Name: isolation of retinal pigment epithelial cells from guinea pig eyes
Uploaded: 2023-05-09T13:00:00
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Este estudo é apoiado pela Sociedade Japonesa para a Promoção da Ciência Bolsas de Pesquisa no Exterior (S.G.), um bolsista de pós-doutorado de Loris e David Rich (S.G.), e uma bolsa do Instituto Nacional de Olhos dos Institutos Nacionais de Saúde (R01EY012392; C.F.W.).

Todos os cuidados e tratamentos com animais utilizados neste estudo estão em conformidade com a Declaração ARVO para o Uso de Animais em Pesquisa Oftalmológica e da Visão. Os protocolos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Cuidados e Uso de Animais da Universidade da Califórnia, Berkeley.
1. Enucleação do olho da cobaia
<ol><li>Eutanásia de uma cobaia com uma injeção intracardíaca de pentobarbital sódico administrada sob anestesia (isoflurano a 5% em ox...

<ol>
	<li>Strauss, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+retinal+pigment+epithelium+in+visual+function.">The retinal pigment epithelium in visual function.</a> Physiological Reviews. 85 (3), 845-881 (2005).</li><li>Amram, B., Cohen-Tayar, Y., David, A., Ashery-Padan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+retinal+pigmented+epithelium+-+from+basic+developmental+biology+research+to+translational+approaches.">The retinal pigmented epithelium - from basic developmental biology research to translational approaches.</a> The International Journal of Developmental Biology. 61 (3-4-5), 225-234 (2017).</li><li>Goto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+retina-specific+Aldh1a1+controls+dorsal+choroidal+vascular+development+via+Sox9+expression+in+retinal+pigment+epithelial+cells.">Neural retina-specific Aldh1a1 controls dorsal choroidal vascular development via Sox9 expression in retinal pigment epithelial cells.</a> Elife. 7, 32358 (2018).</li><li>Rymer, J., Wildsoet, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+retinal+pigment+epithelium+in+eye+growth+regulation+and+myopia:+A+review.">The role of the retinal pigment epithelium in eye growth regulation and myopia: A review.</a> Visual Neuroscience. 22 (3), 251-261 (2005).</li><li>Wallman, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moving+the+retina:+Choroidal+modulation+of+refractive+state.">Moving the retina: Choroidal modulation of refractive state.</a> Vision Research. 35 (1), 37-50 (1995).</li><li>Wu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scleral+hypoxia+is+a+target+for+myopia+control.">Scleral hypoxia is a target for myopia control.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (30), 7091-7100 (2018).</li><li>Troilo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imi+-+Report+on+experimental+models+of+emmetropization+and+myopia.">Imi - Report on experimental models of emmetropization and myopia.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 60 (3), 31-88 (2019).</li><li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Violet+light+suppresses+lens-induced+myopia+via+neuropsin+(OPN5)+in+mice.">Violet light suppresses lens-induced myopia via neuropsin (OPN5) in mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 118 (22), e2018840118 (2021).</li><li>Zhang, Y., Wildsoet, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RPE+and+choroid+mechanisms+underlying+ocular+growth+and+myopia.">RPE and choroid mechanisms underlying ocular growth and myopia.</a> Progress in Molecular Biology and Translational Science. 134, 221-240 (2015).</li><li>Jager, R. D., Mieler, W. F., Miller, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+macular+degeneration.">Age-related macular degeneration.</a> New England Journal of Medicine. 358 (24), 2606-2617 (2008).</li><li>McLeod, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+RPE+and+choriocapillaris+in+age-related+macular+degeneration.">Relationship between RPE and choriocapillaris in age-related macular degeneration.</a> Investigative Opthalmology and Visual Science. 50 (10), 4982 (2009).</li><li>Bhutto, I., Lutty, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+age-related+macular+degeneration+(AMD):+Relationships+between+the+photoreceptor/retinal+pigment+epithelium/Bruch's+membrane/choriocapillaris+complex.">Understanding age-related macular degeneration (AMD): Relationships between the photoreceptor/retinal pigment epithelium/Bruch's membrane/choriocapillaris complex.</a> Molecular Aspects of Medicine. 33 (4), 295-317 (2012).</li><li>Shelton, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microarray+analysis+of+choroid/RPE+gene+expression+in+marmoset+eyes+undergoing+changes+in+ocular+growth+and+refraction.">Microarray analysis of choroid/RPE gene expression in marmoset eyes undergoing changes in ocular growth and refraction.</a> Molecular Vision. 14, 1465-1479 (2008).</li><li>Wang, S., Liu, S., Mao, J., Wen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+retinoic+acid+on+the+tight+junctions+of+the+retinal+pigment+epithelium-choroid+complex+of+guinea+pigs+with+lens-induced+myopia+in+vivo.">Effect of retinoic acid on the tight junctions of the retinal pigment epithelium-choroid complex of guinea pigs with lens-induced myopia in vivo.</a> International Journal of Molecular Medicine. 33 (4), 825-832 (2014).</li><li>He, L., Frost, M. R., Siegwart, J. T., Norton, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+gene+expression+in+tree+shrew+retina+and+retinal+pigment+epithelium+produced+by+short+periods+of+minus-lens+wear.">Altered gene expression in tree shrew retina and retinal pigment epithelium produced by short periods of minus-lens wear.</a> Experimental Eye Research. 168 (3), 77-88 (2018).</li><li>Nickla, D. L., Wallman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+multifunctional+choroid.">The multifunctional choroid.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 29 (2), 144-168 (2010).</li><li>Zhang, Y., Liu, Y., Wildsoet, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional,+optical+sign-dependent+regulation+of+BMP2+gene+expression+in+chick+retinal+pigment+epithelium.">Bidirectional, optical sign-dependent regulation of BMP2 gene expression in chick retinal pigment epithelium.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 53 (10), 6072-6080 (2012).</li><li>Xin-Zhao Wang, C., Zhang, K., Aredo, B., Lu, H., Ufret-Vincenty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+method+for+the+rapid+isolation+of+RPE+cells+specifically+for+RNA+extraction+and+analysis.">Novel method for the rapid isolation of RPE cells specifically for RNA extraction and analysis.</a> Experimental Eye Research. 102 (1), 1-9 (2012).</li><li>Goto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+signatures+of+contact+lens-induced+myopia+in+guinea+pig+retinal+pigment+epithelium.">Gene expression signatures of contact lens-induced myopia in guinea pig retinal pigment epithelium.</a> Investigative Opthalmology and Visual Science. 63 (9), 25 (2022).</li><li>De Schaepdrijver, L., Simoens, P., Lauwers, H., De Geest, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+vascular+patterns+in+domestic+animals.">Retinal vascular patterns in domestic animals.</a> Research in Veterinary Science. 47 (1), 34-42 (1989).</li><li>Araki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Base-resolution+methylome+of+retinal+pigment+epithelial+cells+used+in+the+first+trial+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-based+autologous+transplantation.">Base-resolution methylome of retinal pigment epithelial cells used in the first trial of human induced pluripotent stem cell-based autologous transplantation.</a> Stem Cell Reports. 13 (4), 761-774 (2019).</li><li>Sonoda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+the+culture+and+differentiation+of+highly+polarized+human+retinal+pigment+epithelial+cells.">A protocol for the culture and differentiation of highly polarized human retinal pigment epithelial cells.</a> Nature Protocols. 4 (5), 662-673 (2009).</li><li>Fernandez-Godino, R., Garland, D. L., Pierce, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+culture+and+characterization+of+primary+mouse+RPE+cells.">Isolation, culture and characterization of primary mouse RPE cells.</a> Nature Protocols. 11 (7), 1206-1218 (2016).</li></ol>

Neste artigo, descrevemos um método de isolamento do EPR, apropriado para análises da expressão do gene do EPR, dos olhos de cobaias jovens e pigmentadas. O mérito deste protocolo é que ele produz amostras de EPR de alta qualidade que são relativamente livres de contaminação, com RNA adequadamente preservado para análises específicas de RNA e, ainda assim, é relativamente simples e eficiente. Enquanto no exemplo fornecido aqui, as amostras de EPR foram coletadas dos olhos de uma cobaia jovem (2 semanas de idad...

O EPR compreende uma única monocamada de células pigmentadas localizada entre a retina neural e a coroide vascular, e o EPR tem papéis bem reconhecidos no desenvolvimento e manutenção da função normal da retina, incluindo a fototransdução 1,2. Mais recentemente, foi atribuído à PSE um papel fundamental adicional na regulação do crescimento ocular3 e, portanto, no desenvolvimento da miopia4. Essa atribuição baseia-se na localização crítica da PSE, interposta entre a retina e a coroide, e na aceitação agora ampla de que o crescimento ocular e, portanto, os erros refrativos são reguladoslocalmente5. Acredita-se que a PSE desempenhe um papel fundamental como relé de sinal, ligando a retina, fonte presumida de sinais modulatórios de crescimento, à coroide e esclera, os dois alvos dos sinais retransmitidos 6,7,8.
O aumento do comprimento axial que caracteriza a maioria das miopias não pode ser considerado benigno, com alterações fisiopatológicas envolvendo retina, coroide e/ou esclera representando consequências inevitáveis e agora bem reconhecidas doalongamento ocular excessivo7,9. Nesse contexto, o EPR talvez seja o mais vulnerável, pois, sendo um tecido não mitótico, só é capaz de acomodar a câmara vítrea em expansão pelo estiramento e afinamento de células individuais. Embora seu papel em patologias relacionadas à miopia, como a degeneração macular míope, ainda não seja totalmente compreendido, o EPR tem sido implicado na patogênese de uma série de outras doenças retinianas, incluindo a atrofia geográfica, uma das principais causas de cegueira, que está associada a anormalidades documentadas na retina, PSE e coroide10,11, 12º.
O isolamento bem-sucedido de células de EPR, livres de contaminação de tecidos oculares adjacentes, potencialmente abre muitas oportunidades de pesquisa para obter novos insights sobre os mecanismos subjacentes a uma variedade de doenças oculares/retinianas. Entretanto, o isolamento da PSE tem se mostrado desafiador, com muitos estudos publicados fazendo uso da combinação retina/PSE ou PSE/coroide por esse motivo13,14,15. Estudos envolvendo o sucesso do isolamento do EPR de qualidade adequada para estudos de biologia molecular têm sido limitados a olhos de pintinhos e camundongos16,17. Por exemplo, o método simultâneo de isolamento de PSE e estabilização de RNA (SRIRS) descrito por Wang et al.18. Isolar células RPE em camundongos não parece funcionar bem em olhos de cobaias. O protocolo aqui descrito representa um refinamento de uma abordagem que foi inicialmente prototipada com olhos de musaranho por um dos autores (M.F.) e provou produzir amostras de EPR de alta qualidade, apropriadas para análises de RNA e outras análises de biologia molecular, a partir de olhos de cobaias pigmentadasjovens19.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe with Slip Tip</td>
			<td>Bd Vacutainer Labware Medical</td>
			<td>22-253-260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>21985-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 Well Tissue Culture Plate with Lid, Flat Bottom, Sterile</td>
			<td>pectrum Chemical Mfg. Corp</td>
			<td>970-95008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 Well Tissue Culture Plate with Lid, Individual, Sterile</td>
			<td>Thomas Scientific LLC</td>
			<td>1198D72</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 2100 Bioanalyzer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>automated electrophoresis to check RNA quality</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balanced Salt Solutions</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Micro Forceps, Straight Smooth, 0.3 mm Tip, 7 cm</td>
			<td>Fine Science Tools, Inc.</td>
			<td>11083-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont forceps no. 5</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic disposable needles</td>
			<td>Exelint International, Co.</td>
			<td>26419</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic disposable needles</td>
			<td>Exelint International, Co.</td>
			<td>26437</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MiniSpin Microcentrifuges</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>540108</td>
			<td>Max. Speed: 8,000 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAlater Stabilization Solution</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM7020</td>
			<td>tissue storage reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy Mini kits</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td>RNA isolation kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools, Inc.</td>
			<td>91500-09</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of retinal pigment epithelial cells from guinea pig eyes

Este protocolo descreve o isolamento de células do epitélio pigmentado da retina (EPR) dos olhos de cobaias pigmentadas jovens para potencial aplicação em estudos de biologia molecular, incluindo análises de expressão gênica. No contexto da regulação do crescimento ocular e miopia, o EPR provavelmente desempenha um papel como um relé celular para sinais modulatórios de crescimento, uma vez que está localizado entre a retina e as duas paredes do olho, como a coroide e a esclera. Embora protocolos para isolar o PSE tenham sido desenvolvidos tanto para pintos quanto para camundongos, esses protocolos provaram não ser diretamente traduzíveis para a cobaia, que se tornou um modelo importante e amplamente utilizado de miopia em mamíferos. Neste estudo, ferramentas de biologia molecular foram usadas para examinar a expressão de genes específicos para confirmar que as amostras estavam livres de contaminação dos tecidos adjacentes. O valor desse protocolo já foi demonstrado em um estudo de RNA-Seq de PSE de cobaias pigmentadas jovens expostas ao desfoco óptico indutor de miopia. Além da regulação do crescimento ocular, esse protocolo tem outras aplicações potenciais em estudos de doenças retinianas, incluindo maculopatia míope, uma das principais causas de cegueira em miopes, na qual o EPR tem sido implicado. A principal vantagem desta técnica é que é relativamente simples e, uma vez aperfeiçoada, produz amostras de EPR de alta qualidade adequadas para estudos de biologia molecular, incluindo análise de RNA.

A análise das amostras de EPR coletadas pelo protocolo acima mostrou RNA bem preservado (RIN >8,0, Figura 2B), com 240,2 ng ± 35,1 ng por olho (n = 8, NanoDrop, Figura 2B). Para avaliar melhor a qualidade das amostras isoladas de EPR, particularmente a ausência de contaminantes coroidais e esclerais, examinamos a expressão de genes representativos para cada um destes últimos tecidos nas amostras deEPR19. As amostras de EPR demonstra...

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Isolation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Guinea Pig Eyes

Descrevemos um método simples e eficiente para isolar células do epitélio pigmentado da retina (EPR) de olhos de cobaias pigmentadas jovens. Este procedimento permite o acompanhamento de estudos de biologia molecular do EPR isolado, incluindo análises de expressão gênica.

Isolamento de Células Epiteliais Pigmentares da Retina de Olhos de Cobaia

This protocol describes the isolation of cells of the retinal pigment epithelium (RPE) from the eyes of young pigmented guinea pigs for potential ...

O epitélio pigmentado da retina ou EPR é crítico para a saúde da retina. E estudar o EPR isolado é crucial para a doença retiniana. Este método de isolamento de EPR da cobaia, um modelo popular de miopia, ajuda a resolver o problema desafiador.A principal vantagem desta técnica é que é relativamente simples e produz amostra de EPR de alta qualidade adequada para os estudos moleculares biológicos, incluindo a análise de EPR. Seguindo perfeitamente a técnica demonstrada e observando como manipular as ferramentas dissecadoras, pode-se dominar esse procedimento rapidamente com alguma prática. Depois de sacrificar humanamente a cobaia e enuclear os olhos do animal, lave imediatamente os olhos transferindo-os para uma placa de Petri de 10 centímetros contendo solução salina tamponada com fosfato estéril ou PBS.Após a lavagem, transfira os olhos para a solução de PBS fresca. Agora trabalhando sob um microscópio dissecante, use uma agulha de calibre 18 para fazer uma pequena abertura inicial na esclera de um olho, aproximadamente um milímetro atrás do limite limbal entre a córnea e a esclera. Com tesoura, remova o segmento anterior, incluindo córnea, íris, corpo ciliar e cristalino.Em seguida, trabalhando com um segmento ocular posterior remanescente, use uma pinça para agarrar e puxar suavemente a zônula de Zinn, seguido de desprender a retina do complexo PSE/coroide/esclera e descascar a retina sem fragmentação. Após a remoção completa da retina, mergulhe o copo ocular posterior restante, que inclui o EPR, a coroide e a esclera, em um dos poços de uma placa de 12 poços contendo dois mililitros de reagente de armazenamento de tecido e mantenha-o imerso por cinco minutos. Para enxaguar o reagente de armazenamento, transfira o copo para outro bem preenchido com quatro mililitros de PBS por 10 segundos antes de movê-lo para um terceiro poço preenchido com dois mililitros de PBS.Antes de prosseguir para a etapa final de isolamento do EPR, prepare uma seringa de um mililitro preenchida com PBS e conecte uma agulha de calibre 30. Empurre suavemente o êmbolo da seringa para criar um fluxo de jato de PBS. Trabalhando sob um microscópio, primeiro, aponte esse fluxo de PBS para o EPR para fazer um pequeno rasgo ou buraco nele.Em seguida, direcione o fluxo de PBS para a abertura criada para separar o EPR como uma folha da coroide. Após desprender o EPR da coroide, colete as células do EPR em uma seringa de um mililitro sem agulha e transfira a amostra coletada para um tubo de 1,5 mililitro. Centrifugar o tubo com o EPR coletado a 8.000 x g por um minuto para obter um pellet de EPR.Para amostras a serem usadas em análises de RNA, descarte o sobrenadante, que é a solução PBS, e substitua-o por 350 mililitros de tampão de lise, conforme incluído nos kits de isolamento de RNA. Pipete o conteúdo para cima e para baixo 20 vezes para misturar bem e preservar a qualidade da amostra. Para armazenamento e preservação a longo prazo, transfira as amostras para um congelador de 80 graus Celsius negativos.Use um kit de isolamento de RNA e siga as instruções do fabricante para isolar e coletar o RNA das amostras de EPR antes de avaliar a qualidade da amostra por eletroforese. Em nosso estudo, as amostras de EPR coletadas apresentaram RNA bem preservado com um número de integridade de RNA ou NIR maior que oito. A contagem total de RNA é de cerca de 240 nanogramas por olho.O nível de expressão do gene específico do EPR, Rpe65, foi significativamente maior nas amostras de EPR do que na coroide e esclera. Em contraste, as amostras de EPR apresentaram expressão mínima do gene específico da esclera coroide selecionada, colágeno tipo alfa-ona, indicando a ausência de contaminantes coroidais e esclerais nas amostras isoladas de EPR. O passo mais importante do procedimento é a remoção suave da retina sem deixar nenhum fragmento de retina.Este procedimento de isolamento de EPR justifica estudos in vitro em cultura de células com algumas diferenças importantes, incluindo a escolha do meio de imersão das células de EPR após o isolamento.

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Isolamento de Células-Tronco da retina do olho do rato

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Biologia

MicroRNA Expression Profiles of Human iPS Cells, Retinal Pigment Epithelium Derived From iPS, and Fetal Retinal Pigment Epithelium

Perfis de expressão de microRNA iPS Human Cells, Retinal Pigment Epithelium Derivado de Ips, e Fetal Retinal Pigment Epithelium

The objective of this report is to describe the protocols for comparing the microRNA (miRNA) profiles of human induced-pluripotent stem (iPS) cells, ...

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell Derived-retinal Pigment Epithelial Cells into a Large-eyed Model of Geographic Atrophy

Subretinal transplante de células epiteliais de pigmento retinal derivado de células-tronco embrionárias humanas em um modelo de grandes olhos de atrofia geográfica

Geographic atrophy (GA), the late stage of dry age-related macular degeneration is characterized by loss of the retinal pigment epithelial (RPE) layer, ...

Primary Cell Cultures from the Mouse Retinal Pigment Epithelium

Culturas de células primárias do Mouse epithelium Retinal do Pigment

The retinal pigment epithelium (RPE) is a highly polarized multi-functional epithelium that is located between the neural retina and the choroid of the ...

Isolation, Culture, and Genetic Engineering of Mammalian Primary Pigment Epithelial Cells for Non-Viral Gene Therapy

Isolamento, Cultura e Engenharia Genética de Células Epiteliais de Pigmento Primário mamífero para terapia genética não viral

Age-related macular degeneration (AMD) is the most frequent cause of blindness in patients &#62;60 years, affecting ~30 million people worldwide. AMD is a ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

Dissecção eficiente e cultura de células epiteliais de pigmento de retina do rato primário

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...

Isolation of Epithelial Cells from Human Dental Follicle

Isolamento de Células Epiteliais do Folículo Dental Humano

The dental follicle (DF) was harvested during the removal of an impacted third molar by an oral maxillofacial surgeon. Epithelial cell isolation was ...

Primary Culture of Porcine Retinal Pigment Epithelial Cells

Cultura Primária de Células Epiteliais do Pigmento da Retina Suína

The retinal pigment epithelium (RPE) is a monolayer of polarized pigmented epithelial cells, located between the choroid and neuroretina in the retina. ...

Efficient and Consistent Generation of Retinal Pigment Epithelium/Choroid Flatmounts from Human Eyes for Histological Analysis

Geração eficiente e consistente de epitélio/coroide de pigmento da retina a partir de olhos humanos para análise histológica

The retinal pigment epithelium (RPE) and retina are functionally and structurally connected tissues that work together to regulate light perception and ...

Real-Time Analysis of Bioenergetics in Primary Human Retinal Pigment Epithelial Cells Using High-Resolution Respirometry

Análise em Tempo Real da Bioenergética em Células Epiteliais Pigmentares Pigmentares Humanas Primárias Usando Respirometria de Alta Resolução

Metabolic dysfunction of retinal pigment epithelial cells (RPE) is a key pathogenic driver of retinal diseases such as age-related macular degeneration ...