Name: a silicosis mouse model established by repeated inhalation of crystalline silica dust
Uploaded: 2023-01-06T14:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Silicosis Mouse Model Established by Repeated Inhalation of Crystalline Silica Dust at JoVE.com

تم دعم هذه الدراسة من قبل برنامج الابتكار التآزري الجامعي لمقاطعة آنهوي (GXXT-2021-077) وصندوق ابتكار الخريجين بجامعة آنهوي للعلوم والتكنولوجيا (2021CX2120).

اتبعت جميع الإجراءات المبادئ التوجيهية لدليل المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام المختبر (منشور المعاهد الوطنية للصحة رقم 8023 ، المنقح عام 1978) وتمت الموافقة عليها من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامها في كلية الطب بجامعة آنهوي للعلوم والتكنولوجيا.
1. إدارة وتغذية ا...

<ol>
	<li>Olsson, A., Kromhout, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occupational+cancer+burden:+the+contribution+of+exposure+to+process-generated+substances+at+the+workplace.">Occupational cancer burden: the contribution of exposure to process-generated substances at the workplace.</a> Molecular Oncology. 15 (3), 753-763 (2021).</li><li>The Lancet Respiratory. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+world+is+failing+on+silicosis.">The world is failing on silicosis.</a> The Lancet. Respiratory Medicine. 7 (4), 283 (2019).</li><li>Weissman, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+massive+fibrosis:+An+overview+of+the+recent+literature.">Progressive massive fibrosis: An overview of the recent literature.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 240, 108232 (2022).</li><li>Lancet, C. C., Yu, I. T., Chen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silicosis.">Silicosis.</a> Lancet. 379 (9830), 2008-2018 (2012).</li><li>Mazurek, J. M., Wood, J., Blackley, D. J., Weissman, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coal+workers'+pneumoconiosis-attributable+years+of+potential+life+lost+to+life+expectancy+and+potential+life+lost+before+age+65+years+-+United+States,+1999-2016.">Coal workers' pneumoconiosis-attributable years of potential life lost to life expectancy and potential life lost before age 65 years - United States, 1999-2016.</a> MMWR. Morbidity and Mortality Weekly Report. 67 (30), 819-824 (2018).</li><li>Voelker, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Black+Lung+resurgence+raises+new+challenges+for+coal+country+physicians.">Black Lung resurgence raises new challenges for coal country physicians.</a> JAMA. 321 (1), 17-19 (2019).</li><li>Nakashima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+role+of+heme+oxygenase-1+in+silica-induced+lung+injury.">Regulatory role of heme oxygenase-1 in silica-induced lung injury.</a> Respiratory Research. 19 (1), 144 (2018).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minute+cellular+nodules+as+early+lesions+in+rats+with+silica+exposure+via+inhalation.">Minute cellular nodules as early lesions in rats with silica exposure via inhalation.</a> Veterinary Sciences. 9 (6), 251 (2022).</li><li>Salehi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+responses+in+C3H/HeJ+mice+following+nose-only+inhalation+exposure+to+different+sizes+of+beryllium+metal+particles.">Immunological responses in C3H/HeJ mice following nose-only inhalation exposure to different sizes of beryllium metal particles.</a> Journal of Applied Toxicology. 29 (1), 61-68 (2009).</li><li>Yang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emodin+suppresses+silica-induced+lung+fibrosis+by+promoting+Sirt1+signaling+via+direct+contact.">Emodin suppresses silica-induced lung fibrosis by promoting Sirt1 signaling via direct contact.</a> Molecular Medicine Reports. 14 (5), 4643-4649 (2016).</li><li>Cornell, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraffin+embedding+and+thin+sectioning+of+microbial+colony+biofilms+for+microscopic+analysis.">Paraffin embedding and thin sectioning of microbial colony biofilms for microscopic analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), e57196 (2018).</li><li>Li, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+suitable+silicosis+mouse+model+was+constructed+by+repeated+inhalation+of+silica+dust+via+nose.">A suitable silicosis mouse model was constructed by repeated inhalation of silica dust via nose.</a> Toxicology Letters. 353, 1-12 (2021).</li><li>Mu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coal+dust+exposure+triggers+heterogeneity+of+transcriptional+profiles+in+mouse+pneumoconiosis+and+Vitamin+D+remedies.">Coal dust exposure triggers heterogeneity of transcriptional profiles in mouse pneumoconiosis and Vitamin D remedies.</a> Particle and Fibre Toxicology. 19 (1), 7 (2022).</li><li>Kato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muc1+deficiency+exacerbates+pulmonary+fibrosis+in+a+mouse+model+of+silicosis.">Muc1 deficiency exacerbates pulmonary fibrosis in a mouse model of silicosis.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 493 (3), 1230-1235 (2017).</li><li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD4+CD25+Foxp3++regulatory+T+cells+depletion+may+attenuate+the+development+of+silica-induced+lung+fibrosis+in+mice.">CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells depletion may attenuate the development of silica-induced lung fibrosis in mice.</a> PLoS One. 5 (11), 15404 (2010).</li><li>Mansouri, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stromal+cell+exosomes+prevent+and+revert+experimental+pulmonary+fibrosis+through+modulation+of+monocyte+phenotypes.">Mesenchymal stromal cell exosomes prevent and revert experimental pulmonary fibrosis through modulation of monocyte phenotypes.</a> JCI Insight. 4 (21), 128060 (2019).</li><li>Ohtsuka, Y., Wang, X. T., Saito, J., Ishida, T., Munakata, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+linkage+analysis+of+pulmonary+fibrotic+response+to+silica+in+mice.">Genetic linkage analysis of pulmonary fibrotic response to silica in mice.</a> The European Respiratory Journal. 28 (5), 1013-1019 (2006).</li></ol>

تعتبر نماذج فأر السحار ضرورية لدراسة التسبب في مرض السيليكا. يصف هذا البروتوكول طريقة لإعداد نموذج من السحار السيليسي في الفئران من خلال التعرض المتكرر للأنف. تسمح هذه الطريقة بدراسة الخصائص المرضية للسحار السيليسي الناجم عن أوقات التعرض المختلفة. تم تخدير الفئران على جهاز التنفس الصناع...

يتعرض العمال حتما لغبار السيليكا البلوري غير المنتظم (CSD) ، والذي يمكن استنشاقه وهو أكثر سمية في العديد من السياقات المهنية ، بما في ذلك التعدين والفخار والزجاج ومعالجة الكوارتز والخرسانة 1,2. تسبب حالة استنشاق الغبار المزمنة المعروفة باسم السحار السيليسي تليف الرئة التدريجي3. وفقا للبيانات الوبائية ، انخفض معدل الإصابة بداء السيليكاتيس على مستوى العالم خلال العقود القليلة الماضية ، ولكن في السنوات الأخيرة ، كان يتزايد ويؤثر على الشباب4،5،6. تمثل الآلية الأساسية لداء السيليكاتس تحديا كبيرا للبحث العلمي بسبب بدايته الخبيثة وفترة الحضانة الطويلة. لا يزال من غير المعروف كيف يتطور السحار السيليسي. علاوة على ذلك ، لا توجد أدوية حالية يمكن أن توقف تطور السحار السيليسي والتليف الرئوي العكسي.
تتضمن نماذج الفئران الحالية للسحار السيليسي ابتلاع القصبة الهوائية لتعليق مختلط من CSD. على سبيل المثال ، إعطاء CSD في الرئتين عن طريق اعتماد صدمة القصبة الهوائية العنقية بعد التخدير لا يتوافق مع التعرض البشري المتكرر لصبغالغبار 7. يمكن دراسة تأثير التعرض للغبار المحيط على الأفراد من خلال تعريضهم ل CSD في شكل الهباء الجوي ، والذي يعكس بدقة أكبر التركيزات البيئية لهذه المادةالسامة 8. ومع ذلك ، لا يمكن ببساطة استنشاق CSD البيئي مباشرة في الرئتين بسبب التركيب الفسيولوجي الفريد لأنف الفأر9. علاوة على ذلك ، فإن المعدات المرتبطة بهذه التكنولوجيا باهظة الثمن ، مما دفع الباحثين إلى إعادة تقييم نموذج السحارالسيليسي للفأر 10. عن طريق استنشاق تعليق CSD من خلال بالتنقيط الأنفي خمس مرات في غضون 2 أسابيع ، كان من الممكن بناء نموذج ديناميكي من السحار السيليسي. هذا النموذج متسق وآمن مع سهولة الاستخدام. من المهم ملاحظة أن هذه الدراسة تسمح بالاستنشاق المتكرر ل CSD في الفئران. من المتوقع أن يكون نموذج السحار السيليسي للفأر الذي تم إنشاؤه من خلال هذا الإجراء أكثر فائدة لمتطلبات البحث.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 mL tube</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BS-05-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% formalin neutral fixative</td>
			<td>Nanchang Yulu Experimental Equipment Co.</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Illustrator</td>
			<td>Adobe&#160;</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol disinfectant</td>
			<td>Xintai Kanyuan Disinfection Products Co.</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD68</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab125212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate antigen retrieval solution</td>
			<td>biosharp life science</td>
			<td>BL619A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAB chromogenic kit</td>
			<td>NJJCBio</td>
			<td>W026-1-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl benzene</td>
			<td>West Asia Chemical Technology (Shandong) Co</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enhanced BCA protein assay kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>P0009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin (H&#38;E)</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>C0105S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP substrate</td>
			<td>Millipore Corporation</td>
			<td>P90720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP-conjugated Affinipure Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)</td>
			<td>Proteintech</td>
			<td>Sa00001-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iceacetic acid</td>
			<td>West Asia Chemical Technology (Shandong) Co</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>R510-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson&#39;s Trichrome stain kit</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Macklin</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtubes</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AXYMCT150CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NF-&#954;B p65</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>8242S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oscillatory thermostatic metal bath</td>
			<td>Abson</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin embedding machine</td>
			<td>Precision (Changzhou) Medical Equipment Co.</td>
			<td>PBM-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Slicer</td>
			<td>Jinhua Kratai Instruments Co.</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer (PBS)&#160;</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BL601A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological saline&#160;</td>
			<td>The First People&#39;s Hospital of Huainan City</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMSF</td>
			<td>Beyotime Biotechnological</td>
			<td>ST505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarized light microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision balance</td>
			<td>Acculab</td>
			<td>ALC-110.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism7.0</td>
			<td>GraphPad&#160;</td>
			<td>Version 7.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVDF membranes</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>3010040001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RIPA lysis buffer</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>P0013B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RODI IOT intelligent multifunctional water purification system</td>
			<td>RSJ</td>
			<td>RODI-220BN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scilogex SK-D1807-E 3D Shaker</td>
			<td>Scilogex</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS-PAGE gel preparation kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>P0012A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon dioxid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>#BCBV6865</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sirius red staining</td>
			<td>Nanjing SenBeiJia Biological Technology Co., Ltd.</td>
			<td>181012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal anesthesia machine</td>
			<td>Anhui Yaokun Biotech Co., Ltd.</td>
			<td>ZL-04A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universal Pipette Tips (0.1&#8211;10 &#181;L)</td>
			<td>KIRGEN</td>
			<td>KG1011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universal Pipette Tips (100&#8211;1000 &#181;L)</td>
			<td>KIRGEN</td>
			<td>KG1313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universal Pipette Tips (1&#8211;200 &#181;L)</td>
			<td>KIRGEN</td>
			<td>KG1212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex&#160;mixer&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS GeminiSEM 500</td>
			<td>Zeiss Germany</td>
			<td>SEM 500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-actin</td>
			<td>Bioss</td>
			<td>bs-0061R</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a silicosis mouse model established by repeated inhalation of crystalline silica dust

يمكن أن يحدث السحار السيليسي بسبب التعرض لغبار السيليكا البلوري التنفسي (CSD) في بيئة صناعية. تمت دراسة الفيزيولوجيا المرضية والفحص والعلاج من السحار السيليسي في البشر على نطاق واسع باستخدام نموذج السحار السيليسي للفئران. من خلال جعل الفئران تستنشق CSD بشكل متكرر في رئتيها ، يمكن للفئران تقليد الأعراض السريرية لداء السيليكات البشري. هذه المنهجية عملية وفعالة من حيث الوقت والإخراج ولا تسبب إصابة ميكانيكية للجهاز التنفسي العلوي بسبب الجراحة. علاوة على ذلك ، يمكن لهذا النموذج أن يحاكي بنجاح عملية التحول الحاد / المزمن للسحار السيليسي. وكانت الإجراءات الرئيسية على النحو التالي. تم طحن مسحوق CSD المعقم 1-5 ميكرومتر بالكامل ، وتعليقه في محلول ملحي ، وتشتيت في حمام مائي بالموجات فوق الصوتية لمدة 30 دقيقة. تحولت الفئران تحت التخدير الناجم عن الأيزوفلوران من التنفس السريع الضحل إلى الشفط العميق البطيء لمدة 2 ثانية تقريبا. تم وضع الماوس في راحة اليد ، ولمس طرف الإبهام بلطف حافة شفة فك الماوس لتقويم مجرى الهواء. بعد كل زفير ، تنفست الفئران في تعليق السيليكا قطرة قطرة من خلال فتحة أنف واحدة ، وتكمل العملية في غضون 4-8 ثوان. بعد أن استقر تنفس الفئران ، تم ضرب صدرها ومداعبتها لمنع استنشاق CSD من السعال. ثم أعيدت الفئران إلى القفص. في الختام ، يمكن لهذا النموذج تحديد CSD على طول الممر الفسيولوجي النموذجي للجزيئات الصغيرة إلى الرئة ، من الجهاز التنفسي العلوي إلى القصيبات الطرفية والحويصلات الهوائية. يمكنه أيضا تكرار التعرض المتكرر للموظفين بسبب العمل. يمكن تنفيذ النموذج من قبل شخص واحد ولا يحتاج إلى معدات باهظة الثمن. إنه يحاكي بشكل ملائم وفعال ميزات مرض السيليكات البشري مع قابلية عالية للتكرار.

تم التحقيق في التسبب المحتمل للسحار السيليسي في الفئران باستخدام الطريقة المقترحة. وجدنا أن وزن جسم الفئران في المجموعة التجريبية انخفض بشكل ملحوظ بالنسبة للمجموعة الضابطة وأن وزن الجسم تعافى ببطء بعد التوقف عن التعرض. بسبب الجرعة المثلى المستخدمة هنا ، لم يلاحظ أي وفيات في الفئران المع?...

Watch this Scientific Journal Video about A Silicosis Mouse Model Established by Repeated Inhalation of Crystalline Silica Dust at JoVE.com

A Silicosis Mouse Model Established by Repeated Inhalation of Crystalline Silica Dust

يصف هذا البروتوكول طريقة لإنشاء نموذج فأر من السحار السيليكي من خلال التعرض المتكرر لمعلقات السيليكا عن طريق التنقيط الأنفي. يمكن لهذا النموذج أن يحاكي بكفاءة وسهولة ومرونة العملية المرضية لداء السيليكات البشري مع قابلية عالية للتكرار والاقتصاد.

نموذج فأر السحار السيليسي الذي تم إنشاؤه عن طريق الاستنشاق المتكرر لغبار السيليكا البلوري

Silicosis can be caused by exposure to respiratory crystalline silica dust (CSD) in an industrial environment. The pathophysiology, screening, and ...

في نموذج السحار السيليسي للفأر الموصوف الناتج عن التسريب داخل الليزر لغبار السيليكا البلوري ، قام كل تعليق CSD عدة مرات بمحاكاة حدوث وتطور السحار السيليسي البشري إلى حد كبير. هذه الطريقة هي توفير الوقت وتوفير المستوى ، وكذلك عملية وفعالة. علاوة على ذلك ، لا يسبب أي إصابة ميكانيكية في الجهاز التنفسي العلوي بسبب العملية.يمكن أيضا استخدام هذه الطريقة لإعداد نماذج مرضية للفيروسات والبكتيريا وما إلى ذلك. سيوضح الإجراء Hangbing Cao ، وهو طالب في درجة الماجستير من مختبري ، ماهر في إعداد نموذج فأر السحار السيليسي. ابدأ بتحضير غبار السيليكا البلوري أو CSD قبل يوم واحد على الأقل من إعطاء قطرات الأنف.للقيام بذلك ، طحن السيليكا في هاون العقيق لمدة نصف ساعة. للتحقق من حجم الجسيمات وشكلها ، قم بإعداد العينة لمسح المجهر الإلكتروني أو SEM باستخدام شريط موصل لربط جزيئات السيليكون. باستخدام مجفف الشعر ، قم بتفجير الجسيمات غير الملتصقة بإحكام برفق قبل الشروع في التقاط الصورة.بعد ذلك ، قم بخلط السيليكا المطحونة والمحلول الملحي المعقم بتركيز 20 ملليغرام لكل ملليلتر باستخدام شاكر بالموجات فوق الصوتية. أخيرا ، دوامة تعليق CSD المعدة لمدة 10 ثوان. إدارة 50 ميكرولتر من CSD إلى الفأر المخدر عن طريق التنقيط الأنفي لمدة أربع إلى ثماني ثوان.عالج ماوس التحكم بكمية متساوية من المحلول الملحي ، ثم أمسك جسم الماوس براحة اليد ، واضغط على الجلد على الجزء الخلفي من الرقبة بالإبهام والسبابة أثناء تثبيت الأطراف الخلفية للفأر بالأصابع الأخرى. اضغط على منطقة ضربات قلب الماوس برفق بإصبع السبابة الآخر من خمس إلى 10 مرات لمدة خمس ثوان. سخني أنسجة الرئة المدمجة في البارافين على طبق ساخن عند 60 درجة مئوية لأكثر من أربع ساعات.لإزالة الشمع وترطيب قسم البارافين ، انقع الشريحة في الزيلين لمدة 30 دقيقة مرتين ، ثم اغمس الشريحة بالتتابع لمدة خمس دقائق في كل منهما في الإيثانول اللامائي 95٪ 85٪ و 75٪ ، وأخيرا ، في الماء منزوع الأيونات ، ثم ضع الشريحة في دلو تلطيخ الهيماتوكسيلين لمدة 10 دقائق قبل شطفها برفق تحت الماء الجاري لمدة خمس دقائق. اغمسه في دلو تلطيخ eosin لمدة 10 ثوان. بعد تجفيف العينة بنسبة 75٪ 85٪ 95٪ والإيثانول اللامائي لمدة خمس دقائق لكل منهما ، قم بمسح قسم الأنسجة عن طريق غمره في الزيلين لمدة خمس دقائق ، وختمه بحوالي 60 ميكرولترا من قطرات الراتنج المحايدة.ضع شريحة الغطاء بعناية فوق القسم. بالنسبة لتلطيخ ماسون ، قم بتلطيخ عينات البارافين منزوعة الشمع والرطبة باستخدام الهيماتوكسيلين الطازج بنسبة 50٪ Weigert لمدة 10 دقائق ، ثم بعد نقع الأنسجة في تسييل الإيثانول الحمضي لمدة 10 ثوان ، اشطف الشريحة برفق بالماء الجاري لتزرق النوى. بعد ذلك ، قم بتلطيخ العينة بقطرات من محلول تلطيخ أحمر لمدة سبع دقائق ، واغسلها بمحلول عمل حمض الهيدروكلوريك بنسبة 30٪ لمدة دقيقة واحدة.بعد غمس الشريحة في 95٪ كحول لمدة 20 ثانية ، قم بتجفيف العينة بالإيثانول اللامائي لمدة ثانية إلى ثلاث ثوان مرتين ، وكما هو موضح من قبل ، قم بمسح العينة وختمها. بالنسبة لتلطيخ سيريوس الأحمر ، تسلل إلى القسم منزوع الشمع والرطب لمدة ساعة واحدة باستخدام محلول تلطيخ سيريوس الأحمر ، ثم تلطيخ نوى الخلية لمدة ثماني إلى 10 دقائق بمحلول تلطيخ الهيماتوكسلين ماير. اشطفه برفق تحت الماء الجاري لمدة 10 دقائق قبل تجفيف الشريحة وتنظيفها وإغلاقها.تسلل إلى عينة البارافين منزوعة الشمع والرطبة ب 30 ملليلتر من ثلاثة ملليغرام لكل ملليلتر من محلول استرجاع مستضد EDTA. قم بغلي العينة لمدة 20 إلى 30 دقيقة قبل غسلها بالماء منزوع الأيونات واحتضانها في PBST لمدة خمس دقائق. انقع العينة لمدة 15 دقيقة بمحلول بيروكسيد الهيدروجين الطازج 0.3٪ ، واغسلها ثلاث مرات لمدة خمس دقائق لكل منها باستخدام PBST.قم باختراق غشاء العينة لمدة 15 دقيقة بمحلول 0.3٪ Triton 100 ، وكتلته باستخدام 30 إلى 40 ميكرولتر من 5٪ من ألبومين مصل الأبقار أو BSA لمدة ساعة واحدة. بعد إزالة محلول الحجب ، أضف الأجسام المضادة الأولية المخففة بشكل مناسب NF-kappa B و CD-68 ، واحتضان العينة طوال الليل عند درجتين إلى ثماني درجات مئوية في صندوق مبلل IHC منزلق مجهري. في اليوم التالي ، بعد نقل العينة إلى درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة ، اغسلها ثلاث مرات لمدة خمس دقائق لكل منها باستخدام PBST.احتضان العينة لمدة ساعة واحدة في بيروكسيديز الفجل المضاد للأرانب المسمى الأجسام المضادة الثانوية في درجة حرارة الغرفة. بعد الحضانة ، اغسل العينات مرة أخرى ثلاث مرات لمدة خمس دقائق لكل منها باستخدام PBST ، ثم احتضان العينة بركيزة DAB المقابلة للإنزيم المسمى بالجسم المضاد لمدة خمس إلى 20 دقيقة. بعد إخماد التفاعل بالماء منزوع الأيونات ، قم بتلطيخ العينة لمدة 30 ثانية باستخدام الهيماتوكسيلين من Weigert.شطفه تحت الماء الجاري لمدة دقيقة واحدة ، وتجفيف ، ومسح ، وختم الأنسجة. قبل الشروع في تحليل اللطخة الغربية ، قم بتجانس الأنسجة باستخدام محلول عمل RIPA على الجليد لمدة خمس دقائق باستخدام مطحنة كهربائية محمولة باليد. احتضان لمدة ساعة واحدة على الجليد مع الهز ، وأجهزة الطرد المركزي المجانسة في 14،800 غرام لمدة 15 دقيقة عند أربع درجات مئوية.اجمع المادة الطافية ، وحدد تركيز البروتين باستخدام مجموعة فحص البروتين BCA. أضف 20 ميكرولترا من مخزن التحميل المؤقت 5X إلى المادة الطافية ، ثم سخني ستة ميكروغرام لكل ميكرولتر من محلول تخزين البروتين المحضر باستخدام RIPA في حمام معدني عند 100 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. قم بتخزين 100 ميكرولتر من محلول البروتين في كل أنبوب عند 80 درجة مئوية تحت الصفر.بالنسبة للرحلان الكهربائي ، قم بتخفيف الحصص إلى 2 إلى 3 ميكروغرام لكل ميكرولتر باستخدام RIPA lysate ، ثم أضف 20 ميكروجراما من العينة لكل بئر لتشغيل الجل. انقل البروتين إلى غشاء PVDF المنشط مسبقا بالميثانول لمدة 20 ثانية باستخدام طريقة النقل الرطب مع تيار 400 مللي أمبير لمدة ساعة إلى ساعتين. بعد غسل الغشاء خمس مرات لمدة خمس دقائق لكل منها بمحلول PBST ، قم بحظره باستخدام 5٪ BSA أو الحليب منزوع الدسم لمدة ساعة واحدة.اغمر الشرائط في محلول الأجسام المضادة الأساسي الذي يحتوي على NF-kappa B وبيتا أكتين المخفف بنسبة 5٪ BSA. رج الشرائط برفق طوال الليل عند درجتين إلى ثماني درجات مئوية قبل غسلها باستخدام PBST. بعد ذلك ، احتضان الشرائط ، أولا في الجسم المضاد الثانوي المخفف لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة مع اهتزاز لطيف ، ثم مع مطور التلألؤ الكيميائي المحسن لمدة ثلاث دقائق.قم بتعريض الشريط لجهاز تصوير جل لمدة 20 ثانية وقم بقياس القيمة الرمادية للشريط لتقييم مستوى البروتين بواسطة برنامج النظام. أظهرت صور SEM ل CSD أن الجسيمات كانت غير منتظمة الشكل. أظهر تلطيخ سيريوس الأحمر الذي تم إجراؤه لقياس ترسب الكولاجين أن تطور التليف الرئوي في الفئران قد تسارع بشكل كبير عند التعرض ل CSD لمدة شهر واحد.كشف الفحص المجهري المستقطب عن ثلاثة أنواع مختلفة من ألياف الكولاجين ، منها ألياف الكولاجين من النوع الأول الموضحة باللون الأحمر هي عامل خطر للإصابة بالسليط السيليسي ، ومع ذلك ، لم يتم العثور على تليف كبير في مجموعة المركبات. وقد أشير إلى ذلك أيضا من خلال درجات التليف ذات الصلة. أظهر تلطيخ أنسجة رئة الفأر المعالجة ب CSD عقيدات السيليكا النموذجية التي تتميز بنخر مسال بعد البلعمة من CSD في المركز المحاط بالبلاعم في الأطراف.أظهر تلطيخ ماسون أيضا أن العقيدات كانت غنية ب CSD مصحوبة بالتليف. كشف تلطيخ الكيمياء المناعية ل CD-68 عن وجود واسع للبلاعم في أنسجة الرئة. أظهر الفحص المجهري الضوئي المستقطب أن هذه الضامة قد ابتلعت CSD ، مما تسبب في إصابة شديدة في الرئة.أظهر تلطيخ الكيمياء الهيستولوجية المناعية تلطيخا أعلى ل NF-kappa B ، مما يشير إلى استجابة التهابية أعلى في المجموعة المعالجة ب CSD مقارنة بمجموعة المركبات. أظهرت اللطخة الغربية التمثيلية أيضا أن الفئران المعالجة ب CSD لديها تعبير NF-kappa B أعلى في الرئة ، وكان الفرق في التعبير بين المجموعتين كبيرا. لتجنب انسداد الجهاز التنفسي وتعزيز الانتعاش التنفسي ، يجب تدليك منطقة قلب الفأر بلطف من خمس إلى 10 مرات كما هو موضح بعد فترة خمس ثوان.يمكن لهذا النموذج استكشاف بعض الآليات الأساسية لداء السيليكاتس والمساعدة في فحص الأدوية العلاجية ، إلى جانب وضع معايير حاسمة مثل الجرعة والمدة. توفر هذه التقنية وسيلة مريحة وفعالة واقتصادية لتعريض نماذج الفئران للجسيمات سواء كان ذلك يضيف البكتيريا. يمكن أن تساعد مراقبة سلوك الفئران في تحديد الآثار المحتملة لاستنشاق الجسيمات.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

نموذج الفأر من في الرحم زراعة

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Mouse Model of Surgically-induced Endometriosis by Auto-transplantation of Uterine Tissue

نموذج الفأر من بطانة الرحم جراحيا ، الناجمة عن زرع الذاتية لأنسجة الرحم

Endometriosis is a chronic, painful disease whose etiology remains unknown. Furthermore, treatment of endometriosis can require laparoscopic removal of ...

Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

نموذج الفأر من MCAO داخل اللمعة: الدماغي التقييم عائق من قبل تلوين البنفسج الكريزيل

Stroke is the third  cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic  stroke accounts for approximately 80% of all strokes. ...

MRI Mapping of Cerebrovascular Reactivity via Gas Inhalation Challenges

MRI رسم خرائط الدماغية التفاعلية عبر استنشاق الغاز التحديات

The brain is a spatially heterogeneous and temporally dynamic organ, with different regions requiring different amount of blood supply at different time. ...

Dry Powder and Nebulized Aerosol Inhalation of Pharmaceuticals Delivered to Mice Using a Nose-only Exposure System

مسحوق جاف ومرذذ الهباء استنشاق الصيدلة تسليمها الى الفئران باستخدام فقط الأنف نظام التعرض

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and ...

Repeated Measurement of Respiratory Muscle Activity and Ventilation in Mouse Models of Neuromuscular Disease

القياس المتكرر التنفسي آخر العضلات والتهوية في نماذج الماوس من مرض عصبي عضلي

Accessory respiratory muscles help to maintain ventilation when diaphragm function is impaired. The following protocol describes a method for repeated ...

Generation of a Chronic Obstructive Pulmonary Disease Model in Mice by Repeated Ozone Exposure

جيل طراز انسداد الشعب الهوائية المزمن في الفئران بالتعرض للأوزون المتكررة

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is characterized by persistent airflow limitation and lung parenchymal destruction. It has a very high ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

متساوي القياس كونتراكتيليتي القياس الشريان المساريقي العلوي الماوس باستخدام أسلاك ميوجرافي

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Vinyl Chloride and High-Fat Diet as a Model of Environment and Obesity Interaction

كلوريد الفينيل وحمية عاليه الدسم كنموذج للتفاعل مع البيئة والسمنة

Vinyl chloride (VC), an abundant environmental contaminant, causes steatohepatitis at high levels, but is considered safe at lower levels. Although ...

Assessment of the Acute Inhalation Toxicity of Airborne Particles by Exposing Cultivated Human Lung Cells at the Air-Liquid Interface

تقييم سمية الاستنشاق الحاد للجسيمات المحمولة جواً من خلال كشف خلايا الرئة البشرية المزروعة في واجهة الهواء والسائل

Here, we present a specially designed modular in vitro exposure system that enables the homogenous exposure of cultivated human lung cells at the ALI to ...