Name: isolation of retinal pigment epithelial cells from guinea pig eyes
Uploaded: 2023-05-09T13:00:00
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Questo studio è supportato dalla Japan Society for the Promotion of Science Overseas Research Fellowships (S.G.), da un Loris and David Rich Postdoctoral Scholar (S.G.) e da una sovvenzione del National Eye Institute del National Institutes of Health (R01EY012392; C.F.W.).

Tutte le cure e i trattamenti degli animali utilizzati in questo studio sono conformi alla dichiarazione ARVO per l'uso degli animali nella ricerca oftalmica e visiva. I protocolli sperimentali sono stati approvati dall'Animal Care and Use Committee dell'Università della California, Berkeley.
1. Enucleazione dell'occhio di cavia
<ol><li>Eutanasia di una cavia con un'iniezione intracardiaca di pentobarbital di sodio somministrato in anestesia (isoflurano al 5% in ossigeno).<...

<ol>
	<li>Strauss, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+retinal+pigment+epithelium+in+visual+function.">The retinal pigment epithelium in visual function.</a> Physiological Reviews. 85 (3), 845-881 (2005).</li><li>Amram, B., Cohen-Tayar, Y., David, A., Ashery-Padan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+retinal+pigmented+epithelium+-+from+basic+developmental+biology+research+to+translational+approaches.">The retinal pigmented epithelium - from basic developmental biology research to translational approaches.</a> The International Journal of Developmental Biology. 61 (3-4-5), 225-234 (2017).</li><li>Goto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+retina-specific+Aldh1a1+controls+dorsal+choroidal+vascular+development+via+Sox9+expression+in+retinal+pigment+epithelial+cells.">Neural retina-specific Aldh1a1 controls dorsal choroidal vascular development via Sox9 expression in retinal pigment epithelial cells.</a> Elife. 7, 32358 (2018).</li><li>Rymer, J., Wildsoet, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+retinal+pigment+epithelium+in+eye+growth+regulation+and+myopia:+A+review.">The role of the retinal pigment epithelium in eye growth regulation and myopia: A review.</a> Visual Neuroscience. 22 (3), 251-261 (2005).</li><li>Wallman, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moving+the+retina:+Choroidal+modulation+of+refractive+state.">Moving the retina: Choroidal modulation of refractive state.</a> Vision Research. 35 (1), 37-50 (1995).</li><li>Wu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scleral+hypoxia+is+a+target+for+myopia+control.">Scleral hypoxia is a target for myopia control.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (30), 7091-7100 (2018).</li><li>Troilo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imi+-+Report+on+experimental+models+of+emmetropization+and+myopia.">Imi - Report on experimental models of emmetropization and myopia.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 60 (3), 31-88 (2019).</li><li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Violet+light+suppresses+lens-induced+myopia+via+neuropsin+(OPN5)+in+mice.">Violet light suppresses lens-induced myopia via neuropsin (OPN5) in mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 118 (22), e2018840118 (2021).</li><li>Zhang, Y., Wildsoet, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RPE+and+choroid+mechanisms+underlying+ocular+growth+and+myopia.">RPE and choroid mechanisms underlying ocular growth and myopia.</a> Progress in Molecular Biology and Translational Science. 134, 221-240 (2015).</li><li>Jager, R. D., Mieler, W. F., Miller, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+macular+degeneration.">Age-related macular degeneration.</a> New England Journal of Medicine. 358 (24), 2606-2617 (2008).</li><li>McLeod, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+RPE+and+choriocapillaris+in+age-related+macular+degeneration.">Relationship between RPE and choriocapillaris in age-related macular degeneration.</a> Investigative Opthalmology and Visual Science. 50 (10), 4982 (2009).</li><li>Bhutto, I., Lutty, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+age-related+macular+degeneration+(AMD):+Relationships+between+the+photoreceptor/retinal+pigment+epithelium/Bruch's+membrane/choriocapillaris+complex.">Understanding age-related macular degeneration (AMD): Relationships between the photoreceptor/retinal pigment epithelium/Bruch's membrane/choriocapillaris complex.</a> Molecular Aspects of Medicine. 33 (4), 295-317 (2012).</li><li>Shelton, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microarray+analysis+of+choroid/RPE+gene+expression+in+marmoset+eyes+undergoing+changes+in+ocular+growth+and+refraction.">Microarray analysis of choroid/RPE gene expression in marmoset eyes undergoing changes in ocular growth and refraction.</a> Molecular Vision. 14, 1465-1479 (2008).</li><li>Wang, S., Liu, S., Mao, J., Wen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+retinoic+acid+on+the+tight+junctions+of+the+retinal+pigment+epithelium-choroid+complex+of+guinea+pigs+with+lens-induced+myopia+in+vivo.">Effect of retinoic acid on the tight junctions of the retinal pigment epithelium-choroid complex of guinea pigs with lens-induced myopia in vivo.</a> International Journal of Molecular Medicine. 33 (4), 825-832 (2014).</li><li>He, L., Frost, M. R., Siegwart, J. T., Norton, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+gene+expression+in+tree+shrew+retina+and+retinal+pigment+epithelium+produced+by+short+periods+of+minus-lens+wear.">Altered gene expression in tree shrew retina and retinal pigment epithelium produced by short periods of minus-lens wear.</a> Experimental Eye Research. 168 (3), 77-88 (2018).</li><li>Nickla, D. L., Wallman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+multifunctional+choroid.">The multifunctional choroid.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 29 (2), 144-168 (2010).</li><li>Zhang, Y., Liu, Y., Wildsoet, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional,+optical+sign-dependent+regulation+of+BMP2+gene+expression+in+chick+retinal+pigment+epithelium.">Bidirectional, optical sign-dependent regulation of BMP2 gene expression in chick retinal pigment epithelium.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 53 (10), 6072-6080 (2012).</li><li>Xin-Zhao Wang, C., Zhang, K., Aredo, B., Lu, H., Ufret-Vincenty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+method+for+the+rapid+isolation+of+RPE+cells+specifically+for+RNA+extraction+and+analysis.">Novel method for the rapid isolation of RPE cells specifically for RNA extraction and analysis.</a> Experimental Eye Research. 102 (1), 1-9 (2012).</li><li>Goto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+signatures+of+contact+lens-induced+myopia+in+guinea+pig+retinal+pigment+epithelium.">Gene expression signatures of contact lens-induced myopia in guinea pig retinal pigment epithelium.</a> Investigative Opthalmology and Visual Science. 63 (9), 25 (2022).</li><li>De Schaepdrijver, L., Simoens, P., Lauwers, H., De Geest, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+vascular+patterns+in+domestic+animals.">Retinal vascular patterns in domestic animals.</a> Research in Veterinary Science. 47 (1), 34-42 (1989).</li><li>Araki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Base-resolution+methylome+of+retinal+pigment+epithelial+cells+used+in+the+first+trial+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-based+autologous+transplantation.">Base-resolution methylome of retinal pigment epithelial cells used in the first trial of human induced pluripotent stem cell-based autologous transplantation.</a> Stem Cell Reports. 13 (4), 761-774 (2019).</li><li>Sonoda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+the+culture+and+differentiation+of+highly+polarized+human+retinal+pigment+epithelial+cells.">A protocol for the culture and differentiation of highly polarized human retinal pigment epithelial cells.</a> Nature Protocols. 4 (5), 662-673 (2009).</li><li>Fernandez-Godino, R., Garland, D. L., Pierce, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+culture+and+characterization+of+primary+mouse+RPE+cells.">Isolation, culture and characterization of primary mouse RPE cells.</a> Nature Protocols. 11 (7), 1206-1218 (2016).</li></ol>

In questo articolo, descriviamo un metodo per isolare RPE, appropriato per le analisi di espressione genica RPE, dagli occhi di giovani cavie pigmentate. I meriti di questo protocollo sono che produce campioni RPE di alta qualità che sono relativamente privi di contaminazione, con RNA adeguatamente conservato per analisi specifiche dell'RNA e, tuttavia, è relativamente semplice ed efficiente. Mentre nell'esempio fornito qui, i campioni RPE sono stati raccolti dagli occhi di una cavia giovane (2 settimane), il protocoll...

L'RPE comprende un monostrato unico di cellule pigmentate situate tra la retina neurale e la coroide vascolare e l'RPE ha ruoli ben noti nello sviluppo e nel mantenimento della normale funzione retinica, compresa la fototrasduzione 1,2. Più recentemente, all'RPE è stato assegnato un ulteriore ruolo chiave nella regolazione della crescita oculare3 e, quindi, nello sviluppo della miopia4. Questa assegnazione si basa sulla posizione critica dell'RPE, interposta tra la retina e la coroide e sull'ormai ampia accettazione che la crescita dell'occhio e, quindi, gli errori di rifrazione sono regolati localmente5. Si ritiene che l'RPE svolga un ruolo chiave come relè di segnale, collegando la retina, la presunta fonte di segnali modulatori della crescita, alla coroide e alla sclera, i due bersagli dei segnali trasmessi 6,7,8.
L'aumento della lunghezza assiale che caratterizza la maggior parte della miopia non può essere considerato benigno, con alterazioni fisiopatologiche che coinvolgono la retina, la coroide e/o la sclera che rappresentano conseguenze inevitabili e ormai ben riconosciute di un eccessivo allungamento oculare 7,9. In questo contesto, l'RPE è forse il più vulnerabile, poiché, essendo un tessuto non mitotico, è in grado di ospitare la camera vitreale in espansione solo attraverso lo stiramento e l'assottigliamento delle singole cellule. Mentre il suo ruolo nelle patologie correlate alla miopia, come la degenerazione maculare miopica, deve ancora essere completamente compreso, l'RPE è stato implicato nella patogenesi di una serie di altre malattie della retina, tra cui l'atrofia geografica, una delle principali cause di cecità, che è associata ad anomalie documentate nella retina, RPE e coroide10,11, 12.
Il successo dell'isolamento delle cellule RPE, libere dalla contaminazione dai tessuti oculari adiacenti, apre potenzialmente molte opportunità di ricerca per ottenere nuove informazioni sui meccanismi alla base di una varietà di malattie oculari / retiniche. Tuttavia, l'isolamento dell'RPE si è dimostrato impegnativo, con molti studi pubblicati che utilizzano campioni combinati di retina / RPE o RPE / coroide per questo motivo13,14,15. Gli studi che prevedono l'isolamento riuscito dell'RPE di una qualità adatta agli studi di biologia molecolare sono stati limitati agli occhi di pulcino e topo16,17. Ad esempio, il metodo simultaneo di isolamento RPE e stabilizzazione dell'RNA (SRIRS) descritto da Wang et al.18. Isolare le cellule RPE nei topi non sembra funzionare bene negli occhi delle cavie. Il protocollo qui descritto rappresenta un perfezionamento di un approccio che è stato inizialmente prototipato con occhi di toporagno degli alberi da uno degli autori (M.F.) e ha dimostrato di produrre campioni RPE di alta qualità, appropriati per l'RNA e altre analisi di biologia molecolare, dagli occhi di giovani cavie pigmentate19.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe with Slip Tip</td>
			<td>Bd Vacutainer Labware Medical</td>
			<td>22-253-260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>21985-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 Well Tissue Culture Plate with Lid, Flat Bottom, Sterile</td>
			<td>pectrum Chemical Mfg. Corp</td>
			<td>970-95008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 Well Tissue Culture Plate with Lid, Individual, Sterile</td>
			<td>Thomas Scientific LLC</td>
			<td>1198D72</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 2100 Bioanalyzer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>automated electrophoresis to check RNA quality</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balanced Salt Solutions</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Micro Forceps, Straight Smooth, 0.3 mm Tip, 7 cm</td>
			<td>Fine Science Tools, Inc.</td>
			<td>11083-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont forceps no. 5</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic disposable needles</td>
			<td>Exelint International, Co.</td>
			<td>26419</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic disposable needles</td>
			<td>Exelint International, Co.</td>
			<td>26437</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MiniSpin Microcentrifuges</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>540108</td>
			<td>Max. Speed: 8,000 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAlater Stabilization Solution</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM7020</td>
			<td>tissue storage reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy Mini kits</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td>RNA isolation kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools, Inc.</td>
			<td>91500-09</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of retinal pigment epithelial cells from guinea pig eyes

Questo protocollo descrive l'isolamento delle cellule dell'epitelio pigmentato retinico (RPE) dagli occhi di giovani cavie pigmentate per una potenziale applicazione negli studi di biologia molecolare, comprese le analisi di espressione genica. Nel contesto della regolazione della crescita oculare e della miopia, l'RPE svolge probabilmente un ruolo come relè cellulare per i segnali modulatori della crescita, poiché si trova tra la retina e le due pareti dell'occhio, come la coroide e la sclera. Mentre i protocolli per isolare l'RPE sono stati sviluppati sia per i pulcini che per i topi, questi protocolli hanno dimostrato di non essere direttamente traducibili nella cavia, che è diventata un modello di miopia di mammifero importante e ampiamente utilizzato. In questo studio, sono stati utilizzati strumenti di biologia molecolare per esaminare l'espressione di geni specifici per confermare che i campioni erano privi di contaminazione dai tessuti adiacenti. Il valore di questo protocollo è già stato dimostrato in uno studio RNA-Seq di RPE da giovani cavie pigmentate esposte a defocus ottico che induce miopia. Oltre alla regolazione della crescita oculare, questo protocollo ha altre potenziali applicazioni negli studi sulle malattie della retina, tra cui la maculopatia miopica, una delle principali cause di cecità nei miopi, in cui l'RPE è stato implicato. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è relativamente semplice e, una volta perfezionata, produce campioni RPE di alta qualità adatti per studi di biologia molecolare, compresa l'analisi dell'RNA.

L'analisi dei campioni RPE raccolti utilizzando il protocollo di cui sopra ha mostrato RNA ben conservato (RIN >8.0, Figura 2B), con 240,2 ng ± 35,1 ng per occhio (n = 8, NanoDrop, Figura 2B). Per valutare ulteriormente la qualità dei campioni RPE isolati, in particolare l'assenza di contaminanti coroideali e sclerali, abbiamo esaminato l'espressione di geni rappresentativi per ciascuno di questi ultimi tessuti nei campioni RPE19. I ca...

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Isolation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Guinea Pig Eyes

Descriviamo un metodo semplice ed efficiente per isolare le cellule dell'epitelio pigmentato retinico (RPE) dagli occhi di giovani cavie pigmentate. Questa procedura consente studi di biologia molecolare di follow-up sull'RPE isolato, comprese le analisi di espressione genica.

Isolamento delle cellule epiteliali pigmentate retiniche da occhi di porcellino d'India

This protocol describes the isolation of cells of the retinal pigment epithelium (RPE) from the eyes of young pigmented guinea pigs for potential ...

L'epitelio pigmentato retinico o RPE è fondamentale per la salute della retina. E studiare l'RPE isolato è fondamentale per la malattia della retina. Questo metodo di isolamento RPE dalla cavia, un modello di miopia popolare, aiuta a risolvere il problema impegnativo.Il vantaggio principale di questa tecnica è che è relativamente semplice e produce campioni RPE di alta qualità adatti per gli studi molecolari biologici, compresa l'analisi RPE. Seguendo perfettamente la tecnica dimostrata e osservando come manipolare gli strumenti di dissezione, si può padroneggiare rapidamente questa procedura con un po 'di pratica. Dopo aver eutanasia umana la cavia ed enuclemangiato gli occhi dell'animale, lavare immediatamente gli occhi trasferendoli in una capsula di Petri di 10 centimetri contenente soluzione salina tamponata con fosfato sterile o PBS.Dopo il lavaggio, trasferire gli occhi alla soluzione PBS fresca. Ora lavorando al microscopio da dissezione, utilizzare un ago calibro 18 per fare una piccola apertura iniziale nella sclera di un occhio, circa un millimetro dietro il confine limbare tra la cornea e la sclera. Usando le forbici, rimuovere il segmento anteriore, compresa la cornea, l'iride, il corpo ciliare e il cristallino.Quindi, lavorando con un segmento oculare posteriore rimanente, utilizzare una pinza per afferrare e tirare delicatamente la zonula di Zinn, seguita dal distacco della retina dal complesso RPE / coroide / sclera e rimuovendo la retina senza frammentazione. Dopo che la retina è stata completamente rimossa, immergere la concia oculare posteriore rimanente, che include RPE, coroide e sclera in uno dei pozzetti di una piastra a 12 pozzetti contenente due millilitri di reagente di stoccaggio dei tessuti e tenerlo immerso per cinque minuti. Per risciacquare il reagente di stoccaggio, trasferire la concia oculare in un altro pozzetto riempito con quattro millilitri di PBS per 10 secondi prima di spostarlo in un terzo pozzetto riempito con due millilitri di PBS.Prima di procedere alla fase finale di isolamento RPE, preparare una siringa da un millilitro riempita con PBS e collegare un ago da 30 gauge. Spingere delicatamente sullo stantuffo della siringa per creare una corrente a getto di PBS. Lavorando al microscopio, in primo luogo, punta questo flusso di PBS verso l'RPE per fare un piccolo strappo o un buco in esso.Quindi dirigere il flusso di PBS nell'apertura creata per staccare l'RPE come un foglio dalla coroide. Dopo aver staccato l'RPE dalla coroide, raccogliere le cellule RPE in una siringa senza ago da un millilitro e trasferire il campione raccolto in una provetta da 1,5 millilitri. Centrifugare il tubo con l'RPE raccolto a 8.000 x g per un minuto per ottenere un pellet RPE.Per i campioni da utilizzare nelle analisi dell'RNA, scartare il surnatante, cioè la soluzione PBS, e sostituirlo con 350 millilitri di tampone di lisi incluso nei kit di isolamento dell'RNA. Pipet il contenuto su e giù 20 volte per mescolare bene e preservare la qualità del campione. Per la conservazione e la conservazione a lungo termine, trasferire i campioni in un congelatore a meno 80 gradi Celsius.Utilizzare un kit di isolamento dell'RNA e seguire le istruzioni del produttore per isolare e raccogliere l'RNA dai campioni RPE prima di valutare la qualità del campione tramite elettroforesi. Nel nostro studio, i campioni di RPE raccolti hanno mostrato RNA ben conservato con un numero di integrità dell'RNA o RIN superiore a otto. Il conteggio totale dell'RNA di circa 240 nanogrammi per occhio.Il livello di espressione del gene specifico RPE, Rpe65, è risultato essere significativamente più alto nei campioni RPE rispetto alla coroide e alla sclera. Al contrario, i campioni di RPE hanno mostrato un'espressione minima del gene specifico della sclera coroidea selezionato, collagene di tipo alfa-one, indicando l'assenza di contaminanti coroideali e sclerali nei campioni RPE isolati. Il passo più importante della procedura è la rimozione graduale della retina senza lasciare alcun frammento retinico.Questa procedura di isolamento RPE merita la spiegazione degli studi di coltura cellulare in vitro con alcune importanti differenze, tra cui la scelta dei mezzi per immergere le cellule RPE dopo l'isolamento.

Research

JoVE Journal

Biology

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