Name: ferric chloride-induced arterial thrombosis and sample collection for 3d electron microscopy analysis
Uploaded: 2023-03-17T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ferric Chloride-Induced Arterial Thrombosis and Sample Collection for 3D Electron Microscopy Analysis at JoVE.com

저자는 이 원고를 주의 깊게 정독한 Whiteheart Laboratory 회원들에게 감사를 표합니다. 이 작업은 NIH, NHLBI(HL56652, HL138179 및 HL150818)의 보조금과 SWW에 대한 재향 군인회 공로상, BS에 R01 HL 155519, RDL에 대한 NIBIB 교내 프로그램 보조금으로 지원되었습니다.

여기에서 논의된 모든 실험은 켄터키 대학의 IACUC(Institutional Animal Care and Use Committee)에서 검토하고 승인했습니다.
참고: 수술 기구는 그림 1 과 재료 표에 나와 있습니다. C57BL/6J 마우스, 8-10주령, 수컷/암컷 또는 관련 유전자 조작(Knockout 또는 Knockin) 균주를 사용했습니다.
1. FeCl3 유발 경동맥 손상
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	<li>Lozano, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+and+regional+mortality+from+235+causes+of+death+for+20+age+groups+in+1990+and+2010:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2010.">Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010.</a> Lancet. 380 (9859), 2095-2128 (2012).</li><li>Raskob, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombosis:+a+major+contributor+to+global+disease+burden.">Thrombosis: a major contributor to global disease burden.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 34 (11), 2363-2371 (2014).</li><li>Walton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lead+aspartate,+an+en+bloc+contrast+stain+particularly+useful+for+ultrastructural+enzymology.">Lead aspartate, an en bloc contrast stain particularly useful for ultrastructural enzymology.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 27 (10), 1337-1342 (1979).</li><li>Palta, S., Saroa, R., Palta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+the+coagulation+system.">Overview of the coagulation system.</a> Indian Journal of Anaesthesia. 58 (5), 515-523 (2014).</li><li>Joshi, S., Whiteheart, S. 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Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+action+of+platelets+and+crucial+blood+coagulation+pathways+in+hemostasis.">Mechanism action of platelets and crucial blood coagulation pathways in hemostasis.</a> International Journal of Hematology-Oncology and Stem Cell Research. 11 (4), 319-327 (2017).</li><li>Alexopoulos, D., Katogiannis, K., Sfantou, D., Lekakis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+antiplatelet+treatment+in+coronary+artery+disease+patients:+A+necessary+evil+or+an+overzealous+practice.">Combination antiplatelet treatment in coronary artery disease patients: A necessary evil or an overzealous practice.</a> Platelets. 29 (3), 228-237 (2018).</li><li>Kurz, K. D., Main, B. W., Sandusky, G. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ferric+chloride-induced+canine+carotid+artery+thrombosis:+a+large+animal+model+of+vascular+injury.">Ferric chloride-induced canine carotid artery thrombosis: a large animal model of vascular injury.</a> Journal of Visualized Experiments. (139), e57981 (2018).</li><li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antithrombotic+therapy+by+regulating+the+ROS-mediated+thrombosis+microenvironment+and+specific+nonpharmaceutical+thrombolysis+Using+Prussian+blue+nanodroplets.">Antithrombotic therapy by regulating the ROS-mediated thrombosis microenvironment and specific nonpharmaceutical thrombolysis Using Prussian blue nanodroplets.</a> Small. 18 (15), 2106252 (2022).</li><li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+membrane+cloaked+nanotubes+to+accelerate+thrombolysis+by+thrombus+clot-targeting+and+penetration.">Platelet membrane cloaked nanotubes to accelerate thrombolysis by thrombus clot-targeting and penetration.</a> Small. , 2205260 (2022).</li><li>Refaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Near-infrared+light-responsive+liposomes+for+protein+delivery:+Towards+bleeding-free+photothermally-assisted+thrombolysis.">Near-infrared light-responsive liposomes for protein delivery: Towards bleeding-free photothermally-assisted thrombolysis.</a> Journal of Controlled Release. 337, 212-223 (2021).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomimetic+nanoplatelets+to+target+delivery+hirudin+for+site-specific+photothermal/photodynamic+thrombolysis+and+preventing+venous+thrombus+formation.">Biomimetic nanoplatelets to target delivery hirudin for site-specific photothermal/photodynamic thrombolysis and preventing venous thrombus formation.</a> Small. 18 (51), 2203184 (2022).</li><li>Subramaniam, S., Kanse, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ferric+chloride-induced+arterial+thrombosis+in+mice.">Ferric chloride-induced arterial thrombosis in mice.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 4 (4), 151-164 (2014).</li><li>Cocchiaro, J. L., Kumar, Y., Fischer, E. R., Hackstadt, T., Valdivia, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoplasmic+lipid+droplets+are+translocated+into+the+lumen+of+the+Chlamydia+trachomatis+parasitophorous+vacuole.">Cytoplasmic lipid droplets are translocated into the lumen of the Chlamydia trachomatis parasitophorous vacuole.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (27), 9379-9384 (2008).</li><li>Kaplan, E. 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C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolving+the+multifaceted+mechanisms+of+the+ferric+chloride+thrombosis+model+using+an+interdisciplinary+microfluidic+approach.">Resolving the multifaceted mechanisms of the ferric chloride thrombosis model using an interdisciplinary microfluidic approach.</a> Blood. 126 (6), 817-824 (2015).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+underlying+FeCl3-induced+arterial+thrombosis.">Mechanisms underlying FeCl3-induced arterial thrombosis.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 9 (4), 779-789 (2011).</li><li>Woollard, K. J., Sturgeon, S., Chin-Dusting, J. P. F., Salem, H. H., Jackson, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythrocyte+hemolysis+and+hemoglobin+oxidation+promote+ferric+chloride-induced+vascular+injury.">Erythrocyte hemolysis and hemoglobin oxidation promote ferric chloride-induced vascular injury.</a> Journal of Biological Chemistry. 284 (19), 13110-13118 (2009).</li><li>Shim, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+ferric+chloride-induced+arterial+thrombosis+model+of+mice+and+the+role+of+red+blood+cells+in+thrombosis+acceleration.">Characterization of ferric chloride-induced arterial thrombosis model of mice and the role of red blood cells in thrombosis acceleration.</a> Yonsei Medical Journal. 62 (11), 1032-1041 (2021).</li><li>Ghosh, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+prothrombotic+potential+of+four-factor+prothrombin+complex+concentrate+(4F-PCC)+in+animal+models.">Evaluation of the prothrombotic potential of four-factor prothrombin complex concentrate (4F-PCC) in animal models.</a> PLoS One. 16 (10), 0258192 (2021).</li><li>Wilbs, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+peptide+FXII+inhibitor+provides+safe+anticoagulation+in+a+thrombosis+model+and+in+artificial+lungs.">Cyclic peptide FXII inhibitor provides safe anticoagulation in a thrombosis model and in artificial lungs.</a> Nature Communications. 11 (1), 3890 (2020).</li><li>Wei, Y., Deng, X., Sheng, G., Guo, X. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rabbit+model+of+cerebral+venous+sinus+thrombosis+established+by+ferric+chloride+and+thrombin+injection.">A rabbit model of cerebral venous sinus thrombosis established by ferric chloride and thrombin injection.</a> Neuroscience Letters. 662, 205-212 (2018).</li><li>Jacob-Ferreira, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antithrombotic+activity+of+Batroxase,+a+metalloprotease+from+Bothrops+atrox+venom,+in+a+model+of+venous+thrombosis.">Antithrombotic activity of Batroxase, a metalloprotease from Bothrops atrox venom, in a model of venous thrombosis.</a> International Journal of Biological Macromolecules. 95, 263-267 (2017).</li><li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rabbit+model+of+cerebral+microembolic+signals+for+translational+research:+preclinical+validation+for+aspirin+and+clopidogrel.">A rabbit model of cerebral microembolic signals for translational research: preclinical validation for aspirin and clopidogrel.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 14 (9), 1855-1866 (2016).</li><li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+evodiamine+on+collagen-induced+platelet+activation+and+thrombosis.">Effect of evodiamine on collagen-induced platelet activation and thrombosis.</a> BioMed Research International. 2022, 4893859 (2022).</li><li>Li, W., McIntyre, T. M., Silverstein, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ferric+chloride-induced+murine+carotid+arterial+injury:+A+model+of+redox+pathology.">Ferric chloride-induced murine carotid arterial injury: A model of redox pathology.</a> Redox Biology. 1 (1), 50-55 (2013).</li><li>Li, W., Nieman, M., Sen Gupta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ferric+chloride-induced+murine+thrombosis+models.">Ferric chloride-induced murine thrombosis models.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54479 (2016).</li><li>Holly, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ether+lipid+metabolism+by+AADACL1+regulates+platelet+function+and+thrombosis.">Ether lipid metabolism by AADACL1 regulates platelet function and thrombosis.</a> Blood Advances. 3 (22), 3818-3828 (2019).</li><li>Bird, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+of+the+therapeutic+index+of+marketed+anti-coagulants+and+anti-platelet+agents+by+guinea+pig+models+of+thrombosis+and+hemostasis.">Prediction of the therapeutic index of marketed anti-coagulants and anti-platelet agents by guinea pig models of thrombosis and hemostasis.</a> Thrombosis Research. 123 (1), 146-158 (2008).</li></ol>

혈전증을 유도하기 위해 맥관 구조에 FeCl3 를 국소 적용하는 것은 널리 사용되는 기술이며 다양한 혈소판 수용체, 리간드 신호 전달 경로 및 그 억제제20,21,22,23에 대한 역할을 확립하는 데 도움이되었습니다. FeCl3 가 혈전증을 일으키는 메커니즘은 다각적입니다. 이전에는 내피 탈락이...

혈전증은 혈관을 부분적으로 또는 완전히 차단하여 혈액의 자연스러운 흐름을 방해하는 혈전의 형성입니다. 이것은 허혈성 심장 질환 및 뇌졸중과 같은 심각하고 치명적인 심혈관 사건으로 이어집니다. 심혈관 질환은 이환율과 사망률의 주요 원인이며 전 세계적으로 4명 중 1명이 사망합니다 1,2,3. 혈전증은 혈관계 기능 장애로 나타나지만 기저 미생물 또는 바이러스 감염, 면역 장애, 악성 종양 또는 대사 상태의 결과일 수 있습니다. 혈액의 흐름은 혈관 내피 세포, 적혈구/백혈구, 혈소판, 응고인자 등 혈관계의 다양한 구성 요소들 간의 복잡한 상호작용에 의해 유지된다4. 혈관 손상 시, 혈소판은 내피하 기질의 접착 단백질과 상호작용하여 과립 내용물을 방출하여 더 많은 혈소판을 모집한다5. 동시에 응고 캐스케이드가 활성화되어 피브린 형성 및 침착을 유발합니다. 궁극적으로, 혈소판과 적혈구가 피브린 메쉬(fibrin mesh) 내에 갇혀있는 혈전이 형성된다 6. 혈전증을 조절하기 위해 항혈소판제 및 항응고제를 사용할 수 있지만 가짜 출혈은 이러한 요법의 주요 관심사로 남아 있으며 이러한 약물의 복용량과 조합을 미세 조정해야 합니다. 따라서, 새로운 항혈전제를 발견하는 것이 여전히 시급하다7.
혈전증은 기계적 손상(혈관 결찰), 열적 손상(레이저 손상) 및 화학적 손상(FeCl3/로즈 벵골 적용)과 같은 여러 가지 방법을 사용하여 연구됩니다. 혈전증의 성격은 부상의 위치(동맥 대 정맥), 방법 또는 정도에 따라 다릅니다. 이러한 모든 유형 중에서 FeCl3 유발 혈관 손상이 가장 널리 사용되는 방법입니다. 생쥐, 쥐, 토끼, 기니피그 및 개 8,9,10,11,12에 사용되었습니다. 이 방법은 비교적 간단하고 사용하기 쉬우며 주요 매개변수가 표준화되면 다양한 혈관계(예: 동맥[경동맥 및 대퇴골], 정맥[경정맥] 및 세동맥[크레마스터 및 장간막])에서 민감하고 재현 가능합니다(보충 표 1).
이 모델은 또한 혈전 형성의 역학과 형태에 대한 이해를 높이는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술은 다양한 유속 지점에서 혈전증을 멈추고 폐색되기 전에 공정의 중간 단계를 연구할 수 있는 이점을 제공합니다. 혈전증 연구의 최근 발전은 이 모델을 사용하여 혈전용해의 비약리학적 방법13 또는 항혈전 및/또는 섬유소 용해제의 비침습적 전달에 주의를 집중시켰다14,15. 몇몇 연구진은 혈소판막이 이러한 치료제로 코팅될 때, 혈전을 표적으로 하는 열 자극에 의해 약물이 활성화될 수 있음을 보여주었다16. 여기에 설명된 기술은 단일 혈소판 수준에서 결과를 검증하는 것과 같은 연구에 유용할 수 있습니다. 이 원고에서 프로토콜 1은 기본적인 FeCl3 매개 혈관 손상 절차를 설명하는 반면, 프로토콜 2는 전자 현미경에 의한 추가 분석을 위해 혈관 손상 샘플을 수집하고 고정하는 방법을 설명합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% Saline&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>BP358-212</td>
			<td>NaCl used to make a solution of 0.9% saline&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe&#160;</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company&#160;</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>190 Proof Ethanol&#160;</td>
			<td>KOPTEC</td>
			<td>V1101&#160;</td>
			<td>Used to make a 70% ethanol solution to use for prepping the mouse for surgery&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,2,2 Tribromoethanol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>48402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 Yard Black Braided Silk Suture (5-0)</td>
			<td>DEKNATEL</td>
			<td>136082-1204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26G x 3/8 Needle&#160;</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company&#160;</td>
			<td>305110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-methyl-2-butanol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>240486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7.5 mL Transfer Pipet, Graduated to 3 mL</td>
			<td>Globe Scientific Inc.</td>
			<td>135010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol Prep Pads (70% Isopropyl Alcohol)</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MDS090735</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Araldite GY 502&#160;</td>
			<td>Electron microscopy Services&#160;</td>
			<td>10900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Dish 35mm X 10mm&#160;</td>
			<td>Corning Incorporated&#160;</td>
			<td>430165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact Scale&#160;</td>
			<td>Ward&#39;s Science&#160;</td>
			<td>470314-390</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Scissors, 12.5 cm long</td>
			<td>World Precision Instrument</td>
			<td>15922-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMP-30 activator&#160;</td>
			<td>Electron microscopy Services&#160;</td>
			<td>13600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dodenyl Succinic Anhydride/ DDSA</td>
			<td>Electron microscopy Services&#160;</td>
			<td>13700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doggy Poo Bags/animal carcass disposal bag</td>
			<td>Crown Products&#160;</td>
			<td>PP-RB-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doppler FlowProbe</td>
			<td>Transonic Systems Inc.</td>
			<td>MA0.5PSB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EMBED 812 resin&#160;</td>
			<td>Electron microscopy Services&#160;</td>
			<td>14900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl Alcohol, anhydrous 200 proof&#160;</td>
			<td>Electron microscopy Services&#160;</td>
			<td>15055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye Dressing Forceps, 4&#34; Full Curved, Standard, 0.8mm Wide Tips</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>18-784</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter Paper&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>28310-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors - Sharp-Blunt</td>
			<td>Fine Science Tools&#160;</td>
			<td>14028-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Finger Loop Ear Punches&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools&#160;</td>
			<td>24212-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Sponges 2&#8221; x 2&#8221; &#8211; 12 Ply&#160;</td>
			<td>Dukal Corporation</td>
			<td>2128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde (10% solution)</td>
			<td>Electron microscopy Services&#160;</td>
			<td>16120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Integra Miltex Carbon Steel Surgical Blade #10</td>
			<td>Integra&#174; Miltex&#174;</td>
			<td>4110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron (III) Chloride&#160;</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>157740-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Knife Handle Miltex&#174; Extra Fine Stainless Steel Size 3</td>
			<td>Integra Lifesciences&#160;</td>
			<td>157510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-aspartic acid</td>
			<td>Sigma&#160;Fisher</td>
			<td>&#160;A93100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-aspartic acid</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>BP374-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead Nitrate&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>L-62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEICA S8AP0 Microscope</td>
			<td>LEICA</td>
			<td>No longer available</td>
			<td>No longer available from the company</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEICA S8AP0 Microscope Stand&#160;</td>
			<td>LEICA</td>
			<td>10447255</td>
			<td>No longer available from the company</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light-Duty Tissue Wipers&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82003-822</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Forceps; 1x2 Teeth, Full Curve; 0.8 mm Tip Width; 4&#34; Length</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Company</td>
			<td>RS-5157</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium Tetroxide 4% aqueous solution&#160;</td>
			<td>Electron microscopy Services&#160;</td>
			<td>19150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (16% solution)</td>
			<td>Electron microscopy Services&#160;</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium ferricyanide</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>P-8131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propylene Oxide, ACS reagent&#160;</td>
			<td>Electron microscopy Services&#160;</td>
			<td>20401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rainin Classic Pipette PR-10</td>
			<td>Rainin</td>
			<td>17008649</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Research Flowmeter&#160;</td>
			<td>Transonic Systems Inc.</td>
			<td>T402B01481</td>
			<td>Model: T402</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scotch Magic Invisible Tape, 3/4&#34; x 1000&#34;, Clear</td>
			<td>Scotch&#160;</td>
			<td>305289</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Animal Heated Pad</td>
			<td>K&#38;H Manufacturing Inc.</td>
			<td>Model: HM10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Cacodylate Buffer 0.2M, pH7.4</td>
			<td>Electron microscopy Services&#160;</td>
			<td>11623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cotton Tipped Applicators&#160;</td>
			<td>Puritan Medical Products&#160;</td>
			<td>25-806 1WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steromaster Illuminator&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>12-562-21</td>
			<td>No longer available from the company</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Dumont #7 Forceps&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools&#160;</td>
			<td>11271-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiocarbohydrazide (TCH)</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>88535</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universal Low Retention Pipet Tip Reloads (0.1-10 &#181;L)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>76323-394</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl Acetate</td>
			<td>Electron microscopy Services&#160;</td>
			<td>22400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veet Gel Cream Hair Remover</td>
			<td>Reckitt Benckiser</td>
			<td>3116875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>White Antistatic Hexagonal Weigh Boats, Medium, 64 x 15 x 19 mm</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>S38975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WinDAQ/100 Software for Windows</td>
			<td>DATAQ Instruments, Inc.</td>
			<td>Version 3.38</td>
			<td>Freely available to download. https://www.dataq.com/products/windaq/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS AxioCam Icc 1</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>57615</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ferric chloride-induced arterial thrombosis and sample collection for 3d electron microscopy analysis

심혈관 질환은 전 세계적으로 사망률과 이환율의 주요 원인입니다. 비정상적인 혈전증은 당뇨병 및 비만과 같은 전신 질환과 죽상동맥경화증, 암 및 자가면역 질환과 같은 만성 염증성 질환의 일반적인 특징입니다. 혈관 손상 시 일반적으로 응고계, 혈소판 및 내피가 조율된 방식으로 작용하여 손상 부위에 혈전을 형성하여 출혈을 예방합니다. 이 과정의 이상은 과도한 출혈 또는 조절되지 않는 혈전증/불충분한 항혈전 활성으로 이어져 혈관 폐색 및 후유증으로 이어집니다. FeCl3 유도 경동맥 손상 모델은 생체 내에서 혈전증이 어떻게 시작되고 진행되는지 조사하는 데 유용한 도구입니다. 이 모델은 손상 부위의 내피 손상/탈락 및 후속 혈전 형성을 포함합니다. 다양한 정도의 혈관 손상에 대한 반응으로 혈관 손상 및 혈전 형성을 모니터링하기 위해 매우 민감한 정량적 분석을 제공합니다. 일단 최적화되면, 이 표준 기술은 혈전증의 기저에 있는 분자 메커니즘과 성장하는 혈전에서 혈소판의 미세구조적 변화를 연구하는 데 사용될 수 있습니다. 이 분석은 또한 항혈전제 및 항혈소판제의 효능을 연구하는 데 유용합니다. 이 기사에서는 FeCl3 유도 동맥 혈전증을 시작하고 모니터링하는 방법과 전자 현미경으로 분석할 샘플을 수집하는 방법을 설명합니다.

데이터는 일반적으로 폐색까지의 시간 또는 완전 폐색 혈전을 형성하는 데 필요한 시간으로 표시됩니다. 이러한 데이터는 Kaplan-Meier 생존 곡선(그림 4A)19, 혈류 중단 또는 실험 종료 시점의 최종 혈류를 보여주는 막대가 있는 도트 플롯(그림 4B) 또는 선 그래프(그림 4C)로 표시할 수 있습니다. 이 기술을 사용하여 ?...

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Ferric Chloride-Induced Arterial Thrombosis and Sample Collection for 3D Electron Microscopy Analysis

본 프로토콜은 동맥 혈전증을 유도하기 위해 FeCl3 매개 손상을 사용하는 방법, 및 전자 현미경 분석을 위해 혈전증의 다양한 단계에서 동맥 손상 샘플을 수집하고 준비하는 방법을 설명합니다.

염화제이철 유발 동맥 혈전증 및 3D 전자 현미경 분석을 위한 시료 수집

Cardiovascular diseases are a leading cause of mortality and morbidity worldwide. Aberrant thrombosis is a common feature of systemic conditions like ...

이 방법을 사용하면 혈소판과 지혈 시스템의 어떤 성분이 혈전증에 중요한지 결정할 수 있습니다. 또한 이 방법은 혈전 성장과 구조가 세포 수준에서 어떻게 영향을 받는지 결정할 수 있습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 구조적 수준에서 혈전증의 여러 단계를 재현 가능한 방법으로 연구 할 수 있다는 것입니다.이 기술을 처음 접하는 사람은 수술 부위의 조직을 과도하게 취급하지 않아야 합니다. 이것은 출혈로 이어질 수 있으며 경동맥의 식별을 지나치게 복잡하게 만들 수 있습니다. 경동맥을 노출시킨 후 0.1mm 크기의 두 수술실 사이의 영역을 느슨하게 둘러싸서 손상 부위를 표시하기 시작합니다.프로브를 아래쪽 나사산에서 말단 동맥 아래에 놓습니다. 두 나사산 사이의 동맥 아래에 플라스틱 조각을 삽입하여 염화철 손상 부위를 표시합니다. 부상을 입기 전에 유량을 측정하여 기초 유량을 기록하십시오.염화철에 적신 여과지를 동맥에 3 분 동안 올려 놓아 부상을 입으십시오. 3분 후에 여과지를 제거하여 다양한 정도의 부상을 방지하고 프로브에 의한 유량 계산을 용이하게 합니다. 부상 부위에 식염수를 추가하여 과도한 잔류 염화철을 제거합니다.흐름 판독값을 모니터링합니다. 유량이 초기 값의 50% 미만으로 떨어지면 프로브를 제거합니다. 해당 부위를 빠르게 건조시키고 고정제를 첨가하여 부상 부위를 외부에 고정합니다.다음으로, 집게로 부상 부위 근처의 동맥을 즉시 잡으십시오. 하부 실의 하류와 상부 실의 상류를 자릅니다. 플라스틱 조직 배양 접시에 조직을 수집 된 방향과 동일한 방향으로 놓고 고정액 몇 방울을 첨가하십시오.메스를 사용하여 동맥 주변의 여분의 조직을 청소하십시오. 한쪽 끝을 수평으로 자르고 다른 쪽 끝을 가늘어지거나 비스듬히 절단하여 혈류의 방향을 기록하십시오. 샘플을 실온에서 1시간 동안 고정액에 넣은 다음 전자 현미경 분석을 위해 젖은 얼음으로 보낼 때까지 섭씨 4도에서 1% 파라포름알데히드에 샘플을 저장합니다.데이터는 Kaplan-Meier 생존 곡선, 혈류 중단 또는 실험 종료 시 말단 혈류를 보여주는 막대가 있는 도트 플롯 또는 선 그래프로 표시되었습니다. 혈류는 성장하는 혈전의 부분적인 흘림을 나타내는 몇 분 동안 점진적으로 감소한 후 어떤 경우에는 갑자기 증가했으며 색전술 사건으로 간주되었습니다. 폐색 혈전 형태도 이 방법을 사용하여 연구되었습니다.혈전증 과정에서 샘플을 신속하게 수집하는 것은 이 과정이 지연되면 구조 분석이 잘못 해석될 수 있기 때문에 가장 중요한 단계입니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus

쥐의 대동맥 부비동의 동맥 경화 병변의 정량 분석​​ 및 특성

Atherosclerosis is a disease of the large arteries and a major underlying cause of myocardial infarction and stroke. Several different mouse models have ...

연구

의학

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

마우스의 유방 지방 패드에 유방암 세포의 소성 주입은 종양의 성장을 연구한다.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel

철 염화물에 의한 경동맥 및 장간막 용기에 혈전증 마우스 모델

Severe thrombosis and its ischemic consequences such as myocardial infarction, pulmonary embolism and stroke are major worldwide health issues. The ferric ...

Ferric Chloride-induced Murine Thrombosis Models

철 염화물에 의한 쥐 혈전증 모델

Arterial thrombosis (blood clot) is a common complication of many systemic diseases associated with chronic inflammation, including atherosclerosis, ...

3D Whole-heart Myocardial Tissue Analysis

3D 전체 심장 심근 조직 분석

Cardiac regenerative therapies aim to protect and repair the injured heart in patients with ischemic heart disease. By injecting stem cells or other ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Light Sheet Microscopy에 의한 심근 성 심근염의 Murine 모델에서의 백혈구 침윤의 정량적 시각화

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

준비 및<em&gt; 체외</em&gt; 자화 특성의 내피 세포를 미르 변성

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

Intravital Microscopy of Monocyte Homing and Tumor-Related Angiogenesis in a Murine Model of Peripheral Arterial Disease

Intravital 현미경 Monocyte 유도 및 주변 동맥 질병의 Murine 모델에서 종양 관련 신생의

The therapeutic goal for peripheral arterial disease and ischemic heart disease is to increase blood flow to ischemic areas caused by hemodynamic ...

Ferric Chloride-induced Canine Carotid Artery Thrombosis: A Large Animal Model of Vascular Injury

제 2 철 염화 유도 개 경 동맥 혈전 증: 혈관 손상의 큰 동물 모델

Occlusive arterial thrombosis leading to cerebral ischemic stroke and myocardial infarction contributes to ~13 million deaths every year globally. Here, ...

Immunofluorescence Labelling of Human and Murine Neutrophil Extracellular Traps in Paraffin-Embedded Tissue

파라핀 내장 된 조직에서 인간과 뮤린 호중구 세포 외 트랩의 면역 형광 라벨링

Neutrophil granulocytes, also called polymorphonuclear leukocytes (PMN) due to their lobulated nucleus, are the most abundant type of leukocytes. They ...