Name: a silicosis mouse model established by repeated inhalation of crystalline silica dust
Uploaded: 2023-01-06T14:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Silicosis Mouse Model Established by Repeated Inhalation of Crystalline Silica Dust at JoVE.com

Это исследование было поддержано Инновационной программой университетской синергии провинции Аньхой (GXXT-2021-077) и Инновационным фондом выпускников Аньхойского университета науки и технологий (2021CX2120).

Все процедуры соответствовали рекомендациям Руководства Национальных институтов здравоохранения по уходу и использованию лабораторных животных (публикация NIH No 8023, пересмотренная в 1978 году) и были одобрены Комитетом по уходу за животными и их использованию при Медицинской школе Аньх...

<ol>
	<li>Olsson, A., Kromhout, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occupational+cancer+burden:+the+contribution+of+exposure+to+process-generated+substances+at+the+workplace.">Occupational cancer burden: the contribution of exposure to process-generated substances at the workplace.</a> Molecular Oncology. 15 (3), 753-763 (2021).</li><li>The Lancet Respiratory. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+world+is+failing+on+silicosis.">The world is failing on silicosis.</a> The Lancet. Respiratory Medicine. 7 (4), 283 (2019).</li><li>Weissman, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+massive+fibrosis:+An+overview+of+the+recent+literature.">Progressive massive fibrosis: An overview of the recent literature.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 240, 108232 (2022).</li><li>Lancet, C. C., Yu, I. T., Chen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silicosis.">Silicosis.</a> Lancet. 379 (9830), 2008-2018 (2012).</li><li>Mazurek, J. M., Wood, J., Blackley, D. J., Weissman, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coal+workers'+pneumoconiosis-attributable+years+of+potential+life+lost+to+life+expectancy+and+potential+life+lost+before+age+65+years+-+United+States,+1999-2016.">Coal workers' pneumoconiosis-attributable years of potential life lost to life expectancy and potential life lost before age 65 years - United States, 1999-2016.</a> MMWR. Morbidity and Mortality Weekly Report. 67 (30), 819-824 (2018).</li><li>Voelker, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Black+Lung+resurgence+raises+new+challenges+for+coal+country+physicians.">Black Lung resurgence raises new challenges for coal country physicians.</a> JAMA. 321 (1), 17-19 (2019).</li><li>Nakashima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+role+of+heme+oxygenase-1+in+silica-induced+lung+injury.">Regulatory role of heme oxygenase-1 in silica-induced lung injury.</a> Respiratory Research. 19 (1), 144 (2018).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minute+cellular+nodules+as+early+lesions+in+rats+with+silica+exposure+via+inhalation.">Minute cellular nodules as early lesions in rats with silica exposure via inhalation.</a> Veterinary Sciences. 9 (6), 251 (2022).</li><li>Salehi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+responses+in+C3H/HeJ+mice+following+nose-only+inhalation+exposure+to+different+sizes+of+beryllium+metal+particles.">Immunological responses in C3H/HeJ mice following nose-only inhalation exposure to different sizes of beryllium metal particles.</a> Journal of Applied Toxicology. 29 (1), 61-68 (2009).</li><li>Yang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emodin+suppresses+silica-induced+lung+fibrosis+by+promoting+Sirt1+signaling+via+direct+contact.">Emodin suppresses silica-induced lung fibrosis by promoting Sirt1 signaling via direct contact.</a> Molecular Medicine Reports. 14 (5), 4643-4649 (2016).</li><li>Cornell, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraffin+embedding+and+thin+sectioning+of+microbial+colony+biofilms+for+microscopic+analysis.">Paraffin embedding and thin sectioning of microbial colony biofilms for microscopic analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), e57196 (2018).</li><li>Li, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+suitable+silicosis+mouse+model+was+constructed+by+repeated+inhalation+of+silica+dust+via+nose.">A suitable silicosis mouse model was constructed by repeated inhalation of silica dust via nose.</a> Toxicology Letters. 353, 1-12 (2021).</li><li>Mu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coal+dust+exposure+triggers+heterogeneity+of+transcriptional+profiles+in+mouse+pneumoconiosis+and+Vitamin+D+remedies.">Coal dust exposure triggers heterogeneity of transcriptional profiles in mouse pneumoconiosis and Vitamin D remedies.</a> Particle and Fibre Toxicology. 19 (1), 7 (2022).</li><li>Kato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muc1+deficiency+exacerbates+pulmonary+fibrosis+in+a+mouse+model+of+silicosis.">Muc1 deficiency exacerbates pulmonary fibrosis in a mouse model of silicosis.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 493 (3), 1230-1235 (2017).</li><li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD4+CD25+Foxp3++regulatory+T+cells+depletion+may+attenuate+the+development+of+silica-induced+lung+fibrosis+in+mice.">CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells depletion may attenuate the development of silica-induced lung fibrosis in mice.</a> PLoS One. 5 (11), 15404 (2010).</li><li>Mansouri, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stromal+cell+exosomes+prevent+and+revert+experimental+pulmonary+fibrosis+through+modulation+of+monocyte+phenotypes.">Mesenchymal stromal cell exosomes prevent and revert experimental pulmonary fibrosis through modulation of monocyte phenotypes.</a> JCI Insight. 4 (21), 128060 (2019).</li><li>Ohtsuka, Y., Wang, X. T., Saito, J., Ishida, T., Munakata, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+linkage+analysis+of+pulmonary+fibrotic+response+to+silica+in+mice.">Genetic linkage analysis of pulmonary fibrotic response to silica in mice.</a> The European Respiratory Journal. 28 (5), 1013-1019 (2006).</li></ol>

Модели силикоза на мышах имеют решающее значение для изучения патогенеза и лечения силикоза. В этом протоколе описан метод подготовки модели силикоза у мышей путем многократного назального воздействия. Этот метод позволяет изучать патологические особенности силикоза, индуцированны?...

Рабочие неизбежно подвергаются воздействию нерегулярной кристаллической кварцевой пыли (CSD), которая может вдыхаться и является более токсичной во многих профессиональных контекстах, включая горнодобывающую промышленность, гончарное производство, обработку стекла, кварца и бетона 1,2. Хроническое вдыхание пыли, известное как силикоз, вызывает прогрессирующий фиброз легких3. Согласно эпидемиологическим данным, заболеваемость силикозом снижается во всем мире на протяжении последних нескольких десятилетий, но в последние годы он растет и поражает молодых людей 4,5,6. Основной механизм силикоза представляет собой серьезную проблему для научных исследований из-за его коварного начала и длительного инкубационного периода. До сих пор неизвестно, как развивается силикоз. Кроме того, никакие современные лекарства не могут остановить прогрессирование силикоза и обратить вспять фиброз легких.
Современные мышиные модели силикоза предполагают проглатывание трахеей смешанной суспензии БСД. Например, введение CSD в легкие путем принятия травмы шейного отдела трахеи после анестезии не соответствует повторному воздействию на человека красящей пыли7. Влияние воздействия окружающей пыли на людей может быть изучено путем воздействия на них КСД в виде аэрозолей, что более точно отражает концентрации этого токсичного вещества в окружающей среде8. Тем не менее, КСД из окружающей среды не может быть просто вдыхаем непосредственно в легкие из-за уникальной физиологической структуры носа мыши9. Кроме того, оборудование, связанное с этой технологией, является дорогостоящим, что заставило исследователей пересмотреть модель силикозамышей 10. Вдыхая суспензию ЦСД через назальную капельницу пять раз в течение 2 недель, удалось построить динамическую модель силикоза. Эта модель стабильна и безопасна, а также проста в использовании. Важно отметить, что это исследование допускает повторное вдыхание КСД у мышей. Ожидается, что модель силикоза мыши, созданная с помощью этой процедуры, будет более полезна для исследовательских нужд.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 mL tube</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BS-05-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% formalin neutral fixative</td>
			<td>Nanchang Yulu Experimental Equipment Co.</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Illustrator</td>
			<td>Adobe&#160;</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol disinfectant</td>
			<td>Xintai Kanyuan Disinfection Products Co.</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD68</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab125212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate antigen retrieval solution</td>
			<td>biosharp life science</td>
			<td>BL619A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAB chromogenic kit</td>
			<td>NJJCBio</td>
			<td>W026-1-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl benzene</td>
			<td>West Asia Chemical Technology (Shandong) Co</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enhanced BCA protein assay kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>P0009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin (H&#38;E)</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>C0105S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP substrate</td>
			<td>Millipore Corporation</td>
			<td>P90720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP-conjugated Affinipure Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)</td>
			<td>Proteintech</td>
			<td>Sa00001-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iceacetic acid</td>
			<td>West Asia Chemical Technology (Shandong) Co</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>R510-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson&#39;s Trichrome stain kit</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Macklin</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtubes</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AXYMCT150CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NF-&#954;B p65</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>8242S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oscillatory thermostatic metal bath</td>
			<td>Abson</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin embedding machine</td>
			<td>Precision (Changzhou) Medical Equipment Co.</td>
			<td>PBM-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Slicer</td>
			<td>Jinhua Kratai Instruments Co.</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer (PBS)&#160;</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BL601A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological saline&#160;</td>
			<td>The First People&#39;s Hospital of Huainan City</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMSF</td>
			<td>Beyotime Biotechnological</td>
			<td>ST505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarized light microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision balance</td>
			<td>Acculab</td>
			<td>ALC-110.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism7.0</td>
			<td>GraphPad&#160;</td>
			<td>Version 7.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVDF membranes</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>3010040001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RIPA lysis buffer</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>P0013B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RODI IOT intelligent multifunctional water purification system</td>
			<td>RSJ</td>
			<td>RODI-220BN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scilogex SK-D1807-E 3D Shaker</td>
			<td>Scilogex</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS-PAGE gel preparation kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>P0012A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon dioxid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>#BCBV6865</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sirius red staining</td>
			<td>Nanjing SenBeiJia Biological Technology Co., Ltd.</td>
			<td>181012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal anesthesia machine</td>
			<td>Anhui Yaokun Biotech Co., Ltd.</td>
			<td>ZL-04A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universal Pipette Tips (0.1&#8211;10 &#181;L)</td>
			<td>KIRGEN</td>
			<td>KG1011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universal Pipette Tips (100&#8211;1000 &#181;L)</td>
			<td>KIRGEN</td>
			<td>KG1313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universal Pipette Tips (1&#8211;200 &#181;L)</td>
			<td>KIRGEN</td>
			<td>KG1212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex&#160;mixer&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS GeminiSEM 500</td>
			<td>Zeiss Germany</td>
			<td>SEM 500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-actin</td>
			<td>Bioss</td>
			<td>bs-0061R</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a silicosis mouse model established by repeated inhalation of crystalline silica dust

Силикоз может быть вызван воздействием респираторной кристаллической кварцевой пыли (CSD) в промышленной среде. Патофизиология, скрининг и лечение силикоза у людей были тщательно изучены с использованием модели силикоза у мышей. Многократно заставляя мышей вдыхать CSD в легкие, мыши могут имитировать клинические симптомы силикоза человека. Эта методика практична и эффективна с точки зрения времени и производительности и не вызывает механических травм верхних дыхательных путей из-за хирургического вмешательства. Кроме того, эта модель может успешно имитировать острый/хронический трансформационный процесс силикоза. Основные процедуры заключались в следующем. Стерилизованный порошок CSD размером 1-5 мкм полностью измельчали, суспендировали в физиологическом растворе и диспергировали на ультразвуковой водяной бане в течение 30 мин. Мыши под анестезией, индуцированной изофлураном, переключались с поверхностного быстрого дыхания на глубокую, медленную аспирацию примерно на 2 с. Мышь помещалась в ладонь, и кончик большого пальца осторожно касался края губы челюсти мыши, чтобы выпрямить дыхательные пути. После каждого выдоха мыши вдыхали кремнеземную суспензию капля за каплей через одну ноздрю, завершая процесс в течение 4-8 с. После того, как дыхание мышей стабилизировалось, их грудную клетку поглаживали и ласкали, чтобы предотвратить откашливание вдыхаемого CSD. Затем мышей вернули в клетку. В заключение, эта модель может количественно оценить БКД вдоль типичного физиологического прохождения крошечных частиц в легкие, от верхних дыхательных путей до терминальных бронхиол и альвеол. Он также может воспроизводить повторяющееся воздействие на сотрудников из-за работы. Модель может быть выполнена одним человеком и не нуждается в дорогостоящем оборудовании. Он удобно и эффективно моделирует особенности заболевания силикоза человека с высокой повторяемостью.

С помощью предложенного метода исследован потенциальный патогенез силикоза у мышей. Мы обнаружили, что масса тела мышей в опытной группе значительно снизилась по сравнению с контрольной группой, и что масса тела медленно восстанавливалась после прекращения воздействия. Благодаря опт...

Watch this Scientific Journal Video about A Silicosis Mouse Model Established by Repeated Inhalation of Crystalline Silica Dust at JoVE.com

A Silicosis Mouse Model Established by Repeated Inhalation of Crystalline Silica Dust

В этом протоколе описывается метод создания мышиной модели силикоза путем многократного воздействия кремнеземных суспензий через назальную капельницу. Данная модель позволяет эффективно, удобно и гибко имитировать патологический процесс силикоза человека с высокой повторяемостью и экономичностью.

Мышиная модель силикоза, созданная путем многократного вдыхания кристаллической кремнеземной пыли

Silicosis can be caused by exposure to respiratory crystalline silica dust (CSD) in an industrial environment. The pathophysiology, screening, and ...

В описанной модели силикоза мышей, полученной путем внутрилазерной инфузии кристаллической кварцевой пыли, вся суспензия CSD несколько раз в значительной степени моделировала возникновение и развитие силикоза человека. Этот метод экономит время и уровень, а также практичен и эффективен. Кроме того, не вызывает механических повреждений верхних дыхательных путей из-за операции.Этот метод также может быть использован для создания моделей заболеваний вирусов, бактерий и т.д. Продемонстрировать процедуру будет Ханбин Цао, студент магистратуры из моей лаборатории, умеющий готовить модель мыши с силикозом. Начните с приготовления кристаллической кремнеземной пыли или CSD, по крайней мере, за один день до введения назальных капельниц.Для этого растирайте кремнезем в агатовой ступке в течение получаса. Чтобы проверить размер и форму частиц, подготовьте образец для сканирующей электронной микроскопии или СЭМ с помощью проводящей ленты для связывания частиц кремния. С помощью фена аккуратно сдуйте непрочно склеенные частицы, прежде чем приступить к съемке изображения.Далее смешайте молотый диоксид крема и стерильный физраствор в концентрации 20 миллиграмм на миллилитр с помощью ультразвукового шейкера. Наконец, встряхните приготовленную суспензию CSD в течение 10 секунд. Введите 50 микролитров CSD мыши, находящейся под наркозом, через назальную капельницу в течение четырех-восьми секунд.Обработайте контрольную мышь равным количеством физиологического раствора, затем, придерживая тело мыши ладонью, большим и указательным пальцами зажмите кожу на задней части шеи, а остальными пальцами фиксируйте задние конечности мыши. Осторожно нажмите на область сердцебиения мыши другим указательным пальцем от пяти до 10 раз в течение пяти секунд. Нагревайте залитую парафином легочную ткань на горячей плите при температуре 60 градусов Цельсия в течение четырех часов.Чтобы депарафинизировать и увлажнить парафиновый срез, дважды замочите предметное стекло в ксилоле на 30 минут, затем последовательно окуните предметное стекло на пять минут каждое в безводный 95%85% и 75%-ный этанол и, наконец, в деионизированную воду, затем поместите предметное стекло в ведро для окрашивания гематоксилином на 10 минут, а затем осторожно промойте под проточной водой в течение пяти минут. Опустите его в ведро для окрашивания эозина на 10 секунд. После обезвоживания образца в 75%85%95% и безводном этаноле в течение пяти минут каждый, очистите участок ткани, погрузив его в ксилол на пять минут, и запечатайте примерно 60 микролитрами капель нейтральной смолы.Осторожно поместите слайд крышки на секцию. Для окрашивания по Массону окрасьте депарафинизированные и гидратированные образцы парафина свежеприготовленным 50%-ным гематоксилином Вейгерта в течение 10 минут, затем, замочив ткань в кислом этаноловом сжижении в течение 10 секунд, осторожно промойте предметное стекло проточной водой для воронения ядер. Далее образец окрашивают каплями красного красящего раствора в течение семи минут, и промывают рабочим раствором 30%-ной соляной кислоты в течение одной минуты.После погружения предметного стекла в 95%-ный спирт на 20 секунд дважды обезвоживают образец безводным этанолом в течение одной-трех секунд и, как было показано ранее, очищают и герметизируют образец. Для окрашивания Sirius red инфильтрируйте депарафинизированный и гидратированный участок в течение одного часа раствором для окрашивания Sirius red, затем окрашивайте ядра клеток в течение 8-10 минут раствором для окрашивания гематокслина Mayer. Осторожно промойте его под проточной водой в течение 10 минут, прежде чем обезвоживать, очищать и герметизировать предметное стекло.Пропитайте депарафинизированный и гидратированный образец парафина 30 миллилитрами раствора для извлечения антигена ЭДТА в концентрации три миллиграмма на миллилитр. Прокипятите образец в течение 20–30 минут, а затем промойте его деионизированной водой и инкубируйте в PBST в течение пяти минут. Образец замочить на 15 минут свежеприготовленным 0,3%-ным раствором перекиси водорода и трижды промыть по пять минут ПБСТ.Пермеабилизируют мембрану образца в течение 15 минут 0,3%-ным раствором Triton 100 и блокируют 30-40 микролитрами 5%-ного бычьего сывороточного альбумина или BSA в течение одного часа. После удаления блокирующего раствора добавляют соответствующим образом разведенные первичные антитела NF-kappa B и CD-68 и инкубируют образец в течение ночи при температуре от двух до восьми градусов Цельсия во влажной коробке для предметных стекол микроскопа IHC. На следующий день, после переноса образца при комнатной температуре на один час, промывают его три раза по пять минут каждый с ПБСТ.Инкубируйте образец в течение одного часа в вторичных антителах, меченных пероксидазой хрена кролика, при комнатной температуре. После инкубации образцы еще раз промывают три раза по пять минут каждый с PBST, затем инкубируют образец с субстратом DAB, соответствующим меченому ферментом антителом, в течение 5-20 минут. После гашения реакции деионизированной водой образец окрашивают в течение 30 секунд гематоксилином Вейгерта.Промойте его под проточной водой в течение одной минуты, обезвоживайте, очистите и запечатайте салфетку. Прежде чем приступить к вестерн-блоттингу, гомогенизируйте ткань рабочим раствором RIPA на льду в течение пяти минут с помощью ручной электрической шлифовальной машины. Выдерживают в течение одного часа на льду при встряхивании и центрифугируют гомогенат при 14 800 Г в течение 15 минут при температуре четыре градуса Цельсия.Соберите надосадочную жидкость и определите концентрацию белка с помощью набора для анализа белка BCA. Добавьте 20 микролитров 5-кратного загрузочного буфера в надосадочную жидкость, затем нагрейте шесть микрограммов на микролитр раствора для хранения белка, приготовленного с помощью RIPA, в металлической ванне при температуре 100 градусов Цельсия в течение 20 минут. Храните по 100 микролитров аликвот белкового раствора в каждой пробирке при температуре минус 80 градусов по Цельсию.Для электрофореза разбавьте аликвоты до двух-трех микрограммов на микролитр лизатом РИПА, затем добавьте 20 микрограммов образца на лунку для запуска геля. Перенесите белок на мембрану из ПВДФ, предварительно активированную метанолом, на 20 секунд методом влажного переноса с током 400 миллиампер в течение одного-двух часов. После промывания мембраны пять раз по пять минут раствором ПБСТ заблокируйте 5%-ным БСА или обезжиренным молоком на один час.Погрузите полоски в раствор первичных антител, содержащий NF-каппа В и бета-актин, разбавленный 5% БСА. Осторожно встряхните полоски в течение ночи при температуре от двух до восьми градусов по Цельсию, прежде чем промыть их PBST. Далее полоски инкубируют сначала в разбавленном вторичном антителе в течение одного часа при комнатной температуре при легком встряхивании, а затем с усиленным хемилюминесцентным проявителем в течение трех минут.Поместите полоску на гелевый имидж-сканер в течение 20 секунд и измерьте значение серого полоски, чтобы оценить уровень белка с помощью системного программного обеспечения. СЭМ-изображения CSD показали, что частицы имеют неправильную форму. Окрашивание в красный цвет Sirius, проведенное для измерения отложения коллагена, показало, что прогрессирование легочного фиброза у мышей значительно ускорялось при воздействии CSD в течение одного месяца.Поляризационная микроскопия выявила три различных типа коллагеновых волокон, из которых коллагеновые волокна первого типа, показанные красным цветом, являются фактором риска развития силикоза, однако в группе носителя не было обнаружено значительного фиброза. На это также указывали соответствующие баллы по шкале фиброза. При ОФ-окрашивании легочной ткани мыши, обработанной ЦСД, выявлены типичные кремнеземные узелки, характеризующиеся разжиженным некрозом после фагоцитоза КСД в центре, окруженном макрофагами на периферии.Окрашивание по Массону также показало, что узелки были обогащены CSD, сопровождающимся фиброзом. Иммуногистохимическое окрашивание CD-68 дополнительно выявило широкое присутствие макрофагов в легочной ткани. Микроскопия поляризованного света показала, что эти макрофаги проглотили CSD, вызвав тяжелое повреждение легких.Иммуногистохимическое окрашивание показало более высокое окрашивание NF-kappa B, что указывает на более высокую воспалительную реакцию в группе, получавшей CSD, чем в группе носителя. Репрезентативная вестерн-блоттинг также показала, что мыши, получавшие CSD, имели более высокую экспрессию NF-kappa B в легких, и разница в экспрессии между двумя группами была значительной. Чтобы избежать обструкции дыхания и способствовать восстановлению дыхания, область сердца мыши необходимо осторожно помассировать от пяти до 10 раз, как показано после пятисекундного периода.Эта модель может исследовать некоторый основной механизм силикоза и помочь в скрининге терапевтических препаратов, а также установить такие важные параметры, как дозировка и продолжительность. Эта технология предлагает удобный, эффективный и экономичный способ подвергнуть модели мышей воздействию твердых частиц, независимо от того, добавляют ли они бактерии. Наблюдение за поведением мышей может помочь в определении потенциальных последствий вдыхания твердых частиц.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

Мышь Модель В утробе матери Трансплантации

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Mouse Model of Surgically-induced Endometriosis by Auto-transplantation of Uterine Tissue

Мышиной модели индуцированного хирургического Эндометриоз через Авто-трансплантации тканей матки

Endometriosis is a chronic, painful disease whose etiology remains unknown. Furthermore, treatment of endometriosis can require laparoscopic removal of ...

Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

Мыши Модель внутрипросветного MCAO: церебральный Оценка инфаркта на Cresyl Окрашивание Фиолетовый

Stroke is the third  cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic  stroke accounts for approximately 80% of all strokes. ...

MRI Mapping of Cerebrovascular Reactivity via Gas Inhalation Challenges

МРТ Отображение цереброваскулярной реактивности с помощью вдыхания газа вызовы

The brain is a spatially heterogeneous and temporally dynamic organ, with different regions requiring different amount of blood supply at different time. ...

Dry Powder and Nebulized Aerosol Inhalation of Pharmaceuticals Delivered to Mice Using a Nose-only Exposure System

Сухой порошок и Небулайзерная Аэрозоль Вдыхание Pharmaceuticals Доставляется мышей Используя нос только экспозиционная система

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and ...

Repeated Measurement of Respiratory Muscle Activity and Ventilation in Mouse Models of Neuromuscular Disease

Повторные измерения респираторной мышечной активности и вентиляции в мышиных моделях нервно-мышечных заболеваний

Accessory respiratory muscles help to maintain ventilation when diaphragm function is impaired. The following protocol describes a method for repeated ...

Generation of a Chronic Obstructive Pulmonary Disease Model in Mice by Repeated Ozone Exposure

Поколение модели хронической обструктивной болезни легких у мышей, воздействие неоднократные озона

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is characterized by persistent airflow limitation and lung parenchymal destruction. It has a very high ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Изометрические сократимости измерение верхней брыжеечной артерии мыши, с помощью проволоки миография

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Vinyl Chloride and High-Fat Diet as a Model of Environment and Obesity Interaction

Винилхлорид и с высоким содержанием жира диета в качестве модели окружающей среды и ожирения взаимодействия

Vinyl chloride (VC), an abundant environmental contaminant, causes steatohepatitis at high levels, but is considered safe at lower levels. Although ...

Assessment of the Acute Inhalation Toxicity of Airborne Particles by Exposing Cultivated Human Lung Cells at the Air-Liquid Interface

Оценка острой ингаляционной токсичности воздушно-капельных частиц путем разоблачения культивируемых клеток легких человека на воздушно-жидком интерфейсе

Here, we present a specially designed modular in vitro exposure system that enables the homogenous exposure of cultivated human lung cells at the ALI to ...