיטית.אם הערך הפלואורסצנטי של התאים בקבוצת הביקורת השלילית גבוה יחסית, ניתן להתאים את ריכוזי העבודה של הגשושיות הפלואורסצנטיות לפי הצורך.

Research

JoVE Journal

Medicine

Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

הפעלת יתר רעיל גירוי של המוח כMicroslices<em&gt; במבחנה</em&gt; דגם של שבץ

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

חליטות עורק הראשי לpharmacokinetic וpharmacodynamic ניתוח של taxanes בעכברים

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

A Quick Phenotypic Neurological Scoring System for Evaluating Disease Progression in the SOD1-G93A Mouse Model of ALS

שיטת ניקוד מהירה פנוטיפי נוירולוגיות להערכת מחלת התקדמות בSOD1-G93A מודל העכבר של ALS

The SOD1-G93A transgenic mouse is the most widely used animal model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS). At ALS TDI we developed a phenotypic screening ...

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

מודל הפיברוזיס Dimethylnitrosamine מושרה בחולדה

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

במבחנה and In Vivo זיהוי של Mitophagy ב תאים אנושיים, C. Elegansועכברים

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a ...

Assessment of Plasma Coagulation on Liver Tissue in a Large Animal Model In Vivo

Assessment of Plasma Coagulation on Liver Tissue in a Large Animal Model In Vivo

הערכה של קרישה בפלסמה על רקמת הכבד במודל חיה גדולה In Vivo

Plasma coagulation as a form of electrocautery is used in liver surgery for decades to seal the large liver cut surface after major hepatectomy to prevent ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis (NASH) Resolution

Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis NASH Resolution

התאגדות של הליך ביופסיה בכבד שורדת בעכברים כדי להעריך Steatohepatitis אלכוהוליים (נאש) רזולוציה

Clinical trials assessing therapies for the treatment of non-alcoholic steatohepatitis (NASH) involve a baseline and end of study liver biopsy, and ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

מודל מבחנה של אנגיוגנזה כלילית

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

מורנה דיוק-גזור פרוסות הכבד כמודל Vivo Ex של ביולוגיה של הכבד

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...