Name: a silicosis mouse model established by repeated inhalation of crystalline silica dust
Uploaded: 2023-01-06T14:40:00
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Este estudio contó con el apoyo del Programa de Innovación de Sinergia Universitaria de la Provincia de Anhui (GXXT-2021-077) y el Fondo de Innovación de Posgrado de la Universidad de Ciencia y Tecnología de Anhui (2021CX2120).

Todos los procedimientos siguieron las directrices de la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio de los Institutos Nacionales de Salud (Publicación de los NIH Nº 8023, revisada en 1978) y fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Facultad de Medicina de la Universidad de Ciencia y Tecnología de Anhui.
1. Manejo y alimentación de ratones
<ol><li>Asigne 20 ratones machos C57BL/6 sanos a los grupos experimentales o de ve...

<ol>
	<li>Olsson, A., Kromhout, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occupational+cancer+burden:+the+contribution+of+exposure+to+process-generated+substances+at+the+workplace.">Occupational cancer burden: the contribution of exposure to process-generated substances at the workplace.</a> Molecular Oncology. 15 (3), 753-763 (2021).</li><li>The Lancet Respiratory. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+world+is+failing+on+silicosis.">The world is failing on silicosis.</a> The Lancet. Respiratory Medicine. 7 (4), 283 (2019).</li><li>Weissman, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+massive+fibrosis:+An+overview+of+the+recent+literature.">Progressive massive fibrosis: An overview of the recent literature.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 240, 108232 (2022).</li><li>Lancet, C. C., Yu, I. T., Chen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silicosis.">Silicosis.</a> Lancet. 379 (9830), 2008-2018 (2012).</li><li>Mazurek, J. M., Wood, J., Blackley, D. J., Weissman, D. 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C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraffin+embedding+and+thin+sectioning+of+microbial+colony+biofilms+for+microscopic+analysis.">Paraffin embedding and thin sectioning of microbial colony biofilms for microscopic analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), e57196 (2018).</li><li>Li, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+suitable+silicosis+mouse+model+was+constructed+by+repeated+inhalation+of+silica+dust+via+nose.">A suitable silicosis mouse model was constructed by repeated inhalation of silica dust via nose.</a> Toxicology Letters. 353, 1-12 (2021).</li><li>Mu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coal+dust+exposure+triggers+heterogeneity+of+transcriptional+profiles+in+mouse+pneumoconiosis+and+Vitamin+D+remedies.">Coal dust exposure triggers heterogeneity of transcriptional profiles in mouse pneumoconiosis and Vitamin D remedies.</a> Particle and Fibre Toxicology. 19 (1), 7 (2022).</li><li>Kato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muc1+deficiency+exacerbates+pulmonary+fibrosis+in+a+mouse+model+of+silicosis.">Muc1 deficiency exacerbates pulmonary fibrosis in a mouse model of silicosis.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 493 (3), 1230-1235 (2017).</li><li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD4+CD25+Foxp3++regulatory+T+cells+depletion+may+attenuate+the+development+of+silica-induced+lung+fibrosis+in+mice.">CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells depletion may attenuate the development of silica-induced lung fibrosis in mice.</a> PLoS One. 5 (11), 15404 (2010).</li><li>Mansouri, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stromal+cell+exosomes+prevent+and+revert+experimental+pulmonary+fibrosis+through+modulation+of+monocyte+phenotypes.">Mesenchymal stromal cell exosomes prevent and revert experimental pulmonary fibrosis through modulation of monocyte phenotypes.</a> JCI Insight. 4 (21), 128060 (2019).</li><li>Ohtsuka, Y., Wang, X. 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Los modelos de ratón de silicosis son cruciales para estudiar la patogénesis y el tratamiento de la silicosis. Este protocolo describe un método para preparar un modelo de silicosis en ratones a través de la exposición nasal repetida. Este método permite el estudio de las características patológicas de la silicosis inducida por diferentes tiempos de exposición. Los ratones fueron anestesiados con un respirador y se monitorizó su frecuencia respiratoria. La frecuencia respiratoria inicial corta y rápida disminu...

Los trabajadores están inevitablemente expuestos al polvo irregular de sílice cristalina (CSD), que puede inhalarse y es más tóxico en numerosos contextos ocupacionales, como la minería, la cerámica, el vidrio, el procesamiento de cuarzo y el hormigón 1,2. Una afección crónica por inhalación de polvo conocida como silicosis causafibrosis pulmonar progresiva. De acuerdo con los datos epidemiológicos, la incidencia de la silicosis ha ido disminuyendo a nivel mundial en las últimas décadas, pero en los últimos años ha ido en aumento y afectando a personas más jóvenes 4,5,6. El mecanismo subyacente de la silicosis presenta un desafío significativo para la investigación científica debido a su inicio insidioso y su prolongado período de incubación. Todavía se desconoce cómo se desarrolla la silicosis. Además, ningún medicamento actual puede detener la progresión de la silicosis y revertir la fibrosis pulmonar.
Los modelos actuales de ratón para la silicosis implican la ingestión traqueal de una suspensión mixta de CSD. Por ejemplo, la administración de CSD en los pulmones mediante la adopción del traumatismo de la tráquea cervical después de la anestesia no cumple con la exposición humana repetida al polvo de tinte7. El impacto de la exposición al polvo ambiental en las personas puede estudiarse exponiéndolas a la CSD en forma de aerosoles, lo que refleja con mayor precisión las concentraciones ambientales de esta sustancia tóxica8. Sin embargo, la CSD ambiental no puede inhalarse simplemente directamente en los pulmones debido a la estructura fisiológica única de la nariz del ratón9. Además, los equipos asociados a esta tecnología son caros, lo que ha llevado a los investigadores a reevaluar el modelo10 de silicosis de ratón. Al inhalar la suspensión de CSD a través de un goteo nasal cinco veces en 2 semanas, fue posible construir un modelo dinámico de silicosis. Este modelo es consistente y seguro a la vez que fácil de usar. Es importante tener en cuenta que este estudio permite la inhalación repetida de CSD en ratones. Se espera que el modelo de silicosis de ratón creado a través de este procedimiento sea más beneficioso para los requisitos de investigación.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 mL tube</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BS-05-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% formalin neutral fixative</td>
			<td>Nanchang Yulu Experimental Equipment Co.</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Illustrator</td>
			<td>Adobe&#160;</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol disinfectant</td>
			<td>Xintai Kanyuan Disinfection Products Co.</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD68</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab125212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate antigen retrieval solution</td>
			<td>biosharp life science</td>
			<td>BL619A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAB chromogenic kit</td>
			<td>NJJCBio</td>
			<td>W026-1-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl benzene</td>
			<td>West Asia Chemical Technology (Shandong) Co</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enhanced BCA protein assay kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>P0009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin (H&#38;E)</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>C0105S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP substrate</td>
			<td>Millipore Corporation</td>
			<td>P90720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP-conjugated Affinipure Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)</td>
			<td>Proteintech</td>
			<td>Sa00001-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iceacetic acid</td>
			<td>West Asia Chemical Technology (Shandong) Co</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>R510-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson&#39;s Trichrome stain kit</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Macklin</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtubes</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AXYMCT150CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NF-&#954;B p65</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>8242S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oscillatory thermostatic metal bath</td>
			<td>Abson</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin embedding machine</td>
			<td>Precision (Changzhou) Medical Equipment Co.</td>
			<td>PBM-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Slicer</td>
			<td>Jinhua Kratai Instruments Co.</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer (PBS)&#160;</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BL601A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological saline&#160;</td>
			<td>The First People&#39;s Hospital of Huainan City</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMSF</td>
			<td>Beyotime Biotechnological</td>
			<td>ST505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarized light microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision balance</td>
			<td>Acculab</td>
			<td>ALC-110.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism7.0</td>
			<td>GraphPad&#160;</td>
			<td>Version 7.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVDF membranes</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>3010040001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RIPA lysis buffer</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>P0013B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RODI IOT intelligent multifunctional water purification system</td>
			<td>RSJ</td>
			<td>RODI-220BN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scilogex SK-D1807-E 3D Shaker</td>
			<td>Scilogex</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS-PAGE gel preparation kit</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>P0012A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon dioxid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>#BCBV6865</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sirius red staining</td>
			<td>Nanjing SenBeiJia Biological Technology Co., Ltd.</td>
			<td>181012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal anesthesia machine</td>
			<td>Anhui Yaokun Biotech Co., Ltd.</td>
			<td>ZL-04A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universal Pipette Tips (0.1&#8211;10 &#181;L)</td>
			<td>KIRGEN</td>
			<td>KG1011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universal Pipette Tips (100&#8211;1000 &#181;L)</td>
			<td>KIRGEN</td>
			<td>KG1313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universal Pipette Tips (1&#8211;200 &#181;L)</td>
			<td>KIRGEN</td>
			<td>KG1212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex&#160;mixer&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS GeminiSEM 500</td>
			<td>Zeiss Germany</td>
			<td>SEM 500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-actin</td>
			<td>Bioss</td>
			<td>bs-0061R</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a silicosis mouse model established by repeated inhalation of crystalline silica dust

La silicosis puede ser causada por la exposición al polvo de sílice cristalina respiratoria (CSD) en un entorno industrial. La fisiopatología, el cribado y el tratamiento de la silicosis en humanos se han estudiado ampliamente utilizando el modelo de silicosis de ratón. Al hacer que los ratones inhalen repetidamente CSD en sus pulmones, los ratones pueden imitar los síntomas clínicos de la silicosis humana. Esta metodología es práctica y eficiente en términos de tiempo y rendimiento y no causa lesiones mecánicas en el tracto respiratorio superior debido a la cirugía. Además, este modelo puede imitar con éxito el proceso de transformación aguda/crónica de la silicosis. Los principales procedimientos fueron los siguientes. El polvo esterilizado de 1-5 μm de CSD se molió por completo, se suspendió en solución salina y se dispersó en un baño de agua ultrasónico durante 30 minutos. Los ratones bajo anestesia inducida por isoflurano cambiaron de una respiración rápida y superficial a una aspiración profunda y lenta durante aproximadamente 2 s. El ratón se colocó en la palma de una mano y la punta del pulgar tocó suavemente el borde del labio de la mandíbula del ratón para enderezar las vías respiratorias. Después de cada exhalación, los ratones inhalaron la suspensión de sílice gota a gota a través de una fosa nasal, completando el proceso en 4-8 segundos. Después de que la respiración de los ratones se estabilizó, se les acarició el pecho y se les acarició para evitar que el CSD inhalado fuera expulsado al toser. A continuación, los ratones fueron devueltos a la jaula. En conclusión, este modelo puede cuantificar la CSD a lo largo del paso fisiológico típico de partículas diminutas hacia el pulmón, desde el tracto respiratorio superior hasta los bronquiolos terminales y los alvéolos. También puede replicar la exposición recurrente de los empleados debido al trabajo. El modelo puede ser realizado por una sola persona y no necesita equipos costosos. Simula de manera conveniente y efectiva las características de la enfermedad de la silicosis humana con alta repetibilidad.

La patogénesis potencial de la silicosis en ratones se investigó utilizando el método propuesto. Encontramos que el peso corporal de los ratones en el grupo experimental disminuyó significativamente en relación con el grupo de control y que el peso corporal se recuperó lentamente después del cese de la exposición. Debido a la dosis optimizada utilizada aquí, no se observó mortalidad en ratones expuestos a sílice en este experimento. La hoja de ruta técnica del goteo nasal repetido a la DCV se muestra en la (<...

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A Silicosis Mouse Model Established by Repeated Inhalation of Crystalline Silica Dust

Este protocolo describe un método para establecer un modelo de ratón de silicosis a través de la exposición repetida a suspensiones de sílice a través de un goteo nasal. Este modelo puede imitar de manera eficiente, conveniente y flexible el proceso patológico de la silicosis humana con alta repetibilidad y economía.

Un modelo de ratón de silicosis establecido por inhalación repetida de polvo de sílice cristalina

Silicosis can be caused by exposure to respiratory crystalline silica dust (CSD) in an industrial environment. The pathophysiology, screening, and ...

En el modelo de silicosis de ratón descrito generado por la infusión intraláser de polvo de sílice cristalina, todas las suspensiones de CSD simularon varias veces la aparición y el desarrollo de la silicosis humana en gran medida. Este método ahorra tiempo y nivel, además de ser práctico y eficaz. Además, no causa lesiones mecánicas en el tracto respiratorio superior debido a la operación.Este método también podría utilizarse para preparar modelos de enfermedades de virus, bacterias, etc. Quien demostrará el procedimiento será Hangbing Cao, un estudiante de maestría de mi laboratorio, experto en la preparación del modelo de ratón con silicosis. Comience preparando el polvo de sílice cristalina o CSD al menos un día antes de administrar los goteos nasales.Para ello, muele sílice en un mortero de ágata durante media hora. Para comprobar el tamaño y la forma de las partículas, prepare la muestra para la microscopía electrónica de barrido o SEM utilizando cinta conductora para unir las partículas de silicio. Con un secador de pelo, sople suavemente las partículas que no estén firmemente adheridas antes de proceder a capturar la imagen.A continuación, mezcle la sílice molida y la solución salina estéril a una concentración de 20 miligramos por mililitro utilizando un agitador ultrasónico. Finalmente, vórtese la suspensión de CSD preparada durante 10 segundos. Administrar 50 microlitros de CSD al ratón anestesiado a través de un goteo nasal durante cuatro a ocho segundos.Trate el ratón de control con una cantidad igual de solución salina, luego sostenga el cuerpo del ratón con la palma de la mano, pellizque la piel de la parte posterior del cuello con el pulgar y el índice mientras fija las extremidades traseras del ratón con los otros dedos. Presione suavemente el área de latidos del corazón del mouse con el otro dedo índice de cinco a 10 veces durante cinco segundos. Calentar el tejido pulmonar incrustado en parafina en una placa caliente a 60 grados centígrados durante más de cuatro horas.Para desparafinar e hidratar la sección de parafina, sumerja el portaobjetos en xileno durante 30 minutos dos veces, luego sumerja secuencialmente el portaobjetos durante cinco minutos cada uno en etanol anhidro al 95%, 85% y 75% y, finalmente, en agua desionizada, luego coloque el portaobjetos en el cubo de tinción de hematoxilina durante 10 minutos antes de enjuagar suavemente con agua corriente durante cinco minutos. Sumérjalo en el cubo de tinción de eosina durante 10 segundos. Después de deshidratar la muestra en etanol anhidro al 75%, 85% 95% y anhidro durante cinco minutos cada una, limpie la sección de tejido sumergiéndola en xileno durante cinco minutos y séllela con aproximadamente 60 microlitros de gotas de resina neutra.Coloque con cuidado la corredera de la cubierta sobre la sección. Para la tinción de Masson, tiña las muestras de parafina desparafinadas e hidratadas con hematoxilina de Weigert al 50% recién preparada durante 10 minutos, luego, después de remojar el tejido en licuación de etanol ácido durante 10 segundos, enjuague el portaobjetos suavemente con agua corriente para azular los núcleos. A continuación, tiña la muestra con gotas de solución de tinción roja durante siete minutos y lávala con una solución de trabajo de ácido clorhídrico al 30% durante un minuto.Después de sumergir el portaobjetos en alcohol al 95% durante 20 segundos, deshidrate la muestra con etanol anhidro durante uno a tres segundos dos veces y, como se demostró anteriormente, limpie y selle la muestra. Para la tinción con rojo Sirius, infiltre la sección desparafinada e hidratada durante una hora con la solución de tinción roja Sirius, luego tiña los núcleos celulares durante ocho a 10 minutos con la solución de tinción de hematoxlyn Mayer. Enjuáguelo suavemente con agua corriente durante 10 minutos antes de deshidratar, limpiar y sellar el portaobjetos.Infiltrar la muestra de parafina desparafinada e hidratada con 30 mililitros de una solución de recuperación de antígeno EDTA de tres miligramos por mililitro. Hervir la muestra durante 20 a 30 minutos antes de lavarla con agua desionizada e incubarla en PBST durante cinco minutos. Remoje la muestra durante 15 minutos con una solución de peróxido de hidrógeno al 0,3 % recién preparada y lávela tres veces durante cinco minutos cada una con PBST.Permeabilizar la membrana de la muestra durante 15 minutos con una solución de Triton 100 al 0,3% y bloquear con 30 a 40 microlitros de albúmina sérica bovina al 5% o BSA durante una hora. Después de retirar la solución de bloqueo, agregue los anticuerpos primarios NF-kappa B y CD-68 adecuadamente diluidos, e incube la muestra durante la noche a una temperatura de dos a ocho grados Celsius en una caja húmeda IHC de portaobjetos de microscopio. Al día siguiente, después de transferir la muestra a temperatura ambiente durante una hora, lávela tres veces durante cinco minutos cada una con PBST.Incubar la muestra durante una hora en anticuerpos secundarios marcados con peroxidasa de rábano picante de conejo a temperatura ambiente. Después de la incubación, lavar las muestras nuevamente tres veces durante cinco minutos cada una con PBST, luego incubar la muestra con el sustrato DAB correspondiente al anticuerpo marcado con la enzima durante cinco a 20 minutos. Después de apagar la reacción con agua desionizada, contratiñir la muestra durante 30 segundos con hematoxilina de Weigert.Enjuáguelo con agua corriente durante un minuto, deshidrate, limpie y selle el tejido. Antes de proceder al análisis de Western blot, homogeneice el tejido con la solución de trabajo RIPA en hielo durante cinco minutos utilizando una amoladora eléctrica de mano. Incubar durante una hora en hielo con agitación, y centrifugar el homogeneizado a 14.800 G durante 15 minutos a cuatro grados centígrados.Recoja el sobrenadante y determine la concentración de proteínas con un kit de ensayo de proteínas BCA. Agregue 20 microlitros de tampón de carga 5X al sobrenadante, luego caliente la solución de almacenamiento de proteínas de seis microgramos por microlitro preparada con RIPA en un baño de metal a 100 grados centígrados durante 20 minutos. Almacene 100 alícuotas de microlitros de la solución proteica en cada tubo a menos 80 grados centígrados.Para la electroforesis, diluya las alícuotas a dos o tres microgramos por microlitro con lisado RIPA, luego agregue 20 microgramos de muestra por pocillo para ejecutar el gel. Transfiera la proteína a una membrana de PVDF preactivada con metanol durante 20 segundos utilizando el método de transferencia húmeda con corriente de 400 miliamperios durante una o dos horas. Después de lavar la membrana cinco veces durante cinco minutos cada una con una solución de PBST, bloquee con BSA al 5% o leche desnatada durante una hora.Sumerja las tiras en la solución primaria de anticuerpos que contiene NF-kappa B y beta actina diluida con BSA al 5%. Agite las tiras suavemente durante la noche a una temperatura de dos a ocho grados centígrados antes de lavarlas con PBST. A continuación, incube las tiras, primero en el anticuerpo secundario diluido durante una hora a temperatura ambiente con una suave agitación, y luego con revelador de quimioluminiscencia mejorado durante tres minutos.Exponga la tira a un generador de imágenes en gel durante 20 segundos y mida el valor de gris de la tira para evaluar el nivel de proteína mediante el software del sistema. Las imágenes SEM de CSD mostraron que las partículas tenían una forma irregular. La tinción de rojo Sirius realizada para medir la deposición de colágeno mostró que la progresión de la fibrosis pulmonar en ratones se aceleró significativamente tras la exposición a CSD durante un mes.La microscopía polarizante reveló tres tipos diferentes de fibras de colágeno, de las cuales las fibras de colágeno tipo uno que se muestran en rojo son un factor de riesgo para la silicosis, sin embargo, no se encontró fibrosis significativa en el grupo del vehículo. Esto también fue indicado por las respectivas puntuaciones de fibrosis. La tinción con HE del tejido pulmonar de ratón tratado con CSD mostró nódulos de sílice típicos caracterizados por necrosis licuada después de la fagocitosis de CSD en el centro rodeado de macrófagos en la periferia.La tinción de Masson también mostró que los nódulos estaban enriquecidos con CSD acompañada de fibrosis. La tinción inmunohistoquímica de CD-68 reveló además la amplia presencia de macrófagos en el tejido pulmonar. La microscopía de luz polarizada mostró que estos macrófagos habían ingerido CSD, causando lesiones pulmonares graves.La tinción inmunohistoquímica mostró una mayor tinción de NF-kappa B, lo que indica una mayor respuesta inflamatoria en el grupo tratado con CSD que en el grupo de vehículos. El Western blot representativo también mostró que los ratones tratados con CSD tenían una mayor expresión de NF-kappa B en el pulmón, y la diferencia en la expresión entre los dos grupos fue significativa. Para evitar la obstrucción respiratoria y promover la recuperación respiratoria, el área del corazón del ratón debe masajearse suavemente de cinco a 10 veces, como se demostró después de un período de cinco segundos.Este modelo puede explorar algunos mecanismos subyacentes de la silicosis y ayudar a la detección terapéutica de fármacos, junto con el establecimiento de parámetros cruciales como la dosis y la duración. Esta tecnología ofrece un medio conveniente, efectivo y económico para exponer modelos de ratón a material particulado, ya sea que esto agregue bacterias. El monitoreo del comportamiento de los ratones puede ayudar a determinar los efectos potenciales de la inhalación de partículas.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

Un modelo de ratón En el útero Trasplante

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Investigación

Medicina

Mouse Model of Surgically-induced Endometriosis by Auto-transplantation of Uterine Tissue

Modelo de ratón de la endometriosis quirúrgicamente inducida por la Auto-trasplante de tejido uterino

Endometriosis is a chronic, painful disease whose etiology remains unknown. Furthermore, treatment of endometriosis can require laparoscopic removal of ...

Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

Modelo de ratón de MCAO intraluminal: Evaluación del infarto cerebral mediante tinción con violeta de cresilo

Stroke is the third  cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic  stroke accounts for approximately 80% of all strokes. ...

MRI Mapping of Cerebrovascular Reactivity via Gas Inhalation Challenges

Mapeo de resonancia magnética de la reactividad cerebrovascular mediante gas para inhalación Desafíos

The brain is a spatially heterogeneous and temporally dynamic organ, with different regions requiring different amount of blood supply at different time. ...

Dry Powder and Nebulized Aerosol Inhalation of Pharmaceuticals Delivered to Mice Using a Nose-only Exposure System

De polvo seco y nebulizada de inhalación de aerosol de productos farmacéuticos entregado a ratones utilizando un sólo Nose sistema de exposición

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and ...

Repeated Measurement of Respiratory Muscle Activity and Ventilation in Mouse Models of Neuromuscular Disease

Repetida Medición de la actividad muscular respiratoria y ventilación en el ratón modelos de enfermedad neuromuscular

Accessory respiratory muscles help to maintain ventilation when diaphragm function is impaired. The following protocol describes a method for repeated ...

Generation of a Chronic Obstructive Pulmonary Disease Model in Mice by Repeated Ozone Exposure

Generación de un modelo de enfermedad pulmonar obstructiva crónica en ratones por la exposición repetida del ozono

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is characterized by persistent airflow limitation and lung parenchymal destruction. It has a very high ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Medición de la contractilidad isométrica de la arteria mesentérica de ratón con cable miografía

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Vinyl Chloride and High-Fat Diet as a Model of Environment and Obesity Interaction

Cloruro de vinilo y dieta alta en grasas como modelo de medio ambiente e interacción de la obesidad

Vinyl chloride (VC), an abundant environmental contaminant, causes steatohepatitis at high levels, but is considered safe at lower levels. Although ...

Assessment of the Acute Inhalation Toxicity of Airborne Particles by Exposing Cultivated Human Lung Cells at the Air-Liquid Interface

Evaluación de la toxicidad aguda por inhalación de partículas transmitidas por el aire mediante la exposición de células pulmonares humanas cultivadas en la interfaz aire-líquido

Here, we present a specially designed modular in vitro exposure system that enables the homogenous exposure of cultivated human lung cells at the ALI to ...