Name: the establishment of a murine mandibular molar extraction socket healing model
Uploaded: 2023-01-13T13:40:00
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Ce travail est soutenu par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine 81825005 (L.Y.), 82201045 (F.Y.) et 82100982 (F.L.), et par le Programme scientifique et technologique de la province du Sichuan 2021JDRC0144 (F.L.), 2022JDRC0130 (F.Y.).

Toutes les procédures animales de cette étude ont été examinées et approuvées par le comité d’éthique de l’École de stomatologie de Chine occidentale de l’Université du Sichuan (WCHSIRB-D-2017-041). Des souris adultes C57BL/6, obtenues d’une source commerciale (voir le tableau des matériaux), ont été utilisées pour la présente étude.
1. Préparation préchirurgicale
<ol><li>Préparation des instruments<ol><li>Préparer diverses aiguil...

<ol>
	<li>Mamoun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dry+socket+etiology,+diagnosis,+and+clinical+treatment+techniques.">Dry socket etiology, diagnosis, and clinical treatment techniques.</a> Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons. 44 (2), 52-58 (2018).</li><li>Laraki, M., Chbicheb, S., El Wady, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolitis:+review+of+the+literature.">Alveolitis: review of the literature.</a> Odonto-Stomatologie Tropicale = Tropical Dental Journal. 35 (139), 19-25 (2012).</li><li>Soundia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteonecrosis+of+the+jaws+(ONJ)+in+mice+after+extraction+of+teeth+with+periradicular+disease.">Osteonecrosis of the jaws (ONJ) in mice after extraction of teeth with periradicular disease.</a> Bone. 90, 133-141 (2016).</li><li>Ara&#250;jo, M. G., Silva, C. O., Misawa, M., Sukekava, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+socket+healing:+what+can+we+learn.">Alveolar socket healing: what can we learn.</a> Periodontology 2000. 68 (1), 122-134 (2015).</li><li>Hojo, H., Ohba, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sp7+Action+in+the+skeleton:+its+mode+of+action,+functions,+and+relevance+to+skeletal+diseases.">Sp7 Action in the skeleton: its mode of action, functions, and relevance to skeletal diseases.</a> International Journal of Molecular Sciences. 23 (10), 5647 (2022).</li><li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+functions+of+Osterix+are+required+for+bone+growth+and+homeostasis+in+postnatal+mice.">Multiple functions of Osterix are required for bone growth and homeostasis in postnatal mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (29), 12919-12924 (2010).</li><li>Ito, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathological+differences+in+the+bone+healing+processes+between+tooth+extraction+socket+and+femoral+fracture.">Pathological differences in the bone healing processes between tooth extraction socket and femoral fracture.</a> Bone Reports. 16, 101522 (2022).</li><li>Vasak, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+bone+apposition+to+hydrophilic+and+hydrophobic+titanium+implant+surfaces:+a+histologic+and+histomorphometric+study+in+minipigs.">Early bone apposition to hydrophilic and hydrophobic titanium implant surfaces: a histologic and histomorphometric study in minipigs.</a> Clinical Oral Implants Research. 25 (12), 1378-1385 (2014).</li><li>Ara&#250;jo, M. G., Lindhe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dimensional+ridge+alterations+following+tooth+extraction.+An+experimental+study+in+the+dog.">Dimensional ridge alterations following tooth extraction. An experimental study in the dog.</a> Journal of Clinical Periodontology. 32 (2), 212-218 (2005).</li><li>Kim, I. -. S., Ki, H. -. C., Lee, W., Kim, H., Park, J. -. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+systemically+administered+bisphosphonates+on+bony+healing+after+tooth+extraction+and+osseointegration+of+dental+implants+in+the+rabbit+maxilla.">The effect of systemically administered bisphosphonates on bony healing after tooth extraction and osseointegration of dental implants in the rabbit maxilla.</a> The International Journal of Oral &amp; Maxillofacial Implants. 28 (5), 1194-1200 (2013).</li><li>Kanyama, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Connective+tissue+growth+factor+expressed+in+rat+alveolar+bone+regeneration+sites+after+tooth+extraction.">Connective tissue growth factor expressed in rat alveolar bone regeneration sites after tooth extraction.</a> Archives of Oral Biology. 48 (10), 723-730 (2003).</li><li>Zhou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+IFT140+in+early+bone+healing+of+tooth+extraction+sockets.">The role of IFT140 in early bone healing of tooth extraction sockets.</a> Oral Diseases. 28 (4), 1188-1197 (2022).</li><li>Apaza Alccayhuaman, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FasL+is+required+for+osseous+healing+in+extraction+sockets+in+mice.">FasL is required for osseous healing in extraction sockets in mice.</a> Frontiers in Immunology. 12, 678873 (2021).</li><li>Avivi-Arber, L., Avivi, D., Perez, M., Arber, N., Shapira, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+bone+healing+at+tooth+extraction+sites+in+CD24-deficient+mice:+A+pilot+study.">Impaired bone healing at tooth extraction sites in CD24-deficient mice: A pilot study.</a> PLoS One. 13 (2), 0191665 (2018).</li><li>Vieira, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intramembranous+bone+healing+process+subsequent+to+tooth+extraction+in+mice:+micro-computed+tomography,+histomorphometric+and+molecular+characterization.">Intramembranous bone healing process subsequent to tooth extraction in mice: micro-computed tomography, histomorphometric and molecular characterization.</a> PLoS One. 10 (5), 0128021 (2015).</li><li>Min, K. -. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+resveratrol+on+bone-healing+capacity+in+the+mouse+tooth+extraction+socket.">Effects of resveratrol on bone-healing capacity in the mouse tooth extraction socket.</a> Journal of Periodontal Research. 55 (2), 247-257 (2020).</li><li>Yu, F., Li, F., Zheng, L., Ye, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+controls+of+Sonic+hedgehog+guarantee+fidelity+of+epithelial+adult+stem+cells+trajectory+in+regeneration.">Epigenetic controls of Sonic hedgehog guarantee fidelity of epithelial adult stem cells trajectory in regeneration.</a> Science Advances. 8 (29), (2022).</li><li>Kuroshima, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+noncultured+stromal+vascular+fraction+cells+of+adipose+tissue+ameliorates+osteonecrosis+of+the+jaw-like+lesions+in+mice.">Transplantation of noncultured stromal vascular fraction cells of adipose tissue ameliorates osteonecrosis of the jaw-like lesions in mice.</a> Journal of bone and Mineral Research. 33 (1), 154-166 (2018).</li><li>Ahel, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forces+that+fracture+teeth+during+extraction+with+mandibular+premolar+and+maxillary+incisor+forceps.">Forces that fracture teeth during extraction with mandibular premolar and maxillary incisor forceps.</a> The British Journal of Oral &amp; Maxillofacial Surgery. 53 (10), 982-987 (2015).</li></ol>

Le modèle de guérison de l’alvéole murine est une méthode importante pour démêler les mécanismes sous-jacents de la guérison et de la régénération osseuses, résolvant finalement les défis cliniques. Les études existantes ont démontré la possibilité du modèle d’extraction incisive et du modèle d’extraction molaire maxillaire, alors que les études n’ont pas utilisé le modèle de première molaire mandibulaire13,17,18<sup clas...

La cicatrisation des alvéoles après extraction dentaire est un scénario clinique courant, qui peut entraîner des complications inconvenantes telles qu’une hémorragie des alvéoles, une cavité sèche ou même une ostéomyélite de la mâchoire sous cicatrisation indésirable 1,2,3. Ces comorbidités peuvent nuire à la qualité de vie des patients et, pire encore, remettre en question de manière vitale la rééducation prothétique en raison d’une perte osseuse massive4. Bien que les étapes de cicatrisation des alvéoles aient été élucidées, elles sont insuffisantes pour diriger les soins cliniques après la chirurgie d’extraction dentaire lorsqu’ils rencontrent divers défis de pronostic4.
De multiples études basées sur des modèles animaux ont été menées pour mieux comprendre les mécanismes sous-jacents du processus de guérison des alvéoles et éviter les situations ci-dessus. Sp7 est un régulateur principal dans la différenciation des ostéoblastes, jouant un rôle essentiel dans le développement du squelette, l’hémostase osseuse et la régénération osseuse 5,6. Les modèles rationnels de guérison des alvéoles pourraient afficher la redondance de Sp7 post-traumatique dans la régénération osseuse. De plus, distinct de la cicatrisation des fractures osseuses longues, un seul processus ostéogénique, l’ossification intramembraneuse, implique le processus de cicatrisation de la cavitéd’extraction 7. Cela rend le modèle d’extraction dentaire animale optimal pour étudier les thérapies implantaires, car l’ostéointégration implantaire obéit à la même règle ostéogénique8.
Pendant des décennies, le modèle d’extraction dentaire a été pratiqué chez les rats, les lapins etles chiens, car ces espèces ont de grandes dents qui sont pratiques à opérer sur 9,10,11. Cependant, compte tenu de la demande florissante de modification génétique et en tant que contexte génétique plus adaptatif aux humains, les souris sont de plus en plus utilisées pour établir un modèle d’extraction dentaire. Dès lors, les chercheurs pourraient démêler le rôle d’une population cellulaire spécifique dans le processus de guérison de l’alvéole en utilisant des souris modifiées par le génome au lieu d’observer les phénotypes seulement12. Parmi les modèles d’alvéoles d’extraction dentaire murine, les études précédentes ont démontré l’établissement et le processus de guérison des douilles d’extraction des dents maxillaires murines et des incisives13,14,15,16. Cependant, le schéma de guérison du pronostic et les points temporels détectives et observatifs peuvent différer d’un protocole à l’autre. Cela fait appel à un critère universel pour les chercheurs d’établir un modèle de guérison de l’alvéole murine.
Cette étude visait à constituer un modèle pratique de guérison des alvéoles murines pour les problèmes ci-dessus. Les molaires de la mandibule chez la souris ont des traits morphologiques distinctifs par rapport aux molaires maxillaires et aux incisives, apportant des avantages et des inconvénients uniques. Comme les modèles axés sur la mandibule murine sont actuellement basés sur le vide, ce protocole a tenté de fournir une méthode accomplie pour extraire la première molaire mandibulaire chez la souris. Nous espérons que ce protocole éclairera les chercheurs fondamentaux avec de nouvelles idées pour découvrir les mécanismes sous-jacents de la guérison des alvéoles et indiquer les soins cliniques.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>23/25/26 G needle</td>
			<td>Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus &#38; Instruments Co. LTD.</td>
			<td>SB1-074(IV)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57/B6J&#160;</td>
			<td>Gempharmatech Experimental Animals Company, Chengdu, China</td>
			<td>C57/B6J</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Staining Solution&#160;</td>
			<td>Beyotime&#160;</td>
			<td>Cat#C1005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding Cassettes</td>
			<td>CITOTEST Scientific</td>
			<td>80106-1100-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Stain Kit</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BL700B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science Co.,Ltd</td>
			<td>R510-22-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson&#8217;s Trichrome Stain Kit</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>RM2235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital Sodium</td>
			<td>Huaxia Chemical Reagent Co., Ltd</td>
			<td>2018042001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit polyclonal&#160;</td>
			<td>anti-Sp7&#160;</td>
			<td>Abcam Cat# ab22552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td>Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus &#38; Instruments Co. LTD.</td>
			<td>SB2-115</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the establishment of a murine mandibular molar extraction socket healing model

Cette étude introduit le développement d’un modèle d’extraction molaire dans la mandibule murine afin de fournir un modèle pratique pour étudier la régénération osseuse alvéolaire et l’ossification intramembraneuse. Des souris C57/J6 ont été utilisées pour extraire la première molaire mandibulaire afin d’établir ce modèle. Ils ont été euthanasiés et les mandibules bilatérales récoltées, respectivement 1 semaine et 4 semaines après la chirurgie. Une récolte stéréoscopique en série, une évaluation histologique et une coloration par immunofluorescence ultérieures ont été effectuées pour démontrer la réussite de la chirurgie. Immédiatement après la chirurgie, les images stéréoscopiques affichaient une douille d’extraction vide. L’hématoxyline et l’éosine (H & E) à 1 semaine et la coloration de Masson à 4 semaines après la chirurgie ont montré que la zone de la racine d’origine était partiellement et entièrement remplie de trabécules osseuses, respectivement. La coloration par immunofluorescence a montré que, par rapport à l’homéostasie, l’expression de Sp7 augmentait 1 semaine après la chirurgie, suggérant une ostéogenèse vigoureuse de la fosse alvéolaire. Tous ces résultats ont démontré un modèle pratique de guérison par extraction dentaire murale. Des études à venir révélant les mécanismes de cicatrisation des défauts de la mâchoire ou de la cicatrisation des alvéoles pourraient adopter cette méthode.

Pour élucider l’utilisation pratique de cette méthode, la première molaire mandibulaire droite de deux souris C57BL/6 saines (âgées de 3 mois, toutes deux femelles) a été extraite et suivie pendant 1 semaine et 4 semaines, respectivement. Les mandibules gauches intactes ont été utilisées comme témoins sains. La figure 1A montre les caractéristiques spécifiques de l’appareil chirurgical, y compris des aiguilles de 26-23 G et une pince à épiler ophtalmique dentée. L’aigui...

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The Establishment of a Murine Mandibular Molar Extraction Socket Healing Model

Ce protocole montre étape par étape les détails de la façon d’extraire la première molaire mandibulaire chez la souris. Il fournit une méthode alternative pour les chercheurs qui se concentrent sur la guérison et la régénération des os de la mâchoire.

L’établissement d’un modèle de guérison par voie d’extraction molaire mandibulaire murine

This study introduces the development of a molar extraction model in the murine mandible to provide a practicable model for studying alveolar bone ...

Ce protocole fournit un modèle d’extraction molaire mandibulaire murine qui est rarement introduit dans les études de régénération osseuse disponibles. L’élaboration d’un modèle d’extraction molaire mandibulaire murine est nécessaire en tant que mandibule plus comparable et cohérente entre les différents groupes d’intervention. Les implications de cette technique ne s’étendent pas vers le traitement d’une maladie.Cependant, il peut aider à la guérison clinique et à la régénération osseuse de la mâchoire à long terme en aidant à examiner les mécanismes sous-jacents à ce processus. Cette technique a été développée pour aider les études, révélant les mécanismes de guérison et de régénération disponibles. Malheureusement, cette méthode ne peut pas être appliquée à d’autres systèmes.Commencez à éliminer la résistance distale de la souris anesthésiée en tenant la molaire avec une pince à épiler médialement. Ensuite, forcez une aiguille de calibre 23 dans l’os alvéolaire buccal de la racine distale et faites un intervalle. Ensuite, passez à une aiguille de calibre 25 pour continuer l’expansion de l’intervalle.Progressez délicatement vers la zone périapicale tout en tournant lentement l’aiguille vers l’avant et langoureusement pour presser la racine hors de la fosse alvéolaire. Pour éliminer la résistance mésiale, insérez une aiguille de calibre 23 dans la fourche radiculaire et soulevez la molaire occlusale. Après avoir tenu fermement la molaire, prenez une autre aiguille de calibre 23 et forcez-la dans la membrane parodontale mésiale linguale pour créer un intervalle.Ensuite, utilisez une aiguille de calibre 25 et tournez lentement vers l’avant et buccally. Si certains obstacles sous-jacents empêchent la luxation de la molaire, utilisez une aiguille de calibre 26 pour pénétrer dans l’apex de la racine et répétez les opérations. Lors de l’extraction finale, extraire la dent en veillant à ce que la couronne s’élève au-dessus du plan occlusal et que deux racines intactes soient clairement visibles.Après avoir extrait avec succès la première molaire mandibulaire, appliquez du coton sec pour arrêter le saignement, repositionnez la langue, administrez une analgésie et placez la souris sur un coussin chauffant à température constante jusqu’à ce qu’elle se rétablisse de l’anesthésie. L’alvéole dentaire s’est immédiatement remplie de post-extraction du caillot. Le processus de guérison de la cavité a été observé pendant une semaine.Des os trabéculaires ressemblant à des éponges se sont formés, mais le caillot est resté. Dans le processus de guérison, la cavité a été remplie d’os d’éponge après deux semaines, indiquant l’achèvement de la régénération. Un régulateur maître dans les différenciations des ostéoblastes Sp7 a été largement exprimé dans les cellules de la moelle osseuse dans la marge qui est l’os formant le front.Sous l’état d’homéostasie, les os trabéculaires étaient cohérents et confluents avec des blocs cellulaires de moelle osseuse saupoudrés comme des îles. Une semaine après la chirurgie, de nombreuses cellules exprimant Sp7 ont rempli la cavité d’extraction avec de l’os trabéculaire nouvellement formé saupoudré. Quatre semaines après la chirurgie, la condition s’est inversée et s’est transformée en grande partie en os trabéculaire.L’activité des cellules exprimant Sp7 a diminué à un niveau proche de l’état d’homéostasie. Le peut également être effectué pour démontrer le processus de régénération du nouveau-né. Cette technique peut aider les chercheurs à démêler les mécanismes sous-jacents du processus de guérison et de régénération disponibles en fournissant un nouveau modèle murin.

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