Name: standardization of transfer across labs between flow cytometers for detection of lymphocytes in japanese encephalitis vaccinated children
Uploaded: 2023-02-10T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Standardization of Transfer across Labs between Flow Cytometers for Detection of Lymphocytes in Japanese Encephalitis Vaccinated Children at JoVE.com

RW werd ondersteund door Beijing Natural Science Foundation, China (nr. 7222059), National Natural Science Foundation of China (nr. 82002130), XZ werd ondersteund door het CAMS Innovation Fund for Medical Sciences (nr. 2019-I2M-5-026).

De studie werd goedgekeurd door de ethische commissie van het Beijing Children's Hospital, Capital Medical University (goedkeuringsnummer: 2020-k-85). Van geïnformeerde toestemming van menselijke proefpersonen werd afgezien omdat in deze studie alleen restmonsters na klinische tests werden gebruikt. Bij dit onderzoek zijn twee labo's betrokken. Het overdrachtslaboratorium is waar de gestandaardiseerde methode werd ontwikkeld met behulp van één flowcytometer. De cytometer in dit lab wordt hierna <stron...

<ol>
	<li>Cabanski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+method+transfer:+Recommendations+for+best+practice.">Flow cytometric method transfer: Recommendations for best practice.</a> Cytometry Part B. Clinical Cytometry. 100 (1), 52-62 (2021).</li><li>Le Lann, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+procedure+for+flow+cytometry+data+harmonization+in+prospective+multicenter+studies.">Standardization procedure for flow cytometry data harmonization in prospective multicenter studies.</a> Scientific Reports. 10 (1), 11567 (2020).</li><li>Linskens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+standardization+of+flow+cytometry+diagnostic+screening+of+primary+immunodeficiency+by+software-based+automated+gating.">Improved standardization of flow cytometry diagnostic screening of primary immunodeficiency by software-based automated gating.</a> Frontiers in Immunology. 11, 584646 (2020).</li><li>Glier, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+8-color+flow+cytometry+across+different+flow+cytometer+instruments:+A+feasibility+study+in+clinical+laboratories+in+Switzerland.">Standardization of 8-color flow cytometry across different flow cytometer instruments: A feasibility study in clinical laboratories in Switzerland.</a> Journal of Immunological Methods. 475, 112348 (2019).</li><li>Wang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemiology+and+disease+burden+of+children+hospitalized+for+viral+infections+within+the+family+Flaviviridae+in+China:+A+national+cross-sectional+study.">The epidemiology and disease burden of children hospitalized for viral infections within the family Flaviviridae in China: A national cross-sectional study.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 16 (7), e0010562 (2022).</li><li>Ding, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reference+values+for+peripheral+blood+lymphocyte+subsets+of+healthy+children+in+China.">Reference values for peripheral blood lymphocyte subsets of healthy children in China.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 142 (3), 970-973 (2018).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+polyfunctional+T+cells+in+children+vaccinated+with+Japanese+encephalitis+vaccine+via+the+flow+cytometry+technique.">Detection of polyfunctional T cells in children vaccinated with Japanese encephalitis vaccine via the flow cytometry technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (187), e64671 (2022).</li><li>Yu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD4(+)+CD25+(+)+CD127+(low/-)+T+cells:+a+more+specific+Treg+population+in+human+peripheral+blood.">CD4(+) CD25 (+) CD127 (low/-) T cells: a more specific Treg population in human peripheral blood.</a> Inflammation. 35 (6), 1773-1180 (2012).</li><li>Kalina, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproducibility+of+flow+cytometry+through+standardization:+opportunities+and+challenges.">Reproducibility of flow cytometry through standardization: opportunities and challenges.</a> Cytometry Part A. 97 (2), 137-147 (2020).</li><li>Sommer, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implementation+of+highly+sophisticated+flow+cytometry+assays+in+multicenter+clinical+studies:+considerations+and+guidance.">Implementation of highly sophisticated flow cytometry assays in multicenter clinical studies: considerations and guidance.</a> Bioanalysis. 7 (10), 1299-1311 (2015).</li><li>Glier, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comments+on+EuroFlow+standard+operating+procedures+for+instrument+setup+and+compensation+for+BD+FACS+Canto+II,+Navios+and+BD+FACS+Lyric+instruments.">Comments on EuroFlow standard operating procedures for instrument setup and compensation for BD FACS Canto II, Navios and BD FACS Lyric instruments.</a> Journal of Immunological Methods. 475, 112680 (2019).</li></ol>

Immunofenotypering van perifere bloedlymfocytensubgroepen kan helpen de veranderingen in celgemedieerde adaptieve immuniteit na vaccinatie bij kinderen te begrijpen. In klinische toepassingen doen zich onverwachte situaties voor, zoals het niet tijdig detecteren van monsters of het vervangen van een flowcytometer; Daarom zijn snelle gestandaardiseerde methoden nodig die overdrachten tussen flowcytometers in verschillende laboratoria vergemakkelijken 9,10,11....

De standaardisatie van flowcytometrie is nuttig voor de vergelijkbaarheid van resultaten verkregen van verschillende cytometers in verschillende laboratoria en studiecentra, en bevorderlijk voor de wederzijdse erkenning van resultaten om de werkefficiëntie te verbeteren. Steeds meer scenario's vragen om standaardisatie. Tijdens het ontwikkelingsproces van geneesmiddelen is standaardisatie van flowcytometrie belangrijk, omdat een ontwikkelde en gevalideerde test het hele ontwikkelingsproces van geneesmiddelen van preklinische tot klinische analyse zal ondersteunen. Flowcytometrische methoden worden vaak overgedragen tussen de farmaceutische industrie en samenwerkende laboratoria1. Bovendien is het essentieel om vergelijkbare gegevens te verkrijgen uit multicentrische klinische studies. In het Systemic Autoimmune Diseases Multicenter Clinical Research Project is bijvoorbeeld een standaardisatieworkflow ontwikkeld om vergelijkbare gegevens uit multicentrische flowcytometrie2 te verkrijgen.
De standaardisatie van flowcytometriemethoden is een uitdaging. De uitdagingen die in laboratoria worden ervaren, worden toegeschreven aan het gebrek aan gestandaardiseerde materialen, softwarecompatibiliteitsproblemen, inconsistenties in instrumentconfiguratie en het gebruik van verschillende configuraties tussen verschillende flowcytometers en divergente gatingstrategieën tussen de centra 3,4. Daarom is het belangrijk om een gap-analyse tussen laboratoria uit te voeren. Monstertoegang, kwaliteitssystemen, personeelskwalificaties en instrumentconfiguratie moeten worden herzien om ervoor te zorgen dat aan de vereisten wordt voldaan.
Op dit moment hebben kinderen die zijn gevaccineerd met het Japanse encefalitis (JE) -vaccin een significant verminderde incidentie van JE5. Het monitoren van perifere bloedimmuuncellen kan helpen bij het begrijpen van de veranderingen in celgemedieerde adaptieve immuniteit na vaccinatie, en de correlatie tussen de veranderingen in perifere bloedlymfocytensubsets en de effecten van vaccinatie. Vanwege de beperkte stabiliteit van volbloedmonsters worden evaluaties van de werkzaamheid van het vaccin vaak in meerdere centra uitgevoerd. Voor deze analyse definieerden we naïeve CD8+ of CD4+ T-cellen als CD27+ CD45RA+, centrale geheugen T-cellen (T CM) als CD27+ CD45RA-, effectorgeheugen T-cellen (TEM) als CD27- CD45RA-, en terminaal gedifferentieerde effectorgeheugen T-cellen (T EMRA) als CD27- CD45RA+. CD19+ B-cellen kunnen worden onderverdeeld in populaties die CD27 versus IgD 6,7 tot expressie brengen, naïeve B-cellen drukken CD27n-geheugen tot expressie B-cellen (mBC's) kunnen worden geïdentificeerd op basis van de expressie van IgD6, en regulerende T-cellen (Tregs) kunnen worden geïdentificeerd als CD4 + CD25 ++ CD127laag 8. Om een gestandaardiseerd flowcytometrie-experiment op te zetten om de consistentie en vergelijkbaarheid van experimentele resultaten in meerdere centra te bereiken, werd een snelle en haalbare standaardisatiemethode vastgesteld om de overdracht van protocollen over verschillende flowcytometers voor de detectie van lymfocyten in het volbloed van JE-gevaccineerde kinderen te vergemakkelijken. Zes gezonde kinderen (2 jaar oud) werden gerekruteerd uit het Beijing Children's Hospital, Capital Medical University. Na het ontvangen van een prime en boost vaccinatie met een levend verzwakt JE SA14-14-2 vaccin minder dan 6 maanden eerder, werden perifere bloedmonsters verzameld van de vrijwilligers. Zeer vergelijkbare gegevens werden verkregen uit verschillende instrumenten volgens gestandaardiseerde procedures, wat nuttig is voor multicenter-beoordelingen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BD CompBeads Anti-Mouse Ig, &#954;/Negative Control Compensation Particles Set</td>
			<td>BD</td>
			<td>552843</td>
			<td>compensation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCanto</td>
			<td>BD</td>
			<td>FACSCanto</td>
			<td>flow Cytometry A in the transferring lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSDiva CS&#38;T Research Beads</td>
			<td>BD</td>
			<td>655051</td>
			<td>define flow cytometer baseline and track cytometer performance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Horizon BV421 Mouse Anti-Human CD127</td>
			<td>BD</td>
			<td>562436</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Horizon BV605 Mouse Anti-Human CD27</td>
			<td>BD</td>
			<td>562656</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Horizon V500 Mouse Anti-Human CD45</td>
			<td>BD</td>
			<td>560777</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD LSRFortessa</td>
			<td>BD</td>
			<td>LSRFortessa</td>
			<td>flow Cytometry B in the test method lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD OptiBuild BB700 Mouse Anti-Human CD19</td>
			<td>BD</td>
			<td>745907</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD OptiBuild R718 Mouse Anti-Human CD8</td>
			<td>BD</td>
			<td>751953</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Pharmingen APC Mouse Anti-Human CD45RA</td>
			<td>BD</td>
			<td>550855</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Pharmingen APC-H7 Mouse Anti-Human CD3</td>
			<td>BD</td>
			<td>560176</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Pharmingen FITC Mouse Anti-Human CD4</td>
			<td>BD</td>
			<td>566320</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Pharmingen PE Mouse Anti-Human CD25</td>
			<td>BD</td>
			<td>555432</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Pharmingen PE-Cy7 Mouse Anti-Human IgD</td>
			<td>BD</td>
			<td>561314</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Staining Buffer Plus</td>
			<td>BD</td>
			<td>566385</td>
			<td>Staining Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5810</td>
			<td>Cell centrifugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge Tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>BD-35209715</td>
			<td>15 mL centrifuge tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CS&#38;T IVD Beads</td>
			<td>BD</td>
			<td>662414</td>
			<td>standard beads to setup cytometer settings in different flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lysing Solution 10x Concentrate</td>
			<td>BD</td>
			<td>349202</td>
			<td>lysing red blood cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-023</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-bottom test tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352235</td>
			<td>5 mL test tube</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

standardization of transfer across labs between flow cytometers for detection of lymphocytes in japanese encephalitis vaccinated children

Een toenemend aantal laboratoria moet gegevens verzamelen van meerdere flowcytometers, vooral voor onderzoeksprojecten die in meerdere centra worden uitgevoerd. De uitdagingen van het gebruik van twee flowcytometers in verschillende laboratoria omvatten het gebrek aan gestandaardiseerde materialen, softwarecompatibiliteitsproblemen, inconsistenties in instrumentinstellingen en het gebruik van verschillende configuraties voor verschillende flowcytometers. Om een gestandaardiseerd flowcytometrie-experiment op te zetten om de consistentie en vergelijkbaarheid van experimentele resultaten over meerdere centra te bereiken, werd een snelle en haalbare standaardisatiemethode vastgesteld om parameters over verschillende flowcytometers over te dragen. 
De methoden die in deze studie werden ontwikkeld, maakten de overdracht van experimentele instellingen en analysesjablonen mogelijk tussen twee flowcytometers in verschillende laboratoria voor de detectie van lymfocyten bij Japanse encefalitis (JE) -gevaccineerde kinderen. Een consistente fluorescentie-intensiteit werd verkregen tussen de twee cytometers met behulp van fluorescentiestandaardparels om de cytometerinstellingen vast te stellen. Vergelijkbare resultaten werden verkregen in twee laboratoria met verschillende soorten instrumenten. Met behulp van deze methode kunnen we de analyse voor het evalueren van de immuunfunctie van JE-gevaccineerde kinderen in verschillende laboratoria met verschillende instrumenten standaardiseren, de verschillen in gegevens en resultaten tussen flowcytometers in meerdere centra verminderen en een haalbare aanpak bieden voor de wederzijdse accreditatie van laboratoriumresultaten. De standaardisatiemethode van flowcytometerexperimenten zal zorgen voor de effectieve uitvoering van onderzoeksprojecten in meerdere centra.

Figuur 1 toont een globaal werkblad van de doelwaardesjabloon voor de CST heldere kralen. Met behulp van een FSC/SSC-plot wordt een polygoonpoort getekend om de CST-heldere kralen te selecteren. Histogramplots van 10 fluorescentiekanalen werden verkregen voor de CST heldere kralen: FITC, PE, BB700, PE-Cy7, APC, R718, APC-H7, BV421, V500 en BV605. De doelwaarde voor elke parameter wordt weergegeven door de mediaan binnen de histogrampoorten in tabel 2 weer te geven. De screen...

Watch this Scientific Journal Video about Standardization of Transfer across Labs between Flow Cytometers for Detection of Lymphocytes in Japanese Encephalitis Vaccinated Children at JoVE.com

Standardization of Transfer across Labs between Flow Cytometers for Detection of Lymphocytes in Japanese Encephalitis Vaccinated Children

In deze studie werd een methode ontwikkeld om de overdracht van experimentele instellingen en analysesjablonen tussen twee flowcytometers in twee laboratoria voor de detectie van lymfocyten bij Japanse encefalitis-gevaccineerde kinderen te vergemakkelijken. De standaardisatiemethode voor de flowcytometerexperimenten zal het mogelijk maken om onderzoeksprojecten effectief uit te voeren in meerdere centra.

Standaardisatie van overdracht tussen laboratoria tussen flowcytometers voor detectie van lymfocyten bij Japanse encefalitis gevaccineerde kinderen

An increasing number of laboratories need to collect data from multiple flow cytometers, especially for research projects performed across multiple ...

De standaardisatiemethode van de flowcytometer biedt een haalbare aanpak voor de wederzijdse accreditatie van laboratoriumresultaten en zorgt voor de consistentie van resultaten met onderzoeksprojecten in meerdere centra. De methode minimaliseert het tijdsverbruik is eenvoudig uit te voeren, is uitgerust om te automatiseren, analyseert sjabloon en kan de vereiste van gegevensanalyse drastisch verminderen. Begin met het maken van een nieuwe configuratie in de software van cytometer A, vanuit het overdrachtslaboratorium, door op de cytometerknop te klikken en weergaveconfiguraties te kiezen.Klik met de rechtermuisknop op de map basisconfiguraties in de configuratielijst, kies nieuwe map en hernoem deze. Maak vervolgens een nieuwe configuratie door met de rechtermuisknop op de basisconfiguratie te klikken en deze te kopiëren. Klik met de rechtermuisknop op de nieuwe map en plak de basisconfiguratie voordat u de nieuwe configuratie hernoemt, Gestandaardiseerde methodeoverdracht"Sleep de parameternaam, zoals FETC uit de lijst met parameters, naar de juiste detector 530/30, bewerk ook aanvullende parameters voor de nieuwe configuratie.Om het experiment in het overbrengende laboratorium te standaardiseren, voert u een prestatiecontrole uit met behulp van deze cytometer A-opstelling en volgt u de kralen om te controleren of de cytometer A goed presteert. Klik met de rechtermuisknop op cytometer A-instellingen in het softwarebrowservenster en maak een werkblad door de toepassingsinstellingen te selecteren. Gebruik vervolgens een niet-gekleurd monster om de fotovermenigvuldigingsbuis of PMT-spanningen van het voorwaartse verstrooiingsgebied of FSC en het zijverstrooiingsgebied of SSC en alle fluorescentieparameters aan te passen.Sla de toepassingsinstellingen op door met de rechtermuisknop op de cytometerinstellingen van het experiment te klikken en toepassingsinstellingen te selecteren. Als u automatisch compensatiebesturingselementen wilt toevoegen, klikt u op de knop Experiment en selecteert u het menu voor het instellen van compensatie voordat u Compensatiebesturingselementen maken selecteert. Registreer gegevens voor alle compensatiecontrolekralen.Als u klaar bent, klikt u op het experiment en selecteert u compensatie-instelling, berekent u de compensatie automatisch voordat u de gegevens voor met één cel gekleurde besturingselementen opneemt. gebruik CD45 RAA APC om de compensatiewaarde van R7-18 te wijzigen in 15% APC, gebruik CD19 BB700 om de compensatiewaarde van APC H7 te wijzigen in 14% BB700 en gebruik CD8 R7-18 om de compensatiewaarde van APC H7 te wijzigen in 60% R7-18. Nadat u de gegevens voor de CST-kralen hebt vastgelegd, maakt u een globaal werkblad van de doelwaardesjabloon voor de CST-heldere kralen, zodra u klaar bent, voert u de monsters uit op de flowcytometerarray en verzamelt u 25.000 lymfocyten.Maak een globaal werkblad van de analysesjabloon voor de monsters en sla de experimentele sjabloon op cytometer A. Exporteer de experimentele sjabloon met behulp van de cd-rom. Om de experimentele sjabloon over te brengen naar cytometer B in het testlaboratorium, voert u een prestatiecontrole uit met CST-kralen om te controleren of cytometer B goed presteert. Importeer de experimentele sjabloon uit cytometer A en maak een experiment voor cytometer B met behulp van de sjabloon.Met dezelfde partij CST-kralen passen de fluorescerende parameterspanningen voor elk fluorescentiekanaal aan het vorige MFI-instrument aan. Pas indien nodig de FSC-spanning aan met behulp van het niet-gekleurde monster. Klik met de rechtermuisknop op de instellingen van de experimentele cytometer en selecteer toepassingsinstellingen om de toepassingsinstellingen op te slaan.Wijzig vervolgens de compensatiewaarde van R7-18 naar 15% APC met behulp van CD45 RA APC. Gebruik CD19 BB700 om de compensatiewaarde van APC H7 te wijzigen in 24%BB700. En gebruik CD8 R7-18 om de compensatiewaarde van APC H7 te wijzigen in 60% R7-18.Na wijziging van de compensatiewaarde voert u de monsters uit op de flowcytometer B en verzamelt u 25.000 lymfocyten. In een globaal werkblad van de doelwaardesjabloon voor het instellen en volgen van de cytometer, of CST heldere kralen, werden de histogramplots van 10 fluorescentiekanalen verkregen, de doelwaarde voor elke parameter werd weergegeven door de mediaan binnen de histogrampoorten weer te geven. de dot plots van het monster verkregen met behulp van de cytometer A en B na instrumentstandaardisatie, toonden de consistentie van gegevens tussen verschillende instrumenten met behulp van een automatische analysesjabloon.Er werd geen significant verschil waargenomen toen de resultaten van zes monsters werden vergeleken over twee verschillende instrumentmodellen. De resultaten van 15 lymfoïde subgroepen verkregen uit verschillende instrumenten met behulp van de gestandaardiseerde methode verkregen zeer vergelijkbare gegevens. Dezelfde configuratienaam, het maken van de sjabloon en het maken van de ecotech-waarden van veiligheidsparels in verschillende instrumenten zijn kritieke stappen in dit protocol.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combinatie van Adhesive-tape-gebaseerde Sampling en fluorescentie In situ Hybridisatie voor snelle detectie van Salmonella Op Fresh Produce

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization (LNA flow-FISH): a Method for Bacterial Small RNA Detection

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization LNA flow-FISH: a Method for Bacterial Small RNA Detection

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescentie In situ Hybridisatie (LNA flow-FISH): een methode voor Bacteriële Kleine RNA-detectie

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a powerful technique that is used to detect and localize specific nucleic acid sequences in the cellular ...

Total Protein Extraction and 2-D Gel Electrophoresis Methods for Burkholderia Species

Total Protein Extraction and 2-D Gel Electrophoresis Methods for Burkholderia Species

Totaal Eiwitextractie en 2-D gelelektroforese Werkwijzen voor<em&gt; Burkholderia</em&gt; Soorten

The investigation of  the intracellular protein levels of bacterial species is of importance to  understanding the pathogenic mechanisms of diseases ...

Detection of Fluorescent Nanoparticle Interactions with Primary Immune Cell Subpopulations by Flow Cytometry

Detectie van TL Nanoparticle Interacties met Primary Immune celtypes door flowcytometrie

Engineered nanoparticles are endowed with very promising properties for therapeutic and diagnostic purposes. This work describes a fast and reliable ...

A Simple and Rapid Protocol to Non-enzymatically Dissociate Fresh Human Tissues for the Analysis of Infiltrating Lymphocytes

Een eenvoudige en snelle protocol bij niet-enzymatisch distantiëren Verse menselijke weefsels voor de Analyse van Infiltrating Lymfocyten

The ability of malignant cells to evade the immune system, characterized by tumor escape from both innate and adaptive immune responses, is now accepted ...

Isolation and Flow Cytometric Characterization of Murine Small Intestinal Lymphocytes

Isolatie en Flowcytometrische karakterisatie van muizen dunne darm lymfocyten

The intestines &#8212; which contain the largest number of immune cells of any organ in the body &#8212; are constantly exposed to foreign antigens, both ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

Het visualiseren van de effecten van het sputum op biofilm ontwikkeling met behulp van een chambered dekglaasje Model

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolatie en In Vitro cultuur van lymfkliertest en menselijke alveolaire macrofagen

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Een High-throughput Platform voor de Screening van Salmonella spp. /Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...