Name: isolation of retinal pigment epithelial cells from guinea pig eyes
Uploaded: 2023-05-09T13:00:00
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Este estudio cuenta con el apoyo de la Sociedad Japonesa para la Promoción de la Ciencia en el Extranjero Research Fellowships (SG), un becario postdoctoral Loris y David Rich (SG), y una subvención del Instituto Nacional del Ojo de los Institutos Nacionales de Salud (R01EY012392; C.F.W.).

Todos los cuidados y tratamientos con animales utilizados en este estudio se ajustaron a la Declaración ARVO para el uso de animales en la investigación oftálmica y de la visión. Los protocolos experimentales fueron aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de California, Berkeley.
1. Enucleación del ojo de cobaya
<ol><li>Eutanasia a un conejillo de indias con una inyección intracardíaca de pentobarbital sódico administrada bajo anestesi...

<ol>
	<li>Strauss, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+retinal+pigment+epithelium+in+visual+function.">The retinal pigment epithelium in visual function.</a> Physiological Reviews. 85 (3), 845-881 (2005).</li><li>Amram, B., Cohen-Tayar, Y., David, A., Ashery-Padan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+retinal+pigmented+epithelium+-+from+basic+developmental+biology+research+to+translational+approaches.">The retinal pigmented epithelium - from basic developmental biology research to translational approaches.</a> The International Journal of Developmental Biology. 61 (3-4-5), 225-234 (2017).</li><li>Goto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+retina-specific+Aldh1a1+controls+dorsal+choroidal+vascular+development+via+Sox9+expression+in+retinal+pigment+epithelial+cells.">Neural retina-specific Aldh1a1 controls dorsal choroidal vascular development via Sox9 expression in retinal pigment epithelial cells.</a> Elife. 7, 32358 (2018).</li><li>Rymer, J., Wildsoet, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+retinal+pigment+epithelium+in+eye+growth+regulation+and+myopia:+A+review.">The role of the retinal pigment epithelium in eye growth regulation and myopia: A review.</a> Visual Neuroscience. 22 (3), 251-261 (2005).</li><li>Wallman, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moving+the+retina:+Choroidal+modulation+of+refractive+state.">Moving the retina: Choroidal modulation of refractive state.</a> Vision Research. 35 (1), 37-50 (1995).</li><li>Wu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scleral+hypoxia+is+a+target+for+myopia+control.">Scleral hypoxia is a target for myopia control.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (30), 7091-7100 (2018).</li><li>Troilo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imi+-+Report+on+experimental+models+of+emmetropization+and+myopia.">Imi - Report on experimental models of emmetropization and myopia.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 60 (3), 31-88 (2019).</li><li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Violet+light+suppresses+lens-induced+myopia+via+neuropsin+(OPN5)+in+mice.">Violet light suppresses lens-induced myopia via neuropsin (OPN5) in mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 118 (22), e2018840118 (2021).</li><li>Zhang, Y., Wildsoet, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RPE+and+choroid+mechanisms+underlying+ocular+growth+and+myopia.">RPE and choroid mechanisms underlying ocular growth and myopia.</a> Progress in Molecular Biology and Translational Science. 134, 221-240 (2015).</li><li>Jager, R. D., Mieler, W. F., Miller, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+macular+degeneration.">Age-related macular degeneration.</a> New England Journal of Medicine. 358 (24), 2606-2617 (2008).</li><li>McLeod, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+RPE+and+choriocapillaris+in+age-related+macular+degeneration.">Relationship between RPE and choriocapillaris in age-related macular degeneration.</a> Investigative Opthalmology and Visual Science. 50 (10), 4982 (2009).</li><li>Bhutto, I., Lutty, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+age-related+macular+degeneration+(AMD):+Relationships+between+the+photoreceptor/retinal+pigment+epithelium/Bruch's+membrane/choriocapillaris+complex.">Understanding age-related macular degeneration (AMD): Relationships between the photoreceptor/retinal pigment epithelium/Bruch's membrane/choriocapillaris complex.</a> Molecular Aspects of Medicine. 33 (4), 295-317 (2012).</li><li>Shelton, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microarray+analysis+of+choroid/RPE+gene+expression+in+marmoset+eyes+undergoing+changes+in+ocular+growth+and+refraction.">Microarray analysis of choroid/RPE gene expression in marmoset eyes undergoing changes in ocular growth and refraction.</a> Molecular Vision. 14, 1465-1479 (2008).</li><li>Wang, S., Liu, S., Mao, J., Wen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+retinoic+acid+on+the+tight+junctions+of+the+retinal+pigment+epithelium-choroid+complex+of+guinea+pigs+with+lens-induced+myopia+in+vivo.">Effect of retinoic acid on the tight junctions of the retinal pigment epithelium-choroid complex of guinea pigs with lens-induced myopia in vivo.</a> International Journal of Molecular Medicine. 33 (4), 825-832 (2014).</li><li>He, L., Frost, M. R., Siegwart, J. T., Norton, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+gene+expression+in+tree+shrew+retina+and+retinal+pigment+epithelium+produced+by+short+periods+of+minus-lens+wear.">Altered gene expression in tree shrew retina and retinal pigment epithelium produced by short periods of minus-lens wear.</a> Experimental Eye Research. 168 (3), 77-88 (2018).</li><li>Nickla, D. L., Wallman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+multifunctional+choroid.">The multifunctional choroid.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 29 (2), 144-168 (2010).</li><li>Zhang, Y., Liu, Y., Wildsoet, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional,+optical+sign-dependent+regulation+of+BMP2+gene+expression+in+chick+retinal+pigment+epithelium.">Bidirectional, optical sign-dependent regulation of BMP2 gene expression in chick retinal pigment epithelium.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 53 (10), 6072-6080 (2012).</li><li>Xin-Zhao Wang, C., Zhang, K., Aredo, B., Lu, H., Ufret-Vincenty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+method+for+the+rapid+isolation+of+RPE+cells+specifically+for+RNA+extraction+and+analysis.">Novel method for the rapid isolation of RPE cells specifically for RNA extraction and analysis.</a> Experimental Eye Research. 102 (1), 1-9 (2012).</li><li>Goto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+signatures+of+contact+lens-induced+myopia+in+guinea+pig+retinal+pigment+epithelium.">Gene expression signatures of contact lens-induced myopia in guinea pig retinal pigment epithelium.</a> Investigative Opthalmology and Visual Science. 63 (9), 25 (2022).</li><li>De Schaepdrijver, L., Simoens, P., Lauwers, H., De Geest, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+vascular+patterns+in+domestic+animals.">Retinal vascular patterns in domestic animals.</a> Research in Veterinary Science. 47 (1), 34-42 (1989).</li><li>Araki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Base-resolution+methylome+of+retinal+pigment+epithelial+cells+used+in+the+first+trial+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-based+autologous+transplantation.">Base-resolution methylome of retinal pigment epithelial cells used in the first trial of human induced pluripotent stem cell-based autologous transplantation.</a> Stem Cell Reports. 13 (4), 761-774 (2019).</li><li>Sonoda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+the+culture+and+differentiation+of+highly+polarized+human+retinal+pigment+epithelial+cells.">A protocol for the culture and differentiation of highly polarized human retinal pigment epithelial cells.</a> Nature Protocols. 4 (5), 662-673 (2009).</li><li>Fernandez-Godino, R., Garland, D. L., Pierce, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+culture+and+characterization+of+primary+mouse+RPE+cells.">Isolation, culture and characterization of primary mouse RPE cells.</a> Nature Protocols. 11 (7), 1206-1218 (2016).</li></ol>

En este artículo, describimos un método para aislar el EPR, apropiado para los análisis de expresión génica del EPR, de los ojos de conejillos de indias jóvenes y pigmentados. Los méritos de este protocolo son que produce muestras de EPR de alta calidad que están relativamente libres de contaminación, con ARN adecuadamente preservado para análisis específicos de ARN y, sin embargo, es relativamente simple y eficiente. Mientras que en el ejemplo proporcionado aquí, las muestras de EPR se recolectaron de los oj...

El EPR comprende una monocapa única de células pigmentadas ubicadas entre la retina neural y la coroides vascular, y el EPR tiene funciones bien reconocidas en el desarrollo y mantenimiento de la función normal de la retina, incluida la fototransducción 1,2. Más recientemente, al EPR se le ha asignado un papel clave adicional en la regulación del crecimiento ocular3 y, por lo tanto, en el desarrollo de la miopía4. Esta asignación se basa en la ubicación crítica del EPR, interpuesta entre la retina y la coroides y la ahora amplia aceptación de que el crecimiento ocular y, por lo tanto, los errores refractivos están regulados localmente5. Se cree que el EPR desempeña un papel clave como relé de señal, vinculando la retina, la fuente asumida de señales moduladoras del crecimiento, con la coroides y la esclerótica, los dos objetivos de las señales transmitidas 6,7,8.
El aumento de la longitud axial que caracteriza a la mayoría de la miopía no puede considerarse benigno, con cambios fisiopatológicos que involucran retina, coroides y/o esclerótica que representan consecuencias inevitables y ahora bien reconocidas del alargamiento ocular excesivo 7,9. En este contexto, el EPR es quizás el más vulnerable, ya que, al ser un tejido no mitótico, solo puede acomodar la cámara vítrea en expansión mediante el estiramiento y adelgazamiento de células individuales. Si bien su papel en las patologías relacionadas con la miopía, como la degeneración macular miópica, aún no se comprende completamente, el EPR se ha implicado en la patogénesis de una serie de otras enfermedades de la retina, incluida la atrofia geográfica, una de las principales causas de ceguera, que se asocia con anomalías documentadas en la retina, el EPR y la coroides10,11, 12.
El aislamiento exitoso de las células del EPR, libres de contaminación de los tejidos oculares adyacentes, abre potencialmente muchas oportunidades de investigación para obtener nuevos conocimientos sobre los mecanismos subyacentes a una variedad de enfermedades oculares / retinianas. Sin embargo, el aislamiento del EPR ha demostrado ser un desafío, con muchos estudios publicados que utilizan muestras combinadas de retina/EPR o EPR/coroides por esta razón13,14,15. Los estudios que implican el aislamiento exitoso del EPR de una calidad adecuada para estudios de biología molecular se han limitado a ojos de pollo y ratón16,17. Por ejemplo, el método simultáneo de aislamiento de EPR y estabilización de ARN (SRIRS) descrito por Wang et al.18. Aislar las células del EPR en ratones no parece funcionar bien en los ojos de conejillo de indias. El protocolo descrito aquí representa un refinamiento de un enfoque que fue inicialmente prototipado con ojos de musaraña de árbol por uno de los autores (M.F.) y ha demostrado producir muestras de EPR de alta calidad, apropiadas para ARN y otros análisis de biología molecular, de los ojos de conejillos de indias pigmentados jóvenes19.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe with Slip Tip</td>
			<td>Bd Vacutainer Labware Medical</td>
			<td>22-253-260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>21985-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 Well Tissue Culture Plate with Lid, Flat Bottom, Sterile</td>
			<td>pectrum Chemical Mfg. Corp</td>
			<td>970-95008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 Well Tissue Culture Plate with Lid, Individual, Sterile</td>
			<td>Thomas Scientific LLC</td>
			<td>1198D72</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 2100 Bioanalyzer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>automated electrophoresis to check RNA quality</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balanced Salt Solutions</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Micro Forceps, Straight Smooth, 0.3 mm Tip, 7 cm</td>
			<td>Fine Science Tools, Inc.</td>
			<td>11083-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont forceps no. 5</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic disposable needles</td>
			<td>Exelint International, Co.</td>
			<td>26419</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic disposable needles</td>
			<td>Exelint International, Co.</td>
			<td>26437</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MiniSpin Microcentrifuges</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>540108</td>
			<td>Max. Speed: 8,000 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAlater Stabilization Solution</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM7020</td>
			<td>tissue storage reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy Mini kits</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td>RNA isolation kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools, Inc.</td>
			<td>91500-09</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of retinal pigment epithelial cells from guinea pig eyes

Este protocolo describe el aislamiento de células del epitelio pigmentario de la retina (EPR) de los ojos de conejillos de indias pigmentados jóvenes para su posible aplicación en estudios de biología molecular, incluidos los análisis de expresión génica. En el contexto de la regulación del crecimiento ocular y la miopía, el EPR probablemente desempeña un papel como un relé celular para las señales moduladoras del crecimiento, ya que se encuentra entre la retina y las dos paredes del ojo, como la coroides y la esclerótica. Si bien se han desarrollado protocolos para aislar el EPR tanto para polluelos como para ratones, estos protocolos han demostrado no ser directamente traducibles al conejillo de indias, que se ha convertido en un modelo de miopía de mamíferos importante y ampliamente utilizado. En este estudio, se utilizaron herramientas de biología molecular para examinar la expresión de genes específicos para confirmar que las muestras estaban libres de contaminación de los tejidos adyacentes. El valor de este protocolo ya se ha demostrado en un estudio RNA-Seq de EPR de conejillos de indias pigmentados jóvenes expuestos a un desenfoque óptico inductor de miopía. Más allá de la regulación del crecimiento ocular, este protocolo tiene otras aplicaciones potenciales en estudios de enfermedades de la retina, incluida la maculopatía miópica, una de las principales causas de ceguera en miopes, en la que se ha implicado el EPR. La principal ventaja de esta técnica es que es relativamente simple y una vez perfeccionada, produce muestras de EPR de alta calidad adecuadas para estudios de biología molecular, incluido el análisis de ARN.

El análisis de las muestras de EPR recogidas utilizando el protocolo anterior mostró ARN bien conservado (RIN >8,0, Figura 2B), con 240,2 ng ± 35,1 ng por ojo (n = 8, NanoDrop, Figura 2B). Para evaluar aún más la calidad de las muestras aisladas de EPR, particularmente la ausencia de contaminantes coroideos y esclerales, examinamos la expresión de genes representativos para cada uno de estos últimos tejidos en las muestras de EPR19...

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Isolation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Guinea Pig Eyes

Describimos un método simple y eficiente para aislar células del epitelio pigmentario de la retina (EPR) de los ojos de conejillos de indias pigmentados jóvenes. Este procedimiento permite realizar estudios de biología molecular de seguimiento en el EPR aislado, incluidos los análisis de expresión génica.

Aislamiento de células epiteliales pigmentarias de la retina de ojos de conejillo de indias

This protocol describes the isolation of cells of the retinal pigment epithelium (RPE) from the eyes of young pigmented guinea pigs for potential ...

El epitelio pigmentario de la retina o EPR es fundamental para la salud de la retina. Y estudiar el EPR aislado es crucial para la enfermedad de la retina. Este método de aislamiento del EPR del conejillo de indias, un modelo popular de miopía, ayuda a resolver el problema desafiante.La principal ventaja de esta técnica es que es relativamente simple y produce una muestra de EPR de alta calidad adecuada para los estudios moleculares biológicos, incluido el análisis de EPR. Al seguir perfectamente la técnica demostrada y observar cómo manipular las herramientas de disección, uno puede dominar este procedimiento rápidamente con algo de práctica. Después de sacrificar humanamente al conejillo de indias y enuclear los ojos del animal, lávelos inmediatamente transfiriéndolos a una placa de Petri de 10 centímetros que contenga solución salina tamponada con fosfato estéril o PBS.Después del lavado, transfiera los ojos a una solución fresca de PBS. Ahora trabajando bajo un microscopio de disección, use una aguja de calibre 18 para hacer una pequeña abertura inicial en la esclerótica de un ojo, aproximadamente un milímetro detrás del límite limbal entre la córnea y la esclerótica. Con unas tijeras, retire el segmento anterior, incluyendo la córnea, el iris, el cuerpo ciliar y el cristalino.Luego, trabajando con un segmento ocular posterior restante, use fórceps para agarrar y tirar suavemente de la zonula de Zinn, seguido de separar la retina del complejo RPE / coroides / esclerótica y pelar la retina sin fragmentación. Después de que la retina se haya extirpado por completo, sumerja la copa ocular posterior restante, que incluye el EPR, la coroides y la esclerótica en uno de los pocillos de una placa de 12 pocillos que contiene dos mililitros de reactivo de almacenamiento de tejido y manténgala sumergida durante cinco minutos. Para enjuagar el reactivo de almacenamiento, transfiera el ocular a otro pozo lleno de cuatro mililitros de PBS durante 10 segundos antes de moverlo a un tercer pozo lleno con dos mililitros de PBS.Antes de continuar con el paso final de aislamiento del EPR, prepare una jeringa de un mililitro llena de PBS y coloque una aguja de calibre 30. Empuje suavemente el émbolo de la jeringa para crear una corriente de chorro de PBS. Trabajando bajo un microscopio, primero, apunte esta corriente de PBS al RPE para hacer un pequeño desgarro o agujero en él.Luego dirija la corriente de PBS a la abertura creada para separar el RPE como una hoja de la coroides. Después de separar el EPR de la coroides, recoja las células del EPR en una jeringa sin aguja de un mililitro y transfiera la muestra recolectada a un tubo de 1,5 mililitros. Centrifugar el tubo con el RPE recogido a 8, 000 x g durante un minuto para obtener un pellet de RPE.Para las muestras que se utilizarán en análisis de ARN, deseche el sobrenadante, que es la solución de PBS, y reemplácelo con 350 mililitros de tampón de lisis como se incluye en los kits de aislamiento de ARN. Pipet el contenido hacia arriba y hacia abajo 20 veces para mezclar bien y preservar la calidad de la muestra. Para el almacenamiento y la conservación a largo plazo, transfiera las muestras a un congelador de menos 80 grados centígrados.Use un kit de aislamiento de ARN y siga las instrucciones del fabricante para aislar y recolectar el ARN de las muestras de EPR antes de evaluar la calidad de la muestra mediante electroforesis. En nuestro estudio, las muestras de EPR recogidas mostraron ARN bien conservado con un número de integridad de ARN o RIN superior a ocho. El recuento total de ARN de alrededor de 240 nanogramos por ojo.Se encontró que el nivel de expresión del gen específico del EPR, Rpe65, era significativamente mayor en las muestras de EPR que en la coroides y la esclerótica. En contraste, las muestras de EPR mostraron una expresión mínima del gen específico de la esclerótica coroidea seleccionado, colágeno tipo alfa-uno, lo que indica la ausencia de contaminantes coroideos y esclerales en las muestras aisladas de EPR. El paso más importante del procedimiento es la extracción suave de la retina sin dejar ningún fragmento de retina.Este procedimiento de aislamiento de EPR justifica una explicación en estudios de cultivo celular in vitro con algunas diferencias importantes, incluida la elección de medios para sumergir las células de EPR después del aislamiento.

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Aislamiento de células madre de la retina del ojo del ratón

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Investigación

Biología

MicroRNA Expression Profiles of Human iPS Cells, Retinal Pigment Epithelium Derived From iPS, and Fetal Retinal Pigment Epithelium

Perfiles de expresión de microARN de las células iPS humanas, de la retina del epitelio pigmentario Derivado de Ips y Fetal epitelio pigmentario de la retina

The objective of this report is to describe the protocols for comparing the microRNA (miRNA) profiles of human induced-pluripotent stem (iPS) cells, ...

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell Derived-retinal Pigment Epithelial Cells into a Large-eyed Model of Geographic Atrophy

Transplante subretinal de células epiteliales del pigmento retiniano derivado de células madre embrionarias humanas en un modelo de grandes ojos de atrofia geográfica

Geographic atrophy (GA), the late stage of dry age-related macular degeneration is characterized by loss of the retinal pigment epithelial (RPE) layer, ...

Primary Cell Cultures from the Mouse Retinal Pigment Epithelium

Cultivos celulares primarios de células del epitelio pigmentario de la retina del ratón

The retinal pigment epithelium (RPE) is a highly polarized multi-functional epithelium that is located between the neural retina and the choroid of the ...

Isolation, Culture, and Genetic Engineering of Mammalian Primary Pigment Epithelial Cells for Non-Viral Gene Therapy

Aislamiento, cultivo e ingeniería genética de células epiteliales de pigmento primario de mamíferos para terapia génica no viral

Age-related macular degeneration (AMD) is the most frequent cause of blindness in patients &#62;60 years, affecting ~30 million people worldwide. AMD is a ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

Disección eficiente y cultivo de células epiteliales de pigmento retiniano de ratón primario

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...

Isolation of Epithelial Cells from Human Dental Follicle

Aislamiento de células epiteliales del folículo dental humano

The dental follicle (DF) was harvested during the removal of an impacted third molar by an oral maxillofacial surgeon. Epithelial cell isolation was ...

Primary Culture of Porcine Retinal Pigment Epithelial Cells

Cultivo primario de células epiteliales pigmentarias de la retina porcina

The retinal pigment epithelium (RPE) is a monolayer of polarized pigmented epithelial cells, located between the choroid and neuroretina in the retina. ...

Efficient and Consistent Generation of Retinal Pigment Epithelium/Choroid Flatmounts from Human Eyes for Histological Analysis

Generación eficiente y consistente de epitelio pigmentario retiniano/cordoides de montaje plano a partir de ojos humanos para análisis histológico

The retinal pigment epithelium (RPE) and retina are functionally and structurally connected tissues that work together to regulate light perception and ...

Real-Time Analysis of Bioenergetics in Primary Human Retinal Pigment Epithelial Cells Using High-Resolution Respirometry

Análisis en tiempo real de la bioenergética en células epiteliales pigmentarias de la retina humana primaria mediante respirometría de alta resolución

Metabolic dysfunction of retinal pigment epithelial cells (RPE) is a key pathogenic driver of retinal diseases such as age-related macular degeneration ...