Name: the establishment of a murine mandibular molar extraction socket healing model
Uploaded: 2023-01-13T13:40:00
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Este trabalho é apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China 81825005 (L.Y.), 82201045 (F.Y.) e 82100982 (F.L.), e pelo Programa de Ciência e Tecnologia da Província de Sichuan 2021JDRC0144 (F.L.), 2022JDRC0130 (F.Y.).

Todos os procedimentos em animais neste estudo foram revisados e aprovados pelo Comitê de Ética da Escola de Estomatologia da China Ocidental, Universidade de Sichuan (WCHSIRB-D-2017-041). Camundongos adultos C57BL/6, obtidos de fonte comercial (ver Tabela de Materiais), foram utilizados para o presente estudo.
1. Preparo pré-cirúrgico
<ol><li>Preparação do instrumento<ol><li>Prepare várias agulhas de seringas descartáveis (26G, 25G, 23G; ver <strong...

<ol>
	<li>Mamoun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dry+socket+etiology,+diagnosis,+and+clinical+treatment+techniques.">Dry socket etiology, diagnosis, and clinical treatment techniques.</a> Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons. 44 (2), 52-58 (2018).</li><li>Laraki, M., Chbicheb, S., El Wady, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolitis:+review+of+the+literature.">Alveolitis: review of the literature.</a> Odonto-Stomatologie Tropicale = Tropical Dental Journal. 35 (139), 19-25 (2012).</li><li>Soundia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteonecrosis+of+the+jaws+(ONJ)+in+mice+after+extraction+of+teeth+with+periradicular+disease.">Osteonecrosis of the jaws (ONJ) in mice after extraction of teeth with periradicular disease.</a> Bone. 90, 133-141 (2016).</li><li>Ara&#250;jo, M. G., Silva, C. O., Misawa, M., Sukekava, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+socket+healing:+what+can+we+learn.">Alveolar socket healing: what can we learn.</a> Periodontology 2000. 68 (1), 122-134 (2015).</li><li>Hojo, H., Ohba, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sp7+Action+in+the+skeleton:+its+mode+of+action,+functions,+and+relevance+to+skeletal+diseases.">Sp7 Action in the skeleton: its mode of action, functions, and relevance to skeletal diseases.</a> International Journal of Molecular Sciences. 23 (10), 5647 (2022).</li><li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+functions+of+Osterix+are+required+for+bone+growth+and+homeostasis+in+postnatal+mice.">Multiple functions of Osterix are required for bone growth and homeostasis in postnatal mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (29), 12919-12924 (2010).</li><li>Ito, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathological+differences+in+the+bone+healing+processes+between+tooth+extraction+socket+and+femoral+fracture.">Pathological differences in the bone healing processes between tooth extraction socket and femoral fracture.</a> Bone Reports. 16, 101522 (2022).</li><li>Vasak, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+bone+apposition+to+hydrophilic+and+hydrophobic+titanium+implant+surfaces:+a+histologic+and+histomorphometric+study+in+minipigs.">Early bone apposition to hydrophilic and hydrophobic titanium implant surfaces: a histologic and histomorphometric study in minipigs.</a> Clinical Oral Implants Research. 25 (12), 1378-1385 (2014).</li><li>Ara&#250;jo, M. G., Lindhe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dimensional+ridge+alterations+following+tooth+extraction.+An+experimental+study+in+the+dog.">Dimensional ridge alterations following tooth extraction. An experimental study in the dog.</a> Journal of Clinical Periodontology. 32 (2), 212-218 (2005).</li><li>Kim, I. -. S., Ki, H. -. C., Lee, W., Kim, H., Park, J. -. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+systemically+administered+bisphosphonates+on+bony+healing+after+tooth+extraction+and+osseointegration+of+dental+implants+in+the+rabbit+maxilla.">The effect of systemically administered bisphosphonates on bony healing after tooth extraction and osseointegration of dental implants in the rabbit maxilla.</a> The International Journal of Oral &amp; Maxillofacial Implants. 28 (5), 1194-1200 (2013).</li><li>Kanyama, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Connective+tissue+growth+factor+expressed+in+rat+alveolar+bone+regeneration+sites+after+tooth+extraction.">Connective tissue growth factor expressed in rat alveolar bone regeneration sites after tooth extraction.</a> Archives of Oral Biology. 48 (10), 723-730 (2003).</li><li>Zhou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+IFT140+in+early+bone+healing+of+tooth+extraction+sockets.">The role of IFT140 in early bone healing of tooth extraction sockets.</a> Oral Diseases. 28 (4), 1188-1197 (2022).</li><li>Apaza Alccayhuaman, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FasL+is+required+for+osseous+healing+in+extraction+sockets+in+mice.">FasL is required for osseous healing in extraction sockets in mice.</a> Frontiers in Immunology. 12, 678873 (2021).</li><li>Avivi-Arber, L., Avivi, D., Perez, M., Arber, N., Shapira, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+bone+healing+at+tooth+extraction+sites+in+CD24-deficient+mice:+A+pilot+study.">Impaired bone healing at tooth extraction sites in CD24-deficient mice: A pilot study.</a> PLoS One. 13 (2), 0191665 (2018).</li><li>Vieira, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intramembranous+bone+healing+process+subsequent+to+tooth+extraction+in+mice:+micro-computed+tomography,+histomorphometric+and+molecular+characterization.">Intramembranous bone healing process subsequent to tooth extraction in mice: micro-computed tomography, histomorphometric and molecular characterization.</a> PLoS One. 10 (5), 0128021 (2015).</li><li>Min, K. -. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+resveratrol+on+bone-healing+capacity+in+the+mouse+tooth+extraction+socket.">Effects of resveratrol on bone-healing capacity in the mouse tooth extraction socket.</a> Journal of Periodontal Research. 55 (2), 247-257 (2020).</li><li>Yu, F., Li, F., Zheng, L., Ye, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+controls+of+Sonic+hedgehog+guarantee+fidelity+of+epithelial+adult+stem+cells+trajectory+in+regeneration.">Epigenetic controls of Sonic hedgehog guarantee fidelity of epithelial adult stem cells trajectory in regeneration.</a> Science Advances. 8 (29), (2022).</li><li>Kuroshima, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+noncultured+stromal+vascular+fraction+cells+of+adipose+tissue+ameliorates+osteonecrosis+of+the+jaw-like+lesions+in+mice.">Transplantation of noncultured stromal vascular fraction cells of adipose tissue ameliorates osteonecrosis of the jaw-like lesions in mice.</a> Journal of bone and Mineral Research. 33 (1), 154-166 (2018).</li><li>Ahel, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forces+that+fracture+teeth+during+extraction+with+mandibular+premolar+and+maxillary+incisor+forceps.">Forces that fracture teeth during extraction with mandibular premolar and maxillary incisor forceps.</a> The British Journal of Oral &amp; Maxillofacial Surgery. 53 (10), 982-987 (2015).</li></ol>

O modelo de cicatrização de alvéolos murinos é um método importante para desvendar os mecanismos subjacentes na cicatrização e regeneração óssea, resolvendo desafios clínicos. Estudos existentes demonstraram a possibilidade do modelo de extração de incisivos e do modelo de extração de molares superiores, enquanto estudos não utilizaram o modelo de primeiro molar inferior13,17,18. No entanto, os incisivos são cru...

A cicatrização do alvéolo após exodontia é um cenário clínico comum, que pode resultar em complicações inconsequentes, como hemorragia alveolar, alveolite seca ou mesmo osteomielite mandibular sob cicatrização indesejável 1,2,3. Essas comorbidades podem comprometer a qualidade de vida dos pacientes e, pior ainda, desafiar vitalmente a reabilitação protética devido à perda ósseamaciça4. Embora os estágios de cicatrização do alvéolo tenham sido elucidados, eles são inadequados para direcionar o cuidado clínico pós-cirurgia de exodontia quando se deparam com vários desafios prognósticos4.
Múltiplos estudos baseados em modelos animais têm sido conduzidos para obter uma melhor compreensão dos mecanismos subjacentes no processo de cicatrização do alvéolo e evitar as situações acima. A Sp7 é um regulador mestre na diferenciação osteoblástica, desempenhando um papel vital no desenvolvimento do esqueleto, hemostasia ósseae regeneração óssea5,6. Modelos racionais de cicatrização de alvéolos poderiam mostrar a redundância da Sp7 pós-traumática na regeneração óssea. Além disso, diferentemente da consolidação da fratura de ossos longos, apenas um único processo osteogênico, a ossificação intramembranosa, envolve o processo de cicatrização do alvéolo deextração7. Isso torna o modelo de extração dentária animal ideal para o estudo de terapias baseadas em implantes, uma vez que a osseointegração de implantes obedece àmesma regra osteogênica8.
Há décadas, o modelo de exodontia vem sendo realizado em ratos, coelhos e cães, uma vez que essas espécies possuem dentes grandes e convenientes para operar 9,10,11. No entanto, dadas as crescentes demandas por modificação genética e como um fundo genético mais adaptativo aos seres humanos, camundongos estão sendo cada vez mais usados para estabelecer um modelo de extração dentária. A partir daí, os pesquisadores puderam desvendar o papel de uma população celular específica no processo de cicatrização usando camundongos modificados pelo genoma, em vez de observar fenótipos apenas12. Entre os modelos de alvéolos para extração dentária murina, estudos prévios demonstraram o estabelecimento e o processo de cicatrização de alvéolos de extração de dentes maxilares e incisivosmurinos 13,14,15,16. No entanto, o padrão de cicatrização do prognóstico e os momentos de detecção e observação podem diferir entre os protocolos. Isso apela para um critério universal para que os estudiosos estabeleçam um modelo de cura de alvéolos murinos.
Este estudo teve como objetivo constituir um modelo prático de cicatrização de alvéolos murinos para as questões acima. Molares mandibulares em camundongos apresentam características morfológicas distintas em relação aos molares superiores e incisivos, trazendo vantagens e desvantagens únicas. Como os modelos com foco na mandíbula murina são atualmente baseados em vácuo, este protocolo tentou fornecer um método realizado para extrair o primeiro molar inferior em camundongos. Esperamos que este protocolo ilumine os pesquisadores básicos com novas ideias para descobrir os mecanismos subjacentes da cicatrização da cavidade e indicar cuidados clínicos.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>23/25/26 G needle</td>
			<td>Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus &#38; Instruments Co. LTD.</td>
			<td>SB1-074(IV)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57/B6J&#160;</td>
			<td>Gempharmatech Experimental Animals Company, Chengdu, China</td>
			<td>C57/B6J</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Staining Solution&#160;</td>
			<td>Beyotime&#160;</td>
			<td>Cat#C1005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding Cassettes</td>
			<td>CITOTEST Scientific</td>
			<td>80106-1100-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Stain Kit</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BL700B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science Co.,Ltd</td>
			<td>R510-22-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson&#8217;s Trichrome Stain Kit</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>RM2235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital Sodium</td>
			<td>Huaxia Chemical Reagent Co., Ltd</td>
			<td>2018042001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit polyclonal&#160;</td>
			<td>anti-Sp7&#160;</td>
			<td>Abcam Cat# ab22552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td>Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus &#38; Instruments Co. LTD.</td>
			<td>SB2-115</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the establishment of a murine mandibular molar extraction socket healing model

Este estudo introduz o desenvolvimento de um modelo de extração molar na mandíbula murina para fornecer um modelo viável para o estudo da regeneração óssea alveolar e ossificação intramembranosa. Camundongos C57/J6 foram utilizados para extrair o primeiro molar inferior para estabelecer este modelo. Eles foram sacrificados e as mandíbulas bilaterais retiradas em 1 e 4 semanas pós-cirurgia, respectivamente. Subsequente coleta estereoscópica seriada, avaliação histológica e coloração por imunofluorescência foram realizadas para demonstrar o sucesso da cirurgia. Imediatamente após a cirurgia, as imagens estereoscópicas mostraram um alvéolo de extração vazio. A hematoxilina e a eosina (H&E) em 1 semana e a coloração de Masson em 4 semanas de pós-operatório mostraram que a área da raiz original estava parcial e totalmente preenchida por trabéculas ósseas, respectivamente. A coloração por imunofluorescência mostrou que, em comparação com o lado da homeostase, a expressão de Sp7 aumentou com 1 semana de pós-operatório, sugerindo osteogênese vigorosa na fossa alveolar. Todos esses resultados demonstraram um modelo praticável de cicatrização de alvéolos para extração dentária murina. Estudos futuros revelando os mecanismos de cicatrização de defeitos maxilares ou cicatrização de alvéolos poderão adotar esse método.

Para elucidar o uso prático desse método, o primeiro molar inferior direito de dois camundongos C57BL/6 saudáveis (3 meses de idade, ambos fêmeas) foi extraído e acompanhado por 1 semana e 4 semanas, respectivamente. As mandíbulas esquerdas não danificadas foram usadas como controles saudáveis. A Figura 1A mostra as características específicas do aparelho cirúrgico, incluindo agulhas 26-23 G e um tweezer oftálmico dentado. A agulha 26 G é removida e dobrada. A agulha de 25 G é ...

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The Establishment of a Murine Mandibular Molar Extraction Socket Healing Model

Este protocolo demonstra passo-a-passo detalhes de como extrair o primeiro molar inferior no camundongo. Ele fornece um método alternativo para pesquisadores com foco na cicatrização e regeneração dos ossos maxilares.

O Estabelecimento de um Modelo de Cicatrização de Molares Mandibulares Murinos

This study introduces the development of a molar extraction model in the murine mandible to provide a practicable model for studying alveolar bone ...

Este protocolo fornece um modelo murino de extração de molares mandibulares que raramente é introduzido nos estudos de regeneração óssea disponíveis. O desenvolvimento de um modelo murino de extração de molares mandibulares é necessário como uma mandíbula mais comparável e consistente entre os diferentes grupos de intervenção. As implicações dessa técnica não se estendem para o tratamento de nenhuma doença.No entanto, pode ajudar a cicatrização clínica e regeneração óssea da mandíbula a longo prazo, ajudando a rever os mecanismos subjacentes a este processo. Esta técnica foi desenvolvida para auxiliar os estudos, revelando os mecanismos de cura e regeneração disponíveis. Lamentavelmente, este método não pode ser aplicado a outros sistemas.Comece a eliminar a resistência distal do camundongo anestesiado segurando o molar com uma pinça medialmente. Em seguida, forçar uma agulha de calibre 23 no osso alveolar bucal da raiz distal e fazer um intervalo. Em seguida, mude para uma agulha calibre 25 para continuar a expansão do intervalo.Progredir delicadamente em direção à área periapical enquanto gira lentamente a agulha para frente e angulosamente para pressionar a raiz para fora da fossa alveolar. Para eliminar a resistência mesial, insira uma agulha calibre 23 no garfo radicular e levante o molar de forma oclusal. Depois de segurar o molar com força, pegue outra agulha de calibre 23 e force-a na membrana periodontal mesial lingual para criar um intervalo.Em seguida, use uma agulha calibre 25 e gire lentamente para frente e bucalmente. Se algum obstáculo subjacente impedir a luxação do molar, use uma agulha de calibre 26 para penetrar no ápice da raiz e repetir as operações. Durante a extração final, extraia o dente garantindo que a coroa se eleve acima do plano oclusal e que duas raízes intactas possam ser claramente vistas.Depois de extrair com sucesso o primeiro molar inferior, aplique algodão seco para parar o sangramento, reposicione a língua, administre analgesia e coloque o mouse em uma almofada de aquecimento de temperatura constante até que ele se recupere da anestesia. O alvéolo dentário imediatamente preenchido com coágulo pós-extração. O processo de cicatrização do alvéolo foi observado durante uma semana.Alguns ossos trabeculares semelhantes a esponjas foram formados, mas o coágulo permaneceu. No processo de cicatrização, o alvéolo foi preenchido com ossos esponjosos após duas semanas, indicando o término da regeneração. Um regulador mestre nas diferenciações osteoblásticas Sp7 foi amplamente expresso nas células da medula óssea na margem que é o osso formando a frente.Sob o estado de homeostase, os ossos trabeculares eram consistentes e confluentes com blocos de células da medula óssea polvilhados como ilhas. Uma semana após a cirurgia, numerosas células Sp7 que expressavam preenchiam o alvéolo de extração com osso trabecular recém-formado espalhado ao redor. Com quatro semanas de pós-cirurgia, o quadro se reverteu e passou a se fundir em grande parte ao osso trabecular.A atividade de Sp7 expressando células declinou para um nível próximo ao estado de homeostase. O também pode ser realizado para demonstrar o processo de regeneração do recém-nascido. Esta técnica pode ajudar os pesquisadores a desvendar os mecanismos subjacentes do processo de cura e regeneração disponíveis, fornecendo um novo modelo murino.

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