Name: investigating the protective effects of platycodin d on non-alcoholic fatty liver disease in a palmitic acid-induced in vitro model
Uploaded: 2022-12-02T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model at JoVE.com

Bu çalışma, Chongqing Bilim ve Teknoloji Komisyonu (cstc2020jxjl-jbky10002, jbky20200026, cstc2021jscx-dxwtBX0013 ve jbky20210029) ve Çin Doktora Sonrası Bilim Vakfı (No. 2021MD703919) tarafından desteklenmektedir.

AML-12 hücreleri (normal bir fare hepatosit hücre hattı) hücre bazlı çalışmalar için kullanılır. Hücreler ticari bir kaynaktan elde edilir (bakınız Malzeme Tablosu).
1. NAFLD'yi in vitro modellemek için AML-12 hücrelerinin ön muamelesi
<ol><li>Hücreleri normal hücre kültürü ortamında (DMEM artı Ham'ın F12 [1:1], 0.005 mg/mL insülin, 5 ng/mL selenyum, 0.005 mg/mL transferrin, 40 ng/mL deksametazon ve %10 fetal sığır seru...

Çalışmalar, NAFLD'nin yağlı karaciğerden NASH'ye kadar değişen, siroz ve karaciğer kanserine ilerleyebilen klinikopatolojik bir sendrom olduğu gerçeğini vurgulamıştır51. Yüksek yağlı bir diyet ve aktif olmayan bir yaşam tarzı NAFLD için tipik risk faktörleridir. NAFLD tedavisi için hem ilaç dışı tedaviler hem de ilaç tedavileriaraştırılmıştır 51,52,53. Bununla birlikte, N...

Platycodon grandiflorus (PG), Platycodon grandiflorus'un (Jacq.) kurutulmuş köküdür. A.DC., geleneksel Çin tıbbında (TCM) kullanılır. Esas olarak Çin1'in kuzeydoğu, kuzey, doğu, orta ve güneybatı bölgelerinde üretilmektedir. PG bileşenleri arasında triterpenoid saponinler, polisakkaritler, flavonoidler, polifenoller, polietilen glikoller, uçucu yağlar ve mineraller2 bulunur. PG, Asya'da gıda ve bitkisel ilaç olarak kullanılma konusunda uzun bir geçmişe sahiptir. Geleneksel olarak, bu bitki akciğer hastalıklarına karşı ilaç yapmak için kullanılmıştır. Modern farmakoloji ayrıca PG'nin diğer hastalıkların tedavisinde etkinliğine dair kanıtlar sağlar. Çalışmalar, PG'nin çeşitli ilaca bağlı karaciğer hasarı modelleri üzerinde terapötik bir etkiye sahip olduğunu göstermiştir. PG veya platikodin ekstraktlarının diyet takviyesi, yüksek yağlı diyete bağlı obeziteyi ve buna bağlı metabolik hastalıkları iyileştirebilir 3,4,5. PG'den polisakkaritler, farelerde LPS / D-GalN'nin neden olduğu akut karaciğer hasarının tedavisi için kullanılabilir6. Ayrıca, PG köklerinden gelen saponinler, yüksek yağlı diyete bağlı alkolsüz steatohepatiti (NASH) iyileştirir7. Ayrıca, PG'nin en önemli terapötik bileşenlerinden biri olan platikodin D (PD), insan hepatosellüler karsinom (HepG2) hücrelerinde düşük yoğunluklu lipoprotein reseptör ekspresyonunu ve düşük yoğunluklu lipoprotein alımını artırabilir8. Ayrıca, PD ayrıca apoptozu indükleyebilir ve HepG2 hücrelerinde adezyon, migrasyon ve invazyonu inhibe edebilir 9,10. Bu nedenle, bu çalışmada, fare hepatoma AML-12 hücreleri in vitro model yapımında ve bu modelde PD'nin farmakolojik etkilerini ve altta yatan mekanizmalarını daha fazla incelemek için kullanılmıştır.
Alkolsüz yağlı karaciğer hastalığı (NAFLD) terimi, basit steatoz, NASH, siroz ve hepatosellüler karsinom11'i içeren bir grup karaciğer hastalığını ifade eder. NAFLD'nin patogenezi tam olarak anlaşılamamış olsa da, klasik "iki isabetli" teoriden mevcut "çoklu vuruş" teorisine kadar, insülin direncinin NAFLD patogenezinde merkezi olduğu düşünülmektedir12,13,14. Çalışmalar, hepatositlerdeki insülin direncinin, karaciğerde biriken trigliseritleri oluşturan ve karaciğerin yağlı olmasına neden olan serbest yağ asitlerinin artmasına neden olabileceğini göstermiştir15,16. Yağ birikimi lipotoksisiteye, oksidatif strese bağlı mitokondriyal disfonksiyona, endoplazmik retikulum stresine ve inflamatuar sitokin salınımına yol açarak NAFLD17,18'in patogenezine ve ilerlemesine neden olabilir. Ek olarak, otofaji, hücresel insülin duyarlılığını, hücresel lipid metabolizmasını, hepatosit hasarını ve doğuştan gelen bağışıklığı düzenlemede rol oynadığı için NAFLD'nin patogenezinde de rol oynar 19,20,21.
NAFLD22,23'ün patogenezini ve potansiyel terapötik hedeflerini araştırmak için bir temel oluşturmak üzere çeşitli hayvan modelleri ve hücresel modeller oluşturulmuştur. Bununla birlikte, tek hayvan modelleri NAFLD24'ün tüm patolojik süreçlerini tam olarak taklit edemez. Hayvanlar arasındaki bireysel farklılıklar farklı patolojik özelliklere yol açar. NAFLD'nin in vitro çalışmalarında karaciğer hücre hatlarının veya primer hepatositlerin kullanılması, deneysel koşullarda maksimum tutarlılık sağlar. Hepatik lipid metabolizması disregülasyonu, NAFLD25'te daha yüksek seviyelerde hepatosit lipid damlacık birikimine yol açabilir. Oleik asit ve palmiye yağı gibi serbest yağ asitleri, in vitro modelde, yüksek yağlı bir diyetin neden olduğu NAFLD'yi taklit etmek için kullanılmıştır26,27. İnsan hepatoblastoma hücre hattı HepG2, in vitro NAFLD modellerinin yapımında sıklıkla kullanılır, ancak bir tümör hücre hattı olarak, HepG2 hücrelerinin metabolizması normal fizyolojik koşullar altında karaciğer hücrelerininkinden önemli ölçüde farklıdır28. Bu nedenle, ilaç taraması için in vitro NAFLD modelini oluşturmak için primer hepatositleri veya fare primer hepatositlerini kullanmak, tümör hücre hatlarını kullanmaktan daha avantajlıdır. Hem hayvan modellerinde hem de in vitro hepatosit modellerinde ilaç etkilerinin ve terapötik hedeflerin sinerjik incelemesi karşılaştırıldığında, in vitro NAFLD modelini oluşturmak için fare hepatositlerinin kullanılmasının daha iyi uygulama potansiyeline sahip olduğu görülmektedir.
Karaciğere giren serbest yağ asitleri enerji üretmek için oksitlenir veya trigliseritler olarak depolanır. Önemli ölçüde, serbest yağ asitleri belirli bir lipotoksisiteye sahiptir ve hücresel disfonksiyon ve apoptozu indükleyebilir12. Palmitik asit (PA), insan plazmasında en bol bulunan doymuş yağ asididir29. Yağ dışı dokudaki hücreler uzun süre yüksek konsantrasyonlarda PA'ya maruz kaldığında, bu reaktif oksijen türlerinin (ROS) üretimini uyarır ve oksidatif strese, lipit birikimine ve hatta apoptoza neden olur30. Bu nedenle, birçok araştırmacı PA'yı karaciğer hücrelerini ROS üretmeye teşvik etmek için bir indükleyici olarak kullanır ve böylece in vitro yağlı karaciğer hastalığı modelini oluşturur ve bazı aktif maddelerin hücreler üzerindeki koruyucu etkilerini değerlendirir31,32,33,34. Bu çalışma, PD'nin PA tarafından indüklenen NAFLD'nin bir hücre modeli üzerindeki koruyucu etkilerini araştırmak için bir protokol sunmaktadır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5% BSA Blocking Buffer</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>SW3015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AML12 (alpha mouse liver 12) cell line</td>
			<td>Procell Life Science&#38;Technology Co., Ltd, China</td>
			<td>AML12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beyo ECL&#160;Plus</td>
			<td>Beyotime, Shanghai, China</td>
			<td>P0018S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-safety cabinet</td>
			<td>Esco Micro Pte Ltd, Singapore</td>
			<td>AC2-5S1 A2&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cellSens</td>
			<td>Olympus, Tokyo, Japan</td>
			<td>1.8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture CO2 Incubator</td>
			<td>Esco Micro Pte Ltd, Singapore</td>
			<td>CCL-170B-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone</td>
			<td>Beyotime, Shanghai, China</td>
			<td>ST125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>D8371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Hyclone,&#160;Logan,&#160;UT,&#160;USA</td>
			<td>SH30023.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum</td>
			<td>Hyclone, Tauranga, New Zealand</td>
			<td>SH30406.05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphpad software</td>
			<td>GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA</td>
			<td>8.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP Goat Anti-Mouse IgG (H+L)</td>
			<td>ABclonal, Wuhan, China</td>
			<td>AS003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophobic PVDF Transfer Membrane</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>IPFL00010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin, Transferrin, Selenium Solution, 100&#215;</td>
			<td>Beyotime, Shanghai, China</td>
			<td>C0341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MAP LC3&#946; Antibody</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd</td>
			<td>SC-376404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit with JC-1</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>M8650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus Inverted Microscope IX53</td>
			<td>Olympus, Tokyo, Japan</td>
			<td>IX53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palmitic Acid</td>
			<td>Sigma, Germany</td>
			<td>P0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin Solution (100x)</td>
			<td>Hyclone,&#160;Logan,&#160;UT,&#160;USA</td>
			<td>SV30010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylmethanesulfonyl&#160;fluoride</td>
			<td>Beyotime, Shanghai, China</td>
			<td>ST506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Solution</td>
			<td>Hyclone,&#160;Logan,&#160;UT,&#160;USA</td>
			<td>BL302A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platycodin D</td>
			<td>Chengdu Must Bio-Technology Co., Ltd, China</td>
			<td>CSA: 58479-68-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease inhibitor cocktail for general use, 100x</td>
			<td>Beyotime, Shanghai, China</td>
			<td>P1005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein Marker</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>PR1910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reactive Oxygen Species Assay Kit</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>CA1410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RIPA&#160;Lysis&#160;Buffer</td>
			<td>Beyotime, Shanghai, China</td>
			<td>P0013E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS-PAGE Gel Quick Preparation Kit</td>
			<td>Beyotime, Shanghai, China</td>
			<td>P0012AC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS-PAGE Sample Loading Buffer, 5x</td>
			<td>Beyotime, Shanghai, China</td>
			<td>P0015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sigma Centrifuge</td>
			<td>Sigma, Germany</td>
			<td>3K15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SQSTM1/p62 Antibody</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd</td>
			<td>SC-28359</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tecan Infinite 200 PRO&#160;&#160;</td>
			<td>Tecan Austria GmbH, Austria</td>
			<td>1510002987</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WB Transfer Buffer,10x</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>D1060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Actin Mouse mAb</td>
			<td>ABclonal, Wuhan, China</td>
			<td>AC004</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

investigating the protective effects of platycodin d on non-alcoholic fatty liver disease in a palmitic acid-induced in vitro model

Alkolsüz yağlı karaciğer hastalığının (NAFLD) görülmesi dünya çapında endişe verici bir oranda artmaktadır. Platycodon grandiflorum , çeşitli hastalıkların tedavisi için geleneksel bir etnotilaç olarak yaygın olarak kullanılmaktadır ve günlük diyete dahil edilebilecek tipik bir fonksiyonel besindir. Çalışmalar, Platycodon grandiflorum'daki ana aktif bileşenlerden biri olan platycodin D'nin (PD) yüksek biyoyararlanıma sahip olduğunu ve NAFLD'nin ilerlemesini önemli ölçüde azalttığını ileri sürmüştür, ancak bunun altında yatan mekanizma hala belirsizdir. Bu çalışma, PD'nin NAFLD'ye karşı terapötik etkisini in vitro olarak araştırmayı amaçlamaktadır. AML-12 hücreleri, NAFLD'yi in vitro olarak modellemek için 24 saat boyunca 300 μM palmitik asit (PA) ile ön işlemden geçirildi. Daha sonra, hücreler ya PD ile tedavi edildi ya da 24 saat boyunca PD tedavisi almadı. Reaktif oksijen türlerinin (ROS) seviyeleri 2′,7′-dikloro-dihidro-floresein diasetat (DCFH-DA) boyaması kullanılarak analiz edildi ve mitokondriyal membran potansiyeli JC-1 boyama yöntemi ile belirlendi. Ayrıca, hücre lizatlarındaki LC3-II / LC3-I ve p62 / SQSTM1 protein ekspresyon seviyeleri batı lekelenmesi ile analiz edildi. PD'nin, PA ile tedavi edilen grupta ROS ve mitokondriyal membran potansiyel düzeylerini kontrol grubuna göre anlamlı derecede azalttığı bulundu. Bu arada, PD, kontrol grubuna kıyasla PA ile tedavi edilen grupta LC3-II / LC3-I seviyelerini arttırdı ve p62 / SQSTM1 seviyelerini düşürdü. Sonuçlar, PD'nin oksidatif stresi azaltarak ve otofajiyi uyararak NAFLD'yi in vitro olarak iyileştirdiğini göstermiştir. Bu in vitro model, NAFLD'de PD'nin rolünü incelemek için yararlı bir araçtır.

Hücrelerde hücre içi ROS AML-12 hücreleri 24 saat boyunca 300 μM PA ile indüklendi ve bir NAFLD hücre modeli oluşturuldu. Daha sonra, hücreler 24 saat boyunca PD ile tedavi edildi. Hücreler bir DCFH-DA floresan probu ile etiketlendi ve bir floresan mikroskobu altında ROS üretimi gözlendi. Hücrelerdeki hücre içi ROS'un DCFH-DA boyamasının sonuçları Şekil 1'de gösterilmiştir. Sonuçlar, PD'nin 300 μM PA (P < 0.01) ile inkübe edilen hücrele...

Watch this Scientific Journal Video about Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model at JoVE.com

Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model

Bu protokol, palmitik asit kaynaklı in vitro modelde platikodin D'nin alkolsüz yağlı karaciğer hastalığı üzerindeki koruyucu etkilerini araştırmaktadır.

Palmitik Asit Kaynaklı In Vitro Modelde Platycodin D'nin Alkolsüz Yağlı Karaciğer Hastalığı Üzerindeki Koruyucu Etkilerinin İncelenmesi

The occurrence of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) has been increasing at an alarming rate worldwide. Platycodon grandiflorum is widely used as a ...

Bu yöntem, model yapımına ve platikodin D'nin NAFLD üzerindeki koruyucu etkilerinin araştırılmasına izin verecek AML-12 hücrelerinin kullanımını göstermektedir. Hayvan modellerinin kullanımına aşırı bağımlılık, terapötik ilaç geliştirme yükünde artmaktadır. NAFLD ilaç geliştirmenin erken aşamasında hücre modellerinin kullanılması daha pratik ve uygun maliyetlidir.Bu TCM modeli, platikodin D'nin biyolojik fonksiyonunun anlaşılmasını geliştirmeye yardımcı olabilir ve NAFLD tedavisi için diğer TCM'lerin kullanımını incelemeye yardımcı olabilir. 12 delikli plakalarda kuyu başına bir mililitre AML-12 hücresi ekerek başlayın. Daha sonra 12 kuyucuklu plakayı dört farklı tedavi grubuna bölün ve bunları kontrol, PD ile tedavi edilen, PA ile tedavi edilen ve PA artı PD ile tedavi edilen grup olarak etiketleyin.Kontrole ve PD ile tedavi edilen gruba kuyu başına bir mililitre normal hücre kültürü ortamı ekleyin. PA ile tedavi edilen ve PA artı PD ile tedavi edilen gruba 300 mikromolar palmitik asit ile desteklenmiş normal hücre kültürü ortamının bir mililitresini ekleyin. 24 saatlik inkübasyondan sonra, hücrelerin kültür ortamını çıkarın ve ardından hücreleri iki kez bir mililitre serumsuz ortamla yıkayın.Daha sonra, kontrol grubuna bir araçla desteklenmiş bir mililitre normal hücre kültürü ortamı ve PD ile tedavi edilen gruba bir mikromolar platikodin D ile desteklenmiş bir mililitre normal hücre kültürü ortamı ekleyin. PA artı PD ile tedavi edilen gruba 300 mikromolar palmitik asit ile desteklenmiş bir mililitre normal hücre kültürü ortamı ve 300 mikromolar palmitik asit ve bir mikromolar platikodin D ile desteklenmiş bir mililitre normal hücre kültürü ortamı ekleyin. Hücreleri 24 saat boyunca tedavi ettikten sonra, hücreleri üç kez kuyucuk başına bir mililitre 1X PBS ile yıkayın.Daha sonra hücreleri kuyu başına 100 mikrolitre 10 mikromolar DCFH-DA ile boyayın. Hücreleri karanlıkta 30 dakika boyunca inkübe edin. Kuluçkadan sonra, hücreleri üç kez 1X PBS ile yıkayın ve her bir oyuğa bir mililitre 1X PBS ekleyin.12 kuyucuklu plakayı mikroskop aşamasına yerleştirin ve hücrelerin morfolojisini 200X büyütmede gözlemlemek için 20X hedefi kullanın. Mitokondriyal membran potansiyelini ölçmek için, daha önce hazırlanan tedavi edilmiş hücreleri kuyucuk başına bir mililitre 1X PBS ile üç kez yıkayın. Daha sonra hücreleri mililitre JC-1 çalışma çözeltisi başına 100 mikrolitre beş mikrogram ile lekeleyin ve hücreleri karanlıkta 37 santigrat derecede 30 dakika boyunca inkübe edin.Daha sonra hücreleri üç kez 1X PBS ile yıkayın ve her bir oyuğa bir mililitre 1X PBS ekleyin. 12 kuyucuklu plakayı mikroskop aşamasına yerleştirin ve hücrelerin morfolojisini 200X büyütmede gözlemlemek için 20X hedefi kullanın. Tedavi edilen hücreleri lize edin ve hücre lizatını 1.5 mililitrelik mikrosantrifüj tüplerine toplayın.Tüpleri 12.000 G'de dört santigrat derecede 20 dakika boyunca santrifüj edin. Ardından, hücre lizat süpernatantına bir ila dört hacim oranında 5X SDS-PAGE numune yükleme tamponu ekleyin. Daha sonra, hazırlanan% 12 SDS-PAGE jelini 12 kuyucuklu elektroforez tankına yerleştirin ve önerilen yükseklik sınırına ultra saf su ile seyreltilmiş 1X SDS yukarı numune tamponu ekleyin.SDS-PAGE elektroforezinden sonra, proteinlerin 0.45 mikron PVDF membrana elektro transferini gerçekleştirin. Membranı, bloke edici tamponda seyreltilmiş birincil antikorların beş mililitresinde inkübe edin. LC-III, p62 ve beta-aktin için spesifik antikorlar kullanın.Gece boyunca dört santigrat derecede inkübe edin. Daha sonra PVDF membranını, bloke edici tamponda bir ila 10.000 arasında seyreltilmiş tavşan anti-fare LGG HRP ikincil antikoru ile inkübe edin. Membranı iki saat boyunca ışıktan korunan oda sıcaklığında inkübe edin.İnkübasyondan sonra, PVDF membranını plastik bir sargı üzerine yerleştirin. Uygun miktarda ECL çalışma çözeltisi ekleyin ve iki dakika boyunca inkübe edin. Ardından ECL çalışma solüsyonunu çıkarın ve görüntü geliştirme için görüntüleme sistemindeki PVDF membranını açığa çıkarın.DCFH-DA boyaması, platikodin D'nin ALM-12 hücrelerindeki hücre içi ROS seviyesini önemli ölçüde azaltabileceğini ve bu tedavinin hücresel oksidatif stresi azaltabileceğini göstermiştir. Dahası, JC-1 monomerlerini veya depolarize mitokondrileri temsil eden yeşil floresan, palmitik asitle muamele edilen hücrelerde tedavi edilmemiş hücrelerden daha yüksekken, JC-1 dimerlerini veya polarize mitokondrileri temsil eden kırmızı floresan, palmitik asitle muamele edilen hücrelerde, tedavi edilmemiş hücrelerden daha düşüktü ve bu da palmitik asit kaynaklı MMP depolarizasyonunu gösteriyordu. Ek olarak, model grubuyla karşılaştırıldığında, JC-1 monomerlerinin dimerlere oranı, platikodin D tedavi grubunda azalmıştır, bu da palmitik asit kaynaklı MMP'yi iyileştirebileceğini göstermektedir.Otofaji ile ilişkili proteinler LC-III ve p62'nin protein ekspresyon düzeyleri batı lekelenmesi ile araştırıldı. LC-32'nin LC-31'e oranı önemli ölçüde azaldı ve palmitik asit ile muamele edildikten sonra p62'nin protein ekspresyon seviyesi arttı. Öte yandan, platikodin D, p62'nin protein ekspresyon seviyesini önemli ölçüde azalttı ve LC-32'nin LC-31'e oranını arttırdı, bu da palmitik asit tarafından indüklenen otofajik akının restorasyonunu gösterdi.Negatif kontrol grubundaki hücrelerin floresan değeri nispeten yüksekse, floresan probların çalışma konsantrasyonları gerektiğinde ayarlanabilir.

Research

JoVE Journal

Medicine

Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Bir olarak Beyin Microslices arasında excitotoxic uyarılması<em&gt; In vitro</em&gt; İnme Model

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Farelerde Taksanlar Farmakokinetik ve Farmakodinamik Analiz Karotis Arter İnfüzyonlar

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

A Quick Phenotypic Neurological Scoring System for Evaluating Disease Progression in the SOD1-G93A Mouse Model of ALS

ALS SOD1-G93A Fare Modeli hastalığın ilerlemesine değerlendirilmesi için Hızlı Fenotipik Nörolojik Puanlama Sistemi

The SOD1-G93A transgenic mouse is the most widely used animal model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS). At ALS TDI we developed a phenotypic screening ...

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

Rat Dimethylnitrosamine Başlatılan Karaciğer Fibrozis Modeli

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

Vitro ve In Vivo insan hücreleri, C. Elegansve fareler Mitophagy tespiti

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a ...

Assessment of Plasma Coagulation on Liver Tissue in a Large Animal Model In Vivo

Assessment of Plasma Coagulation on Liver Tissue in a Large Animal Model In Vivo

Plazma koagülasyon büyük hayvan modeli Vivo içinde karaciğer dokusu üzerinde değerlendirilmesi

Plasma coagulation as a form of electrocautery is used in liver surgery for decades to seal the large liver cut surface after major hepatectomy to prevent ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis (NASH) Resolution

Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis NASH Resolution

-Alkolsüz Steatohepatitis (NASH) çözünürlük değerlendirmek farelerde hayatta kalınabilir karaciğer biyopsisi yordam eklenmesi

Clinical trials assessing therapies for the treatment of non-alcoholic steatohepatitis (NASH) involve a baseline and end of study liver biopsy, and ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

Koroner Anjiyogenezin In Vitro Modeli

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

Karaciğer Biyolojisi Ex Vivo Modeli olarak Murine Precision-Cut Karaciğer Dilimleri

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...