Många detaljer i typ 1-diabetes sårmodelleringsprocessen är benägna att fel. Det är en svår utmaning för erfarna forskare. Som ett resultat är det nödvändigt att använda detta protokoll.
På det enklaste sättet kan denna teknik effektivt replikera vissa egenskaper hos kroniska diabetiska sår, såsom ingen sårläkning, fördröjd återepitelisering och minskad angiogenes. Streptozotocinlösningen ska användas omedelbart efter beredning. När du skapar såret, se till att sårets storlek och placering måste regleras.
Börja med att lösa streptozotocinpulvret i en lämplig mängd av 0,1 mol per liter natriumcitratbuffert för att uppnå en koncentration på 1% och skaka det i 30 sekunder med en läkemedelsoscillator innan du placerar det i en fin låda. För intraperitoneal injektion av 1% streptozotocinlösning, ta tag i råttan och exponera bukhuden på injektionsstället. Desinficera injektionsstället två gånger med en bomullstuss indränkt i 75% alkohol och placera råttans huvud under buken.
För in nålen parallellt med bukens mittlinje vid 45 grader. Minska sedan nålvinkeln till 30 grader och sätt in två till tre millimeter. Dra försiktigt i nålpluggen, injicera streptozotocinlösningen och dra ut nålen innan du applicerar en bomullspinne.
För att mäta de kausala blodsockernivåerna klockan 9:00 på dag 3 och dag 7, hitta platsen för den kaudala venen. Desinficera råttsvansen två gånger med 75% alkohol innan du punkterar den kaudala venen för att inducera blödning och mäta blodsockret med en glukometer. När du är klar, sluta blödningen med en bomullspinne.
Raka området på 5 x 5 centimeter på ryggsidan av råttan med en elektrisk rakhyvel en dag före sårmodellering. Torka av det rakade området med en varm normal saltlösning bomullstuss och låt den torka för applicering av hårborttagningskräm i fem minuter. Rengör området med gasväv och tvätta eventuell kvarvarande hårborttagningskräm med varm normal saltlösning.
Desinficera sedan rygghuden två gånger med bomullstussar indränkta i jod och 75% alkohol i de alternativa omgångarna. Efter torkning, skär huden med en 20 millimeter diameter cirkulär biopsi stans. Sköt huden med pincett och använd sedan kirurgisk sax för att ta bort hela tjockleken på huden längs stansskärmärkena.
När du är klar, stoppa blödningen med en vanlig saltlösning bomullstuss. Täck såret med vaselingasväv. Diabetes inducerades hos alla råttor efter tre dagars streptozotocininjektion, med blodsockernivån högre än 16,7 millimol per liter.
Glukosnivån stabiliserades fem veckor efter induktionen. Diabetesgruppens vikt ökade gradvis efter streptozotocininjektionen. Vikten minskade i vecka 3 och ökade långsamt igen från vecka 4.
Däremot ökade vikten hos den normala gruppråttan stadigt. Deras medelvikt efter de tre dagarna av diabetesinduktion var högre än diabetesgruppen. Den makroskopiska analysen som utfördes på dag 7 och 14 efter såret avslöjade att reepiteliseringen var mer uttalad hos råttor i normalgruppen än i diabetesgruppen.
De kvantitativa resultaten dag 7 och dag 14 visade att sårläkningshastigheten var signifikant lägre i diabetesgruppen än i normalgruppen. Men på dag 14 var sårläkningsgraden över 90% i diabetesgruppen. De diabetiska såren visade partiell förlust av hårsäckarna och talgkörtlarna med färre synliga kapillärer.
I sårangiogenes analyserad med CD31-immunfärgning visade den genomsnittliga optiska densiteten av CD31-uttryck att angiogenesen vid sårstället var signifikant högre hos normala än i diabetesgruppen. När du modellerar såret, se till att huden på framsidan avlägsnas inklusive epidermis, dermis och subkutan vävnad.
