Name: a silicosis mouse model established by repeated inhalation of crystalline silica dust
Uploaded: 2023-01-06T14:40:00
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이 연구는 안후이성 대학 시너지 혁신 프로그램(GXXT-2021-077)과 안후이 과학기술 대학 대학원 혁신 기금(2021CX2120)의 지원을 받았습니다.

모든 절차는 미국 국립보건원(National Institutes of Health)의 실험동물 관리 및 사용 가이드(NIH Publication No. 8023, 1978년 개정)의 지침을 따랐으며 안후이 과학기술대학 의과대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받았습니다.
1. 쥐 관리 및 먹이 주기
<ol><li>건강한 C57BL/6 수컷 마우스 20마리를 1:1 비율로 실험 그룹 또는 비히클 그룹에 할당합니다. 생쥐를 1주일 ?...

<ol>
	<li>Olsson, A., Kromhout, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occupational+cancer+burden:+the+contribution+of+exposure+to+process-generated+substances+at+the+workplace.">Occupational cancer burden: the contribution of exposure to process-generated substances at the workplace.</a> Molecular Oncology. 15 (3), 753-763 (2021).</li><li>The Lancet Respiratory. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+world+is+failing+on+silicosis.">The world is failing on silicosis.</a> The Lancet. Respiratory Medicine. 7 (4), 283 (2019).</li><li>Weissman, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+massive+fibrosis:+An+overview+of+the+recent+literature.">Progressive massive fibrosis: An overview of the recent literature.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 240, 108232 (2022).</li><li>Lancet, C. C., Yu, I. T., Chen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silicosis.">Silicosis.</a> Lancet. 379 (9830), 2008-2018 (2012).</li><li>Mazurek, J. M., Wood, J., Blackley, D. J., Weissman, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coal+workers'+pneumoconiosis-attributable+years+of+potential+life+lost+to+life+expectancy+and+potential+life+lost+before+age+65+years+-+United+States,+1999-2016.">Coal workers' pneumoconiosis-attributable years of potential life lost to life expectancy and potential life lost before age 65 years - United States, 1999-2016.</a> MMWR. Morbidity and Mortality Weekly Report. 67 (30), 819-824 (2018).</li><li>Voelker, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Black+Lung+resurgence+raises+new+challenges+for+coal+country+physicians.">Black Lung resurgence raises new challenges for coal country physicians.</a> JAMA. 321 (1), 17-19 (2019).</li><li>Nakashima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+role+of+heme+oxygenase-1+in+silica-induced+lung+injury.">Regulatory role of heme oxygenase-1 in silica-induced lung injury.</a> Respiratory Research. 19 (1), 144 (2018).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minute+cellular+nodules+as+early+lesions+in+rats+with+silica+exposure+via+inhalation.">Minute cellular nodules as early lesions in rats with silica exposure via inhalation.</a> Veterinary Sciences. 9 (6), 251 (2022).</li><li>Salehi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+responses+in+C3H/HeJ+mice+following+nose-only+inhalation+exposure+to+different+sizes+of+beryllium+metal+particles.">Immunological responses in C3H/HeJ mice following nose-only inhalation exposure to different sizes of beryllium metal particles.</a> Journal of Applied Toxicology. 29 (1), 61-68 (2009).</li><li>Yang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emodin+suppresses+silica-induced+lung+fibrosis+by+promoting+Sirt1+signaling+via+direct+contact.">Emodin suppresses silica-induced lung fibrosis by promoting Sirt1 signaling via direct contact.</a> Molecular Medicine Reports. 14 (5), 4643-4649 (2016).</li><li>Cornell, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraffin+embedding+and+thin+sectioning+of+microbial+colony+biofilms+for+microscopic+analysis.">Paraffin embedding and thin sectioning of microbial colony biofilms for microscopic analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), e57196 (2018).</li><li>Li, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+suitable+silicosis+mouse+model+was+constructed+by+repeated+inhalation+of+silica+dust+via+nose.">A suitable silicosis mouse model was constructed by repeated inhalation of silica dust via nose.</a> Toxicology Letters. 353, 1-12 (2021).</li><li>Mu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coal+dust+exposure+triggers+heterogeneity+of+transcriptional+profiles+in+mouse+pneumoconiosis+and+Vitamin+D+remedies.">Coal dust exposure triggers heterogeneity of transcriptional profiles in mouse pneumoconiosis and Vitamin D remedies.</a> Particle and Fibre Toxicology. 19 (1), 7 (2022).</li><li>Kato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muc1+deficiency+exacerbates+pulmonary+fibrosis+in+a+mouse+model+of+silicosis.">Muc1 deficiency exacerbates pulmonary fibrosis in a mouse model of silicosis.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 493 (3), 1230-1235 (2017).</li><li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD4+CD25+Foxp3++regulatory+T+cells+depletion+may+attenuate+the+development+of+silica-induced+lung+fibrosis+in+mice.">CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells depletion may attenuate the development of silica-induced lung fibrosis in mice.</a> PLoS One. 5 (11), 15404 (2010).</li><li>Mansouri, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stromal+cell+exosomes+prevent+and+revert+experimental+pulmonary+fibrosis+through+modulation+of+monocyte+phenotypes.">Mesenchymal stromal cell exosomes prevent and revert experimental pulmonary fibrosis through modulation of monocyte phenotypes.</a> JCI Insight. 4 (21), 128060 (2019).</li><li>Ohtsuka, Y., Wang, X. T., Saito, J., Ishida, T., Munakata, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+linkage+analysis+of+pulmonary+fibrotic+response+to+silica+in+mice.">Genetic linkage analysis of pulmonary fibrotic response to silica in mice.</a> The European Respiratory Journal. 28 (5), 1013-1019 (2006).</li></ol>

규폐증 마우스 모델은 규폐증의 발병 기전과 치료를 연구하는 데 매우 중요합니다. 이 프로토콜은 반복적인 비강 노출을 통해 마우스에서 규폐증 모델을 제조하는 방법을 설명합니다. 이 방법을 사용하면 다양한 노출 시간에 의해 유도되는 규폐증의 병리학적 특성을 연구할 수 있습니다. 생쥐를 인공호흡기에 마취시키고 호흡수를 모니터링했다. 초기의 짧고 빠른 호흡 속도는 시간이 지남에 따?...

작업자는 필연적으로 불규칙한 결정질 실리카 분진(CSD)에 노출되며, 이는 흡입될 수 있으며 광업, 도자기, 유리, 석영 가공 및 콘크리트를 포함한 다양한 직업 환경에서 더 독성이 있습니다 1,2. 규폐증으로 알려진 만성 분진 흡입 질환은 진행성 폐 섬유증을 유발한다3. 역학 자료에 따르면, 규폐증의 발병률은 지난 수십 년 동안 전 세계적으로 감소해 왔지만, 최근 몇 년 동안 증가하여 젊은 사람들에게 영향을 미치고 있다 4,5,6. 규폐증의 근본적인 메커니즘은 잠복기 시작과 장기간의 잠복기로 인해 과학 연구에 중요한 도전을 제시합니다. 규폐증이 어떻게 발생하는지는 아직 알려져 있지 않습니다. 더욱이, 현재의 어떤 약물도 규폐증의 진행을 막고 폐섬유증을 역전시킬 수 없습니다.
규폐증에 대한 현재 마우스 모델은 CSD의 혼합 현탁액의 기관 섭취를 포함합니다. 예를 들어, 마취 후 자궁경부 기관 외상을 채택하여 폐에 CSD를 투여하는 것은 염료 분진에 대한 반복적인 인체 노출을 준수하지 않는다7. 주변 먼지에 대한 노출이 개인에게 미치는 영향은 이 독성 물질의 환경 농도를 보다 정확하게 반영하는 에어로졸 형태의 CSD에 노출시켜 연구할 수 있습니다8. 그러나 환경적 CSD는 생쥐 코의 독특한 생리학적 구조로 인해 단순히 폐로 직접 흡입될 수 없다9. 더욱이, 이 기술과 관련된 장비는 고가이기 때문에 연구자들은 쥐 규폐증 모델10을 재평가하게 되었습니다. 2주 이내에 비강을 통해 CSD 현탁액을 5회 흡입함으로써 규폐증의 동적 모델을 구축할 수 있었습니다. 이 모델은 사용하기 쉬우면서도 일관되고 안전합니다. 이 연구는 생쥐에서 CSD의 반복적인 흡입을 허용한다는 점에 유의하는 것이 중요합니다. 이 절차를 통해 생성된 마우스 규폐증 모델은 연구 요구 사항에 더 도움이 될 것으로 예상됩니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 mL tube</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BS-05-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% formalin neutral fixative</td>
			<td>Nanchang Yulu Experimental Equipment Co.</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Illustrator</td>
			<td>Adobe&#160;</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol disinfectant</td>
			<td>Xintai Kanyuan Disinfection Products Co.</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD68</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab125212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate antigen retrieval solution</td>
			<td>biosharp life science</td>
			<td>BL619A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAB chromogenic kit</td>
			<td>NJJCBio</td>
			<td>W026-1-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl benzene</td>
			<td>West Asia Chemical Technology (Shandong) Co</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enhanced BCA protein assay kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>P0009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin (H&#38;E)</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>C0105S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP substrate</td>
			<td>Millipore Corporation</td>
			<td>P90720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP-conjugated Affinipure Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)</td>
			<td>Proteintech</td>
			<td>Sa00001-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iceacetic acid</td>
			<td>West Asia Chemical Technology (Shandong) Co</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>R510-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson&#39;s Trichrome stain kit</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Macklin</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtubes</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AXYMCT150CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NF-&#954;B p65</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>8242S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oscillatory thermostatic metal bath</td>
			<td>Abson</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin embedding machine</td>
			<td>Precision (Changzhou) Medical Equipment Co.</td>
			<td>PBM-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Slicer</td>
			<td>Jinhua Kratai Instruments Co.</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer (PBS)&#160;</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BL601A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological saline&#160;</td>
			<td>The First People&#39;s Hospital of Huainan City</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMSF</td>
			<td>Beyotime Biotechnological</td>
			<td>ST505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarized light microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision balance</td>
			<td>Acculab</td>
			<td>ALC-110.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism7.0</td>
			<td>GraphPad&#160;</td>
			<td>Version 7.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVDF membranes</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>3010040001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RIPA lysis buffer</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>P0013B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RODI IOT intelligent multifunctional water purification system</td>
			<td>RSJ</td>
			<td>RODI-220BN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scilogex SK-D1807-E 3D Shaker</td>
			<td>Scilogex</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS-PAGE gel preparation kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>P0012A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon dioxid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>#BCBV6865</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sirius red staining</td>
			<td>Nanjing SenBeiJia Biological Technology Co., Ltd.</td>
			<td>181012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal anesthesia machine</td>
			<td>Anhui Yaokun Biotech Co., Ltd.</td>
			<td>ZL-04A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universal Pipette Tips (0.1&#8211;10 &#181;L)</td>
			<td>KIRGEN</td>
			<td>KG1011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universal Pipette Tips (100&#8211;1000 &#181;L)</td>
			<td>KIRGEN</td>
			<td>KG1313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universal Pipette Tips (1&#8211;200 &#181;L)</td>
			<td>KIRGEN</td>
			<td>KG1212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex&#160;mixer&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS GeminiSEM 500</td>
			<td>Zeiss Germany</td>
			<td>SEM 500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-actin</td>
			<td>Bioss</td>
			<td>bs-0061R</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a silicosis mouse model established by repeated inhalation of crystalline silica dust

규폐증은 산업 환경에서 호흡기 결정질 실리카 분진(CSD)에 노출되어 발생할 수 있습니다. 인간의 규폐증의 병태생리학, 스크리닝 및 치료는 모두 마우스 규폐증 모델을 사용하여 광범위하게 연구되었습니다. 쥐가 CSD를 폐로 반복적으로 흡입하게 함으로써 쥐는 인간 규폐증의 임상 증상을 모방할 수 있습니다. 이 방법론은 시간과 출력 측면에서 실용적이고 효율적이며 수술로 인해 상부 호흡기에 기계적 손상을 일으키지 않습니다. 또한, 이 모델은 규폐증의 급성/만성 변형 과정을 성공적으로 모방할 수 있습니다. 주요 절차는 다음과 같습니다. 멸균된 1-5μm CSD 분말을 완전히 분쇄하고, 식염수에 현탁시키고, 초음파 수조에 30분 동안 분산시켰다. 이소플루란 유도 마취 하에 있는 마우스는 약 2초 동안 얕은 빠른 호흡에서 깊고 느린 흡인으로 전환했습니다. 쥐를 손바닥에 놓고 엄지손가락 끝이 쥐 턱의 입술 가장자리에 부드럽게 닿아 기도를 곧게 펴도록 했습니다. 숨을 내쉴 때마다 생쥐는 한쪽 콧구멍을 통해 실리카 현탁액을 한 방울씩 들이마시고 4-8초 이내에 이 과정을 완료했습니다. 생쥐의 호흡이 안정된 후, 흡입된 CSD가 기침을 하지 않도록 가슴을 쓰다듬고 애무했습니다. 그런 다음 쥐를 케이지로 되돌려 보냈습니다. 결론적으로, 이 모델은 상부 호흡기에서 말단 세기관지 및 폐포에 이르기까지 폐로 들어가는 작은 입자의 전형적인 생리학적 통로를 따라 CSD를 정량화할 수 있습니다. 또한 업무로 인한 직원의 반복적인 노출을 복제할 수 있습니다. 이 모델은 한 사람이 수행할 수 있으며 고가의 장비가 필요하지 않습니다. 높은 반복성으로 인간 규폐증의 질병 특징을 편리하고 효과적으로 시뮬레이션합니다.

마우스에서 규폐증의 잠재적 발병 기전은 제안된 방법을 사용하여 조사되었습니다. 실험군에 속한 쥐의 체중은 대조군에 비해 유의하게 감소했으며, 노출을 중단한 후 체중이 서서히 회복되는 것을 확인했다. 여기에 사용된 최적화된 용량으로 인해 이 실험에서 실리카에 노출된 마우스에서 사망률이 관찰되지 않았습니다. CSD에 대한 반복적인 비강 점적의 기술 로드맵은 (그림 1</s...

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A Silicosis Mouse Model Established by Repeated Inhalation of Crystalline Silica Dust

이 프로토콜은 비강 점적을 통해 실리카 현탁액에 반복적으로 노출되어 규폐증의 마우스 모델을 확립하는 방법을 설명합니다. 이 모델은 높은 반복성과 경제성으로 인간 규폐증의 병리학적 과정을 효율적이고 편리하며 유연하게 모방할 수 있습니다.

결정질 실리카 분진을 반복적으로 흡입하여 확립된 규폐증 마우스 모델

Silicosis can be caused by exposure to respiratory crystalline silica dust (CSD) in an industrial environment. The pathophysiology, screening, and ...

크리스탈 실리카 분진의 레이저 내 주입에 의해 생성된 설명된 마우스 규폐증 모델에서 모든 CSD 현탁액은 인간 규폐증의 발생 및 발달을 여러 번 시뮬레이션했습니다. 이 방법은 시간을 절약하고 수준을 절약할 뿐만 아니라 실용적이고 효과적입니다. 또한, 수술로 인한 상부 호흡기에 기계적 손상을 일으키지 않습니다.이 방법은 또한 바이러스, 박테리아 등의 질병 모델을 제조하는 데 사용할 수 있습니다. 이 절차를 시연하는 것은 규폐증 마우스 모델을 준비하는 데 능숙한 제 실험실의 석사 학년 학생인 Hangbing Cao입니다. 비강을 투여하기 최소 하루 전에 결정질 실리카 분진 또는 CSD를 준비하는 것으로 시작하십시오.이렇게하려면 마노 모르타르에서 실리카를 30 분 동안 갈아줍니다. 입자 크기와 모양을 확인하려면 실리콘 입자를 결합하기 위해 전도성 테이프를 사용하여 주사 전자 현미경 또는 SEM을 위한 샘플을 준비합니다. 헤어 드라이어를 사용하여 이미지 캡처를 진행하기 전에 단단히 결합되지 않은 입자를 부드럽게 불어냅니다.다음으로, 초음파 쉐이커를 사용하여 밀리리터당 20밀리그램의 농도로 분쇄된 실리카와 멸균 식염수를 혼합합니다. 마지막으로 준비된 CSD 서스펜션을 10초 동안 소용돌이칩니다. 마취된 쥐에게 50 마이크로리터의 CSD를 4-8초 동안 비강 점액을 통해 투여합니다.대조군 쥐에게 같은 양의 식염수를 투여한 다음 손바닥으로 쥐의 몸통을 잡고 엄지와 검지로 목 뒤쪽 피부를 꼬집고 다른 손가락으로 쥐의 뒷다리를 고정합니다. 다른 검지 손가락으로 마우스의 심장 박동 부위를 5초간 5-10회 부드럽게 누릅니다. 파라핀이 박힌 폐 조직을 섭씨 60도의 열판에 4시간 이상 가열합니다.파라핀 섹션을 왁스 해제하고 수화하려면 슬라이드를 크실렌에 30 분 동안 두 번 담근 다음 무수 95 % 85 % 및 75 % 에탄올에 각각 5 분 동안 슬라이드를 순차적으로 담그고 마지막으로 탈 이온수에 담근 다음 슬라이드를 헤마 톡실린 염색 양동이에 10 분 동안 넣고 흐르는 물에 5 분 동안 부드럽게 헹굽니다. 에오신 염색 양동이에 10초 동안 담그십시오. 샘플을 75%85%95% 및 무수 에탄올에서 각각 5분 동안 탈수한 후 자일렌에 5분 동안 담가 조직 부분을 청소하고 약 60마이크로리터의 중성 수지 방울로 밀봉합니다.덮개 슬라이드를 섹션 위에 조심스럽게 놓습니다. Masson 염색의 경우 탈왁스 및 수화 된 파라핀 샘플을 갓 준비한 50 % Weigert의 헤마톡실린 린으로 10 분 동안 염색 한 다음 조직을 산성 에탄올 액화에 10 초 동안 담근 후 흐르는 물로 슬라이드를 부드럽게 헹구어 핵 청색을 만듭니다. 다음으로, 7 분 동안 빨간 염색 용액의 방울로 샘플을 염색하고, 30 % 염산 작동 용액으로 1 분 동안 세척하십시오.슬라이드를 95% 알코올에 20초 동안 담근 후 샘플을 무수 에탄올로 1-3초 동안 두 번 탈수하고 이전에 설명한 대로 샘플을 투명하게 하고 밀봉합니다. 시리우스 레드 염색의 경우, 시리우스 레드 염색 용액으로 1시간 동안 탈왁스 및 수화 부분을 침투시킨 다음 Mayer 헤마톡슬린 염색 용액으로 8-10분 동안 세포핵을 염색합니다. 슬라이드를 탈수하고 청소하고 밀봉하기 전에 흐르는 물에 10분 동안 부드럽게 헹굽니다.탈왁스 및 수화된 파라핀 샘플에 3밀리리터당 3밀리그램의 EDTA 항원 회수 용액 30밀리리터를 침투시킵니다. 샘플을 20-30분 동안 끓인 후 탈이온수로 세척하고 PBST에서 5분 동안 배양합니다. 갓 준비한 0.3% 과산화수소 용액에 샘플을 15분 동안 담그고 PBST로 각각 5분씩 3회 세척합니다.0.3 % Triton 100 용액으로 15 분 동안 검체의 막을 투과시키고 30-40 마이크로 리터의 5 % 소 혈청 알부민 또는 BSA로 1 시간 동안 차단합니다. 차단 용액을 제거한 후 적절하게 희석된 1차 항체 NF-kappa B 및 CD-68을 추가하고 현미경 슬라이드 IHC 습식 상자에서 섭씨 2-8도에서 밤새 검체를 배양합니다. 다음날 샘플을 실온에 1시간 동안 옮긴 후 PBST로 각각 5분씩 3회 세척합니다.실온에서 토끼 항 마우스 양 고추 냉이 과산화 효소 표지 된 2 차 항체에서 샘플을 1 시간 동안 배양합니다. 배양 후, PBST로 각각 5분 동안 샘플을 다시 3회 세척한 다음, 효소 표지 항체에 해당하는 DAB 기질로 5-20분 동안 샘플을 배양합니다. 탈이온수로 반응을 담금질한 후 Weigert의 헤마톡실린으로 30초 동안 샘플을 대조염색합니다.흐르는 물에 1분 동안 헹구고 탈수하고 깨끗이 씻은 다음 티슈를 밀봉합니다. 웨스턴 블롯 분석을 진행하기 전에 휴대용 전기 그라인더를 사용하여 얼음 위에서 5분 동안 RIPA 작업 용액으로 조직을 균질화합니다. 흔들면서 얼음 위에서 1시간 동안 배양하고, 14, 800 G에서 4°C에서 15분 동안 균질액을 원심분리한다.상층액을 채취하고 BCA 단백질 분석 키트로 단백질 농도를 측정합니다. 상층액에 20 마이크로 리터의 5X 로딩 버퍼를 첨가 한 다음 RIPA로 제조 된 마이크로 리터 당 6 마이크로 그램의 단백질 저장 용액을 섭씨 100도의 금속 수조에서 20 분 동안 가열합니다. 단백질 용액 100마이크로리터를 섭씨 영하 80도의 각 튜브에 보관합니다.전기영동을 위해 분취액을 RIPA 용해물로 마이크로리터당 2-3마이크로그램으로 희석한 다음 웰당 20마이크로그램의 샘플을 추가하여 겔을 실행합니다. 1-2시간 동안 400밀리암페어 전류의 습식 전달 방법을 사용하여 20초 동안 메탄올로 사전 활성화된 PVDF 멤브레인으로 단백질을 옮깁니다. PBST 용액으로 각각 5분씩 5회 세척한 후 5% BSA 또는 탈지유로 1시간 동안 차단합니다.5% BSA로 희석한 NF-kappa B와 베타 액틴을 함유한 1차 항체 용액에 스트립을 담그십시오. 스트립을 섭씨 2도에서 8도에서 밤새 부드럽게 흔든 후 PBST로 씻습니다. 다음으로, 스트립을 먼저 희석된 2차 항체에 넣고 실온에서 1시간 동안 부드럽게 흔든 다음 강화된 화학발광 현상액으로 3분 동안 배양합니다.스트립을 겔 이미저에 20초 동안 노출시키고 스트립의 회색 값을 측정하여 시스템 소프트웨어로 단백질 수준을 평가합니다. CSD의 SEM 이미지는 입자가 불규칙한 모양을 가지고 있음을 보여주었습니다. 콜라겐 침착을 측정하기 위해 수행된 Sirius 적색 염색은 마우스에서 폐 섬유증의 진행이 한 달 동안 CSD에 노출되었을 때 현저하게 가속화되었음을 보여주었습니다.편광 현미경 검사에서 세 가지 유형의 콜라겐 섬유가 발견되었으며, 그 중 빨간색으로 표시된 1형 콜라겐 섬유는 규폐증의 위험 요소이지만 차량 그룹에서는 유의미한 섬유화가 발견되지 않았습니다. 이것은 또한 각각의 섬유증 점수에 의해 나타났다. CSD를 처리한 쥐 폐 조직의 HE 염색은 주변부의 대식세포로 둘러싸인 중앙에서 CSD의 식세포작용 후 액화 괴사를 특징으로 하는 전형적인 실리카 결절을 보여주었습니다.Masson 염색은 또한 결절이 섬유증을 동반한 CSD로 풍부하다는 것을 보여주었습니다. CD-68의 면역조직화학 염색은 폐 조직에 대식세포가 광범위하게 존재한다는 것을 추가로 밝혀냈습니다. 편광 현미경 검사는 이러한 대식세포가 CSD를 섭취하여 심각한 폐 손상을 유발한다는 것을 보여주었습니다.면역조직화학 염색은 NF-kappa B 염색이 더 높았으며, 이는 비히클 그룹보다 CSD 치료군에서 더 높은 염증 반응을 나타냈습니다. 대표적인 웨스턴 블롯은 또한 CSD를 처리한 마우스가 폐에서 NF-kappa B 발현이 더 높았으며 두 그룹 간의 발현 차이가 유의하다는 것을 보여주었습니다. 호흡 폐색을 피하고 호흡 회복을 촉진하려면 5초 후 입증된 대로 쥐의 심장 부위를 5-10회 부드럽게 마사지해야 합니다.이 모델은 규폐증의 몇 가지 근본적인 메커니즘을 탐구하고 치료 약물 스크리닝을 돕고 투여량 및 기간과 같은 중요한 매개변수를 설정할 수 있습니다. 이 기술은 박테리아 추가 여부에 관계없이 마우스 모델을 미립자 물질에 노출시킬 수 있는 편리하고 효과적이며 경제적인 수단을 제공합니다. 쥐의 행동을 모니터링하면 미립자 물질 흡입의 잠재적 영향을 결정하는 데 도움이 될 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

의 마우스 모델 Utero에 이식

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

연구

의학

Mouse Model of Surgically-induced Endometriosis by Auto-transplantation of Uterine Tissue

자궁의 자동 이식하여 수술 유발 Endometriosis의 마우스 모델

Endometriosis is a chronic, painful disease whose etiology remains unknown. Furthermore, treatment of endometriosis can require laparoscopic removal of ...

Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

Intraluminal MCAO의 마우스 모델 : Cresyl 보라 착색에 의한 뇌 경색 평가

Stroke is the third  cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic  stroke accounts for approximately 80% of all strokes. ...

MRI Mapping of Cerebrovascular Reactivity via Gas Inhalation Challenges

가스 흡입 도전을 통해 뇌 혈관 반응성의 MRI 매핑

The brain is a spatially heterogeneous and temporally dynamic organ, with different regions requiring different amount of blood supply at different time. ...

Dry Powder and Nebulized Aerosol Inhalation of Pharmaceuticals Delivered to Mice Using a Nose-only Exposure System

건조 분말과 제약의 분무 에어로졸 흡입은 코 전용 노출 시스템을 사용하여 마우스 배달

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and ...

Repeated Measurement of Respiratory Muscle Activity and Ventilation in Mouse Models of Neuromuscular Disease

신경 근육 질환의 마우스 모델에서 호흡 근육 활동 및 환기의 반복 측정

Accessory respiratory muscles help to maintain ventilation when diaphragm function is impaired. The following protocol describes a method for repeated ...

Generation of a Chronic Obstructive Pulmonary Disease Model in Mice by Repeated Ozone Exposure

반복된 오존 노출에 의해 쥐에 만성 폐쇄성 폐 질환 모델의 생성

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is characterized by persistent airflow limitation and lung parenchymal destruction. It has a very high ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Vinyl Chloride and High-Fat Diet as a Model of Environment and Obesity Interaction

환경과 비만 상호 작용의 모델로 비닐 염화물 과 고지방 다이어트

Vinyl chloride (VC), an abundant environmental contaminant, causes steatohepatitis at high levels, but is considered safe at lower levels. Although ...

Assessment of the Acute Inhalation Toxicity of Airborne Particles by Exposing Cultivated Human Lung Cells at the Air-Liquid Interface

공기-액체 인터페이스에서 재배된 인간 폐 세포를 노출하여 공기 중 입자의 급성 흡입 독성 평가

Here, we present a specially designed modular in vitro exposure system that enables the homogenous exposure of cultivated human lung cells at the ALI to ...