Name: monitoring changes in human umbilical vein endothelial cells upon viral infection using impedance-based real-time cell analysis
Uploaded: 2023-05-05T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Changes in Human Umbilical Vein Endothelial Cells upon Viral Infection Using Impedance-Based Real-Time Cell Analysis at JoVE.com

Dit onderzoek kreeg steun van het Ministerie van Hoger Onderwijs Maleisië in het kader van het Higher Institution Centre of Excellence (HICoE)-programma (MO002-2019) en financiering in het kader van de Long-Term Research Grant Scheme (LRGS MRUN Phase 1: LRGS MRUN/F1/01/2018).

1. Voorbereiding van de cel
<ol><li>Voorbereiding van HUVEC's<ol><li>Kweek 7,5 x 105 HUVEC-cellen/ml in een celkweekkolf van 75 cm2 (gecoat met 20 μg/ml collageen type 1) met 12 ml endotheelcelmedium (ECM) aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS), 0,01% endotheelcelgroeisupplement (ECGS) dat groeifactoren, hormonen en eiwitten bevat die nodig zijn voor de kweek van HUVEC's, en 0,01% penicilline-streptomycine (P/S). Incubeer de cellen in een celkweekincubator bij 37 °C met 5%...

Cytocide virale infectie in permissieve cellen wordt meestal geassocieerd met substantiële veranderingen in celmorfologie en biosynthese36. De door het virus geïnduceerde cellulaire morfologische veranderingen, zoals celkrimp, celvergroting en/of syncytievorming, staan ook bekend als cytopathische effecten (CPE's), kenmerkend voor bepaalde viraleinfecties37. In EC's werd de CPE beschreven als de vernietiging van cellen en de afbraak van de tight junctions tussen elke EC, ...

Endotheelcellen (EC's) bekleden het binnenoppervlak van alle bloed- en lymfevaten. Ze zijn verbonden door adherens, tight gap junctions, waardoor een semi-permeabele barrière ontstaat tussen bloed of lymfe en de omliggende weefsels 1,2. De intacte endotheelcel-celverbindingen zijn van cruciaal belang voor het reguleren van het transport van macromoleculen, opgeloste stoffen en vloeistoffen, cruciaal voor de fysiologische activiteiten van de overeenkomstige weefsels en organen. De endotheelbarrière is dynamisch en wordt gemoduleerd door specifieke stimuli4. Verstoring of verlies van de endotheliale barrièrefunctie is een kenmerk van de pathofysiologie van de ziekte bij acute en chronische ontsteking in de pathogenese van vele ziekten 5,6,7, waaronder virale infectie 8,9,10,11. Voor flavivirussen werd gevonden dat het niet-structurele eiwit NS1 de endotheliale permeabiliteit kan veranderen, bijvoorbeeld via verstoring van de endotheliale glycocalyx-achtige laag als gevolg van verhoogde expressie en activering van cathepsine L, sialidasen en endoglycosidase heparinase9. In de ziektetoestand wordt de integriteit van de endotheliale monolaag aangetast en worden cel-celverbindingen verstoord, wat kan leiden tot endotheelletsel en disfunctie12 en uiteindelijk wijdverspreide pathologische manifestaties in meerdere orgaansystemen 13,14. Virale infectie van EC's resulteert in veranderingen in de celsignaleringsroutes en het cellulaire genexpressieprofiel, wat de vloeistofbarrièrefuncties kan beïnvloeden, verstoring van de EC's kan veroorzaken en vasculaire lekkage kan veroorzaken10,15. Het is gebleken dat infectie met het Zika-virus (ZIKV) van EC's de junctie-integriteit verstoort die veranderingen in de vasculaire permeabiliteit veroorzaakt en leidt tot disfunctie van de endotheelbarrière, wat resulteert in vasculaire lekkage10,15. Studies hebben aangetoond dat ZIKV verband houdt met ernstige geboorteafwijkingen; Er is echter niet veel bekend over het exacte mechanisme waarmee dit gebeurt16,17. Het begrijpen van veranderingen in de endotheliale barrière tijdens een infectie is daarom van cruciaal belang om het ziektemechanisme te begrijpen.
EC's worden momenteel gebruikt als een belangrijk experimenteel in vitro vasculair modelsysteem voor verschillende fysiologische en pathologische processen 18,19,20,21. Menselijke endotheelcellen van de navelstrengader (HUVEC's) zijn op grote schaal gebruikt als een primair, niet-onsterfelijk celsysteem om het vasculaire endotheel en de vasculaire biologie in vitro te bestuderen 22,23,24,25. HUVEC's werden voor het eerst geïsoleerd voor in-vitrokweek in de vroege jaren 1970 uit de navelstrengader van de menselijke navelstreng26. HUVEC's hebben een geplaveide morfologie die gemakkelijk in het laboratorium kan worden verspreid. Als gevolg van schuifspanning na lange perioden in confluente toestand te zijn gehouden, wordt verlenging van de celvorm waargenomen. HUVEC's kunnen worden gekenmerkt door de aanwezigheid van Weibel- en Palade-lichamen (WPB), pinocytische blaasjes, kleine hoeveelheden fibrillen in de buurt van de kern, mitochondriën met buisvormige vormen die zelden vertakkingen vertonen, een ellipsoïde kern met een fijn korrelig patroon van gecondenseerd chromatine en één tot drie nucleoli aanwezig in elke kern27. Hoewel HUVEC's talrijke morfologische kenmerken vertonen, kan de identificatie van HUVEC's niet worden bereikt door alleen optisch onderzoek. Assays, zoals immunofluorescentiekleuring van vasculaire endotheliale (VE)-cadherine, worden vaak gebruikt voor de monitoring van vasculaire integriteit in HUVEC's 28,29,30,31.
Deze studie beschrijft het real-time celanalyse (RTCA) protocol van de infectie van HUVEC's. Het RTCA-systeem maakt gebruik van gespecialiseerde met goud beklede platen met micro-elektroden die een geleidend oppervlak bieden voor de celbevestiging. Wanneer de cellen zich hechten aan het oppervlak van de micro-elektrode, wordt een barrière gevormd die de elektronenstroom door de micro-elektroden belemmert. Meting van de impedantie die wordt gegenereerd door micro-elektroden kan worden gebruikt om informatie te verkrijgen over sommige cellulaire processen, waaronder celaanhechtingen, proliferatie en migratie32. De gerapporteerde test is een op impedantie gebaseerde cellulaire test die, in combinatie met een real-time celanalysator, continue meting biedt van de proliferatie van levende cellen, morfologische veranderingen (zoals celkrimp) en celhechtingskwaliteit op een niet-invasieve en labelvrije manier. In deze studie wordt de real-time celanalysator gebruikt om de endotheelintegriteit en morfologische veranderingen van HUVEC's tijdens ZIKV-infectie te monitoren. In het kort meet het instrument de elektronenstroom die wordt overgebracht in gespecialiseerde met goud met micro-elektroden gecoate microtiterplaten in aanwezigheid van een kweekmedium (elektrisch geleidende oplossing). Celhechting of veranderingen in het aantal cellen en de morfologie verstoren de elektronenstroom en veroorzaken impedantievariaties die door het instrument kunnen worden opgevangen (aanvullende figuur 1). Het verschil tussen HUVEC-groei, proliferatie en therapietrouw voor en na ZIKV-infectie wordt in realtime geregistreerd door een elektrisch impedantiesignaal en vervolgens vertaald naar celindex (CI)-waarde. De CI-waarde van de pre-infectie wordt gebruikt als basislijn voor normalisatie van de CI-waarde. De veranderingen in CI-waarden weerspiegelen cellulaire morfologische veranderingen of verlies van celhechting bij de infectie33. De onderzoeksresultaten tonen aan dat het RTCA-protocol de detectie van voorbijgaande effecten of celmorfologische veranderingen tijdens virale infectie mogelijk maakt in vergelijking met een eindpunttest, zoals immunofluorescentiekleuring van VE-cadherine. De RTCA-methode zou nuttig kunnen zijn voor het analyseren van de veranderingen in de vasculaire integriteit van HUVEC bij infectie door andere virussen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tube</td>
			<td>Nest</td>
			<td>615601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37 &#176;C incubator with 5% CO2</td>
			<td>Sanyo</td>
			<td>MCO-18AIC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75 cm2 tissue culture flask&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430725U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic solution penicillin-streptomycin (P/S)</td>
			<td>Sciencell</td>
			<td>0503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biological safety cabinet, Class II</td>
			<td>Holten</td>
			<td>HB2448</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen Type 1</td>
			<td>SIgma-Aldrich</td>
			<td>C3867</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endothelial cell growth supplement (ECGS)</td>
			<td>Sciencell</td>
			<td>1052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endothelial cell medium (ECM)</td>
			<td>Sciencell</td>
			<td>1001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E-plate 96</td>
			<td>Agilent Technologies, Inc.</td>
			<td>05232368001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Sciencell</td>
			<td>0025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#39; Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H9394</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>Laboroptik LTD</td>
			<td>Neubauer improved</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVECs)</td>
			<td>Sciencell</td>
			<td>8000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>TELAVAL 31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latitude 3520 Laptop</td>
			<td>Dell&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multichannel micropipette (10 - 100 &#181;L)</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3125000036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multichannel micropipette (30 - 300 &#181;L)</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3125000052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent reservior</td>
			<td>Tarsons</td>
			<td>T38-524090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RTCA resistor plate 96</td>
			<td>Agilent Technologies, Inc.</td>
			<td>05232350001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RTCA Software Pro (Version 2.6.1)</td>
			<td>Agilent Technologies, Inc.</td>
			<td>5454433001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single channel pipettes (10 - 100 &#181;L)</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3123000047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single channel pipettes (100 - 1000 &#181;L)</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3123000063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single channel pipettes (20 - 200 &#181;L)</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3123000055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xCELLigence Real-time cell analyzer SP (Model: W380)</td>
			<td>Agilent Technologies, Inc.</td>
			<td>00380601030</td>
			<td>https://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/real-time-cell-analysis/rtca-analyzers/xcelligence-rtca-sp-single-plate-741232</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring changes in human umbilical vein endothelial cells upon viral infection using impedance-based real-time cell analysis

Endotheelcellen bekleden het binnenoppervlak van alle bloed- en lymfevaten en creëren een semi-permeabele barrière die de uitwisseling van vocht en opgeloste stoffen tussen bloed of lymfe en de omliggende weefsels reguleert. Het vermogen van een virus om de endotheelbarrière te passeren is een belangrijk mechanisme dat de verspreiding van virussen in het menselijk lichaam vergemakkelijkt. Van veel virussen wordt gemeld dat ze de permeabiliteit van het endotheel veranderen en/of verstoring van de barrière van endotheelcellen veroorzaken tijdens infectie, wat vasculaire lekkage kan veroorzaken. De huidige studie beschrijft een real-time celanalyse (RTCA) -protocol, waarbij gebruik wordt gemaakt van een commerciële real-time celanalysator om de endotheelintegriteit en permeabiliteitsveranderingen te bewaken tijdens Zika-virus (ZIKV)-infectie van de endotheelcellen van de menselijke navelstrengader (HUVEC's). De impedantiesignalen die voor en na ZIKV-infectie werden geregistreerd, werden vertaald naar celindexwaarden (CI) en geanalyseerd. Het RTCA-protocol maakt de detectie mogelijk van voorbijgaande effecten in de vorm van celmorfologische veranderingen tijdens een virale infectie. Deze test zou ook nuttig kunnen zijn voor het bestuderen van veranderingen in de vasculaire integriteit van HUVEC's in andere experimentele opstellingen.

Vóór de ZIKV-infectie was de CI die werd geregistreerd voor de HUVEC-monolaag gekweekt op een gespecialiseerde met goud met micro-elektrode gecoate microtiterplaat hoger dan 8, wat wijst op sterke hechtingseigenschappen. Platen of putjes met een CI-index van minder dan 8 moeten worden weggegooid. De HUVEC's werden vervolgens geïnfecteerd met ZIKV met een MOI van 0,1 en 1, en de celimpedantie werd gedurende 7 dagen geregistreerd. De CI-waarde van HUVEC's geïnfecteerd met ZIKV P6-740 bij een MOI van 0,1 (lichtblauwe li...

Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Changes in Human Umbilical Vein Endothelial Cells upon Viral Infection Using Impedance-Based Real-Time Cell Analysis at JoVE.com

Monitoring Changes in Human Umbilical Vein Endothelial Cells upon Viral Infection Using Impedance-Based Real-Time Cell Analysis

De huidige studie beschrijft een protocol om de veranderingen in endotheelcellen van de menselijke navelstrengader (HUVEC's) tijdens virale infectie te volgen met behulp van een real-time celanalysesysteem (RTCA).

Monitoring van veranderingen in endotheelcellen van de menselijke navelstrengader bij virale infectie met behulp van op impedantie gebaseerde real-time celanalyse

Endothelial cells line the inner surface of all blood and lymphatic vessels, creating a semi-permeable barrier regulating fluid and solute exchange ...

Dit protocol maakte de continue detectie van voorbijgaand effect mogelijk in de vorm van enkele morfologische veranderingen tijdens een virale infectie, zoals loslating en zweven van aanhangende cellen. Dit protocol maakte een niet-invasieve en niet-arbeidsintensieve aanpak mogelijk voor het continu monitoren van cellulaire morfologische veranderingen en het vastleggen van voorbijgaande effecten zoals vasculaire lekkage die konden worden gemist door een eindpunttest. Dit protocol kan worden gebruikt om vasculaire integriteitsveranderingen van andere cellijnen in verschillende experimentele opstellingen te analyseren als de cellen hechtende cellen zijn.Nadat u de HUVEC's hebt voorbereid, start u de RTCA-softwaretoepassing door te dubbelklikken op het pictogram op het bureaublad. Typ de gebruikersnaam en het wachtwoord in het inlogvenster. Plaats een RTCA-weerstandsplaat met 96 putjes met de A1-put naar binnen gericht in het RTCA-station in de celkweekincubator.Ga vervolgens naar het tabblad Experimentnotities van de RTCA-software en typ de naam van het experiment, het serienummer van het apparaat en het apparaattype. Markeer op het tabblad Lay-out onder het celtabblad van de RTCA-software alle putten en klik met de rechtermuisknop op de gemarkeerde putten om ervoor te zorgen dat alle putten zijn ingeschakeld. Open vervolgens het planningstabblad van de RTCA-software.Klik op Step_1 en stel sweeps in op 10 en interval op 30 seconden. Klik vervolgens op doorgaan in de linkerbovenhoek van de software om de verificatierun te starten. Open na het uitvoeren het tabblad Celindex om de gegevens te controleren.Alle celindexwaarden moeten lager zijn dan 0,063. Controleer vervolgens de onbewerkte scangegevens in het onderste deel van het tabblad Celindex op herhaalde waardepatronen zoals beschreven in het manuscript. Om de verificatierun te voltooien, klikt u op de plaat en selecteert u de ontgrendelingsplaat.Verwijder de RTCA-weerstandsplaat met 96 putjes van het RTCA-station. Om achtergrondinformatie over RTCA te verkrijgen, wast u de collageentype één gecoate gespecialiseerde gouden micro-elektrodeplaat twee keer met 60 microliter HBSS per putje. Gooi de resterende HBSS weg en voeg 50 milliliter extracellulaire matrix per putje toe.Plaats vervolgens de plaat in het RTCA-station in de celkweekincubator met de A1-put naar binnen gericht. Typ op het tabblad exp-notities van de RTCA-software de naam van het experiment, het serienummer van het apparaat en het apparaattype. Navigeer naar het celtabblad van de RTCA-software en selecteer het tabblad Lay-out.Markeer de te gebruiken putten en klik met de rechtermuisknop op de gemarkeerde putten om ervoor te zorgen dat alle putten zijn ingeschakeld. Ga nu naar het tabblad schema van de RTCA-software. Klik op Step_1 en klik op start of doorgaan in de linkerbovenhoek om een achtergrondinformatie te krijgen.De plaat is nu klaar voor het zaaien van cellen en het verwijderen van het RTCA-station. Zaai daarna 10 tot de vierde cellen per putje HUVEC's in de gouden micro-elektrodeplaat met 50 microliter per putje geconditioneerd medium. Plaats de plaat terug in het RTCA-station in de celkweekincubator, met de A1-put naar binnen gericht.Klik vervolgens op het tabblad Planning van de software op een stap toevoegen in de linkerbovenhoek. Klik op Step_2. Wijzig de sweeps in 601, het interval in twee minuten en klik op toepassen.Klik op Step_2 en klik op start of doorgaan in de linkerbovenhoek van de software. Na 20 uur incubatie, wanneer de celindexwaarden in het tabblad Brongrafiek een plateau laten zien, is de plaat klaar voor infectie. Klik op het tabblad Schema van de RTCA-software op stap afbreken.De plaat is nu klaar om van het RTCA-station te worden verwijderd. Om de HUVEC's te infecteren, haalt u de Zika-virusvoorraad uit de vriezer van min 80 graden Celsius. Verdun de Zika-virusvoorraad met serumvrije extracellulaire matrix in centrifugebuisjes van 1,5 milliliter om multipliciteiten van infectie van 0,1 en één te bereiken.Gooi vervolgens het geconditioneerde medium uit elke put weg en spoel elke put met 60 microliter HBSS terwijl u de zijkant van de put gebruikt. Voeg 40 microliter verdund virusmonster toe aan het putje, beginnend van de hoogste naar de laagste verdunning, met behulp van de zijkant van het putje. Incubeer de plaat in een celkweekincubator bij 37 graden Celsius met 5% koolstofdioxide om virusabsorptie mogelijk te maken.Draai de plaat elke 15 minuten vijf keer rond om virusabsorptie door de monolaag van de cel mogelijk te maken. Verwijder na een uur incubatie de virussuspensie van de laagste naar de hoogste concentratie en gooi deze weg. Was de geïnfecteerde cellen twee keer met 60 milliliter HBSS.Bedek de putjes met extracellulaire matrix aangevuld met 2%FBS. Verdun voor de positieve controleputjes de trombine in 20 eenheden per milliliter met extracellulaire matrix aangevuld met 2% FBS, en bedek de putjes met trombinehoudend extracellulair matrixmedium, met behulp van de zijkant van het putje. Klik nu op het tabblad planning en voeg een stap toe in de linkerbovenhoek.Navigeer naar Step_3 en wijzig de sweeps in 3.601 en het interval in twee minuten. Klik op toepassen en klik vervolgens op OK in het pop-upvenster. Plaats de geïnfecteerde gespecialiseerde gouden micro-elektrodeplaat met de A1-put naar binnen gericht in het RTCA-station in de kweekincubator.Klik ten slotte op Step_3 en klik op doorgaan in de linkerbovenhoek van de software. De celindexwaarde van HUVEC's geïnfecteerd met Zika-virus P6-740 bij een infectieveelvoud van 0,1 begon 15 uur na infectie te dalen in vergelijking met de negatieve infectiecontrole. De HUVEC's die waren geïnfecteerd met een hogere dosis Zika-virus P6-740 bij een multipliciteit van infectie van één, vertoonden een daling van de celindex 11 uur na infectie.24 uur na infectie was er een daling van 5% en 7% in de genormaliseerde celindexwaarde wanneer de endotheelcellen werden geïnfecteerd met een multipliciteit van infectie van respectievelijk 0,1 en één. Een vermindering van 50% van de genormaliseerde celindexwaarde werd geregistreerd 96 uur na infectie en 66,75 uur na infectie na infectie bij een multipliciteit van infectie van respectievelijk 0,1 en één. De genormaliseerde celindexwaarde bereikte zijn laagste punt 107 uur na infectie, met een reductie van 51% en 60% bij infectie bij een multipliciteit van infectie van respectievelijk 0,1 en één.De genormaliseerde celindexwaarde bleek een toename van 4% en 13% te hebben vanaf 107 uur na infectie tot het einde van het experiment 168 uur na infectie. Voorafgaand aan elk RTCA-experiment is een weerstandsverificatie met behulp van de RTCA-plaat met 96 putjes essentieel om ervoor te zorgen dat elke biosensor goed werkt om betrouwbare celindexwaarden te produceren.

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC)

Isolation of Human Umbilical Vein Endothelial Cells HUVEC

Isolatie van de Mens navelstreng endotheel cellen (HUVEC)

Angiogenesis is a complex multi-step process, where in response to angiogenic stimuli, new vessels are created from the existing vasculature. These steps ...

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs)

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells MSCs and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells ECFCs

Isolatie en dierlijk serum vrije expansie van de mens navelstreng Afgeleid Mesenchymale stromale cellen (MSC&#39;s) en Endotheliale Colony Forming progenitor cellen (ECFCs)

The umbilical cord is a rich source for progenitor cells with high proliferative potential including mesenchymal stromal cells (also termed mesenchymal ...

Monitoring Dynamic Changes In Mitochondrial Calcium Levels During Apoptosis Using A Genetically Encoded Calcium Sensor

Monitoring dynamische veranderingen in het mitochondriaal calciumgehalte Tijdens Apoptosis Met behulp van een genetisch gecodeerd Calcium Sensor

Dynamic changes in intracellular calcium concentration in response to various stimuli regulates many cellular processes such as proliferation, ...

Phenotypic and Functional Characterization of Endothelial Colony Forming Cells Derived from Human Umbilical Cord Blood

Fenotypische en functionele karakterisering van endotheliale Colony Forming Cellen uit menselijk navelstrengbloed

Longstanding views of new blood vessel formation via angiogenesis, vasculogenesis, and arteriogenesis have been recently reviewed1. The presence of ...

FRET Microscopy for Real-time Monitoring of Signaling Events in Live Cells Using Unimolecular Biosensors

FRET microscopie voor Real-time monitoring van Signalering Evenementen in levende cellen met behulp Unimoleculaire Biosensoren

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET) microscopy  continues to gain increasing interest as a technique for real-time monitoring  of biochemical ...

Quantitative, Real-time Analysis of Base Excision Repair Activity in Cell Lysates Utilizing Lesion-specific Molecular Beacons

Kwantitatieve, real-time analyse van Base excisie reparatie Activiteit in Cellysaten gebruik te maken van laesie-specifieke moleculaire Beacons

We describe a method for the quantitative, real-time measurement of DNA glycosylase and AP endonuclease activities in cell nuclear lysates using base ...

Autonomously Bioluminescent Mammalian Cells for Continuous and Real-time Monitoring of Cytotoxicity

Autonoom Bioluminescente zoogdiercellen voor continue en real-time monitoring van de cytotoxiciteit

Mammalian  cell-based in vitro assays have been  widely employed as alternatives to animal testing for toxicological studies but  have been limited due to ...

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

Real Time Analyse van Metabool profiel in<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Muis Intestinale Crypt organoïde Cultures

The small intestinal mucosa exhibits a repetitive architecture organized into two fundamental structures: villi, projecting into the intestinal lumen and ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Hoge-resolutie time-lapse beeldvorming en geautomatiseerde analyse van de dynamiek van microtubuli in Living humane navelstreng endotheelcellen

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

LDL Cholesterol Uptake Assay Using Live Cell Imaging Analysis with Cell Health Monitoring

LDL Cholesterol opname Assay met behulp van levende cellen Imaging analyse met mobiele gezondheidsmonitoring

The regulation of LDL cholesterol uptake through LDLR-mediated endocytosis is an important area of study in various major pathologies including metabolic ...