Name: induction of periodontitis via a combination of ligature and lipopolysaccharide injection in a rat model
Uploaded: 2023-02-17T14:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Periodontitis via a Combination of Ligature and Lipopolysaccharide Injection in a Rat Model at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי Fundació Universitat-Empresa de les Illes Balears (הוכחת היתכנות קריאה 2020), על ידי Instituto de Salud Carlos III, Ministerio de Economía y Competividad, במימון משותף של הקרן החברתית האירופית ESF והקרן האירופית לפיתוח אזורי ERDF (חוזה ל- M.M.B; FI18/00104) ועל ידי Direcció General d'Investigació, Conselleria d'Investigació, Govern Balear (חוזה עם M.M.F.C; פ/040/2020). המחברים מודים לד"ר אנה תומס ומריה טורטוסה על עזרתן בניתוח הניסויי ובפלטפורמה של IdISBa. לבסוף, תודה לבית הספר לרפואת שיניים ADEMA על הגישה לסורק CBCT.

הערה: פרוטוקול הניסוי של המחקר אושר על ידי הוועדה האתית לניסויים בבעלי חיים של מכון המחקר לבריאות האיים הבלאריים (CEEA-UIB; מספר סימוכין 163/03/21).
1. הרדמה של בעלי חיים והכנת הליכים
<ol><li>יש לעקר את כל כלי הניתוח (פערי פה מאלומיניום, סייר שיניים, לאנס יהלום, מספריים כירורגיי?...

<ol>
	<li>Carvalho, J. D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+citrus+flavonoid+supplementation+on+inflammation+in+lipopolysaccharide-induced+periodontal+disease+in+mice.">Impact of citrus flavonoid supplementation on inflammation in lipopolysaccharide-induced periodontal disease in mice.</a> Food and Function. 12 (11), 5007-5017 (2021).</li><li>Nazir, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+periodontal+disease,+its+association+with+systemic+diseases+and+prevention.">Prevalence of periodontal disease, its association with systemic diseases and prevention.</a> International Journal of Health Sciences. 1 (2), 72-80 (2017).</li><li>Dumitrescu, A. L., El-Aleem, S. A., Morales-Aza, B., Donaldson, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+periodontitis+in+the+rat:+Effect+of+lipopolysaccharide+on+bone+resorption,+osteoclast+activity,+and+local+peptidergic+innervation.">A model of periodontitis in the rat: Effect of lipopolysaccharide on bone resorption, osteoclast activity, and local peptidergic innervation.</a> Journal of Clinical Periodontology. 31 (8), 596-603 (2004).</li><li>Wang, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventive+effects+of+the+novel+antimicrobial+peptide+Nal-P-113+in+a+rat+Periodontitis+model+by+limiting+the+growth+of+Porphyromonas+gingivalis+and+modulating+IL-1&#946;+and+TNF-&#945;+production.">Preventive effects of the novel antimicrobial peptide Nal-P-113 in a rat Periodontitis model by limiting the growth of Porphyromonas gingivalis and modulating IL-1&#946; and TNF-&#945; production.</a> BMC Complementary and Alternative Medicine. 17 (1), 1-10 (2017).</li><li>Guan, J., Zhang, D., Wang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+periodontitis+risk+factors+through+a+retrospective+analysis+of+80+cases.">Identifying periodontitis risk factors through a retrospective analysis of 80 cases.</a> Pakistan Journal of Medical Sciences. 38 (1), 293-296 (2021).</li><li>Khajuria, D. K., Patil, O. N., Karasik, D., Razdan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+evaluation+of+novel+biodegradable+chitosan+based+metformin+intrapocket+dental+film+for+the+management+of+periodontitis+and+alveolar+bone+loss+in+a+rat+model.">Development and evaluation of novel biodegradable chitosan based metformin intrapocket dental film for the management of periodontitis and alveolar bone loss in a rat model.</a> Archives of Oral Biology. 85, 120-129 (2018).</li><li>Nishida, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+resorption+and+local+interleukin-1alpha+and+interleukin-1beta+synthesis+induced+by+Actinobacillus+actinomycetemcomitans+and+Porphyromonas+gingivalis+lipopolysaccharide.">Bone resorption and local interleukin-1alpha and interleukin-1beta synthesis induced by Actinobacillus actinomycetemcomitans and Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide.</a> Journal of Periodontal Research. 36 (1), 1-8 (2001).</li><li>Graves, D. T., Kang, J., Andriankaja, O., Wada, K., Rossa, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+to+study+host-bacteria+interactions+involved+in+periodontitis.">Animal models to study host-bacteria interactions involved in periodontitis.</a> Bone. 23 (1), 1-7 (2008).</li><li>Struillou, X., Boutigny, H., Soueidan, A., Layrolle, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+animal+models+in+periodontology:+a+review.">Experimental animal models in periodontology: a review.</a> The Open Dentistry Journal. 4 (1), 37-47 (2010).</li><li>Mustafa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+periodontal+disease+via+retentive+ligature,+lipopolysaccharide+injection,+and+their+combination+in+a+rat+model.">Induction of periodontal disease via retentive ligature, lipopolysaccharide injection, and their combination in a rat model.</a> Polish Journal of Veterinary Sciences. 24 (3), 365-373 (2021).</li><li>Chadwick, J. W., Glogauer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+ligature-induced+model+of+murine+periodontitis+for+the+evaluation+of+oral+neutrophils.">Robust ligature-induced model of murine periodontitis for the evaluation of oral neutrophils.</a> Journal of Visualized Experiments. 2020 (155), 6-13 (2019).</li><li>Cheng, R., Wu, Z., Li, M., Shao, M., Hu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-1&#946;+is+a+potential+therapeutic+target+for+periodontitis:+a+narrative+review.">Interleukin-1&#946; is a potential therapeutic target for periodontitis: a narrative review.</a> International Journal of Oral Science. 12 (1), 1-9 (2020).</li><li>Abe, T., Hajishengallis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+ligature-induced+periodontitis+model+in+mice.">Optimization of the ligature-induced periodontitis model in mice.</a> Journal of Immunological Methods. 394 (1-2), 49-54 (2013).</li><li>Jeong-Hyon, K., Bon-Hyuk, G., Sang-Soo, N., Yeon-Cheol, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+rat+models+of+periodontitis+treated+with+natural+extracts.">A review of rat models of periodontitis treated with natural extracts.</a> Journal of Traditional Chinese Medical Sciences. 7 (2), 95-103 (2020).</li><li>Marchesan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+murine+model+to+study+periodontitis.">An experimental murine model to study periodontitis.</a> Nature Protocols. 13 (10), 2247-2267 (2018).</li><li>Lin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+ligature-induced+periodontitis+in+mice+to+explore+the+molecular+mechanism+of+periodontal+disease.">Application of ligature-induced periodontitis in mice to explore the molecular mechanism of periodontal disease.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (16), 8900 (2021).</li><li>Irie, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+micro-computed+tomography+for+bone+evaluation+in+dentistry.">Use of micro-computed tomography for bone evaluation in dentistry.</a> Brazilian Dental Journal. 29 (3), 227-238 (2018).</li><li>Haas, L. F., Zimmermann, G. S., De Luca Canto, G., Flores-Mir, C., Corr&#234;a, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precision+of+cone+beam+CT+to+assess+periodontal+bone+defects:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Precision of cone beam CT to assess periodontal bone defects: a systematic review and meta-analysis.</a> Dentomaxillofacial Radiology. 47 (2), 20170084 (2018).</li><li>Kamburo&#287;lu, K., Ere&#351;, G., Akg&#252;n, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Qualitative+and+quantitative+assessment+of+alveolar+bone+destruction+in+adult+rats+using+CBCT.">Qualitative and quantitative assessment of alveolar bone destruction in adult rats using CBCT.</a> Journal of Veterinary Dentistry. 36 (4), 245-250 (2019).</li><li>Sousa Melo, S. L., Rovaris, K., Javaheri, A. M., de Rezen de Barbosa, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cone-beam+computed+tomography+(CBCT)+imaging+for+the+assessment+of+periodontal+disease.">Cone-beam computed tomography (CBCT) imaging for the assessment of periodontal disease.</a> Current Oral Health Reports. 7 (4), 376-380 (2020).</li></ol>

שיטה זו מתארת השראת פרקינסון בחולדות בעקבות טכניקה משולבת של זריקות Pg-LPS ומיקום רצועות סביב M1, וחושפת כי ניתן לגרום לשינויים משמעותיים ברקמות החניכיים ובעצם הנאדית תוך 14 יום לאחר שיטה זו.
במהלך הליך זה, יש לתת תשומת לב לשלבים קריטיים שונים. במהלך הרדמת בעלי חיים והכנת פר...

דלקת חניכיים (PD) היא מחלת בריאות הציבור השישית בשכיחותה בעולם, המשפיעה על כ-11% מכלל האוכלוסייה, בהיותה צורה מתקדמת, בלתי הפיכה והרסנית של מחלת חניכיים 1,2. PD הוא תהליך דלקתי המשפיע על רקמות החניכיים והחניכיים, הגורם לנסיגת חניכיים, נדידה אפיקלית של אפיתל צומת עם התפתחות כיס, ואובדן עצם מכתשית3. יתר על כן, מחלת פרקינסון קשורה למספר מחלות מערכתיות, כולל מחלות לב וכלי דם, השמנת יתר, סוכרת ודלקת מפרקים שגרונית, שעבורן גורמים סביבתיים וספציפיים למארח ממלאים תפקיד משמעותי 4,5.
לפיכך, פרקינסון היא מחלה רב-גורמית הנגרמת בעיקר על ידי הצטברות של פלאק מיקרוביאלי - הנובע מדיסביוזה של קהילות מיקרוביאליות - ועל ידי תגובה חיסונית מוגזמת של המאכסן לפתוגנים חניכיים, מה שמוביל לפירוק רקמת חניכיים 4,6. מבין מספר חיידקי חניכיים, החיידק האנאירובי הגראם-שלילי Porphyromonas gingivalis הוא אחד הפתוגנים המרכזיים במחלת פרקינסון4. P. gingivalis מכיל ליפופוליסכריד מורכב (LPS) בדפנותיו, מולקולה הידועה כגורמת להסננת לויקוציטים פולימורפו-גרעיניים ולהרחבת כלי הדם ברקמות חניכיים דלקתיות7. התוצאה היא ייצור של מתווכי דלקת, כגון אינטרלוקין 1 (IL-1), IL-6 ו- IL-8, גורם נמק גידולי (TNF), או פרוסטגלנדינים, עם הפעלת אוסטאוקלסטים וספיגת עצם לאחר מכן, מה שמוביל להרס רקמות ולאובדן שיניים סופי3.
בין היתרונות השונים של מודלים בבעלי חיים ניתן למנות את היכולת לחקות מורכבויות תאיות כמו בבני אדם, או להיות מדויקים יותר מאשר מחקרי מבחנה , המתבצעים על משטחי פלסטיק עם סוגי תאים מוגבלים8. לצורך מידול ניסויי של PD in vivo, נעשה שימוש במינים שונים של בעלי חיים, כמו פרימטים לא אנושיים, כלבים, חזירים, חמוסים, ארנבות, עכברים וחולדות9. עם זאת, חולדות הן המודל הנחקר ביותר בבעלי חיים עבור הפתוגנזה של פרקינסון מכיוון שהן זולות וקלות לטיפול10. לרקמת החניכיים הדנטלית שלהם יש תכונות מבניות דומות לרקמת חניכיים אנושית, עם חריץ חניכיים רדוד ואפיתל צומת המחוברים לפני השטח של השן. יתר על כן, כמו בבני אדם, אפיתל צומת מאפשר מעבר של חיידקים זרים, ומפריש מתאים דלקתיים 9.
אחד המודלים הניסיוניים המדווחים ביותר של השראת פרקינסון בחולדות הוא מיקום הליגטורות סביב השיניים, שהוא מאתגר מבחינה טכנית אך אמין10. מיקום הליגטורה מאפשר הצטברות רובד שיניים וחיידקים, ויוצר דיסביוזיס בסולצ'י החניכיים, הגורם לדלקת והרס רקמת חניכיים11. אובדן התקשרות חניכיים וספיגה מחדש של עצם מכתשית יכול להתרחש תוך 7 ימים במודל חולדהזה 8.
מודל נוסף של בעלי חיים לפרקינסון מורכב מהזרקת LPS לרקמת החניכיים. כתוצאה מכך, osteoclastogenesis ואובדן עצם מגורים. המאפיינים ההיסטופתולוגיים של מודל זה דומים לפרקינסון שהוקם על ידי בני אדם, ומאופיין ברמות גבוהות יותר של ציטוקינים מעודדי דלקת, פירוק קולגן וספיגת עצם מכתשית 6,8.
לפיכך, מטרת מחקר זה הייתה לתאר מודל פשוט של חולדה של PD ניסיוני המבוסס על טכניקות של זריקות P. gingivalis-LPS (Pg-LPS), בשילוב עם מיקום רצועות סביב הטוחנות המקסילריות הראשונות (M1). זהו מודל בעל מאפיינים דומים לאלה שנצפו במחלת פרקינסון בבני אדם, אשר יכול לשמש לחקר מנגנוני התקדמות המחלה וטיפולים אפשריים עתידיים.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adsorbent paper point n&#186;30&#160;</td>
			<td>Proclinc</td>
			<td>8187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aprotinin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A1153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezole</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>573751.5</td>
			<td>Revanzol 5 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braided silk ligature (5/0)&#160;</td>
			<td>Laboratorio Arago Sl</td>
			<td>613112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine&#160;</td>
			<td>Richter pharma</td>
			<td>578816.6</td>
			<td>Bupaq 0.3 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cone-beam computed tomography (CBCT) Scanner&#160;</td>
			<td>MyRay</td>
			<td>hyperion X9</td>
			<td>Model Hyperion X9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CTAn software</td>
			<td>SkyScan</td>
			<td></td>
			<td>Version 1.13.4.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental explorer&#160;</td>
			<td>Proclinc</td>
			<td>99743</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diamond lance-shaped bur&#160;</td>
			<td>Dentaltix</td>
			<td>IT21517</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Food maintenance diet</td>
			<td>Sodispain research</td>
			<td>ROD14&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heated surgical platform</td>
			<td>PetSavers</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hollenback carver</td>
			<td>Hu-FRIEDY&#160;</td>
			<td>HF45234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic needle&#160;&#160;</td>
			<td>BD&#160;</td>
			<td>300600</td>
			<td>25G X 5/8&#8221; - 0,5 X 16 MM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane&#160;</td>
			<td>Karizoo</td>
			<td></td>
			<td>Isoflutek 1000mg/g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine&#160;&#160;</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>581140.6</td>
			<td>Anesketin 100 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipopolysaccharide&#160; derived from P.Gingivalis&#160;</td>
			<td>InvivoGen</td>
			<td>TLRL-PGLPS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M/4000/PB08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro needle holter</td>
			<td>Fehling Surgical Instruments</td>
			<td>KOT-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical pliers</td>
			<td>KLS Martin</td>
			<td>12-384-06-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microsurgical scissors&#160;</td>
			<td>S&#38;T microsurgical instruments</td>
			<td>SDC-15 RV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monitor iMEC 8 Vet</td>
			<td>Mindray&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiplex bead immunoassay</td>
			<td>Procartaplex, Thermo fisher Scientific</td>
			<td>PPX-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>8187151000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Periosteal microsurgical elevator&#160;</td>
			<td>Dentaltix</td>
			<td>CU19112468</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylmethylsulfonylfluoride (PMSF)&#160;</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10837091001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffer Solution (PBS)</td>
			<td>Capricorn Scientific</td>
			<td>PBS-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PhosSTOP&#160;</td>
			<td>Roche</td>
			<td>4906845001</td>
			<td>Commercial phosphatase inhibitor tablet&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic vial</td>
			<td>SPL Lifesciencies</td>
			<td>60015</td>
			<td>1.5mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Cinfa</td>
			<td>204024.3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Microscope&#160;</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Model SteREO Discovery.V12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical loupes led light</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors&#160;</td>
			<td>Zepf Surgical</td>
			<td>08-1701-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe&#160;</td>
			<td>BD plastipak</td>
			<td>303172</td>
			<td>1mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary dental micromotor</td>
			<td>Eickemeyer</td>
			<td>174028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Calier</td>
			<td>20102-003</td>
			<td>Xilagesic 20 mg/mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of periodontitis via a combination of ligature and lipopolysaccharide injection in a rat model

פריודונטיטיס (PD) היא מחלה דלקתית-חיסונית כרונית שכיחה ביותר של החניכיים, הגורמת לאובדן רקמת חניכיים רכה, רצועה פריודונטלית, צמנטום ועצם מכתשית. במחקר זה מתוארת שיטה פשוטה של השראת פרקינסון בחולדות. אנו מספקים הוראות מפורטות למיקום מודל הליגטורה סביב הטוחנות המקסילריות הראשונות (M1) ושילוב של זריקות ליפופוליסכריד (LPS), הנגזר מחניכיים מסוג Porphyromonas בצד המזיו-פלטלי של M1. השראת דלקת חניכיים נשמרה במשך 14 יום, קידום הצטברות של חיידקים, ביופילם ודלקת. כדי לאמת את המודל של בעלי החיים, IL-1β, מתווך דלקתי מרכזי, נקבע על ידי בדיקה חיסונית בנוזל החניכיים (GCF), ואובדן עצם מכתשית חושב באמצעות טומוגרפיה ממוחשבת של קרן חרוט (CBCT). טכניקה זו הייתה יעילה בקידום נסיגת חניכיים, אובדן עצם מכתשית ועלייה ברמות IL-1β ב- GCF בסוף הליך הניסוי לאחר 14 יום. שיטה זו הייתה יעילה בגרימת מחלת פרקינסון, ובכך ניתן היה להשתמש בה במחקרים על מנגנוני התקדמות המחלה וטיפולים אפשריים בעתיד.

ציר זמן של שלבי הניסוי מוצג באיור 1. איור 2A מראה תמונה של המנדיבולה לאחר התערבות כירורגית, עם מיקום רצועות סביב החריץ של M1 בזמן 0 של הניסוי. איור 2B מראה כיצד, לאחר 14 יום של ההליך, הרצועה סביב M1 נכנסת לחריץ החניכיים, מה שגורם לדלקת בחניכיים ולהצט?...

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Periodontitis via a Combination of Ligature and Lipopolysaccharide Injection in a Rat Model at JoVE.com

Induction of Periodontitis via a Combination of Ligature and Lipopolysaccharide Injection in a Rat Model

במחקר זה, מודל חולדה של השראת דלקת חניכיים מוצג באמצעות שילוב של ליגטורה חוזרת וזריקות חוזרות ונשנות של ליפופוליסכריד שמקורו בפורפירומונס חניכיים, במשך 14 יום סביב הטוחנות המקסילריות הראשונות. טכניקות הקשירה וההזרקה LPS היו יעילות בגרימת דלקת פרידונטיקה, וכתוצאה מכך אובדן עצם מכתשית ודלקת.

השראת דלקת חניכיים באמצעות שילוב של ליגטורה והזרקת ליפופוליסכריד במודל חולדה

Periodontitis (PD) is a highly prevalent, chronic immune-inflammatory disease of the periodontium, that results in a loss of gingival soft tissue, ...

זהו מודל חולדה של דלקת חניכיים ניסיונית, המבוסס על טכניקות של זריקות ליפופוליסכריד בשילוב עם מיקום רצועות, ומציע שיטה יעילה לחקר התקדמות המחלה ולהערכת טיפולים לדלקת חניכיים. שילוב שתי הטכניקות עם שיטות בודדות מגיע לשיאו בהשראת מחלה מהירה, הגברת התגובה הדלקתית ההרסנית והגדלת אובדן רקמת החיבור וספיגת עצם הנאדית. שיטה זו מספקת הזדמנות חשובה להעריך את ההשפעה של טיפולי פריודונטיטיס.הדגמת ההליך תהיה ד"ר אוסקר וילה, PhD. התחל על ידי עיקור כל כלי הניתוח לפני הניתוח. הכינו תערובת של קטמין וקסילזין על ידי ערבוב של 1.6 מיליליטר קטמין עם מיליליטר אחד של קסילזין, מדולל ב-PBS או מלוחים, ואחסנו את המלאי בארבע מעלות צלזיוס.לדלל atipamezole לריכוז סופי של 0.25 מיליגרם למיליליטר ו buprenorphine לריכוז סופי של 0.03 מיליגרם למיליליטר PBS או מלוחים, ולאחסן את המלאי בארבע מעלות צלזיוס. הכינו מיליליטר אחד של PG-LPS במי מלח סטריליים ואחסנו את המלאי בטמפרטורה של מינוס 20 מעלות צלזיוס. השתמשו בחולדות וויסטאר נקבות וזכרים לצורך הניסוי.שמרו על בעלי החיים בקבוצות תחת הסביבה המתאימה, עם מזון ומים סטנדרטיים המוצעים אד ליביטום. לאחר שהחולדה מורדמת, הניחו את החיה על גבה על משטח כירורגי מחומם. לכסות את הגוף של החיה במהלך ההליך כדי למנוע אובדן חום.מתן 100% חמצן באמצעות חרוט אף קטן, ולפקח על קצב הדופק וריווי החמצן על ידי אוקסימטריה הדופק. כעת, פתחו את פי החולדה באמצעות פה אלומיניום סביב החותכות. משכו את הלשון באמצעותה וייצבו את המקסילה והלסת התחתונה בתנוחת עבודה פתוחה ונוחה, המאפשרת גישה לטוחנות מנדיבולאריות.יש לאסוף GCF באמצעות ארבע נקודות נייר סופגות מספר 30, על ידי הכנסתו לנקיק החניכיים סביב המזיופלטל של M1 עד להתנגדות קלה. שמור את נקודת הנייר באותו מיקום למשך 30 שניות לפני ההסרה המיידית. לאחר האיסוף, מעבירים את נקודת הנייר מיד לבקבוקון פלסטיק ומאחסנים בטמפרטורה של מינוס 80 מעלות צלזיוס עד לביצועי הבדיקה.מקמו את הזנב הדיסטלי של התפר בצד החיך של השיניים והכניסו את המקטע הפרוקסימלי בין המגע של M1 לטוחנות מקסילריות שניות. השתמש במעלית המיקרוכירורגית הפריאוסטאלית כדי להחדיר את התפר בתוך החריץ. לעטוף את הרצועה סביב פני השטח buccal של M1 בזהירות רבה, כמו הרקמות ברמה זו להציג אזור צר של חניכיים מחובר.ודא שהתפר מהודק בשני הקצוות כדי להידחף לתוך חריץ החניכיים. לאחר מכן, קשרו את קצות התפר בקשר מנתח וקצצו את הזנבות קצרים ככל האפשר. הכנס את הקשר לחריץ.לאחר מיקום הליגטורה, יש להזריק 40 מיקרוליטר של PG-LPS במי מלח סטריליים לרקמה התת-חניכית בצד המזיופלטלי של ה-M1 באופן דו-צדדי. כדי לבחון ולהתאים את הליגטורה, הניחו את בעל החיים המרדים על גבו והשתמשו במהלך ההליך בחרוט אף קטן עם 1% איזופלורן ו-100% חמצן לתחזוקת ההרדמה של בעל החיים. יש לפתוח את הפה העוטף באמצעות פה אלומיניום סביב החותכות, למשוך את הלשון באמצעותו ולייצב את המקסילה והלסת התחתונה בתנוחת עבודה פתוחה ונוחה, המאפשרת גישה לליגטורות.הדקו את הרצועות כנגד החניכיים בעזרת מעלית מיקרוכירורגית פריאוסטאלית וודאו שתפר הליגטורות מוכנס, מה שיוצר דלקת סביב החניכיים. לאחר התאמת הליגטורה, הזריקו באופן דו-צדדי 40 מיקרוליטר של PG-LPS לרקמה התת-חניכית בצד המזיופלטלי של ה-M1, כפי שהודגם קודם לכן. לאחר הקרבת החיה ביום ה -14, לאסוף GCF כפי שמוצג קודם לכן.מעבירים את נקודת הנייר מיד לבקבוקון פלסטיק ומאחסנים בטמפרטורה של מינוס 80 מעלות צלזיוס עד לביצועי הבדיקה. התמונות הדו-ממדיות של עצם הנאדית של הטוחנות המקסילריות מראות נפח עצם גדול יותר בבקרה הבסיסית ואובדן עצם מכתשית גבוה יותר לאחר הקמת דלקת חניכיים. ניתוח של תמונות sagittal מדגיש אובדן עצם alveolar משמעותי יותר באזור העצם interradicular של M1 ו M2 לאחר הקמת periodontitis, בהשוואה לקבוצת הביקורת הבסיסית.לאחר הקרבה, החיך הציג הבדלים בנסיגת חניכיים ב-M1 בין קבוצות שונות. קבוצת פריודונטיטיס מראה נדידת חניכיים אפיקלית מרשימה יותר ודלקת של החניכיים סביב הטוחנות המקסילריות בהשוואה לקבוצת הביקורת הבסיסית. כמו כן, קבוצת דלקת חניכיים הראתה שחרור גבוה משמעותית של ציטוקין 1L-1 בטא מעודד דלקת מ-GCF בהשוואה לקבוצת הביקורת.שלבים מכריעים בהליך הם מיקום נכון של התפר והקשר בחריץ, התאמה נכונה של הליגטורה, והזרקת ליפופוליסכריד מדויקת במהלך פרוטוקול 14 יום.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Induction of Periodontitis via a Combination of Ligature and Lipopolysaccharide Injection in a Rat Model

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

הכנת Immunogen עכבר יותרת המוח עבור אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימונית ניסויית

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימוניות הניסויי עכברים SJL

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

אינדוקציה של מחלת שתל נגד מארח ו<em&gt; In Vivo</em&gt; ניטור תא T תוך שימוש במודל Murine MHC התאמה

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Chemoselective Modification of Viral Surfaces via Bioorthogonal Click Chemistry

שינוי Chemoselective של משטחים ויראלי באמצעות כימיה לחץ Bioorthogonal

The modification of virus particles has received a significant amount of attention for its tremendous potential for impacting gene therapy, oncolytic ...

A Method for Generating Pulmonary Neutrophilia Using Aerosolized Lipopolysaccharide

שיטה ליצירת ריאות neutrophilia שימוש התרסיס lipopolysaccharide

Acute lung injury (ALI) is a severe disease characterized by alveolar neutrophilia, with limited treatment options and high mortality. Experimental models ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

דגם לא פולשנית של Neuropathogenic<em&gt; Coli Escherichia</em&gt; זיהום בעכברוש הילודים

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

אינדוקציה של שיתוק ופציעה מערכת הראייה אצל עכברים מאת T תאים ספציפיים עבור אופטיקה Neuromyelitis Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Two-photon Intravital Imaging of Leukocytes During the Immune Response in Lipopolysaccharide-treated Mouse Liver

שני הפוטונים הדמיה Intravital של לויקוציטים במהלך התגובה החיסונית בכבד עכבר שטופלו ליפופוליסכריד

Sepsis is a type of severe infection that can cause organ failure and tissue damage. Although the mortality and morbidity rates associated with sepsis are ...

Induction of Mouse Lung Injury by Endotracheal Injection of Bleomycin

אינדוקציה של פגיעה בריאות העכבר על ידי הזרקת אנדוקנה של ליאומיצין

Pulmonary fibrosis is a hallmark of several human lung diseases with a different etiology. Since current therapies are rather limited, mouse models ...

Induction and Scoring of Graft-Versus-Host Disease in a Xenogeneic Murine Model and Quantification of Human T Cells in Mouse Tissues using Digital PCR

אינדוקציה והבקיע של מחלת השתל מול מארחים ב מודל Murine מורה Xenoic ו כימות האדם תאים T ברקמות העכבר באמצעות PCR דיגיטלי

Acute graft-versus-host disease (GVHD) is a significant limitation for patients receiving hematopoietic stem cell transplant as therapy for hematological ...