Name: real-time measurement of the mitochondrial bioenergetic profile of neutrophils
Uploaded: 2023-06-02T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-Time Measurement of the Mitochondrial Bioenergetic Profile of Neutrophils at JoVE.com

UConn Health İmmünoloji Bölümü'nden Dr. Anthony T. Vella ve Dr. Federica Aglianoin'e metabolik hücre dışı akı analizörünü kullanma konusundaki eğitimleri için ve UConn Health İmmünoloji Bölümü'nden Dr. Lynn Puddington'a enstrümanlara verdiği destek için teşekkür ederiz. UConn Tıp Fakültesi'nden Dr. Geneva Hargis'e bu makalenin bilimsel yazımı ve düzenlenmesindeki yardımları için teşekkür ederiz. Bu araştırma, Ulusal Sağlık Enstitüleri, Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüsü (R01HL145454), Ulusal Genel Tıp Bilimleri Enstitüsü (R35GM147713 ve P20GM139763), UConn Health'ten bir başlangıç fonu ve Amerikan İmmünologlar Birliği'nden bir Kariyer yeniden giriş bursu ile desteklenmiştir.

Heparinize edilmiş tam kan örnekleri, Helsinki Deklarasyonu'na uygun olarak UConn Health Kurumsal İnceleme Kurulu tarafından onaylandığı gibi, bilgilendirilmiş onam alındıktan sonra sağlıklı insan bağışçılarından alınmıştır. Tüm hayvan deneyleri, UConn Sağlık Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) yönergelerini izledi ve kemirgenlerin kullanımı için onay, Ulusal Sağlık Enstitüleri'nden Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'nda belirtilen kriterler...

Metabolik hücre dışı akı analizörünü kullanarak nötrofillerin mitokondriyal solunumunu ölçen standart prosedür, hücre sayısı, hücre büyümesi ve canlılık gibi birçok faktörle sınırlıdır. Her bileşik konsantrasyonu, bu tahlildeki hücrelerin tipi ve kaynağı arasında değişir. Oligomisin ve rotenon / antimisin A, çoğu hücre tipi arasında çoğunlukla benzer konsantrasyonda kullanılır. Bununla birlikte, FCCP kaynaklı maksimum solunum hızı farklı hücreler arasında değiştiğinden, ...

Mitokondri, oksidatif fosforilasyon (OXPHOS) ile adenozin trifosfat (ATP) üreten hücre biyoenerjetik maddelerinde önemli bir rol oynar. Buna ek olarak, mitokondrinin rolü, reaktif oksijen türlerinin üretilmesi ve detoksifikasyonuna, sitoplazmik ve mitokondriyal matriks kalsiyum regülasyonuna, hücresel senteze, katabolizmaya ve metabolitlerin hücre1 içinde taşınmasına kadar uzanır. Mitokondriyal solunum tüm hücrelerde esastır, çünkü işlev bozuklukları kardiyovasküler hastalıklar3 dahil olmak üzere metabolik sorunlara2 ve yaşa bağlı makula dejenerasyonu4, Parkinson ve Alzheimer hastalıkları5 ve Charcot-Marie-Tooth hastalığı 2 A (CMT2A)6 gibi çok çeşitli nörodejeneratif hastalıklara neden olabilir.
Nötrofiller üzerinde yapılan elektron mikroskobik çalışmaları, nispeten az sayıda mitokondri7 olduğunu ve mitokondriyal solunum hızları çok düşük olduğu için enerji üretimi için glikolize büyük ölçüde güvendiklerini ortaya koymuştur8. Bununla birlikte, mitokondri, kemotaksis9 ve apoptoz10,11,12 gibi nötrofil fonksiyonları için çok önemlidir. Önceki bir çalışma, yüksek membran potansiyeline sahip insan nötrofillerinde karmaşık bir mitokondriyal ağ ortaya koymuştur. Mitokondriyal membran potansiyel kaybı, nötrofil apoptozunun erken bir göstergesidir10. Mitokondriyal uncoupler karbonil siyanür m-klorofenil hidrazon (CCCP) ile tedavi, mitokondriyal morfolojide bir değişiklik ile birlikte kemotaksiste önemli inhibisyon göstermiştir 9,10.
Nötrofiller için birincil enerji kaynağı glikoliz olmasına rağmen, mitokondri, Ca2 + sinyallemesini artıran, mitokondriyal ATP üretimini artıran ve nötrofil fonksiyonel yanıtlarını başlatan pürinerjik sinyallemenin ilk aşamasını besleyerek nötrofil aktivasyonunu başlatan ATP'yi sağlar13. Mitokondriyal solunum zincirinin disfonksiyonu, toksik reaktif oksijen türlerinin (ROS) aşırı üretimine neden olur ve patojenik hasarlara yol açar14,15,16. Nötrofil hücre dışı tuzakları (NET'ler) oluşturma süreci olan NETosis, nötrofillerin patojenlere karşı savaşmalarına yardımcı olan kritik bir özelliktir17 ve kanser, tromboz ve otoimmün bozukluklar18 dahil olmak üzere birçok patolojik duruma katkıda bulunur. Mitokondriyal kaynaklı ROS, NETosis19'a katkıda bulunur, mitokondriyal DNA, NETs18'in bir bileşeni olabilir ve değiştirilmiş mitokondriyal homeostaz, NETosis 20,21,22,23,24'ü bozar. Ayrıca, normal farklılaşma veya olgunlaşma sırasında, nötrofil metabolik yeniden programlama, glikolitik aktiviteyi sınırlayarak tersine döner ve mitokondriyal solunuma katılır ve hücre içi lipitleri harekete geçirir25,26.
Metabolik hücre dışı akı analizörü, canlı hücre mitokondriyal solunumu ve glikolizi sürekli olarak izleyebilir ve ölçebilir. Analizör, oksijen (O2) konsantrasyonunu ve pH değişikliklerini ölçmek için 96 delikli plaka formatlı bir sensör kartuşu ve iki florofor kullanır. Sensör kartuşu, tahlil sırasında hücre tek katmanının üzerindedir ve ~ 200 nm yüksekliğinde bir mikro oda oluşturur. Analizördeki optik fiber demetleri, floroforları uyarmak ve floresan yoğunluğu değişikliklerini tespit etmek için kullanılır. O2 konsantrasyonu ve pH'daki gerçek zamanlı değişiklikler otomatik olarak hesaplanır ve oksijen tüketim oranı (OCR) ve hücre dışı asitleşme oranı (ECAR) olarak gösterilir. Sensör kartuşunda, tahlil ölçümleri sırasında her bir kuyucuğa dört adede kadar bileşiğin yüklenmesine izin veren dört bağlantı noktası vardır. Bu protokol, metabolik hücre dışı akı analizörünü kullanarak fare ve insan nötrofillerinin mitokondriyal solunumunun yanı sıra nötrofil benzeri HL60 hücrelerinin ölçülmesine odaklanır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>37 &#176;C non-CO2&#160;incubator</td>
			<td>Precision</td>
			<td>Economy Model 2EG</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biorender</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Software Application</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Model 5810R</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;Cell-Tak Cell and Tissue Adhesive</td>
			<td>Corning</td>
			<td>102416-100</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasySep Magnet</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>18000</td>
			<td>Magnet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasySepMouse Neutrophil Enrichment kit</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>19762A</td>
			<td>Reagents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphpad Prism 9</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Software Application</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin Solution (25%)</td>
			<td>GeminiBio</td>
			<td>800-120</td>
			<td>Reagents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine (VetaKet)</td>
			<td>DAILYMED</td>
			<td>NDC 59399-114-10</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Cytiva</td>
			<td>SH30256.01</td>
			<td>Reagents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate buckets</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>UL155</td>
			<td>Accessory</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PolymorphPrep</td>
			<td>PROGEN</td>
			<td>1895 (previous 1114683)</td>
			<td>polysaccharide solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified mouse anti-human CD18 antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>302102</td>
			<td>Clone TS1/18</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11-875-093</td>
			<td>Reagents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse metabolic extracellular flux analyzer</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>XFe96</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF Cell Mito Stress Test Kit</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>103015-100</td>
			<td>mitochondrial stress test Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swing-bucket rotor</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>A-4-62</td>
			<td>Rotor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vactrap 2 Vacum Trap</td>
			<td>Fox Lifesciences</td>
			<td>3052101-FLS</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wave</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Software Application</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF 1.0 M Glucose Solution</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>103577-100</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF 100 mM Pyruvate Solution</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>103578-100</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF 200 mM Glutamine Solution</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>103579-100</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF DMEM medium</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>103575-100</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XFe96 FluxPak</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>102601-100</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine (AnaSed Injection)</td>
			<td>DAILYMED</td>
			<td>NDC 59399-110-20</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time measurement of the mitochondrial bioenergetic profile of neutrophils

Nötrofiller ilk savunma hattıdır ve insanlarda en bol bulunan lökositlerdir. Bu efektör hücreler fagositoz ve oksidatif patlama gibi işlevleri yerine getirir ve mikrobiyal klirens için nötrofil hücre dışı tuzaklar (NET'ler) oluşturur. Nötrofillerin metabolik aktivitelerine ilişkin yeni anlayışlar, öncelikle glikolize dayandıkları erken kavramına meydan okuyor. Metabolik aktivitelerin hassas ölçümü, fizyolojik koşullar altında ve hastalık durumlarında trikarboksilik asit (TCA) döngüsü (Krebs döngüsü olarak da bilinir), oksidatif fosforilasyon (OXPHOS), pentoz fosfat yolu (PPP) ve yağ asidi oksidasyonu (FAO) dahil olmak üzere nötrofillerin farklı metabolik gereksinimlerini ortaya çıkarabilir. Bu yazıda, fare kemik iliği kaynaklı nötrofiller, insan kanından türetilmiş nötrofiller ve nötrofil benzeri HL60 hücre hattı üzerindeki mitokondriyal solunumun bir göstergesi olarak oksijen tüketim hızını (OCR) ölçmek için adım adım bir protokol ve ön gereksinimler, metabolik bir hücre dışı akı analizörü üzerinde metabolik akı analizi kullanılarak açıklanmaktadır. Bu yöntem, normal ve hastalık koşulları altında nötrofillerin mitokondriyal fonksiyonlarını ölçmek için kullanılabilir.

Fare nötrofillerinin oligomisin, FCCP ve rotenon / antimisin A karışımına (Şekil 3A), insan nötrofillerine (Şekil 3B) ve farklılaşmamış ve farklılaşmış HL60 hücrelerine (Şekil 3C) yanıt olarak mitokondriyal solunum değişikliklerini gösteren temsili OCR dinamikleri gösterilmiştir. Tüm hücrelerde, oligomisin tedavisi, ATP sentazın proton kanalını inhibe ederek OCR değerini düşürür; FCCP tedavisi, memb...

Watch this Scientific Journal Video about Real-Time Measurement of the Mitochondrial Bioenergetic Profile of Neutrophils at JoVE.com

Real-Time Measurement of the Mitochondrial Bioenergetic Profile of Neutrophils

Metabolik hücre dışı akı analizörünü kullanarak fare ve insan nötrofillerinin ve HL60 hücrelerinin mitokondriyal solunumunu ölçen kademeli protokolleri açıklıyoruz.

Nötrofillerin mitokondriyal biyoenerjetik profilinin gerçek zamanlı ölçümü

Neutrophils are the first line of defense and the most abundant leukocytes in humans. These effector cells perform functions such as phagocytosis and ...

Bu protokol, fare ve insan nötrofillerinin mitokondriyal solunumunun yanı sıra metabolik hücre dışı akı analizörü kullanılarak nötrofil benzeri HL60 hücrelerinin ölçülmesine odaklanmaktadır. Bu yöntem, normal ve hastalık koşulları altında nötrofillerdeki mitokondriyal fonksiyonu ölçmemizi sağlar. Bu, ilaçlara veya herhangi bir hastalık durumuna yanıt olarak hücrelerin mitokondriyal fonksiyonu hakkında fikir verebilen basit bir tekniktir.Farklı hücreler farklı mitokondriyal solunum verimliliğine sahip olduklarından, yüksek kaliteli sonuçlar elde etmek için hücre tohumlama yoğunluğunun ve reaktif konsantrasyonunun optimizasyonu doğru bir şekilde yapılmalıdır. Metabolik hücre dışı akı testine başlamak için, özel olarak tasarlanmış 96 delikli bir plaka üzerinde paketlenmiş bir sensör kartuşu alın ve altta yatan plakanın her bir kuyucuğuna 200 mikrolitre kalibrasyon ortamı aktarın. Kartuşu ve plakayı calibrant ile dikkatlice kaldırın ve hidrasyon için gece boyunca karbondioksit nemlendirilmiş 37 santigrat derece inkübatöre yerleştirin.Daha sonra, hücre tipine bağlı olarak, hücre yapışmasını sağlamak için 96 delikli plakayı belirli bir kaplama ile kaplayın. Daha sonra, plakaları iki kez 200 mikrolitre steril PBS ile yıkayın. DMEM'deki tahlil ortamını bir milimolar piruvat, 10 milimolar glikoz ve iki milimolar glutamin ile hazırlayın.Fare ve insan nötrofil hücrelerini metin el yazmasında açıklandığı gibi tedarik edin. Fareden temin edilen nötrofiller için, tahlil ortamı ekleyerek hücre yoğunluğunu mililitre başına altıncı hücrelere 1.1 kat 10 olarak ayarlayın. Daha sonra hazırlanan 96 delikli plakaya kuyu başına 180 mikrolitre fare nötrofil süspansiyonu tohumlayın.Benzer şekilde, insan nötrofil hücre yoğunluğunu, tahlil ortamını kullanarak mililitre başına altıncı hücrelere 2.2 kat 10'a ayarlayın. Tahlil gününde, hemositometreyi kullanarak nötrofil benzeri HL60 hücrelerini manuel olarak sayın. Daha sonra farklılaşmış veya farklılaşmamış HL60 hücrelerini oda sıcaklığında 300G'de beş dakika boyunca santrifüj edin.Hücreleri DMEM ile bir kez yıkayın ve mililitre başına 1.39 kat 10 ila altıncı hücreler arasında bir hücre yoğunluğu elde etmek için tahlil ortamında tekrar askıya alın. Daha sonra, fare ve insan nötrofil örneklerini içeren önceden hazırlanmış 96 delikli plakaya 180 mikrolitre farklılaştırılmış veya farklılaşmamış HL60 hücresi tohumlayın. Son olarak, tohumlama sırasında arka plan düzeltmesi için hücrelerden yoksun hücre kültürü plakasının köşe kuyucuklarına tam bir ortam ekleyin.Plakanın altındaki hücrelerin düzgün bir şekilde yapışmasını sağlamak için plakayı oda sıcaklığında 300G'de üç dakika boyunca ara vermeden santrifüj edin. Son olarak, hücreleri tahlil ortamıyla önceden dengelemek için plakayı bir saat boyunca inkübe edin. Mitokondriyal stres test kitini açın ve reaktifleri üreticinin talimatlarına göre hazırlayın.Daha sonra, kartuşu, hazırlanan oligomisin ile başlayarak A portuna, FCCP B portuna ve rotenon / antimisin A karışımını enjeksiyonlar için Port C'ye reaktiflerle yükleyin. Kullanılmayan portları 20 mikrolitre tahlil ortamı ile doldurun. Wave yazılımını açıp Isıtıcı Açık sekmesine tıklayarak tahlilden en az beş saat önce tahlil sistemini 37 santigrat derecede dengeleyin.Sıcaklığa ulaştıktan sonra Wave yazılımının sol alt köşesi hazır görünüyor. Yazılımda mitokondriyal stres testi kiti için bir şablon açın. Sol taraftaki enjeksiyon stratejilerini seçin, ardından Ekle'ye tıklayın ve enjeksiyon durumunu insan nötrofilleri veya fare nötrofilleri veya HL60 olarak adlandırın.Her birine tıklayarak A'dan D'ye bağlantı noktasını seçin ve Bileşik Ekle'ye tıklayın ve ilgili konsantrasyonlarla oligomisin veya FCCP veya rotenon / antimisin A'yı girin. Sol taraftaki Ön İşlem'i seçin, ardından Ekle'ye tıklayın ve bunları CD18 ve Hücre Tak'ı ayrı ayrı adlandırın. Sol taraftaki Hücre Türü'nü seçin.Ardından Ekle'ye tıklayın ve bunları insan nötrofilleri, fare nötrofilleri ve HL60 veya DHL60 olarak uygun bir besleme yoğunluğuyla adlandırın. Grup Ekle'ye tıklayarak grupları tanımlayın. Ardından altı çizili tanıma tıklayın.Sol tarafta tanımları olan tüm grupları ve sağda plaka haritasını gözlemlemek için üst menüdeki Plaka Haritası'na tıklayın. Dört köşe kuyucuğunu arka plan olarak korurken her bir kuyucuğu gruba eklemek için sürükleyip bırakın. Protokolü ayarlamak için, üst menüdeki Protokol sekmesini seçin ve karıştırma süresini üç dakika, dinlenme süresini sıfır dakika ve ölçüm süresini yedi dakika olarak ayarlayarak üç döngü taban çizgisi, oligomisin, FCCP, rotenon ve antimisin A karışımı tanımlayın.Testi Çalıştır sayfasına gidin, başvuru için proje özet bilgilerini sağlayın ve Çalıştırmayı Başlat'a tıklayın. Dosyaların kaydedileceği konumu verin, böylece tüm sonuçlar tahlilin tamamlanmasından sonra kaydedilir. Ardından tekrar Çalıştırmayı Başlat'a tıklayın.Tahlilin otomatik olarak yüklenmesinden sonra, sensör kartuşunu ve plakayı 200 mikrolitre calibrant ile yerleştirmek için tepsinin açılmasını bekleyin. Kartuş barkod yönünü sağa bakacak şekilde ayarlayın. Hazırım'ı tıklatarak kalibrasyonu çalıştırın, bu işlem yaklaşık 20 dakika sürer.Kalibrasyondan sonra, Tepsiyi Aç'a tıklayın, plakayı hücre tohumlu plaka ile değiştirin ve tahlile devam etmek için Hazırım'a tıklayın. Testi tamamladıktan sonra, veriler otomatik olarak kaydedilir. Sonuçları bir elektronik tabloya veya başka bir analiz yazılımı dosyasına aktarın.Grafiği çizin ve verileri analiz edin. Oksijen tüketim hızının veya OCR'nin temsili dinamikleri, fare ve insan nötrofillerinde mitokondriyal solunumdaki değişikliklerin yanı sıra, oligomisin, FCCP ve rotenon ve antimisin karışımına yanıt olarak farklılaşmamış ve farklılaşmış HL60 hücrelerinde değişiklikler olduğunu göstermiştir. FCCP tedavisi, OCR değerini geri kazanmak ve maksimum solunum elde etmek için elektron akışını ve oksijen tüketimini arttırdı.Rotenon ve antimisin A karışımı, elektron taşıma zincirinin 1 ve 3 komplekslerini bloke ederek mitokondriyal solunumun ortadan kaldırılmasına yol açar. Nötrofil yönelimli farklılaşmadan sonra HL60 hücrelerinde azalmış mitokondriyal solunum gözlendi. Diferansiye HL60 hücrelerinin bazal mitokondriyal solunum, proton sızıntısına bağlı solunum, ATP'ye bağlı solunum ve mitokondriyal olmayan solunum ile anlamlı derecede düşük olduğu bulundu.Diferansiye HL60 hücrelerinin maksimal solunumundaki artış önemli değildi, yedek solunum kapasitesi ise önemli ölçüde artmıştı. OCR değerini okurken sensör kartuşunun yüzen hücreler nedeniyle herhangi bir engeli olmaması gerektiğinden, hücrelerin plakanın altında olduğundan emin olun. Bu teknik, araştırmacıların nötrofil ile ilişkili çalışmalarda ilaçların veya mitokondriyal disfonksiyonun etkisini incelemelerine yardımcı olacaktır.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A TIRF Microscopy Technique for Real-time, Simultaneous Imaging of the TCR and its Associated Signaling Proteins

Gerçek zamanlı, TCR Eşzamanlı Görüntüleme ve İlişkili Sinyal Proteinler için TIRF Mikroskopi Tekniği

Signaling is initiated through the T Cell Receptor (TCR) when it is engaged by antigenic peptide fragments bound by Major Histocompatibility Complex ...

Real-time Live Imaging of T-cell Signaling Complex Formation

T hücre gerçek zamanlı Canlı Görüntüleme Kompleks Oluşum Sinyal

Protection against infectious diseases is mediated by the immune system 1,2. T lymphocytes are the master coordinators of the immune system, regulating ...

Bioenergetics and the Oxidative Burst: Protocols for the Isolation and Evaluation of Human Leukocytes and Platelets

İnsan lökosit ve trombosit İzolasyonu ve Değerlendirme Protokolleri: Biyoenerji ve Oksidatif Burst

Mitochondrial dysfunction is known to play a significant role in a number of pathological conditions such as atherosclerosis, diabetes, septic shock, and ...

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

Ekstraselüler DNA Yayın Yüksek Verimli Ölçme ve İnsan Nötrofiller Kantitatif NET Oluşumu<em&gt; İn Vitro</em

Neutrophil granulocytes are the most abundant leukocytes in the human blood. Neutrophils are the first to arrive at the site of infection. Neutrophils ...

Imaging Neutrophils and Monocytes in Mesenteric Veins by Intravital Microscopy on Anaesthetized Mice in Real Time

Real Time Anestetize Farelerde Intravital Mikroskopi Mezenterik Damarlardaki nötrofiller ve monositler Görüntüleme

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in ...

Measuring Dengue Virus RNA in the Culture Supernatant of Infected Cells by Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction

Dang virüs RNA kültür süpernatant gerçek zamanlı nicel polimeraz zincir reaksiyonu tarafından enfekte hücre içinde ölçme

At present, real-time polymerase chain reaction (PCR) technology is an indispensable tool for the detection and quantification of viral genomes in ...

Robust Ligature-Induced Model of Murine Periodontitis for the Evaluation of Oral Neutrophils

Oral Nötrofillerin Değerlendirilmesinde Mürin Periodontitin Sağlam Ligatür Kaynaklı Modeli

The main advantages of studying the pathophysiology of periodontal disease utilizing murine models are the reduced cost of animals, array of genetically ...

Pan-lyssavirus Real Time RT-PCR for Rabies Diagnosis

Pan-Lyssavirus gerçek zamanlı RT-PCR Rabies tanı için

Molecular assays are rapid, sensitive and specific, and have become central to diagnosing rabies. PCR based assays have been utilized for decades to ...

Monitoring Influenza Virus Survival Outside the Host Using Real-Time Cell Analysis

Gerçek Zamanlı Hücre Analizi Kullanarak Konak Dışında Influenza Virüsünün Hayatta Kalmasını İzleme

Methods for virus particle quantification represent a critical aspect of many virology studies. Although several reliable techniques exist, they are ...

Real-Time Quantification of Reactive Oxygen Species in Neutrophils Infected with Meningitic Escherichia Coli

Real-Time Quantification of Reactive Oxygen Species in Neutrophils Infected with Meningitic Escherichia Coli

Meningitik Escherichia Coli ile Enfekte Olan Nötrofillerde Reaktif Oksijen Türlerinin Gerçek Zamanlı Nicelemesi

Escherichia coli (E. coli) is the most common Gram-negative bacteria causing neonatal meningitis. The occurrence of bacteremia and bacterial penetration ...