Name: the establishment of a murine mandibular molar extraction socket healing model
Uploaded: 2023-01-13T13:40:00
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Questo lavoro è supportato dalla National Natural Science Foundation of China 81825005 (L.Y.), 82201045 (F.Y.) e 82100982 (F.L.) e dal Sichuan Province Science and Technology Program 2021JDRC0144 (F.L.), 2022JDRC0130 (F.Y.).

Tutte le procedure animali in questo studio sono state esaminate e approvate dal Comitato etico della West China School of Stomatology, Sichuan University (WCHSIRB-D-2017-041). Per il presente studio sono stati utilizzati topi adulti C57BL/6, ottenuti da una fonte commerciale (vedi Tabella dei materiali).
1. Preparazione prechirurgica
<ol><li>Preparazione dello strumento<ol><li>Preparare vari aghi di siringhe monouso (26G, 25G, 23G; vedi Tabella dei ...

<ol>
	<li>Mamoun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dry+socket+etiology,+diagnosis,+and+clinical+treatment+techniques.">Dry socket etiology, diagnosis, and clinical treatment techniques.</a> Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons. 44 (2), 52-58 (2018).</li><li>Laraki, M., Chbicheb, S., El Wady, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolitis:+review+of+the+literature.">Alveolitis: review of the literature.</a> Odonto-Stomatologie Tropicale = Tropical Dental Journal. 35 (139), 19-25 (2012).</li><li>Soundia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteonecrosis+of+the+jaws+(ONJ)+in+mice+after+extraction+of+teeth+with+periradicular+disease.">Osteonecrosis of the jaws (ONJ) in mice after extraction of teeth with periradicular disease.</a> Bone. 90, 133-141 (2016).</li><li>Ara&#250;jo, M. G., Silva, C. O., Misawa, M., Sukekava, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+socket+healing:+what+can+we+learn.">Alveolar socket healing: what can we learn.</a> Periodontology 2000. 68 (1), 122-134 (2015).</li><li>Hojo, H., Ohba, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sp7+Action+in+the+skeleton:+its+mode+of+action,+functions,+and+relevance+to+skeletal+diseases.">Sp7 Action in the skeleton: its mode of action, functions, and relevance to skeletal diseases.</a> International Journal of Molecular Sciences. 23 (10), 5647 (2022).</li><li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+functions+of+Osterix+are+required+for+bone+growth+and+homeostasis+in+postnatal+mice.">Multiple functions of Osterix are required for bone growth and homeostasis in postnatal mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (29), 12919-12924 (2010).</li><li>Ito, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathological+differences+in+the+bone+healing+processes+between+tooth+extraction+socket+and+femoral+fracture.">Pathological differences in the bone healing processes between tooth extraction socket and femoral fracture.</a> Bone Reports. 16, 101522 (2022).</li><li>Vasak, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+bone+apposition+to+hydrophilic+and+hydrophobic+titanium+implant+surfaces:+a+histologic+and+histomorphometric+study+in+minipigs.">Early bone apposition to hydrophilic and hydrophobic titanium implant surfaces: a histologic and histomorphometric study in minipigs.</a> Clinical Oral Implants Research. 25 (12), 1378-1385 (2014).</li><li>Ara&#250;jo, M. G., Lindhe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dimensional+ridge+alterations+following+tooth+extraction.+An+experimental+study+in+the+dog.">Dimensional ridge alterations following tooth extraction. An experimental study in the dog.</a> Journal of Clinical Periodontology. 32 (2), 212-218 (2005).</li><li>Kim, I. -. S., Ki, H. -. C., Lee, W., Kim, H., Park, J. -. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+systemically+administered+bisphosphonates+on+bony+healing+after+tooth+extraction+and+osseointegration+of+dental+implants+in+the+rabbit+maxilla.">The effect of systemically administered bisphosphonates on bony healing after tooth extraction and osseointegration of dental implants in the rabbit maxilla.</a> The International Journal of Oral &amp; Maxillofacial Implants. 28 (5), 1194-1200 (2013).</li><li>Kanyama, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Connective+tissue+growth+factor+expressed+in+rat+alveolar+bone+regeneration+sites+after+tooth+extraction.">Connective tissue growth factor expressed in rat alveolar bone regeneration sites after tooth extraction.</a> Archives of Oral Biology. 48 (10), 723-730 (2003).</li><li>Zhou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+IFT140+in+early+bone+healing+of+tooth+extraction+sockets.">The role of IFT140 in early bone healing of tooth extraction sockets.</a> Oral Diseases. 28 (4), 1188-1197 (2022).</li><li>Apaza Alccayhuaman, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FasL+is+required+for+osseous+healing+in+extraction+sockets+in+mice.">FasL is required for osseous healing in extraction sockets in mice.</a> Frontiers in Immunology. 12, 678873 (2021).</li><li>Avivi-Arber, L., Avivi, D., Perez, M., Arber, N., Shapira, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+bone+healing+at+tooth+extraction+sites+in+CD24-deficient+mice:+A+pilot+study.">Impaired bone healing at tooth extraction sites in CD24-deficient mice: A pilot study.</a> PLoS One. 13 (2), 0191665 (2018).</li><li>Vieira, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intramembranous+bone+healing+process+subsequent+to+tooth+extraction+in+mice:+micro-computed+tomography,+histomorphometric+and+molecular+characterization.">Intramembranous bone healing process subsequent to tooth extraction in mice: micro-computed tomography, histomorphometric and molecular characterization.</a> PLoS One. 10 (5), 0128021 (2015).</li><li>Min, K. -. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+resveratrol+on+bone-healing+capacity+in+the+mouse+tooth+extraction+socket.">Effects of resveratrol on bone-healing capacity in the mouse tooth extraction socket.</a> Journal of Periodontal Research. 55 (2), 247-257 (2020).</li><li>Yu, F., Li, F., Zheng, L., Ye, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+controls+of+Sonic+hedgehog+guarantee+fidelity+of+epithelial+adult+stem+cells+trajectory+in+regeneration.">Epigenetic controls of Sonic hedgehog guarantee fidelity of epithelial adult stem cells trajectory in regeneration.</a> Science Advances. 8 (29), (2022).</li><li>Kuroshima, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+noncultured+stromal+vascular+fraction+cells+of+adipose+tissue+ameliorates+osteonecrosis+of+the+jaw-like+lesions+in+mice.">Transplantation of noncultured stromal vascular fraction cells of adipose tissue ameliorates osteonecrosis of the jaw-like lesions in mice.</a> Journal of bone and Mineral Research. 33 (1), 154-166 (2018).</li><li>Ahel, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forces+that+fracture+teeth+during+extraction+with+mandibular+premolar+and+maxillary+incisor+forceps.">Forces that fracture teeth during extraction with mandibular premolar and maxillary incisor forceps.</a> The British Journal of Oral &amp; Maxillofacial Surgery. 53 (10), 982-987 (2015).</li></ol>

Il modello di guarigione della presa murina è un metodo importante per svelare i meccanismi sottostanti nella guarigione e nella rigenerazione ossea, risolvendo in definitiva le sfide cliniche. Gli studi esistenti hanno dimostrato la possibilità del modello di estrazione degli incisivi e del modello di estrazione molare mascellare, mentre gli studi non hanno utilizzato il modello mandibolare del primo molare13,17,18. Tuttavia,...

La guarigione dell'alveolo dopo l'estrazione del dente è uno scenario clinico comune, che può causare complicazioni sconvenienti come emorragia dell'orbita, presa secca o persino osteomielite della mascella in caso di guarigione indesiderata 1,2,3. Queste comorbidità possono compromettere la qualità della vita dei pazienti e, peggio ancora, sfidare in modo vitale la riabilitazione protesica a causa della massiccia perdita ossea4. Sebbene le fasi di guarigione dell'alveolo siano state chiarite, sono inadeguate per dirigere l'assistenza clinica post-chirurgia di estrazione dentale quando si incontrano varie sfide prognosi4.
Sono stati condotti diversi studi basati su modelli animali per ottenere una migliore comprensione dei meccanismi sottostanti nel processo di guarigione dell'alveolo e prevenire le situazioni di cui sopra. Sp7 è un regolatore principale nella differenziazione degli osteoblasti, svolgendo un ruolo vitale nello sviluppo dello scheletro, nell'emostasi ossea e nella rigenerazione ossea 5,6. I modelli di guarigione delle prese razionali potrebbero mostrare la ridondanza di Sp7 post-traumatica nella rigenerazione ossea. Inoltre, a differenza della guarigione delle fratture ossee lunghe, solo un singolo processo osteogenico, l'ossificazione intramembranosa, comporta il processo di guarigione della presa di estrazione7. Ciò rende il modello di estrazione del dente animale ottimale per lo studio di terapie basate su impianti, poiché l'osteointegrazione dell'impianto obbedisce alla stessa regola osteogenica8.
Per decenni, il modello di estrazione dei denti è stato eseguito su ratti, conigli e cani, poiché queste specie hanno denti grandi che sono convenienti per operare su 9,10,11. Tuttavia, date le fiorenti richieste di modificazione genetica e come background genetico più adattabile agli esseri umani, i topi vengono sempre più utilizzati per stabilire un modello di estrazione dei denti. Da quel momento in poi, i ricercatori potrebbero svelare il ruolo di una specifica popolazione cellulare nel processo di guarigione della presa usando topi modificati dal genoma invece di osservare fenotipi solo12. Tra i modelli di presa per l'estrazione dei denti murini, studi precedenti hanno dimostrato l'istituzione e il processo di guarigione del dente masculare murino e delle prese di estrazione degli incisivi13,14,15,16. Tuttavia, il modello di guarigione della prognosi e i punti temporali detective e osservativi possono differire tra i protocolli. Questo fa appello a un criterio universale per gli studiosi per stabilire un modello di guarigione della presa murina.
Questo studio mirava a costituire un modello praticabile di guarigione della presa murina per i problemi di cui sopra. I molari della mandibola nei topi hanno tratti morfologici distintivi rispetto ai molari mascellari e agli incisivi, portando vantaggi e svantaggi unici. Poiché i modelli incentrati sulla mandibola murina sono attualmente basati sul vuoto, questo protocollo ha cercato di fornire un metodo compiuto per estrarre il primo molare mandibolare nei topi. Speriamo che questo protocollo illumini i ricercatori di base con nuove idee per scoprire i meccanismi sottostanti della guarigione delle prese e indicare la cura clinica.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>23/25/26 G needle</td>
			<td>Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus &#38; Instruments Co. LTD.</td>
			<td>SB1-074(IV)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57/B6J&#160;</td>
			<td>Gempharmatech Experimental Animals Company, Chengdu, China</td>
			<td>C57/B6J</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Staining Solution&#160;</td>
			<td>Beyotime&#160;</td>
			<td>Cat#C1005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding Cassettes</td>
			<td>CITOTEST Scientific</td>
			<td>80106-1100-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Stain Kit</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BL700B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science Co.,Ltd</td>
			<td>R510-22-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson&#8217;s Trichrome Stain Kit</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>RM2235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital Sodium</td>
			<td>Huaxia Chemical Reagent Co., Ltd</td>
			<td>2018042001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit polyclonal&#160;</td>
			<td>anti-Sp7&#160;</td>
			<td>Abcam Cat# ab22552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td>Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus &#38; Instruments Co. LTD.</td>
			<td>SB2-115</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the establishment of a murine mandibular molar extraction socket healing model

Questo studio introduce lo sviluppo di un modello di estrazione molare nella mandibola murina per fornire un modello praticabile per lo studio della rigenerazione ossea alveolare e dell'ossificazione intramembranosa. I topi C57/J6 sono stati utilizzati per estrarre il primo molare mandibolare per stabilire questo modello. Sono stati eutanasizzati e le mandibole bilaterali raccolte, rispettivamente a 1 settimana e 4 settimane dopo l'intervento. La successiva raccolta stereoscopica seriale, la valutazione istologica e la colorazione con immunofluorescenza sono state eseguite per dimostrare il successo della chirurgia. Subito dopo l'intervento chirurgico, le immagini stereoscopiche mostravano una presa di estrazione vuota. L'ematossilina e l'eosina (H & E) a 1 settimana e la colorazione Masson a 4 settimane dopo l'intervento chirurgico hanno mostrato che l'area della radice originale era parzialmente e completamente riempita con trabecole ossee, rispettivamente. La colorazione con immunofluorescenza ha mostrato che, rispetto al lato omeostasi, l'espressione di Sp7 è aumentata a 1 settimana dopo l'intervento, suggerendo un'osteogenesi vigorosa nella fossa alveolare. Tutti questi risultati hanno dimostrato un modello praticabile di guarigione dell'alveolo di estrazione del dente murino. I prossimi studi che rivelano i meccanismi di guarigione dei difetti dell'osso mascellare o della guarigione dell'alveolo potrebbero adottare questo metodo.

Per chiarire l'uso pratico di questo metodo, il primo molare mandibolare destro di due topi C57BL / 6 sani (3 mesi, entrambi femmine) è stato estratto e seguito per 1 settimana e 4 settimane, rispettivamente. Le mandibole sinistre non danneggiate sono state utilizzate come controlli sani. La figura 1A mostra le caratteristiche specifiche dell'apparecchio chirurgico, tra cui aghi da 26-23 G e una pinzetta oftalmica dentata. L'ago da 26 G viene rimosso e piegato. L'ago da 25 G è piegato a ci...

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The Establishment of a Murine Mandibular Molar Extraction Socket Healing Model

Questo protocollo dimostra i dettagli passo-passo su come estrarre il primo molare mandibolare nel topo. Fornisce un metodo alternativo per i ricercatori che si concentrano sulla guarigione e la rigenerazione della mandibola.

L'istituzione di un modello murino di guarigione dell'orbita di estrazione molare mandibolare

This study introduces the development of a molar extraction model in the murine mandible to provide a practicable model for studying alveolar bone ...

Questo protocollo fornisce un modello murino di estrazione molare mandibolare che viene raramente introdotto negli studi di rigenerazione ossea disponibili. Lo sviluppo di un modello di estrazione molare mandibolare murina è necessario come mandibola che sia più comparabile e coerente tra i diversi gruppi di intervento. Le implicazioni di questa tecnica non si estendono verso la terapia di alcuna malattia.Tuttavia, può aiutare la guarigione clinica e la rigenerazione dell'osso mascellare a lungo termine, aiutando a rivedere i meccanismi alla base di questo processo. Questa tecnica è stata sviluppata per aiutare gli studi, rivelando i meccanismi di guarigione e rigenerazione disponibili. Purtroppo, questo metodo non può essere applicato ad altri sistemi.Iniziare ad eliminare la resistenza distale del topo anestetizzato tenendo medialmente il molare con una pinzetta. Quindi forzare un ago di gauge 23 nell'osso alveolare buccale della radice distale e rendere un intervallo. Quindi, passare a un ago da 25 gauge per continuare l'espansione dell'intervallo.Avanzare delicatamente verso l'area periapicale mentre ruota lentamente l'ago in avanti e languidamente per spingere la radice fuori dalla fossa alveolare. Per eliminare la resistenza mesiale, inserire un ago di gauge 23 nella forcella della radice e sollevare il molare di occlusalmente. Dopo aver tenuto saldamente il molare, prendere un altro ago di gauge 23 e forzarlo nella membrana parodontale mesiale linguale per creare un intervallo.Quindi utilizzare un ago calibro 25 e ruotare lentamente in avanti e buccalmente. Se alcuni ostacoli sottostanti impediscono la lussazione del molare, utilizzare un ago di calibro 26 per penetrare nell'apice della radice e ripetere le operazioni. Durante l'estrazione finale, estrarre il dente assicurandosi che la corona si alzi al di sopra del piano occlusale e che si possano vedere chiaramente due radici intatte.Dopo aver estratto con successo il primo molare mandibolare, applicare cotone asciutto per fermare l'emorragia, riposizionare la lingua, somministrare l'analgesia e mettere il topo su una piastra riscaldante a temperatura costante fino a quando non si riprende dall'anestesia. L'alveolo del dente si è immediatamente riempito con l'estrazione post coagulo. Il processo di guarigione della presa è stato osservato per una settimana.Si formarono alcune ossa trabecolari simili a spugne ma il coagulo rimase. Nel processo di guarigione, la presa è stata riempita con ossa di spugna dopo due settimane che indicano il completamento della rigenerazione. Un regolatore principale nelle differenziazioni degli osteoblasti Sp7 è stato ampiamente espresso nelle cellule del midollo osseo nel margine che è il fronte osseo che forma.Sotto lo stato di omeostasi le ossa trabecolari erano consistenti e confluenti con blocchi di cellule del midollo osseo cosparsi come isole. A una settimana dall'intervento, numerose cellule esprimenti Sp7 hanno riempito la cavità di estrazione con osso trabecolare appena formato cosparso intorno. A quattro settimane dopo l'intervento, la condizione si è invertita e si è trasformata in gran parte in fusione con l'osso trabecolare.L'attività delle cellule che esprimono Sp7 è diminuita ad un livello che si avvicina allo stato di omeostasi. Il può anche essere eseguito per dimostrare il processo di rigenerazione neonatale. Questa tecnica può aiutare i ricercatori a svelare i meccanismi sottostanti del processo di guarigione e rigenerazione disponibile fornendo un nuovo modello murino.

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